脑卒中的预防或治疗用组合物的制作方法

本发明涉及一种脑卒中的预防或治疗用组合物，具体地，涉及包含(s)-2-(((4'-三氟甲基联苯-4-基)甲基)氨基)丙酰胺甲磺酸盐的脑卒中的预防或治疗用组合物、脑卒中的预防或改善用食品组合物、饲料组合物、脑卒中的预防或治疗方法及所述化合物的脑卒中预防或治疗用途等。

背景技术：

脑卒中是一种脑血管疾病，它与心脏疾病及癌症一起被认为是三大主要死因，随着发病数逐渐增加，脑卒中成为了影响平均寿命及人口年龄延长的最常见的疾病之一。高血压、高脂血症、粥状动脉硬化症、高胆固醇血症已知为针对脑血性脑卒中的多样重要危险因子。

脑卒中大致氛围两种，即被区分为由向脑组织提供的血液供给减少或阻断而以脑组织缺血导致的缺血性脑卒中(ischemicstroke)和血管破裂而引起向脑组织出血的出血性脑卒中(hemorrhagicstroke)，缺血性脑卒中占全部脑卒中患者的大约80％程度。由这些脑卒中引起的死亡率在国内和全世界范围内呈增加趋势，当今在脑卒中治疗药物的开发上的关注多。

[现有技术文献]

[专利文献]

(专利文献1)韩国授权专利公报第10-1795562号

(专利文献2)韩国授权专利公报第10-1781060号

技术实现要素：

要解决的问题

发明人确认了本发明的(s)-2-(((4'-三氟甲基联苯-4-基)甲基)氨基)丙酰胺甲磺酸盐化合物具有恢复脑卒中引发的运动功能下降，并减小内囊中的梗塞大小的效果，从而确认可以有效利用于脑卒中的预防及治疗，由此完成了本发明。

解决问题的方案

本发明的目的在于提供一种脑卒中(stroke)的预防或治疗用药物组合物，所述组合物包括由下述化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。

化学式1

本发明的另一个目的在于，提供一种脑卒中的预防或改善用食品组合物，所述组合物包括所述化合物作为有效成分。

本发明的另一个目的在于，提供一种脑卒中的预防或治疗方法，所述方法包括将所述化合物给药至个体的步骤。

本发明的另一个目的在于，提供所述化合物的脑卒中预防或治疗用途。

发明的效果

确认了本发明的包括化学式1的化合物通过由恢复脑卒中引发的运动功能下降且减小梗塞大小，确认了在脑卒中的预防和改善方面具有优异的效果，从而所述化合物及包含其的组合物可以有效利用于脑卒中的预防、治疗及改善。

附图说明

图1是示出啮齿类中风模型的概要的图。

图2是示出在啮齿类中风模型中由给予kds2010引起的运动功能恢复效果的图。图a是示出整个实验时间及药物给药时间的图。图b是示出单丸到达试验(single-pelletreachingtask，sprt)试验的图，图c及图d是示出sprt分数的图。图e是示出圆筒试验的图，图f及图g是示出在圆筒试验中，在全部次数中发生中风的一侧与相反侧前爪的使用比率的图。(sham：正常对照组，stroke：中风模型，stroke+rehab：进行康复训练的中风模型，stroke+kds2010：进行给药的中风模型，stroke+rehab+kds2010：进行药物给药和康复训练的中风模型)

图3是示出在啮齿类中风模型中由投入kds2010引起的脑组织损伤恢复效果的图。

最佳实施方式

以下具体说明本发明。一方面，本发明公开的各个说明及实施形态还分别可以适用到不同的说明及实施形态。即，本发明公开的多样要素的所有组合均属于本发明的范畴里。而且，不能认为本发明的范畴被下述具体的说明限定。

为了达到所述目的的本发明的一个实施方式提供一种脑卒中(stroke)的预防或治疗用药物组合物，所述组合物包括由下述化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。

化学式1

本发明中的由所述化学式1表示的化合物为由(s)-2-(((4'-三氟甲基联苯-4-基)甲基)氨基)丙酰胺甲磺酸盐((s)-2-(((4'-trifluoromethylbiphenyl-4-yl)methyl)amino)propanamidemethanesulfonate)来命名的化合物。本发明中的所述化合物可以命名为kds2010。

所述化合物的具体的药理活性目前还在研究当中，但没有研究结果直接表明是否具有脑卒中的预防及治疗效果。

本发明不限定于(s)-2-(((4'-三氟甲基联苯-4-基)甲基)氨基)丙酰胺甲磺酸盐的获取方法，可以利用本领域公知的方法来化学合成，或使用在市场销售的物质。

本发明的(s)-2-(((4'-三氟甲基联苯-4-基)甲基)氨基)丙酰胺甲磺酸盐不仅可以以溶剂化形态存在，而且也可以以非溶剂化(unsolvated)形态存在。本发明的(s)-2-(((4'-三氟甲基联苯-4-基)甲基)氨基)丙酰胺甲磺酸盐可以以结晶形或无定形形态存在，全部的这些物理形态均属于本发明的范畴内。

本发明的药物组合物不仅包括由所述化学式1表示的化合物，而且还可以包括其药学上可接受的盐。在本发明中，“药学上可接受的盐”是所述化合物与其他物质结合的盐的形态，意指在药学上表示类似活性的物质。

所述药学上可接受的盐的类型包括诸如氢氯化物、氢溴化物、磷酸盐或硫酸盐的无机酸盐和诸如羧酸盐或磺酸盐的有机酸盐，但不限定于此。并且，羧酸盐的类型包括醋酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、苹果酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、乳酸盐或苯酸盐，但不限定于此。而且，磺酸盐的类型包括甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐或萘二磺酸盐，但不限定于此。

本发明中的‘脑卒中(stroke)’意指脑血流异常引发的局部性的神经学上的缺损症状。这种脑卒中可以包括由血栓等导致脑血管堵塞而引发脑细胞坏死的脑梗塞，或因脑血管破裂而发生的脑出血。具体的脑卒中的症状可能会有急剧的头痛及呕吐，半身麻痹或身体局部麻痹，身体局部的感官麻痹和丧失，可显示语言障碍(失语症或发音障碍)、面部神经障碍、运动失调等。本发明的脑卒中可以意指中风。

本发明的所述药物组合物可以是促进因脑卒中而受损的运动功能恢复，或减少梗塞大小的组合物。

本发明的具体的一个实施例中，将本发明的化学式1的化合物使用于脑卒中动物模型的结果，相比于脑卒中药物非给药组，促进运动功能恢复，且内囊中的梗塞大小也减少(图2及图3)。

通过所述结果确认了包括本发明的化学式1的化合物的组合物作为预防或治疗脑卒中的用途具有优异的效果。

本发明的术语“预防”是指通过给药包括本发明的化学式1的化合物的组合物来抑制或推迟脑卒中发病的所有行为。本发明的术语“治疗”是指通过给药包括本发明的化学式1的化合物的组合物来使得所述疾病的症状好转或变更为有益处的所有行为。

本发明的脑卒中预防或治疗用组合物的药物给药形态也可以以其药学上可接受的盐的形态适用，且不仅可以以单独或与其他药物活性化合物结合或适当的集合来使用。

本发明的脑卒中预防或治疗用组合物还可以包括药学上可接受的载体。

本发明的脑卒中预防或治疗用组合物给药至哺乳动物后，可以使用本领域公知的方法制造成药学剂型，以便提供活性成分的迅速、持续或推迟放出。就剂型的制造而言，优选将活性成分和载体一起进行混合或稀释，或封入至容器形态的载体内。

因此，本发明的脑卒中预防或治疗用组合物，可以根据一般的方法以散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆、气雾剂等口服剂型、外用剂、栓剂及无菌注射溶液的形态进行剂型化来使用，还可以包括通常使用于组合物的制备的适当的载体、赋形剂及稀释剂。

例如，可以包括在本发明的组合物的载体可以包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯橡胶、藻朊酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等，但不限定于此。在进行制剂化的情况下，使用常用的填充剂、增量剂、粘接剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂等稀释剂或赋形剂来制造。

用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂和胶囊剂等，这种固体制剂是在所述化合物中添加至少一种以上的赋形剂例如淀粉、碳酸钙(calciumcarbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶等来制造。此外，除了单纯的赋形剂之外，还可以使用诸如硬脂酸镁和滑石的润滑剂。

作为口服用液体制剂相当于悬浮剂、液体药剂、乳剂和糖浆剂，并且除了作为常用的单一稀释剂的水和液体石蜡以外，可包括各种赋形剂，例如湿润剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂。

用于非口服的制剂可以包括无菌水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冻干剂和栓剂。非水溶剂和悬浮剂可以为诸如丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇和橄榄油的植物油；和诸如油酸乙酯的可注射酯。作为栓剂用基料，可使用威泰索尓(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、甘油明胶等。

本发明的药物组合物可作为个别治疗制剂来给药，或可通过与其它治疗制剂合并来给药，并也可以与现有的治疗制剂按顺序或同时给药。并且，还可以单一或多种给药。在全部考虑到上述要素而在不诱发副作用的情况下，以最小限度的量获得最大效果的量来给药是重要的，并且可以由本领域技术人员容易确定。

本发明中使用的术语“给药(投入)”意指将本发明的药物组合物通过某种适当的方法导入至患者，本发明的组合物的给药途径只要可以送达目的组织，则可通过包括口服或非口服的多样途径来给药。

根据本发明的药物组合物的给药方式不会被特殊限定，可以使用本技术领域一般使用的方式。作为所述给药方式的非限定例，可以将组合物以口服或非口服给药方式来给药。根据本发明的药物组合物可以根据所意向的给药方式制备成多样的剂型。

本发明的组合物的给药频率没有被特殊限定，但可以一日一次给药或分量来给药数次。

将本发明的化学式1的化合物作为有效成分来包含的组合物的通常每日给药量以1至1,000mg/kg，具体可以以11至100mg/kg来给药，且可以给药1次或分数次给药。

作为本发明的另一个实施方式，提供一种脑卒中的预防或改善用食品组合物，所述组合物包括由所述化学式1表示的化合物作为有效成分。

本发明的脑卒中预防或改善用食品组合物包括丸剂、粉末、颗粒、浸剂、片剂、胶囊或水剂等形态，可以添加本发明的组合物的食品例如有各种食品类，例如，饮料、口香糖、茶、复合维生素、保健品等食品类。

作为本发明的脑卒中预防或改善用食品组合物中可以包括的必要成分，除了所述组合物或其有效成分，或其生理学上可接受的盐之外，对其他成分没有特殊限定，如同一般食品可以包含作为额外成分的各种生药提取物、食品辅助添加剂或天然碳水化合物等。

如同上述提及可以额外添加食品添加剂，而食品添加剂包括本领域的一般的食品添加剂，例如，香味剂、风味剂、着色剂、填充剂、稳定剂等。

所述天然碳水化合物的例子是单糖，例如葡萄糖、果糖；二糖，例如麦芽糖、蔗糖；及多糖，例如葡聚糖、环糊精等一般的糖，以及木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇等糖醇。除上述之外，作为香味剂可以有效地使用天然香味剂(例如莱鲍迪甙a、甘草甜素等)及合成香味剂(糖精、阿斯巴甜等)。

除上述之外，本发明的脑卒中预防或改善用食品组合物可以包括多种营养剂、维生素、矿物(电解质)、合成风味剂及天然风味剂等的风味剂、着色剂以及增进剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐，褐藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、用于碳酸饮料的碳酸剂等。此外，还可以包含用于制作天然果汁及果汁饮料及蔬菜饮料的果肉。这些成分可以独立或组合而使用。

本发明中的所述保健品包括健康功能食品及健康食品。

所述保健功能(性)食品(functionalfood)是指作为与特定保健用食品(foodforspecialhealthuse、foshu)相同的术语，除了营养供给之外，还以可有效地呈现生物体调节功能的方式加工的医学、医疗效果高的食品。其中，“功能(性)”是指对人体的结构及功能调节营养素或在诸如生理学作用等保健用途中取得有用的效果的情形。本发明的食品可以通过本发明所属技术领域中通常所使用的方法来制备，在所述制备时可添加通常所添加的原料及成分来制备。而且，作为所述食品的剂型而言，只要是认定为食品的剂型，就可无限制地使用。本发明的食品用组合物能够制备成多种形态的剂型，与普通药品不同，由于将食品作为原料，从而可以具有没有当长期服用药品时可能发生的副作用等的优点，并且便携性优异，因此本发明的食品可以作为用于增进脑卒中的预防或改善效果的辅助剂来摄取。

作为本发明的另一个实施方式，提供一种脑卒中的预防或改善用饲料组合物，所述组合物包括由所述化学式1表示的化合物作为有效成分。

本发明的饲料组合物可以指动物食用和摄取、被消化的或着对此恰当的任意天然或人工定量餐或一次性餐等或者所述一次性餐的成分。

所述饲料并无特殊的限定，可以使用相应领域通常使用的饲料。所述饲料有谷物类、根果类、食品加工副产物类、藻类、纤维质类、制药副产物类、油脂类、淀粉类、匏瓜类或谷物副产物类等植物性饲料；蛋白质类、无机物类、油脂类、矿物类、油脂类、单细胞蛋白质类、动物性浮游生物类或食物等动物性饲料等。这些饲料，可以单独使用或2种以上饲料混合使用。

本发明的饲料添加剂组合物，除了用于给药的上述记载的化合物之外，还可以使用柠檬酸、富马酸、己二酸、乳酸等有机酸；或磷酸钾、磷酸钠、聚磷酸盐等磷酸盐；或多元酚、儿茶酸、生育酚、维生素c、绿茶提取物、壳聚糖、鞣酸等天然抗氧化剂中的一种成分或混合多种成分使用，根据需求可以添加缓冲液，抑菌剂等其他常用的添加剂。并且，还可以附加稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘接剂及润滑剂等来进行制剂化。

所述饲料组合物可以以直接混合至动物饲料或与其他成分组合的方式容易地给药。给药量根据动物的体重、健康状态、饮食、给药方法及疾病严重程度其范围多样。

作为本发明的另一个实施方式，提供一种脑卒中的预防或治疗方法，包括：将由所述化学式1表示的化合物给药至个体的步骤。

所述预防或治疗方法，还可以是包括康复训练步骤的方法。

本发明中使用的用语“个体”可以意指已发病或有可能发脑卒中病的包括人类的所有动物。所述动物不仅是人类而且还可以是需要治疗与人类类似症状的牛、马、羊、猪、山羊、骆驼、羚羊、狗、猫等哺乳动物，但不限定于此。

本发明的所述预防或治疗方法具体可以包括向已发脑卒中病或有发病危险的个体将所述组合物以药学上有效的量给药步骤。

作为本发明的另一个实施方式，提供由所述化学式1表示的化合物的脑卒中预防或治疗用途。

所述化合物，脑卒中的预防或治疗如前述。

具体实施方式

以下，通过实施例更具体地说明本发明的构成及效果。这些实施例只是用于示例本发明，不应解释为本发明的范围受这些实施例的限制。

实施例1：实验方法

1-1.准备给药药物

准备了用于确认是否对于脑卒中具有的治疗效果的对象药物。作为给药对象的药物是根据韩国注册专利公报第10-1746060号准备的。具体地，根据所述公报所记载的合成方法合成了所述公报的实施例9中记载的(s)-2-(((4'-三氟甲基联苯-4-基)甲基)氨基)丙酰胺甲磺酸盐(以下称kds2010)。

1-2.制作啮齿类中风模型

向9周龄sd大鼠的脑内囊后肢(posteriorlimboftheinternalcapsule)给予光刺激而制作了白质(whitematter)脑梗塞动物模型。

具体地，使用盐酸氯胺酮(ketaminehydrochloride,100mg/kg)和甲苯噻嗪(xylazine,7mg/kg)组合的麻醉药麻醉动物后，利用定向法(stereotaxis)在头盖骨前囟(bregma)的后方2.0mm，侧方3.1mm位置穿孔，以7.2mm深度插入光纤维(内径62.5μm，外径125μm)而对准内囊后肢。将玫瑰红(rosebengal,20mg/kg)向尾静脉注入后，通过光纤维，用绿激光3.7mw进行15分钟的光刺激，然后去除光纤维并完成了手术，为了缓解疼痛而注入酮洛芬(ketoprofen,2mg/kg)并进行恢复。作为对照组注入0.9％的生理盐水来代替玫瑰红。

所制作的脑梗塞动物模型的脑结构概要如图1。

1-3.给药及康复训练

就作为药物kds2010给药的组的大鼠而言，每天一次通过口服将kds2010溶于盐溶液(saline)而以10mg/kg的浓度来进行服用(图2a)

进行康复训练的组的大鼠在中风手术后练习了每天20分钟并持续3周的单丸到达试验(single-pelletreachingtask，sprt)。另一方面，没有进行康复训练的组的大鼠在3周内每周只练习了两次sprt。

1-4.行动实验

为了确定啮齿类中风模型中的kds2010的效果，进行了用于确定前爪的非对称使用的圆筒试验(cylindertest)和用于评估精确的运动能力的单丸到达试验。

为了进行圆筒试验，将动物放入透明的圆筒(宽20cm，高30cm)内，并观察了在用前爪扶圆筒壁时哪一只脚使用的频率更多。录像总共20次的动作，计算在整个次数中的中风侧和相反侧前爪的使用比率。

就单丸到达试验而言，使用了前壁上有1cm的竖向狭缝的压克力箱子(45cm×13cm×40cm)，并在狭缝前放置了砂糖丸。使动物禁食直到体重减小至90％，并使其成为渴求食物的状态。计算总共20个砂糖丸中用嘴在不掉落的情况下叼走几个的比率。

1-5.神经丝染色

为了在组织中确认内囊梗塞的大小，为了组织学上的检查，牺牲完成行动实验的大鼠后准备了脑卒中。利用摘取的脑组织、神经丝(neurofilament)抗体(smi-31r,biolegend,ca,usa)和dab染色(staining)试剂盒(tl-060-qhd,thermo,ma,usa)对神经丝进行染色。

实施例2实验结果

2-1.利用单丸到达试验及圆筒试验的运动功能恢复效果的确认

如所述实施例1-4用单丸到达试验评估了运动功能的结果，由图2的b至d可知，就啮齿类中风模型而言，运动功能受损比较严重。诱发中风后即使进行了康复训练，运动功能也没有实质性恢复。相反，并行进行了kds2010给药和康复训练时，精确的运动功能恢复到了接近正常的水平。

并且，使用圆筒试验确认运动功能恢复效果的结果，由图2的e至g可知，啮齿类中风模型的运动功能受损颇多，相反地，就药物给药组(stroke+kds2010)而言，相比于对照组，运动功能有明显恢复。

因此，通过所述结果可以确定，当向中风模型给药kds2010药物时，促进因中风受损的运动功能恢复。

2-2.利用单丸到达试验及圆筒试验的运动功能恢复效果的确认

如所述实施例1-5的方法对神经丝进行染色并观察了内囊中的梗塞的大小。

结果如图3，就啮齿类中风模型而言，内囊中的梗塞的大小增加了相当的部分，而就药物给药组(stroke+kds)而言，相比于对照组，梗塞大小相当地减小，尤其是在与药物给药一起并行康复训练的实验组(stroke+rehab+kds)中，内囊梗塞大小减小地更多。

因此，通过上述结果可知，kds2010通过减小梗塞面积而恢复运动功能并能够预防及治疗中风即脑卒中。

通过上述的说明，本发明所属技术领域的技术人员可以理解本发明在不改变其技术思想或必要特征的前提下可以以不同的具体形态实施。与之相关，上述实施例应被理解为在所有方面上均是示例性的，并非是限定性的。本发明的范围应被解释为，与其说说明书，还不如说从后述的权利要求书的含义、范围及其均等概念导出的所有变更或变形形态包括在本发明的范围内。