一种可调节肠道功能、预防结肠炎的发酵乳杆菌HY01及其用途的制作方法

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种可调节肠道功能、预防结肠炎的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01及其用途。

背景技术：

炎症性肠病是病因和发病机制尚不清楚的慢性非特异性肠道疾病，结肠炎是其中一种，主要症状包括便血、腹痛、腹泻、消瘦、里急后重等，严重影响患者生活，给患者带来巨大痛苦与困扰。结肠炎在世界范围内均有发生，与种族、地域和年龄有关，发病人群中男女性别无显著差异。据统计，西方国家结肠炎发病率最高，发生率为1.2-20.3/10万，流行率为7.6-245/10万；欧洲地区的发生率为19.2-24.3/10万，亚洲和中东地区的发生率为6.3/10万。但是，由于我国人民生活水平的提高和饮食结构的改变，结肠炎的发病率呈逐年增加趋势，已成为我国消化系统常见疾病之一。此外，数据显示有5％-10％的慢性结肠炎患者转变为结肠癌，而患有结肠炎25年以上的长期患者，约40％转变为结肠癌，给人民健康和结肠炎患者带来巨大的威胁。因此，探寻有效预防结肠炎的方法已迫在眉睫。

在临床研究中，由于结肠炎发病机制的不确定性，使得临床上治疗结肠炎的药物种类繁多，目前常用的药物可归纳为以下几种：氨基水杨酸类(主要代表药物：5-氨基水杨酸)、免疫抑制剂类(主要代表药物：硫唑嘌呤和6-巯基嘌呤)、糖皮质激素类(主要代表药物：二丙酸倍氯松、巯氢可的松)、抗生素、维生素和细胞因子拮抗剂。虽然这些药物可在不同程度上预防结肠炎，但其作用机理有所不同，并且大多具有副作用、价格高的特点，不适用于普通患者。例如，长期使用5-氨基水杨酸会导致腹痛、恶心、溶血性贫血和肾功能衰竭；低剂量使用糖皮质激素时结肠炎复发率较高，而高剂量使用又会导致白内障和骨质疏松症；此外，使用抗生素能使肠道菌群生存环境的条件发生改变，不利于有益微生物的生存。除此之外，不少研究者还关注中药制剂治疗结肠炎的效果，如黄连煎剂、乌梅丸、参苓白术散、葛根芩连汤、四白汤和四神丸等，虽然表现出对结肠炎的预防效果，但是中药制剂具有组成复杂且含有不明成分的特点。因此，寻找安全、有效且经济的治疗方法具有重要意义。

微生态制剂因其具有安全、有效且经济的特点而受到国内外学者的重视，益生菌是微生态制剂中的一种，在保护肠道中发挥重要作用，cn1796540a公开了具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌及其用途，用于制备食品组合物或药物组合物，杀死或抑制幽门螺旋杆菌或大肠杆菌，治疗由其引起的各种疾病。cn102174450a公开了一种抗幽门螺杆菌感染的植物乳杆菌及其用途，用于制备药物组合物、发酵剂、动物饲料添加剂和保健品中来预防或减轻幽门螺杆菌的感染。目前认为其作用机理为：益生菌进入肠道后，通过调节肠道菌群，改善肠道免疫屏障和促进适应性与固有免疫反应途径来维持机体肠道内稳态的平衡，从而抑制肠道内有害菌的生长和减少毒素的产生；益生菌产生的代谢产物(乳酸)使肠道内ph值降低，进而具有一定抗菌作用；此外，益生菌还能与胃肠道上皮细胞结合，从而抑制肠道内致病菌的黏附与定植等功能。因此，筛选具有预防结肠炎功能的乳酸菌对改善肠道功能的研究具有重要意义。

技术实现要素：

为了解决上述问题，本发明提供了一种可调节肠道功能、预防结肠炎的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01及其用途，主要提供一种可调节肠道功能、预防结肠炎的发酵乳杆菌菌株和提供一种所述发酵乳杆菌在发酵食品中的用途。

本发明提供的一种可调节肠道功能、预防结肠炎的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01于2015年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctccm2015792。

发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01从自然发酵牦牛酸乳中筛选出，利用形态特征、培养性状和生理生化特征等微生物学特性对该乳酸杆菌lactobacillusfermentumhy01鉴定为发酵乳杆菌，该菌株已于2015年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctccm2015792。

所述发酵乳杆菌hy01的形态学特征具体为：

菌体特征：呈革兰氏染色阳性，细胞杆状，无芽孢，两端圆形。

菌落特征：在mrs固体培养基上形成明显的菌落，圆形，边缘整齐，乳白色，菌落凸起，表面湿润光滑，不产生色素。

所述发酵乳杆菌hy01体内耐受特征为：

发酵乳杆菌的菌株耐受能力较强，在ph3.0的人工胃液中处理3h后的存活率为103.73±8.60％；在0.3％胆盐浓度下的生长效率为无胆盐培养的21.62±0.86％。

所述发酵乳杆菌hy01在制备调节肠道功能或/和预防结肠炎的食品中的应用。

所述发酵乳杆菌来源于传统发酵食品，属公认安全(generallyrecognizedassafe,gras)菌种，用于发酵食品中；

所述发酵食品为含有发酵乳杆菌的乳酸菌奶饮料、乳粉、胶囊制品或发酵乳中的一种或多种。

利用所述发酵乳杆菌hy01制备乳酸菌奶饮料的方法，将保存的发酵乳杆菌hy01作为发酵工作剂加入经杀菌的原料乳中，培养至发酵乳杆菌hy01浓度达到10⁶cfu/ml以上，保存，得乳酸菌奶饮料；

所述原料乳选自脱脂奶、鲜奶或复原奶。

进一步，所述乳酸菌奶饮料是按照下述步骤制备得到的：

所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度-80℃下以磁珠形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；

利用所述发酵乳杆菌的原始菌种制备发酵乳杆菌工作发酵剂；

原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，冷却到4℃，加入所述发酵乳杆菌工作发酵剂，使其浓度达到10⁶cfu/ml以上，在4℃冷藏保存。

利用所述发酵乳杆菌hy01制备乳粉的方法，将保存的发酵乳杆菌hy01作为发酵工作剂加入经杀菌的原料乳中，发酵获得发酵乳杆菌发酵乳，然后将获得的发酵乳杆菌发酵乳与经杀菌的原料乳按照体积比为1:3混合，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得到乳粉。

进一步，所述乳粉是按照下述步骤制备得到的：

所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度-80℃下磁珠形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；

利用所述发酵乳杆菌的原始菌种制备发酵乳杆菌工作发酵剂；

原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再以原料乳体积的4％接菌量接种所述的发酵乳杆菌工作发酵剂，37℃下发酵16h，得到发酵乳杆菌发酵乳；所述发酵乳杆菌发酵乳和灭菌后的原料乳按照1∶3(v∶v)配比加入，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得到含发酵乳杆菌的乳粉。

利用所述发酵乳杆菌hy01制备胶囊制品的方法，将保存的发酵乳杆菌hy01作为发酵工作剂加入经杀菌的原料乳中，发酵获得发酵乳杆菌发酵乳，然后将获得的发酵乳杆菌发酵乳与经杀菌的原料乳按照体积比为1:3混合，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得到乳粉，将乳粉装到胶囊中制成胶囊制品。

进一步，所述胶囊制品是按照下述步骤制备得到的：

所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度-80℃下以磁珠形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；

利用所述发酵乳杆菌的原始菌种制备发酵乳杆菌工作发酵剂；

将原料乳在140℃高温热杀菌2s，然后冷却至37℃，以原料乳体积的4％接菌量接种所述发酵乳杆菌工作发酵剂，在37℃下发酵16h，得到发酵乳杆菌发酵乳；将所述发酵乳杆菌发酵乳和灭菌后的原料乳按照以1∶3(v∶v))配比加入，均质，真空浓缩、喷雾干燥处理后得到乳粉，将得到含有发酵乳杆菌的胶囊制品。

利用所述发酵乳杆菌hy01制备发酵乳的方法，将保存的发酵乳杆菌hy01作为发酵工作剂按体积百分比为3～5％加入经杀菌的原料乳中，在加入相当于原料乳体积百分比为3～5％的可共生发酵剂，混匀后在发酵至滴定酸度以乳酸计0.6-0.7％，然后冷却至4℃，再进行冷藏保存得发酵乳。

进一步，所述发酵乳是按照下述步骤制备得到的：

所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度-80℃下以磁珠形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；

利用所述发酵乳杆菌的原始菌种制备发酵乳杆菌工作发酵剂；

原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再按照3-5％(体积)加入发酵乳杆菌工作发酵剂，再加入3-5％(体积)可共生的用于制备发酵乳制品的发酵剂，混匀后在37℃下混菌发酵至滴定酸度以乳酸计0.6-0.7％，然后冷却至4℃，再进行冷藏保存得到含有发酵乳杆菌的发酵乳。

进一步，所述可共生发酵剂保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。

本发明中，所述发酵乳杆菌工作发酵剂的制备方法包括：

将所述发酵乳杆菌的原始菌种接种于12％(重量)的脱脂乳中，110℃灭菌10min，在37℃条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；将所述母发酵剂按3-5％(体积)接种于灭菌乳中，培养14-16h至凝乳，至该凝乳中的活菌数约10⁹cfu/ml，得到工作发酵剂，可以直接将这种工作发酵剂添加到食品中，或者与可共生的制备发酵乳的商业发酵剂如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌一起使用制备发酵乳；或

将所述发酵乳杆菌的原始菌种接种于mrs液体培养基中，在37℃条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4％(体积)接种于mrs培养基中，培养16-18h，在4℃条件下3000r/min离心15min，去除上清夜，得到细胞沉淀，将沉淀用无菌脱脂乳制成悬浮液，得到工作发酵剂。

本发明中，加热杀菌是例如使用上海沃迪自动化装备股份有限公司销售的tw10d1000型管式杀菌机进行的。

高温热杀菌是例如使用北京勇创嘉业机械设备有限公司销售的yc-104型板式超高温杀菌机进行的。

均质是例如使用常州市均质机械有限公司销售的gjb500-40小型均质机进行的。

浓缩是例如使用上海伟宙轻工机械有限公司销售的真空浓缩锅进行的。

喷雾干燥是例如使用上海沃迪科技有限公司销售的实验型喷雾干燥机进行的。

商品发酵剂优选的是保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。

在本发明的意义上，所述的原料乳选自脱脂奶、鲜奶、复原奶的一种或多种。

本发明实施例的技术方案带来的有益效果如下：

本发明公开了一种分离自四川省红原县牧民家自然发酵牦牛酸乳中的可调节肠道功能、预防结肠炎的发酵乳杆菌和以该菌株为发酵剂或添加的发酵乳、健康食品以及动物保健制品中的应用，发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01菌株耐受能力较强，在ph3.0的人工胃液中处理3h后的存活率为103.73±8.60％；在0.3％胆盐浓度下的生长效率为无胆盐培养的21.62±0.86。这表明发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01在人的肠道内能够良好生长。小鼠体内试验表明，发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01能够缓解结肠炎小鼠结肠缩短、结肠水肿，结肠炎性细胞浸润和粘膜损伤等。此外，在血清水平上，发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01能够下调促炎因子ifn-γ，il-12、tnf-α和il-6的水平。在蛋白水平上，发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01还能提高iκbα的水平，降低nf-κbp65、inos和cox-2的水平，具有预防结肠炎的作用。

附图说明

为了更清楚的说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见的，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01菌落形态；

图2发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01的菌体形态(l000×)；

图3不同组小鼠结肠长度与重量的变化(a：不同组小鼠结肠照片；b：不同组小鼠结肠长度；c：不同组小鼠结肠重量)；

图4不同组小鼠结肠病理学观察(a：正常组；b：模型组；c：低浓度组；d：高浓度组)；

图5不同组小鼠血清中炎症相关因子水平(a：inf-γ因子水平；b：il-12因子水平；c：tnf-α因子水平；d：il-6因子水平)；

图6不同组小鼠结肠中炎症相关蛋白水平(a：iκbα蛋白水平；b：nf-κbp65蛋白水平；c：inos蛋白水平；d：cox-2蛋白水平)。

生物材料保藏

本发明的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01于2015年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，编号为cctccm2015792。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01的分离、纯化及初步鉴定，该实施例按照下述步骤进行：

(1)lactobacillusfermentumhy01的分离、纯化

以无菌操作吸取样品(四川省红原县牧民家自然发酵牦牛酸乳)1ml加入至9ml灭菌生理盐水混合作成1∶10的均匀稀释液，并继续作一定比例的稀释。选择合适梯度的稀释液，用无菌枪头各吸取100μl分别涂布到mrs固体平板培养基中，37℃培养48h，观察记录菌落形态，如图1所示。用接种环从平板表面挑取不同菌落接种于mrs液体培养基中，置37℃，100r/min摇床培养18h；重复以上步骤连续活化2代后进行涂片革兰氏染色镜检，如图2所示，确定为g+菌的继续活化，直至得到纯菌落(镜检无杂菌)并保存，具体操作参照《微生物学实验技术》。

实验结果显示，从四川红原的十二份样品中共分离出乳酸菌43株。

(2)lactobacillusfermentumhy01的初步鉴定

革兰氏染色：取典型菌落涂片，进行革兰氏染色，在微生物显微镜油镜下观察菌体形态及其排列方式。挑取视野清晰、形态典型的菌株，进行拍照。结果表明，从样品中分离纯化出的菌株均为革兰氏染色阳性。

实施例2

lactobacillusfermentumhy01的体外筛选

乳酸菌是正常肠道菌的一部分，作为益生菌的首要条件之一，是能在胃和小肠前段存活，被筛选的菌株应具有足够的耐酸性和酸性环境下生长发育的特性，有必要对发酵乳杆菌lactobacillusfermentumhy01的耐酸性进行分析。

(1)益生菌耐受ph3.0人工胃液的筛选

人工胃液的配制：nacl0.2％、胃蛋白酶0.35％、用1m的hcl调整ph值为3.0后，在无菌操作台中用真空泵抽滤除菌后备用。

益生菌对人工胃液耐受性的测定：取5ml已经活化好的菌株培养液，在无菌操作台中倒入已灭菌10ml离心管中，经3000r/min离心10min收集菌体，加入5ml灭菌生理盐水混匀制成菌悬液，取1ml菌悬液与9mlph3.0的人工胃液混合，摇匀，置于恒温振荡器中培养(37℃，100r/min)，并分别在0h和3h取样，用mrs琼脂培养基涂布37℃培养48h。用平板计数法测定活菌数，计算其存活率(％)：存活率(％)＝3h的活菌数/0h的活菌数×100％，结果如表1所示。

(2)益生菌耐受不同浓度胆盐的测定

将活化好的菌种5ml按2％的接种量(100μl)用移液枪分别接种于含0.0％牛胆盐(即空白)0.05％，0.1％，0.2％和0.3％牛胆盐(w/v)的mrs-thio培养基(mrs培养基中加0.2％的巯基乙酸钠)。在恒温振荡器中37℃培养24h后，以空白培养基为对照(未接种的mrs-thio培养基)，分别测定上述不同浓度培养基的od值，计算菌株对胆盐的耐受力。胆盐耐受力＝含胆盐的培养基的od值/空白培养基的od值×100％，结果如表1所示。

表1、lactobacillusfermentumhy01的筛选结果

筛选结果表明，lactobacillusfermentumhy01菌株能耐受ph3.0的环境，且存活率为103.73±8.60％。

通过胃后存活的菌体将与小肠中的胆盐接触，本实验把乳酸菌对胆盐的抵抗能力用于作为潜在益生菌的一个选择标准。耐酸性较好的lactobacillusfermentumhy01随着胆盐浓度的增加，生长效率逐渐降低，在0.3％胆盐浓度下的生长效率仍保持在20％以上。

通过以上实验我们筛选出了耐酸性、耐胆盐能力较好的lactobacillusfermentumhy01，该菌株已于2015年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号cctccm2015792。

实施例3

dss(葡聚糖硫酸钠，dextransulfatesodium)诱导结肠炎实验：将40只昆明小鼠随机分成4组，每组10只，雌雄各半，饲养一周后开始实验，实验周期为五周。每组小鼠饲养情况如下：实验期间，饲养在不锈钢笼中，室温保持25±2℃，相对湿度50±10％，12h明暗轮换，各组小鼠摄食自由。此外，正常组小鼠每天自由饮水(不含dss)，直到实验结束。模型组小鼠第一、二、四周自由饮水(不含dss)，第三周自由饮用含2％dss的水，第五周自由饮用含4％dss的水。低浓度组(10⁹cfu/kg·bw)和高浓度组(10¹⁰cfu/kg·bw)实验期间每天灌胃相应浓度的lactobacillusfermentumhy01菌液，并且均在第三周自由饮用含2％dss的水，第五周自由饮用含4％dss的水，各浓度菌体灌胃量根据小鼠体重计算。脱颈椎处死小鼠前24h禁水禁食。处死小鼠后，记录小鼠结肠的长度与重量，结果如图3所示。结果表明，高浓度组能够显著提高dss诱导结肠炎的结肠长度，同时结肠重量与正常组差异不显著。

实施例4

小鼠结肠病理学观察：小鼠脱颈椎处死后，取结肠用10％福尔马林溶液浸泡，将其固定，做常规he切片。

实验期内各组小鼠结肠病理学观察如图4所示。结果显示，正常组结肠粘膜、隐窝完整，固有层无炎性细胞浸润现象，杯状细胞连续分布；而模型组结肠粘膜损伤严重、杯状细胞减少、固有层细胞浸润现象严重，并伴有肠壁增厚。而经lactobacillusfermentumhy01处理的结肠炎小鼠结肠粘膜损伤和炎性细胞浸润现象均得到缓解，说明lactobacillusfermentumhy01处理能够改善dss导致的结肠损伤，对预防结肠炎的发生具有促进作用。

实施例5

小鼠血清中各因子水平的测定：取0.2ml小鼠动脉血，在4℃，3000r/min离心10min，取上层血清。按照il-6、il-12、tnf-α和inf-γ测试剂盒说明书的方法测定血清中上述因子水平。

实验期内各小组小鼠血清中各因子水平如图5所示。

相对于结肠炎对照组，lactobacillusfermentumhy01高低组均能不同程度的下调血清中促炎因子il-6、il-12、tnf-α和inf-γ的水平，所以lactobacillusfermentumhy01能够下调炎症因子，对预防炎症加重具有促进作用。

实施例6

小鼠结肠中炎症相关蛋白的表达。

取结肠组织100mg加入装有1ml高效ripa裂解液的离心管中匀浆，充分匀浆后4℃，12000r/min离心5min，取其上清用bca法分析其蛋白含量。经sds-page凝胶电泳后，将蛋白转移到0.45μmpvdf，并用5％bsa室温封闭2h。然后一抗孵育过夜(4℃)，tbst洗膜5次，每次5min。二抗室温孵育1h，tbst洗膜3次，每次5min。最后用eclplus化学发光显影。

实验期内各组小鼠结肠中炎症相关蛋白的表达如图6所示。

iκbα是iκb蛋白家族中的一员，iκb蛋白具有抑制细胞内无活性nf-κb的作用，在外界条件作用下，iκb表达的蛋白被磷酸化和被泛素和蛋白酶降解后，使得抑制作用降低，从而激活并释放nf-κb。研究发现，被激活nf-κb在溃疡性结肠炎的发病机制中扮演重要角色，能够刺激大量促炎因子的分泌，使肠道炎症加重，并且nf-κb具有调节调控cox-2和inos的转录因子，炎症发生时，二者蛋白水平提高。实验中，lactobacillusfermentumhy01处理结果表明，其能有效防止iκbα的降解，使nf-κb从而抑制nf-κbp65蛋白的磷酸化和inos和cox-2蛋白水平的提高，具有预防结肠炎的作用，其中，高浓度处理对预防dss诱导小鼠结肠炎的效果最佳。

应用实施例1：利用发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01制造乳酸菌奶饮料

首先，所述发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01原始菌种在温度-80℃下以磁珠形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用。

然后，可以采用两种方法制备本发明的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01工作发酵剂：

第一种方法是将上述发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01原始菌种接种于12％(重量)在110℃灭菌10min的脱脂乳中，在37℃条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；将所述母发酵剂按3-5％(体积)接种于灭菌乳中，培养14-16h至凝乳，此时该凝乳中的活菌数约10⁹cfu/ml，得到所述的工作发酵剂，可以直接将这种工作发酵剂添加到食品中，或者与可共生的制备发酵乳的商业发酵剂如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌一起使用制备发酵乳。

第二种方法是将上述发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01原始菌种接种于mrs液体培养基中，在37℃条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4％(体积)接种于mrs培养基中，培养16-18h，在4℃条件下3000r/min离心15min，去除上清夜，得到细胞沉淀，将沉淀用一定量的无菌脱脂乳制成悬浮液，得到工作发酵剂备用。

然后，原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到4℃，再加入前面所述的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01工作发酵剂，使其浓度达到10⁶cfu/ml以上，在4℃冷藏保存即得到含发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01活菌的乳酸菌奶饮料。

在本发明中，所述的mrs液体培养基是本技术领域的技术人员熟知的，是索莱宝公司销售的用于乳杆菌培养的培养基。

所述的加热杀菌是例如使用上海沃迪自动化装备股份有限公司销售的tw10d1000型管式杀菌机进行的。

所述的高温热杀菌是例如使用北京勇创嘉业机械设备有限公司销售的yc-104型板式超高温杀菌机进行的。

应用实施例2：利用发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01制造乳粉

按照上述乳酸菌奶饮料的制备方法制备，只是原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再以原料乳体积的4％接菌量接种前面所述的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01工作发酵剂，再在37℃下发酵16h，得到发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01发酵乳；然后所述的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01发酵乳按照1∶3(v∶v)加到上述灭菌原料乳中，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得到含发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01的乳粉。

所述的均质是例如使用常州市均质机械有限公司销售的gjb500-40小型均质机进行的。

所述的浓缩是例如使用上海伟宙轻工机械有限公司销售的真空浓缩锅进行的。

所述的喷雾干燥是例如使用上海沃迪科技有限公司销售的实验型喷雾干燥机进行的。

应用实施例3：利用发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01制造胶囊制品

将原料乳在140℃高温热杀菌2s，然后冷却至37℃，以原料乳体积的4％接菌量接种本发明的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01工作发酵剂，在37℃下发酵16h，得到发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01发酵乳。将发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01发酵乳以1∶3(v∶v)加入灭菌后的原料乳中均质，经真空浓缩、喷雾干燥处理后得到乳粉，将得到的乳粉装到胶囊中制成胶囊制品。

应用实施例4：利用发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01制备发酵乳

按照上述乳酸菌奶饮料的制备方法制备，只是原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再按照3-5％(体积)加入前面所述的发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)hy01工作发酵剂，再加入3-5％(体积)可共生的制备发酵乳商品发酵剂，混匀后在37℃下混菌发酵至滴定酸度以乳酸计0.6-0.7％，然后冷却至4℃，再进行冷藏保存得到所述的发酵乳。

所述的商品发酵剂优选的是保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。

在本发明的意义上，所述的原料乳是一种或多种选自脱脂奶、鲜奶、复原奶的原料乳。

以上所述，仅为本发明的具体实施例，但本发明的特征并不局限于此，任何熟悉该项技术的人在本发明领域内，可轻易想到的变化或修饰，都应涵盖在以下本发明的申请专利范围中。