含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用的制作方法

本发明属于药品、保健品研发领域，尤其涉及含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用。

背景技术：

随着人们生活水平的不断提高，人们追求健康长寿的愿望也越来越强烈。然而衰老是任何生命过程中的必然规律，是不以人的意志为转移的生物学法则，但延缓衰老速度，让人的寿命达到自然赋予的最高寿命是有可能达到的。迄今为止，关于衰老机制的学说和假设已有数百种，譬如自由基学说、免疫机能退化学说、神经内分泌学说、蛋白质合成差错积累学说等，以及近年来基于分子水平和基因水平提出的基因调控学说、DNA损伤修复学说、线粒体损伤学说、端粒酶学说等。

现有技术中，虽然抗衰老机制的研究多种多样，但应用于抗衰老的产品并不多见，目前市面上的抗衰老产品多数为食品或中药的提取物组合而成一定程度上具有增强人体机能的作用，但是使用效果并不理想，抗衰老效果有待加强。某些抗衰产品有的为了达到很好的抗衰老效果使用了抗氧化性强的工业成分、短时见效快，但是长时间使用对人体危害极大；有的抗衰产品添加维生素类抗氧化剂，但是这类产品稳定性差。

因此，研发出含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用，用于解决现有技术中，抗衰老产品存在着难以兼顾良好抗衰老效果、对人体无危害及产品质量稳定的技术缺陷，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用，用于解决现有技术中，抗衰老产品存在着难以兼顾良好抗衰老效果、对人体无危害及产品质量稳定的技术缺陷。

本发明提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：烟酰胺单核苷酸 (NMN)、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚。

优选地，以质量份计，所述组合物的原料包括：烟酰胺单核苷酸1～10份、吴茱萸次碱1～10份、白藜芦醇1～10份、漆树黄酮1～10份、紫铆因1～10份、淫羊藿甙1～10份以及和厚朴酚1～10份。

优选地，以质量份计，所述组合物的原料包括：烟酰胺单核苷酸2～8份、吴茱萸次碱5～7份、白藜芦醇2～5份、漆树黄酮3～6份、紫铆因1～5份、淫羊藿甙6～9份以及和厚朴酚2～5份。

优选地，所述组合物的剂型为：口服制剂和/或肠道外给药剂型；

所述口服制剂选自：片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、糖浆剂、合剂、散剂以及滴丸中的任意一种或多种，所述肠道外给药剂型选自：注射剂、吸入剂、贴剂、栓剂、膏剂中的任意一种或多种。

本发明还提供了一种包括以上任意一项所述组合物的制备方法，所述制备方法为：

步骤一、烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚分别干燥后过筛，混合均匀得第一产物；

步骤二、辅料干燥后混合均匀，过筛，得第二产物；

步骤三、所述第一产物和第二产物溶于水后，第一次搅拌后升温进行第二次搅拌，制剂得产品。

优选地，步骤一中，所述过筛的粒径为60～80目；

步骤二中，所述过筛的粒径为60～80目。

优选地，步骤二中，所述辅料选自：甘露醇、微晶纤维素、硬脂酸镁、羧甲基纤维素以及磷酸氢钙中的任意一种或多种。

优选地，步骤三中，所述第一次搅拌的温度为25～40℃，所述第二次搅拌的温度为50℃，所述第二次搅拌的时间为1小时。

本发明还提供了一种包括以上任意一项所述组合物或以上任意一项所述的制备方法得到的产品在抗衰老药品和/或保健品中的应用。

综上所述，本发明提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚。本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明还提供了一种上述组合物或上述制备方法得到的产品在抗衰老药品和/或保健品中的应用。本发明提供的技术方案中，烟酰胺单核苷酸可以起到激活机体能量代谢及改善机体氧化应激反应的作用，同时，配合以吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚的协同作用，起到了良好的抗衰老效果；并且，组合物中的各成分结构稳定，制得对应的产品后不易发生变质损坏，同时，各成分安全，对人体基本无不良反应。本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用，解决了现有技术中，抗衰老产品存在着难以兼顾良好抗衰老效果、对人体无危害及产品质量稳定的技术缺陷。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为年轻和年老对照(YC和OC)以及年轻和年老本发明组合物组(Y本发明物组和O本发明物组)小鼠(每组n＝7)的主动脉中SIRT1表达的结果示意图；

图2为年轻和年老对照(YC和OC)以及年轻和年老本发明组合物组(Y本发明物组和O本发明物组)小鼠(每组n＝7)的主动脉中脱乙酰基与总NFκB的比率的结果示意图；

图3为年轻和年老对照组(YC和OC)及年轻和年老本发明物组(Y本发明物组和O本发明物组)小鼠(每组n＝10)对内皮依赖性扩张剂乙酰胆碱(ACh) 的剂量反应的结果示意图；

图4为在存在或不存在TEMPOL的情况下，年轻和年老对照组(YC和OC) 以及年轻和年老本发明组合物组(Y本发明物组和O本发明物组)小鼠对内皮依赖性扩张剂乙酰胆碱(ACh)的最大反应剂量(n＝10/组)的结果示意图；

图5为通过电子顺磁共振(EPR)评估的超氧化物产生的结果示意图；

图6为年轻和年老对照组(YC和OC)以及年轻和年老本发明组合物组(Y 本发明物组和O本发明物组)小鼠(n＝10/组)的主动脉脉搏波速度(aPWV) 的结果示意图；

图7为年轻和年老对照组(YC和OC)以及年轻和年老本发明组合物组(Y 本发明物组和O本发明物组)小鼠(n＝10/组)的弹性模量(n＝10/组)的结果示意图；

图8为年轻和年老对照组(YC和OC)以及年轻和年老本发明组合物组(Y 本发明物组和O本发明物组)小鼠(n＝10/组)的总弹性蛋白表达(n＝10/组)的结果示意图。

具体实施方式

本发明提供了含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用，用于解决现有技术中，抗衰老产品存在着难以兼顾良好抗衰老效果、对人体无危害及产品质量稳定的技术缺陷。

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为了更详细说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用，进行具体地描述。

本发明提供了一种组合物，包括：烟酰胺单核苷酸(NMN)、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚。本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用，解决了现有技术中，抗衰老产品存在着难以兼顾良好抗衰老效果、对人体无危害及产品质量稳定的技术缺陷。

Sirtuins蛋白价值在细胞中的广泛分布，参与调控细胞分化与凋亡，细胞周期，新陈代谢与基因组稳定等方面。NMN是NAD+前体，进入细胞后变成参与人体中诸多反应的重要辅酶NAD+，依赖于NAD+的组蛋白去乙酰化酶Sirtuins 家族可促进线粒体自噬和再生。

哺乳动物SIRT1是蛋白质去乙酰化酶/去乙酰基酶sirtuin家族中的七个成员之一，是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性脱乙酰酶，是机体能量代谢的传感器并且改善机体的氧化应激。研究表明，在老化动脉中SIRT1表达减少和活性增加是调节受损EDD(内皮依赖性扩张)的关键机制。

本发明提供的技术方案中，通过补充NAD+关键中间体烟酰胺单核苷酸 (NMN)，可以激活SIRT1并改善年老小鼠的代谢和应激反应。NMN补充后可以增加动脉SIRT1活性，减少血管氧化应激，并逆转随着衰老引起的血管功能障碍。同时NMN还减少了血管超氧化物的产生，增加NO(一氧化氮)的生物利用度以及对胶原蛋白和弹性蛋白表达产生影响。

同时，组合物中的白藜芦醇可以直接或者间接激活SIRT1起到抗氧化或激活SIRT1基因等有效防止或者延缓很多老年相关疾病的发生和发展。

进一步地，组合物中的淫羊藿甙可通过上调依赖SIRT1的抗氧化物酶的表达，从而减弱了ROS产生的氧化应激作用；组合物中的和厚朴酚能够激活一种关键的保护性蛋白SIRT3，与延缓衰老、抵抗压力和代谢调控密切相关；组合物中的白藜芦醇、漆树黄酮(Fistein)、紫铆因(Butein)等具有的较强的抗氧化、抗自由基作用，主要是通过激活组蛋白去乙酰化酶(Sirtuin,silent mating type information regulation 2homolog)的活性，进而调控下游基因转录及活性来实现的；组合物中的吴茱萸次碱可抑制高糖诱导的内皮细胞衰老,其机制与激活 TRPV1/[Ca～(2+)]i信号途径,上调长寿蛋白Sirt1，进而下调衰老相关蛋白P21, 抑制ROS生成。

因此，吴茱萸次碱、白藜芦醇、和厚朴酚、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙与NMN产生协同作用，增加NMN对Sirtuins蛋白的激活，从而改变蛋白质的活性以及稳定性。从而起到调控衰老过程的作用。

本发明提供的技术方案中，采用特定的成分特定的配比，组方合理，配伍得当，符合中医药与现代医药相结合的理论，使用方便，吸收效果好，无不良及毒副作用；经临床验证，能有效的减少体内自由基，维持活性氧水平，从而改善手机电磁辐射造成的细胞损伤。

实施例1

本实施例为制备产品1的具体实施例。

烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚分别干燥后过60～80目筛，混合均匀得第一产物；

辅料干燥后混合均匀，过60～80目筛，得第二产物；本实施例中，辅料为甘露醇。

第一产物和第二产物溶于水后，于25～40℃进行第一次搅拌，搅拌均匀后升温，于50℃进行第二次搅拌，搅拌1小时后，制剂得片剂产品1；本实施例中，所采用的制剂工艺为本领域技术人员熟知的常规制剂工艺，在此不再赘述。

本实施例中，第一产物中，各原料的投料量为：烟酰胺单核苷酸10g、吴茱萸次碱5g、白藜芦醇10g、漆树黄酮6g、紫铆因5g、淫羊藿甙9g以及和厚朴酚2g。

实施例2

本实施例为制备产品2的具体实施例。

烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚分别干燥后过60～80目筛，混合均匀得第一产物；

辅料干燥后混合均匀，过60～80目筛，得第二产物；本实施例中，辅料为微晶纤维素。

第一产物和第二产物溶于水后，于25～40℃进行第一次搅拌，搅拌均匀后升温，于50℃进行第二次搅拌，搅拌1小时后，制剂得丸剂产品2；本实施例中，所采用的制剂工艺为本领域技术人员熟知的常规制剂工艺，在此不再赘述。

本实施例中，第一产物中，各原料的投料量为：烟酰胺单核苷酸5g、吴茱萸次碱10g、白藜芦醇1g、漆树黄酮5g、紫铆因10g、淫羊藿甙7g以及和厚朴酚1g。

实施例3

本实施例为制备产品3的具体实施例。

烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚分别干燥后过60～80目筛，混合均匀得第一产物；

辅料干燥后混合均匀，过60～80目筛，得第二产物；本实施例中，辅料为硬脂酸镁。

第一产物和第二产物溶于水后，于25～40℃进行第一次搅拌，搅拌均匀后升温，于50℃进行第二次搅拌，搅拌1小时后，制剂得颗粒剂产品3；本实施例中，所采用的制剂工艺为本领域技术人员熟知的常规制剂工艺，在此不再赘述。

本实施例中，第一产物中，各原料的投料量为：烟酰胺单核苷酸2g、吴茱萸次碱7g、白藜芦醇2g、漆树黄酮10g、紫铆因1g、淫羊藿甙10g以及和厚朴酚5g。

实施例4

本实施例为制备产品4的具体实施例。

烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚分别干燥后过60～80目筛，混合均匀得第一产物；

辅料干燥后混合均匀，过60～80目筛，得第二产物；本实施例中，辅料为羧甲基纤维素。

第一产物和第二产物溶于水后，于25～40℃进行第一次搅拌，搅拌均匀后升温，于50℃进行第二次搅拌，搅拌1小时后，制剂得胶囊剂产品4；本实施例中，所采用的制剂工艺为本领域技术人员熟知的常规制剂工艺，在此不再赘述。

本实施例中，第一产物中，各原料的投料量为：烟酰胺单核苷酸1g、吴茱萸次碱6g、白藜芦醇5g、漆树黄酮1g、紫铆因2g、淫羊藿甙6g以及和厚朴酚 10g。

实施例5

本实施例为制备产品5的具体实施例。

烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚分别干燥后过60～80目筛，混合均匀得第一产物；

辅料干燥后混合均匀，过60～80目筛，得第二产物；本实施例中，辅料为磷酸氢钙。

第一产物和第二产物溶于水后，于25～40℃进行第一次搅拌，搅拌均匀后升温，于50℃进行第二次搅拌，搅拌1小时后，制剂得水剂产品5；本实施例中，所采用的制剂工艺为本领域技术人员熟知的常规制剂工艺，在此不再赘述。

本实施例中，第一产物中，各原料的投料量为：烟酰胺单核苷酸8g、吴茱萸次碱1g、白藜芦醇3g、漆树黄酮3g、紫铆因3g、淫羊藿甙1g以及和厚朴酚 4g。

实施例6

6.1动物处理

购买年轻(3-4个月)和年老(20-24个月)C57BL/6雄性小鼠。所有小鼠在动物房适应性养殖2周，按13h白昼的节律调节光照。养殖期间，小鼠可自由进水与进食，饲养环境温度始终保持为20℃-22℃，相对湿度为50％-60％。

经过2周的适应期后，将年轻和年老的小鼠分成两个亚组：对照组动物(YC 年轻对照组，OC年老对照组)继续饮用正常水，其他组动物(Y本发明物年轻实验组，O本发明物年老实验组)接受含本发明制得的产品1的饮用水(目标剂量为300mg/kg/天)8周，每周监测三次体重和水摄入量。

6.2.1离体颈动脉血管扩张反应

8周后，使用异氟烷麻醉小鼠并通过心脏穿刺放血使其安乐死。切除颈动脉，将静脉插入玻璃微量移液管尖端，并用尼龙缝合线固定在含有缓冲生理盐水溶液的肌动描记室(DMT Inc.，Ann Arbor，MI，USA)中。

将动脉在37℃下加压至50mmHg，并在实验前平衡45分钟。在使用苯肾上腺素(2μm)进行亚极量收缩后，增加动脉管腔直径对乙酰胆碱(ACh：1×10^-9～1×10^-4m)的应答程度，用乙酰胆碱处理的动脉管通过响应NO的供体硝普钠(SNP：1×10^-10～1×10^-4m)的血管舒张来测定内皮依赖性扩张。

根据以下公式计算：由于年轻和年老动物的最大颈动脉直径不同，血管舒张反应记录为实际直径，以最大反应的百分比表示，公式如下：

Dilation(％)＝(Ds-Db)/(Dm-Db)×100％；

其中，Dm是50mmHg压力下管腔内最大直径；Db是第一次添加药物前预收缩后的稳态腔内直径；Ds是加入药物后记录的稳态腔内直径。

6.2.2体内主动脉脉搏波速度

测量主动脉脉搏波速度(aPWV)，用2％异氟烷麻醉小鼠并仰卧，双腿固定在心电图(ECG)电极上。用多普勒探针在横向主动脉弓和腹主动脉测量主动脉血流速度。对于每个部位，确定射血前时间，即ECG的R波与多普勒信号底部之间的时间。通过将横向探针和腹部探针之间的距离除以胸部和腹部预喷射时间的差异来计算aPWV。

6.2.3主动脉超氧化物测定

使用EPR光谱测量主动脉超氧化物。37℃条件下，将没有血管周围脂肪和其他周围组织的1毫米主动脉节段在Krebs-Hepes缓冲液与超氧化物特异性旋转探针1-羟基-3-甲氧基羰基-2,2,5,5-四甲基吡咯烷共同温育1小时，用于检测全细胞超氧化物的产生量。使用MS300X波段EPR光谱仪分析信号波幅。具体设置如下：中场，3350G；扫描，80G，微波调制，3000mG，和微波衰减7dB。 6.2.4小鼠体内NAD+含量测量

在年轻(12个月)小鼠中使用有Supelco LC-18-T柱(15cm×4.6cm；)的 HPLC系统测定主动脉NAD+水平。

6.3实验结果

6.3.1NMN组合物激活动脉SIRT1

与年轻小鼠相比，年老小鼠主动脉SIRT1平均表达水平低约40％(图1)。年轻小鼠和年老小鼠补充本发明组合物后SIRT1蛋白的表达水平均增高，并且年老小鼠SIRT1表达水平增幅大于年轻小鼠(图2).

NFκB的p65亚基是SIRT1的主要靶标，是脱乙酰基对SIRT1的活性的响应。因此，通过评估乙酰化与总NFκB(p65亚基)的比率来确定SIRT1活化。与年轻对照相比，年老对照组主动脉中的比值更高，表明主动脉SIRT1活性随着衰老而降低。最重要的是，本发明组合物恢复了年老组主动脉SIRT1的活性。

6.3.2恢复年老小鼠乙酰胆碱依赖的最大EDD

体外评估年轻组和年老组小鼠乙酰胆碱依赖的最大程度的EDD，年老组明显低于年轻组。本发明组合物明显缓解了年老组小鼠乙酰胆碱依赖的最大程度的EDD，但对年轻组小鼠无明显作用(如图3)。

6.3.3NMN降低血管氧化应激

将小鼠离体颈动脉段与超氧化物歧化酶模拟物4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶 -1-氧基(TEMPOL)一起离体孵育，恢复了年老对照组颈动脉的EDD，而对其他组没有影响(图4)，表明过多的超氧化物介导随年龄增长的内皮功能障碍。

为了进一步评估衰老和用本发明组合物处理对动脉氧化应激的影响，使用主动脉进行相关生化分析。通过电子顺磁共振(EPR)光谱直接评估显示，年老组小鼠主动脉的超氧化物的含量明显多于年轻组(图5)，与TEMPOL的药理功能实验结果一致。

6.4.5老鼠的主动脉僵硬度正常化

通过aPWV在体内评估的大弹性动脉硬化，年老对照组明显高于年轻对照组(图6)。补充本发明组合物后逆转了年老小鼠年龄相关的aPWV增加，而对年轻鼠没有明显影响(图6)。

同样的，年老组体外动脉硬化指数明显高于年轻组，补充本发明组合物后这一数值恢复正常值(图7)，年老组的弹性胶原蛋白的含量明显低于年轻组(图 8)，补充本发明组合物后老年组弹性胶原蛋白的含量趋于正常组。

上述结果表明：本发明组合物逆转随年龄增长的大弹性动脉硬化，部分是通过保留动脉壁中的弹性蛋白来实现这一功能。

产品2～5重复上述实验，均得到类似的实验结果，在此不再赘述。

从上述实施例可以得出，口服补充本发明技术方案所得产品，增加了小鼠 SIRT1蛋白的表达，SIRT1通过增强的脱乙酰化和转录因子的活性促进自身转录调节。SIRT1作为机体的长寿蛋白参与机体的多用生理过程，通过保护细胞免受氧化应激、保护神经、促进骨和肌肉的生成等方式延缓机体的衰老，维持机体健康。

综上所述，本发明提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：烟酰胺单核苷酸、吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚。本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明还提供了一种上述组合物或上述制备方法得到的产品在抗衰老药品和/或保健品中的应用。本发明提供的技术方案中，烟酰胺单核苷酸可以起到激活机体能量代谢及改善机体氧化应激反应的作用，同时，配合以吴茱萸次碱、白藜芦醇、漆树黄酮、紫铆因、淫羊藿甙以及和厚朴酚的协同作用，起到了良好的抗衰老效果；并且，组合物中的各成分结构稳定，制得对应的产品后不易发生变质损坏，同时，各成分安全，对人体基本无不良反应。本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的组合物在抗衰老药品/保健品的应用，解决了现有技术中，抗衰老产品存在着难以兼顾良好抗衰老效果、对人体无危害及产品质量稳定的技术缺陷。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。