本发明涉及纳米凝胶材料领域，尤其涉及一种假酸浆糖胶微球的制备方法。
背景技术：
纳米凝胶是指一类粒径在1～1000nm的交联聚合物胶粒。这种胶粒内部具有高度交联的网络结构，通常以胶态的形式溶胀于一定的溶剂中而且能高度分散。二硫键交联的纳米凝胶是指以二硫键为交联键的纳米凝胶。该类纳米凝胶具有还原响应性、可逆溶胀性、电性能等性质。纳米凝胶网络结构中的二硫键能在还原性环境(如还原性谷胱甘肽或二硫苏糖醇的溶液)中被劈开还原为自由巯基，使凝胶的网络结构崩解进而使其具有还原响应性.二硫键交联的纳米凝胶可有以下应用前景：(1)用于解决某些药物如多肽类、酶类、蛋白类、抗生素等的给药途径，避免因口服而被胃酸或胃肠道内的酶破坏；(2)用于更精确地定位靶向给药，避免或减少药物的毒副作用；(3)用于延缓药物的体内代谢，减少用药次数，从而提高患者的顺应性；(4)用于消除一些特殊的生物屏障对药物作用的限制；(5)用作基因载体，使其能发挥独特的基因治疗作用。
但是，现有的纳米凝胶的载药能力有限，并且缓释效果较差、靶向性较弱。如中国专利局于2019年2月1日公开的一种假酸浆糖胶微球的制备方法的发明专利申请，申请公开号为cn109288812a，其采用假酸浆胶质多糖配合钙离子直接形成纳米凝胶微球，其制备过程简洁高效，但是在实际使用过程中，发现其载药性能有限，并且较难实现靶向给药。
技术实现要素：
为解决现有的纳米凝胶微球载药性能有限，并且难以实现靶向给药，以及生物相容性较差等问题，本发明提供了一种假酸浆糖胶微球的制备方法。本发明的目的在于：一、提高纳米凝胶微球的载药性能；二、通过海藻酸钠的引入提高纳米微球对人体的生物相容性；三、通过巯基化海藻酸钠的配合实现靶向给药。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。
一种假酸浆糖胶微球的制备方法，
所述方法包括以下步骤：
1)将海藻酸钠溶于水，调节其ph值≤7，加入活化剂对海藻酸钠羟基进行活化，随后在保护气氛中加入氨基巯醇得到前驱液，于保护气氛中存放；
2)将假酸浆胶质多糖配制为多糖溶液，将多糖溶液和前驱液于保护气氛中混合，并加入钙盐溶液，进行互穿交联，得到中间体；
3)将中间体从保护气氛中取出，置于含氧气氛中进行高速均质，即得到假酸浆糖胶微球。
首先将海藻酸钠活化，并加入氨基巯醇对海藻酸钠进行巯基化，使其改性成为巯基化海藻酸钠，并置于保护气氛中使其处于预交联状态。同时，配制多糖溶液，将多糖溶液置于保护气氛中与前驱液混合，同样是为了防止巯基化海藻酸钠的自交联进行，此时加入钙盐溶液，通过钙离子首先激发假酸浆胶质多糖与巯基化海藻酸钠的互穿交联，使两者配合形成凝胶中间体，最后置于含氧气氛中，进行高速均质，使得凝胶分散，并且在含氧气氛中巯基化海藻酸钠再进行自交联形成纳米微球，所得假酸浆糖胶微球由层叠交错的巯基化海藻酸钠和假酸浆糖胶组成，具有良好的物理特性和生物相容性，并且巯基化海藻酸钠的引入还提高了其载药性能并给予了微球靶向给药的能力。
作为优选，
步骤1)所述活化剂为碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺。
碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺均能够对海藻酸钠的羧基进行良好的活化，以便后续其与氨基巯醇的反应进行和自交联的进行。
作为优选，
所述活化剂由碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：(0.5～2)的比例组成。
上述配比的活化剂能够起到较优的活化效果。
作为优选，
步骤1)前驱液中：
海藻酸钠浓度为2～8wt％，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：(0.8～2.2)，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：(0.8～1.1)。
海藻酸钠浓度过高则会导致后续高速均质制备微球的难度增大，并且更加难以抑制其自交联的进行，而浓度过低则会导致巯基化海藻酸钠和假酸浆胶质多糖的互穿交联效果差，所形成的微球仍存在生物相容性差、载药性能较差等问题。活化剂的用量决定了海藻酸钠的羧基活化程度，用量过小会导致其羧基活化不完全，用量过多则造成了物料浪费。
作为优选，
步骤2)所述多糖溶液中假酸浆胶质多糖的浓度为2.5～4.5wt％；
步骤2)所述钙盐溶液为0.5～1.0wt％氯化钙溶液。
假酸浆胶质多糖的浓度过大或过小均会导致后续互穿交联效果变差，上述浓度的假酸浆胶质多糖和氯化钙溶液具有较优的制备效果。
作为优选，
步骤2)所述多糖溶液和前驱液以体积比1：(0.8～1.1)的比例混合；
步骤2)所用钙盐溶液体积为多糖溶液体积的1.5～3倍。
上述比例的多糖溶液、前驱液和钙盐溶液混合能够实现较优的制备效果。
作为优选，
步骤3)所述高速均质的转速为8000～12000r/min。
由于假酸浆胶质多糖和巯基化海藻酸钠产生了互穿交联，因此需要高速均质才能够实现微球的制备，以避免形成整体的凝胶。但转速过大则容易导致微球形成速度减慢甚至难以形成。
本发明的有益效果是：
1)制备方法简洁高效；
2)能够制备得到具有良好生物相容性、载药性和靶向给药能力的微球。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作出进一步清楚详细的描述说明。本领域普通技术人员在基于这些说明的情况下将能够实现本发明。此外，下述说明中涉及到的本发明的实施例通常仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。因此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
如无特殊说明，本发明实施例所用原料均为市售或本领域技术人员可获得的原料；如无特殊说明，本发明实施例所用方法均为本领域技术人员所掌握的方法。
实施例1
一种假酸浆糖胶微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)将海藻酸钠溶于水，利用氯化氢调节其ph值为5，加入活化剂对海藻酸钠羟基进行活化，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：1.5的比例组成，随后在氮气气氛中加入氨基巯醇得到前驱液，于氮气气氛中存放；
其中前驱液中：海藻酸钠浓度为5wt％，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：1.5，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：1；
2)将假酸浆胶质多糖配制为3.5wt％的多糖溶液，将多糖溶液和前驱液于氮气气氛中以体积比1：1的比例混合，并加入多糖溶液体积的2倍的1.0wt％氯化钙溶液，进行互穿交联，得到中间体；
3)将中间体从氮气气氛中取出，置于空气气氛中进行12000r/min的高速均质30min，即得到假酸浆糖胶微球。
实施例2
一种假酸浆糖胶微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)将海藻酸钠溶于水，利用氯化氢调节其ph值为4，加入活化剂对海藻酸钠羟基进行活化，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：1的比例组成，随后在氮气气氛中加入氨基巯醇得到前驱液，于氮气气氛中存放；
其中前驱液中：海藻酸钠浓度为6wt％，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：1.75，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：1.05；
2)将假酸浆胶质多糖配制为2.5～4.5wt％的多糖溶液，将多糖溶液和前驱液于氮气气氛中以体积比1：1的比例混合，并加入多糖溶液体积的2.5倍的1.0wt％氯化钙溶液，进行互穿交联，得到中间体；
3)将中间体从氮气气氛中取出，置于空气气氛中进行10000r/min的高速均质30min，即得到假酸浆糖胶微球。
实施例3
一种假酸浆糖胶微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)将海藻酸钠溶于水，利用氯化氢调节其ph值为3，加入活化剂对海藻酸钠羟基进行活化，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：2的比例组成，随后在氮气气氛中加入氨基巯醇得到前驱液，于氮气气氛中存放；
其中前驱液中：海藻酸钠浓度为5wt％，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：1.25，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：0.85；
2)将假酸浆胶质多糖配制为3.5wt％的多糖溶液，将多糖溶液和前驱液于氮气气氛中以体积比1：1的比例混合，并加入多糖溶液体积的3倍的0.5wt％氯化钙溶液，进行互穿交联，得到中间体；
3)将中间体从氮气气氛中取出，置于空气气氛中进行11000r/min的高速均质30min，即得到假酸浆糖胶微球。
实施例4
一种假酸浆糖胶微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)将海藻酸钠溶于水，利用氯化氢调节其ph值为3，加入活化剂对海藻酸钠羟基进行活化，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：2的比例组成，随后在氮气气氛中加入氨基巯醇得到前驱液，于氮气气氛中存放；
其中前驱液中：海藻酸钠浓度为8wt％，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：2.2，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：1.1；
2)将假酸浆胶质多糖配制为4.5wt％的多糖溶液，将多糖溶液和前驱液于氮气气氛中以体积比1：1.1的比例混合，并加入多糖溶液体积的3倍的0.5wt％氯化钙溶液，进行互穿交联，得到中间体；
3)将中间体从氮气气氛中取出，置于空气气氛中进行12000r/min的高速均质30min，即得到假酸浆糖胶微球。
实施例5
一种假酸浆糖胶微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)将海藻酸钠溶于水，利用氯化氢调节其ph值为7，加入活化剂对海藻酸钠羟基进行活化，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：0.5的比例组成，随后在氮气气氛中加入氨基巯醇得到前驱液，于氮气气氛中存放；
其中前驱液中：海藻酸钠浓度为2wt％，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：0.8，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：0.8；
2)将假酸浆胶质多糖配制为2.5wt％的多糖溶液，将多糖溶液和前驱液于氮气气氛中以体积比1：0.8的比例混合，并加入多糖溶液体积的1.5倍的1.0wt％氯化钙溶液，进行互穿交联，得到中间体；
3)将中间体从氮气气氛中取出，置于空气气氛中进行8000r/min的高速均质45min，即得到假酸浆糖胶微球。
实施例6
具体操作步骤与实施例1相同，所不同的是：在步骤2)配制多糖溶液时向多糖溶液中加入20wt％牛血清白蛋白作为模拟药物。
对所得微球进行检测，测定所制得假酸浆糖胶微球中载药量为20.31wt％，包封率高达86.1％。
实施例7
具体操作步骤与实施例2相同，所不同的是：在步骤2)配制多糖溶液时向多糖溶液中加入20wt％牛血清白蛋白作为模拟药物。
对所得微球进行检测，测定所制得假酸浆糖胶微球中载药量为20.12wt％，包封率高达86.4％。
实施例8
具体操作步骤与实施例3相同，所不同的是：在步骤2)配制多糖溶液时向多糖溶液中加入20wt％牛血清白蛋白作为模拟药物。
对所得微球进行检测，测定所制得假酸浆糖胶微球中载药量为20.26wt％，包封率高达87.2％。