[0001]
本发明涉及化护肤品领域，具体是一种含有成纤维干细胞生长因子-醇脂体复合物的美容凝胶及其制备方法。
背景技术：
[0002]
干细胞是一种具有分化潜能的种子细胞，具有无限的自我更新复制能力，在一定条件下能分化成特定组织。
[0003]
而皮肤中的成纤维干细胞在生长、增殖、分化过程中会向胞外分泌大量用于修改皮肤的细胞生长因子等活性物质，主要包括成纤维细胞生长因子 (bfgf)、表皮细胞生长因子(egf)、组织基质金属蛋白酶抑制因子 1(timp-1)等，通过调节免疫反应、激活细胞活动、促进胶原代谢等方式，实现皮肤的修复与再年轻化，其中，成纤维细胞生长因子能促进成纤维细胞有丝分裂、中胚层细胞的生长，还可刺激血管形成，在创伤愈合及肢体再生中发挥作用，表皮细胞生长因子能促进受损表皮的修复与再生，对烧伤、烫伤、光疗、等多种表皮创伤的修复的功效十分显著。
[0004]
而通过干细胞体外培养与加入多种精确含量的添加因子相结合，可将干细胞培养液中的干细胞生长因子功能最大化，可制成被皮肤吸收的美容护肤品的功效成分，具有补充皮肤营养、修复皮肤损伤、激活皮肤细胞更新、减轻炎症反应的作用。
[0005]
然而，如何将这些有助于皮肤修复和增强活力的干细胞生长因子递送制成可促进美容护肤品，实现干细胞生长因子有效的经皮递送，是本领域面临的一大课题。
[0006]
目前，市场上常见的美容护肤品有膏、霜、乳、液、凝胶等多种剂型，而凝胶是通过皮肤渗透实现吸收的新制剂形式。
[0007]
使用该类制剂时，干细胞生长因子将通过毛孔方式和穿透角质层和表皮层方式，到达真皮层中并在真皮中层内发挥护肤、修复皮肤功效，过程简单、方便且行之有效，因此特别适合于护肤产品。
[0008]
目前，纳米醇脂体是一种性能优越的经皮递送纳米材料，可显著包载干细胞生长因子后渗透进入真皮层及成纤维细胞中，从而提高这些干细胞生长因子的渗透性能和利用效率；然而，如何有效的利用醇脂体应用于护肤中，却是一大挑战。
技术实现要素：
[0009]
本发明的目的在于提供一种美容凝胶，该美容凝胶能够提高干细胞生长因子的渗透性能及利用效率；另外，本发明还提供了该护肤凝胶的制备方法，该方法能有效实现美容凝胶内各物质的融合，提高美容凝胶的护肤能力；此外，该方法简便易行，条件容易控制，设备要求低，易于实现产业化生产。
[0010]
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种美容凝胶，其特征在于：按重量百分比计算，包括以下组份：含有细胞生长因子的培养液10～50％、脂质15～30％、乳化剂1～3％、缓冲溶液50～65％、透明质酸物质10～
20％、余量为溶剂和水。
[0011]
进一步改进，所述细胞生长因子由如下成分组成：成纤维细胞生长因子0.25～0.45mg/l、表皮细胞生长因子2.5～4 mg/l、i型胶原蛋白0.5～3 mg/l、角质细胞生长因子3～6 mg/l、γ-氨基丁酸2～8.5 mg/l、维生素 b12 为 0.3～1 mg/l。
[0012]
进一步改进，所述细胞生长因子由如下成分组成：抗炎因子0.50～2.00 mg/l、转化生长因子1.50～1.71 mg/l、粒细胞集落刺激因子(g-csf) 0.50～2.00 mg/l、干细胞因子(scf)为2.55～3.35 mg/l、内皮细胞生长因子(vegf) 1.31 mg/l、成纤维细胞生长因子(fgf)为0.30～0.40 mg/l、表皮细胞生长因子(egf) 0.50～2.00 mg/l、角质细胞生长因子3～7 mg/l、γ
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氨基丁酸 4.45 mg/l、维生素 b12 为 0.68 mg/l。
[0013]
进一步改进，所述脂质为胆固醇、二棕榈酰卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油中的一种或多种混合物。
[0014]
进一步改进，所述乳化剂为吐温80和单硬脂酸甘油酯中的一种或两种混合物。
[0015]
进一步改进，所述透明质酸物质为透明质酸、透明质酸钠、透明质酸衍生物中的一种或多种混合物。
[0016]
进一步改进，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液、tris缓冲溶液或甘氨酸-hcl缓冲溶液中一种或多种混合物。
[0017]
进一步改进，所述的溶剂选自乙醇、乙二醇、丙二醇、异丙醇、1.3-丁二醇和甘油中的一种或多种混合物。
[0018]
上述美容凝胶的制备方法，包括如下步骤：第一步、制备含有细胞生长因子的培养液，具体过程如下：将皮肤组织真皮细胞中加入适量的水，其密度为2x105/ml～2x106/ml，放置于成纤维细胞培养基中进行培养，得到细胞培养液；在37℃培养 24 小时后，在细胞培养液的上清液中加入细胞生长因子，继续培养24小时，取出上层培养液；离心取出培养液中的细胞成分，得到上层液，即为含有细胞生长因子的培养液。
[0019]
第二步、制备包载细胞生长因子-醇脂体；具体过程如下：1、取适量的脂质、乳化剂加入到溶剂中，进行搅拌，使其相互溶解，得到醇脂体溶液；2、将第一步中得到含有细胞生长因子的培养液加入到（1）的醇脂体溶液中，且在溶液中加入磷酸盐缓冲溶液；进行充分搅拌，使其混合，搅拌速率为100～600rpm，持续搅拌时长为0.5～3h；3、将（2）中的混合液在20～40℃条件下进行超声处理10～30分钟，通过超声，控制醇脂体粒径为50～200 nm；超声功率为100～300 w；调节其酸碱值为7.0～7.5，即可得到细胞生长因子-醇脂体分散液。
[0020]
第三步、制备透明质酸凝胶，具体过程如下：将透明质酸物质注入到去离子水中，进行磁力搅拌1～6h，搅拌速率为100～300rpm,使其充分分散均匀，即可得到透明质酸凝胶母液。
[0021]
第四步、制备美容凝胶，具体过程如下：将第三步中得到的透明质酸凝胶母液加入到第二步中的细胞生长因子-醇脂体分散液中，进行磁力搅拌0.5～1h，搅拌速率为100～300rpm，并调整其黏度为3000～12000 mpa.s，即可得到能直接喷涂或涂抹的含有细胞生长因子-醇脂体复合物的美容凝胶。
[0022]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用醇脂体作为负载材料，实现了细胞生长因子的较大负载量；以静电作作用力原理，实现透明质酸凝胶和醇脂体的有效结合，并具有良好的稳定性，显著提高细胞生长因子的渗透性能和利用率，提高产品效果；整个配方所用的成份均具有良好的生物相融性，无任何副作用。
具体实施方式
[0023]
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0024]
一种美容凝胶，其特征在于：按重量百分比计算，包括以下组份：含有细胞生长因子的培养液10～50％、脂质15～30％、乳化剂1～3％、缓冲溶液50～65％、透明质酸物质10～20％、余量为溶剂和水。
[0025]
进一步的，所述脂质为胆固醇、二棕榈酰卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油中的一种或多种混合物；优选的，在本发明中，脂质选用大豆卵磷脂。
[0026]
进一步的，所述乳化剂为吐温80和单硬脂酸甘油酯中的一种或两种混合物；优选的，在本发明中，乳化剂选用单硬脂酸甘油酯。
[0027]
进一步改进，所述透明质酸物质为透明质酸、透明质酸钠、透明质酸衍生物中的一种或多种混合物；优选的，在本发明中，透明质酸物质选用透明质酸。
[0028]
进一步改进，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液、tris缓冲溶液或甘氨酸-hcl缓冲溶液中一种或多种混合物；优选的，在本发明中，缓冲溶液选用磷酸盐缓冲溶液。
[0029]
进一步改进，所述的溶剂为乙醇、乙二醇、丙二醇、异丙醇、1.3-丁二醇和甘油中的一种或多种混合物；优选的，在本发明中，溶剂选用乙醇。
[0030]
进一步的，所述细胞生长因子由如下成分组成：成纤维细胞生长因子0.25～0.45mg/l、表皮细胞生长因子2.5～4 mg/l、i型胶原蛋白0.5～3 mg/l、角质细胞生长因子3～6 mg/l、γ-氨基丁酸2～8.5 mg/l、维生素 b12 为 0.3～1 mg/l。
[0031]
进一步的，所述细胞生长因子还可以由以下成分组成：抗炎因子0.50～2.00 mg/l、转化生长因子1.50～1.71 mg/l、粒细胞集落刺激因子(g-csf) 0.50～2.00 mg/l、干细胞因子(scf)为2.55～3.35 mg/l、内皮细胞生长因子(vegf) 1.31 mg/l、成纤维细胞生长因子(fgf)为0.30～0.40 mg/l、表皮细胞生长因子(egf) 0.50～2.00 mg/l、角质细胞生长因子3～7 mg/l、γ
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氨基丁酸 4.45 mg/l、维生素 b12 为 0.68 mg/l。
[0032]
上述美容凝胶的制备方法，包括如下步骤：第一步、制备含有细胞生长因子的培养液，具体过程如下：将皮肤组织真皮细胞中加入适量的水，其密度为2x105/ml～2x106/ml，放置于成纤维细胞培养基中进行培养，得到细胞培养液；在37℃培养 24 小时后，在细胞培养液的上清液中加入细胞生长因子，继续培养24小时，取出上层培养液；离心取出培养液中的细胞成分，得到上层液，即为含有细胞生长因子的培养液。
[0033]
第二步、制备包载细胞生长因子-醇脂体；具体过程如下：1、取适量的脂质、乳化剂加入到溶剂中，进行搅拌，使其相互溶解，得到醇脂体溶液；2、将第一步中得到含有细胞生长因子的培养液加入到（1）的醇脂体溶液中，且在溶液中加入磷酸盐缓冲溶液；进行充分搅拌，使其混合，搅拌速率为100～600rpm，持续搅拌时长
为0.5～3h；3、将（2）中的混合液在20～40℃条件下进行超声处理10～30分钟，通过超声，控制醇脂体粒径为50～200 nm；超声功率为100～300 w；调节其酸碱值为7.0～7.5，即可得到细胞生长因子-醇脂体分散液。
[0034]
第三步、制备透明质酸凝胶，具体过程如下：将透明质酸物质注入到去离子水中，进行磁力搅拌1～6h，搅拌速率为100～300rpm,使其充分分散均匀，即可得到透明质酸凝胶母液。
[0035]
第四步、制备美容凝胶，具体过程如下：将第三步中得到的透明质酸凝胶母液加入到第二步中的细胞生长因子-醇脂体分散液中，进行磁力搅拌0.5～1h，搅拌速率为100～300rpm，并调整其黏度为3000～12000 mpa.s，即可得到能直接喷涂或涂抹的含有细胞生长因子-醇脂体复合物的美容凝胶。
[0036]
通过以下具体几种美容凝胶产品，做详细说明，以下实施方式各物质成分采用重量、体积计份；具体实施方式一、所需原料：（1）、含有细胞生长因子的培养液：4毫升；（2）、脂质：选取大豆卵磷脂120毫克；（3）、乳化剂：选取单硬脂酸甘油酯5毫克；（4）、缓冲溶液：选取磷酸盐缓冲溶液4毫升；（5）、透明质酸物质：选取透明质酸80毫克；（6）、去离子水：3毫升；（7）、溶剂：选用乙醇2毫升。
[0037]
在该过程中所需的细胞生长因子有：成纤维细胞生长因子 0.25mg/l、表皮细胞生长因子2.5 mg/l、i型胶原蛋白0.5 mg/l、角质细胞生长因子 3 mg/l、γ
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氨基丁酸 2 mg/l、维生素 b12 为0.3 mg/l。
[0038]
具体制备步骤如下：第一步、制备含有细胞生长因子的培养液，具体过程如下：将皮肤组织真皮细胞中加入适量的水，其密度为2x105/ml，放置于成纤维细胞培养基中进行培养，得到细胞培养液；在37℃培养 24 小时后，在细胞培养液的上清液中加入成纤维细胞生长因子 0.25mg/l、表皮细胞生长因子2.5 mg/l、i型胶原蛋白0.5 mg/l、角质细胞生长因子 3 mg/l、γ
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氨基丁酸 2 mg/l、维生素 b12 为0.3 mg/l；继续培养24小时，取出上层培养液；离心取出培养液中的细胞成分，离心时间为10分钟，转速为1000rmp，得到上层液，即为含有细胞生长因子的培养液。
[0039]
第二步、制备包载细胞生长因子-醇脂体；具体过程如下：1、将120毫克的大豆卵磷脂、5毫克的单硬脂酸甘油酯加入到2毫升的乙醇中，且搅拌后至其相互溶解，得到醇脂体溶液；2、取第一步中得到含有细胞生长因子的培养液4毫升，将其加入到（1）的醇脂体溶液中，进行充分搅拌，且在溶液中加入4毫升的磷酸盐缓冲溶液；使其混合，搅拌速率为300rpm，持续搅拌时长为1h；3、将（2）中的混合液在20℃条件下进行超声处理10分钟，通过超声，控制醇脂体粒径为80 nm；超声功率为300w；调节其酸碱值为7.0，即可得到细胞生长因子-醇脂体分散液。
[0040]
第三步、制备透明质酸凝胶，具体过程如下：将透明质酸物质注入到去离子水中，进行磁力搅拌4h，搅拌速率为300rpm,使其充分溶解老化，即可得到透明质酸凝胶母液。
[0041]
第四步、制备美容凝胶，具体过程如下：取第三步中得到的透明质酸凝胶母液3毫升，取第二步中得到的细胞生长因子-醇脂体分散液4毫升，将3毫升的透明质酸凝胶母液加入到4毫升的细胞生长因子-醇脂体分散液中，进行磁力搅拌1h，搅拌速率为300rpm，并调整其黏度为4000 mpa.s，即可得到能直接喷涂或涂抹的含有细胞生长因子-醇脂体复合物的美容凝胶。
[0042]
使用方法：将所制备的美容凝胶喷涂在皮肤上，15分钟后，待溶液充分吸收；这种凝胶能够快速的渗入皮肤，比单纯使用透明酸凝胶能递送更多的细胞生长因子进入皮肤的真皮层，能够有效地提高细胞生长因子的渗透性和利用率。
[0043]
具体实施方式二、所需原料：（1）、含有细胞生长因子的培养液：3毫升；（2）、脂质：选取大豆卵磷脂100毫克；（3）、乳化剂：选取单硬脂酸甘油酯2毫克；（4）、缓冲溶液：选取磷酸盐缓冲溶液3毫升；（5）、透明质酸物质：选取透明质酸120毫克；（6）、去离子水：2毫升；（7）、溶剂：选用乙醇1.5毫升。
[0044]
在该过程中所需的细胞生长因子有：成纤维细胞生长因子 0.4mg/l、表皮细胞生长因子3.0 mg/l、i型胶原蛋白1.0 mg/l、角质细胞生长因子4.0 mg/l、γ
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氨基丁酸 3.5 mg/l、维生素 b12 为0.6 mg/l。
[0045]
具体制备步骤如下：第一步、制备含有细胞生长因子的培养液，具体过程如下：将皮肤组织真皮细胞中加入适量的水，其密度为2x106/ml，放置于成纤维细胞培养基中进行培养，得到细胞培养液；在37℃培养 24 小时后，在细胞培养液的上清液中加入成纤维细胞生长因子 0.4mg/l、表皮细胞生长因子3.0 mg/l、i型胶原蛋白1.0 mg/l、角质细胞生长因子4.0 mg/l、γ
-ꢀ
氨基丁酸 3.5 mg/l、维生素 b12 为0.6 mg/l；继续培养24小时，取出上层培养液；离心取出培养液中的细胞成分，离心时间为10分钟，转速为1000rmp，得到上层液，即为含有细胞生长因子的培养液。
[0046]
第二步、制备包载细胞生长因子-醇脂体；具体过程如下：1、将100毫克的大豆卵磷脂、2毫克的单硬脂酸甘油酯加入到1.5毫升的乙醇中，且搅拌后至其相互溶解，得到醇脂体溶液；2、取第一步中得到含有细胞生长因子的培养液3毫升，将其加入到（1）的醇脂体溶液中，且在溶液中加入3毫升的磷酸盐缓冲溶液；进行充分搅拌，使其混合，搅拌速率为300rpm，持续搅拌时长为1h；3、将（2）中的混合液在20℃条件下进行超声处理10分钟，通过超声，控制醇脂体粒径为100nm；超声功率为300w；调节其酸碱值为7.0，即可得到细胞生长因子-醇脂体分散液。
[0047]
第三步、制备透明质酸凝胶，具体过程如下：将120毫克的透明质酸物质注入到2毫升去离子水中，进行磁力搅拌5h，搅拌速率为300rpm,使其充分溶解老化，即可得到透明质酸凝胶母液。
[0048]
第四步、制备美容凝胶，具体过程如下：取第三步中得到的透明质酸凝胶母液2毫升，取第二步中得到的细胞生长因子-醇脂体分散液3毫升，将2毫升的透明质酸凝胶母液加入到3毫升的细胞生长因子-醇脂体分散液中，进行磁力搅拌1h，搅拌速率为200rpm，并调整其黏度为9000 mpa.s，即可得到能直接喷涂或涂抹的含有细胞生长因子-醇脂体复合物的
美容凝胶。
[0049]
使用方法：将所制备的美容凝胶涂抹在皮肤上，15分钟后，待溶液充分吸收；这种凝胶能够快速的渗入皮肤，比单纯使用透明酸凝胶能递送更多的细胞生长因子进入皮肤的真皮层，能够有效地提高细胞生长因子的渗透性和利用率。
[0050]
具体实施方式二、所需原料：（1）、含有细胞生长因子的培养液：2毫升；（2）、脂质：选取大豆卵磷脂70毫克；（3）、乳化剂：选取单硬脂酸甘油酯1毫克；（4）、缓冲溶液：选取磷酸盐缓冲溶液1.5毫升；（5）、透明质酸物质：选取透明质酸150毫克；（6）、去离子水：2毫升；（7）、溶剂：选用乙醇1毫升。
[0051]
在该过程中所需的细胞生长因子有：抗炎因子1 mg/l、转化生长因子1.50mg/l、粒细胞集落刺激因子(g-csf) 0.60 mg/l、干细胞因子(scf)为2.6 mg/l、内皮细胞生长因子(vegf) 1.31 mg/l、成纤维细胞生长因子(fgf)为0.3 mg/l、表皮细胞生长因子(egf) 0.5 mg/l、角质细胞生长因子3mg/l、γ
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氨基丁酸 4.45 mg/l、维生素 b12 为 0.68 mg/l。
[0052]
具体制备步骤如下：第一步、制备含有细胞生长因子的培养液，具体过程如下：将皮肤组织真皮细胞中加入适量的水，其密度为2x106/ml，放置于成纤维细胞培养基中进行培养，得到细胞培养液；在37℃培养 24 小时后，在细胞培养液的上清液中加入抗炎因子1 mg/l、转化生长因子1.50mg/l、粒细胞集落刺激因子(g-csf) 0.60 mg/l、干细胞因子(scf)为2.6 mg/l、内皮细胞生长因子(vegf) 1.31 mg/l、成纤维细胞生长因子(fgf)为0.3 mg/l、表皮细胞生长因子(egf) 0.5 mg/l、角质细胞生长因子3mg/l、γ
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氨基丁酸 4.45 mg/l、维生素 b12 为 0.68 mg/l；继续培养24小时，取出上层培养液；离心取出培养液中的细胞成分，离心时间为10分钟，转速为1000rmp，得到上层液，即为含有细胞生长因子的培养液。
[0053]
在这个配方中，抗炎因子、转化生长因子、粒细胞集落刺激因子(g-csf)可以缓解美容产品对皮肤的刺激。
[0054]
第二步、制备包载细胞生长因子-醇脂体；具体过程如下：1、将70毫克的大豆卵磷脂、1毫克的单硬脂酸甘油酯加入到1毫升的乙醇中，且搅拌后至其相互溶解，得到醇脂体溶液；2、取第一步中得到含有细胞生长因子的培养液2毫升，将其加入到（1）的醇脂体溶液中，且在溶液中加入1.5毫升的磷酸盐缓冲溶液；进行充分搅拌，使其混合，搅拌速率为300rpm，持续搅拌时长为1h；3、将（2）中的混合液在20℃条件下进行超声处理10分钟，通过超声，控制醇脂体粒径为100nm；超声功率为300w；调节其酸碱值为7.0，即可得到细胞生长因子-醇脂体分散液。
[0055]
第三步、制备透明质酸凝胶，具体过程如下：将150毫克的透明质酸物质注入到2毫升去离子水中，进行磁力搅拌5h，搅拌速率为300rpm,使其充分溶解老化，即可得到透明质酸凝胶母液。
[0056]
第四步、制备美容凝胶，具体过程如下：取第三步中得到的透明质酸凝胶母液2毫升，取第二步中得到的细胞生长因子-醇脂体分散液3毫升，将2毫升的透明质酸凝胶母液加入到3毫升的细胞生长因子-醇脂体分散液中，进行磁力搅拌1h，搅拌速率为300rpm，并调整
其黏度为12000 mpa.s，即可得到能直接喷涂或涂抹的含有细胞生长因子-醇脂体复合物的美容凝胶。
[0057]
使用方法：将所制备的美容凝胶涂抹在皮肤上，15分钟后，待溶液充分吸收；这种凝胶能够快速的渗入皮肤，比单纯使用透明酸凝胶能递送更多的细胞生长因子进入皮肤的真皮层，能够有效地提高细胞生长因子的渗透性和利用率。
[0058]
透明质酸凝胶因其具有良好的生物相容性、理化特性和特异的配体-受体生理功能，在经皮递送方面发挥着越来越重要的作用。
[0059]
首先，透明质酸是一种糖胺聚糖，天然存在于皮肤细胞外基质中，不仅良好的生物相容性，更具备优异的护肤、修改皮肤的功能。
[0060]
其次，透明质酸具有特殊的吸水性能和亲疏水两性结构域，不仅具有良好的保湿性能，还可通过水化作用降低角质层屏障功能从而有效促进干细胞生长因子穿透角质层进行经皮递送。
[0061]
最后，透明质酸凝胶在一定浓度下呈空间网格结构可包载性能，可以与纳米醇脂体的磷脂通过静电作用形成复合结构，实现两者的协同递送，显著提高经皮递送性能。
[0062]
目前，经皮递送研究研究证实皮肤中的成纤维细胞表面具有大量的透明质酸受体，因此透明质酸能主动聚集于成纤维细胞表面，实现干细胞生长因子在成纤维细胞表面靶向聚集，充分利用这些生长因子对成纤维细胞的作用实现皮肤护理与修复的功能。
[0063]
此外，透明质酸可与醇脂体通过利用静电作用结合形成可经皮递送护肤凝胶，实现透明质酸与醇脂体进行协同渗透，降低干细胞生长因子通过皮肤的阻力并加速进入真皮层，显著提高干细胞生长因子渗透性能，同时实现醇脂体在成纤维细胞表面靶向聚集并大量进入细胞，促进干细胞生长因子进入细胞提高其利用效率。
[0064]
本发明使用醇质体经皮递送送干细胞生长因子，使其更好地被皮肤吸收，既能使皮肤短时间内达到修复与美容效果，又能在使用过程中调理皮肤，达到护肤的效果。
[0065]
本发明采用醇脂体作为负载材料，实现了细胞生长因子的较大负载量；以静电作作用力原理，实现透明质酸凝胶和醇脂体的有效结合，并具有良好的稳定性，显著提高细胞生长因子的渗透性能和利用率，提高产品效果；整个配方所用的成份均具有良好的生物相融性，无任何副作用。
[0066]
本发明不局限于上述具体的实施方式，本领域的普通技术人员从上述构思出发，不经过创造性的劳动，所作出的种种变换，均落在本发明的保护范围之内。