一种调节肠道健康的复配物的制作方法

本发明涉及一种调节肠道健康的复配物。

背景技术：

人体大约携带3.9×10¹³个细菌，其中绝大多数存在于大肠中。据统计，人的肠道菌群中存在大约1000万种不重复的基因，约是人类基因组的150倍。因此，肠道菌群的代谢能力远超人体细胞的代谢能力。此外，肠道菌群的组成和丰度与人体的机能和代谢存在显著的相关性。肠道菌群紊乱易增加机体患胰岛素抵抗、血脂异常、慢性炎症以及免疫力低下的风险，从而导致肥胖、二型糖尿病、非酒精性脂肪肝等多种代谢综合征的产生。因此，调节和维持肠道菌群的平衡对于维持宿主的健康具有重要作用。

目前市面上蛋白肽类产品更多是用于辅助调节机体免疫，维持人体健康及作为营养补充剂，功能较为单一，很多产品不具备肠道菌群调节作用。现阶段所报道的肠道菌群调节产品主要包括益生菌类产品、低聚糖类等益生元产品，然而益生菌类产品菌种单一，不能满足人体肠道中复杂菌群体系的需求，在一定程度上限制了其应用；低聚糖类等益生元产品，单独使用效果有限，并且作为碳水化合物，低聚糖被代谢后可为机体供能，限制了糖尿病、肥胖等人群的食用。

技术实现要素：

根据上述现有技术的不足，本发明提供一种调节肠道健康的复配物。该复配物有效提高了其调节肠道菌群、提高免疫力活性。

一种调节肠道健康的复配物，所述复配物的原料组分包括：糖基化牡蛎肽粉60～80重量份，海参多糖10～20重量份，维生素1％～3重量份，壳寡糖5～15重量份，益生菌粉1～2重量份。

优选的，所述糖基化牡蛎肽粉的制备方法的步骤包括：

(1)将牡蛎肉经匀浆后得到牡蛎匀浆液；再将牡蛎匀浆液经高压均质后得到牡蛎均质液；

(2)调节牡蛎均质液的ph至7.0～9.0，经蛋白酶酶解后，得到牡蛎蛋白酶解液；

(3)将牡蛎蛋白酶解液离心后取上清；将上清液通过超滤膜后，向超滤液中加入高活性干酵母进行一次脱腥处理，再加入活性炭进行二次脱腥处理，得到脱腥后的牡蛎酶解液；

(4)将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过筛后得牡蛎肽粉；

(5)将所述牡蛎肽粉与一定比例的还原糖添加到ph7.0的磷酸盐缓冲液中，溶解使其终浓度为80～150mg/ml，在50-75℃的条件下反应4-8h，反应结束后将混合液进行浓缩、干燥，过100目筛后得具有肠道菌群调节活性的糖基化牡蛎肽粉。

优选的，所述益生菌粉为两歧双歧杆菌和植物乳杆菌的混合物，所述两歧双歧杆菌和植物乳杆菌的质量比为1.3～1.5:1。

本发明还提供一种调节肠道健康的复配物的制备方法，按比例将所述糖基化牡蛎肽粉与海参多糖、维生素、壳寡糖、益生菌粉在双螺旋锥形混合机中混合10-20min，得调节肠道健康的复配物。

有益效果：糖基化牡蛎肽与海参多糖、维生素、壳寡糖、益生菌粉进行复配，有效提高了其调节肠道菌群、提高免疫力活性。

附图说明

图1为本发明应用例中对小鼠肠道菌群进行多样性分析图。

图2为本发明应用例中对小鼠肠道菌群的组成及丰度分析图。

具体实施方式

实施例1

取70g糖基化牡蛎肽粉、20g海参多糖、1g维生素c、8g壳寡糖、1g两歧双歧杆菌和0.5g植物乳杆菌粉在双螺旋锥形混合机中混合10min，得具有肠道菌群调节作用的糖基化牡蛎肽复配物。

实施例2

取75g糖基化牡蛎肽粉、10g海参多糖、0.5g维生素c、13g壳寡糖、1.5g两歧双歧杆菌和0.5g植物乳杆菌粉在双螺旋锥形混合机中混合10min，得具有肠道菌群调节作用的糖基化牡蛎肽复配物。

应用例

糖基化牡蛎肽复配物肠道菌群调节、降糖降脂及增强免疫力作用的评价：

实施例1制得的糖基化牡蛎肽复配物。

实验动物：4周龄雄性c56bl/6小鼠，购自于北京维通利华实验动物技术有限公司。

实验方法

1)肥胖模型的建立

60只4周龄的雄性c57bl/6小鼠适应性喂养一周后，随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、糖基化牡蛎肽复配物组。正常对照组饲喂普通饲料，其余各组均饲喂60％的高脂饲料，连续饲喂12周。

2)实验设计

按照分组，各组灌胃相应的活性物质，每天1次，具体灌胃剂量如表1所示。实验期间小鼠自由摄食、饮水，每3天称一下体重。连续灌胃8周后，对小鼠禁食8-10h，摘眼球取血，收集血清，用于检测血清中糖脂代谢相关生化指标；收集结肠内容物，用于测定小鼠肠道菌群组成及丰度。

表1动物分组及灌胃剂量

3)血清生化指标测定

按照试剂盒说明书要求，分别检测小鼠血清中葡萄糖、脂多糖(lps)、甘油三酯(tg)、胆固醇(tc)、高密度脂蛋白(hdl-c)、低密度脂蛋白(ldl-c)、iga、igg以及igm含量，其中葡萄糖、甘油三酯(tg)、胆固醇(tc)、高密度脂蛋白(hdl-c)、低密度脂蛋白(ldl-c)生化检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；脂多糖(lps)、iga、igg以及igmelisa试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。

糖基化牡蛎肽复配物对肥胖小鼠体重及血糖、血脂的影响如表2所示。

表2体重和血清生化指标

注：各组数据以平均值±标准差的形式表示；不同字母代表具有显著性差异(p<0.05)

表2实验结果显示，与正常对照组相比，模型对照组小鼠体重增加量显著升高(p<0.05)；而干预糖基化牡蛎肽及其复配物后，小鼠体重增加量较模型对照组均显著下降(p<0.05)，并且糖基化牡蛎肽及其复配物效果优于牡蛎肽；

与模型对照组相比，糖基化牡蛎肽组复配物组均能显著降低肥胖小鼠的空腹血糖、血清中lps、tc、tg以及ldl-c，并显著增加hdl-c的含量(p<0.05)，并且糖基化牡蛎肽复配物的糖基化作用能够显著增强其抗炎、降糖降脂活性。

4)肠道菌群测序及分析

根据soil试剂盒(omegabio-tek,norcross,ga,u.s.)说明书总dna抽提，对v3-v4可变区进行进行pcr扩增。根据illuminamiseq平台(illumina,sandiego,usa)标准操作规程将纯化后的扩增片段构建pe2*300的文库利用illumina公司的miseqpe300平台进行测序。

如图1所示，通过对小鼠肠道菌群进行α多样性分析(图1a-b)，结果显示，与正常对照组相比，模型对照组小鼠肠道菌群的shannon指数显著降低，糖基化牡蛎肽复配物组显著上调了shannon指数；而chao指数各组之间无显著性差异。

通过对小鼠肠道菌群进行β多样性分析(图1c)发现，正常对照组小鼠肠道菌群与模型对照组之间存在显著性差异，而糖基化牡蛎肽复配物组形成了不同于正常对照组和模型对照组的肠道菌群结构，并且糖基化牡蛎肽复配物组小鼠的肠道菌群结构接近于正常对照组。以上结果说明，糖基化牡蛎肽复配物均能显著调节高脂饮食小鼠的菌群多样性。

如图2所示，通过对小鼠肠道菌群的组成及丰度进行分析发现，在门水平上(图2a-b)，与正常对照组相比，模型对照组小鼠肠道菌群中厚壁菌门丰度显著升高，拟杆菌门丰度显著降低，导致拟杆菌门/厚壁菌门显著下降(p<0.05)；而糖基化牡蛎肽复配物组，能够显著改善高脂饮食导致的拟杆菌门和厚壁菌门的变化，增加拟杆菌门与厚壁菌门的比值(p<0.05)。

如图2c-d所示，在属水平上，高脂饮食显著下调了porphyromonadaceae、bacteroidaies_s24-7_group的丰度(p<0.05)，显著上调了bacteroidaceae、rikenellaceae、ruminococcaceae以及lachnospiraceae的丰度(p<0.05)，而糖基化牡蛎肽复配物组干预后显著逆转了高脂饮食造成的菌群丰度变化(p<0.05)，并且糖基化牡蛎肽复配物组小鼠肠道菌群的组成接近于正常组小鼠。以上结果说明糖基化牡蛎肽复配物组能够显著改善高脂饮食小鼠的肠道菌群。

5)糖基化牡蛎肽复配物对肥胖小鼠免疫力的影响

表3血清免疫球蛋白含量

注：各组数据以平均值±标准差的形式表示；不同字母代表具有显著性差异(p<0.05)

由表3可知，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清中的iga、igg以及igm的含量均显著下降(p<0.05)，说明模型对照组小鼠机体免疫力下降。而糖基化牡蛎肽复配物组，小鼠血清中的iga、igg以及igm的含量均不同程度的显著升高(p<0.05)，说明糖基化牡蛎肽复配物能够显著增强高脂饮食小鼠机体的免疫力。

采用本发明制备得到的糖基化牡蛎肽及其复配物安全、无副作用、易吸收，具有良好的肠道菌群调节活、辅助降糖降脂、提高机体免疫力活性。糖基化牡蛎肽复配物可有效应用于制备具有肠道菌群调节、降糖降脂、增强免疫力活性的药品或保健食品中。

本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从哪一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在本发明的权利要求书的范围内。