含有西洋接骨木提取物作为有效成分的男性更年期综合症的预防用、治疗用或改善用组合物的制作方法

本发明涉及含有西洋接骨木提取物作为有效成分的男性更年期综合症的预防用、治疗用或改善用组合物。

背景技术：

由于男性体内也会出现类似于女性绝经期的内分泌系统的变化，将其称为男性更年期，这一称呼是1939年werner将与女性更年期类似的症状作为中心称之为男性更年期(maleclimacteric)而被首次使用的。

男性虽然不会出现像女性的绝经，但是随着年龄的增长，雄性激素的减少会增加，每年减少0.2～2.0％，40～50岁之后，男性激素的分泌缓慢减少，70岁是30岁的1/2，80岁是1/3，由此，靶细胞对于作为活性雄性激素的睾酮(testosterone)的敏感性也会降低，会出现与女性相似的各种更年期症状。

当体内的睾酮为正常范围(12nmol/l或350ng/dl以上)以下时，被称作男性性腺功能减退症，当男性随着年龄的增长，由于产生男性激素的脑垂体-下丘脑-睾丸轴的功能障碍而激素水平下降时，被称作男性迟发性性腺功能减退症(late-onsethypogonadism，loh)。根据韩国男性更年期学会报道，男性更年期被定义为“男性随着年龄的增长所经历的诸多典型症状以及伴随血清睾酮缺乏所引起的临床、生化综合症，会降低生活质量并可对多个身体器官的功能产生负面影响”，学术上使用的名称为“男性迟发性性腺功能减退症(lateonsethypogonadism，loh)”，通常使用的名称为“男性更年期综合征”。

男性更年期综合征与睾酮的减少有密切的关系，睾酮包括总睾酮、游离睾酮、结合有蛋白质的睾酮。40岁之后由睾丸或肾上腺产生的睾酮减少，血清的总睾酮、游离睾酮、结合有白蛋白质的睾酮每年分别减少0.4％、10％、12％。众所周知，饮酒会导致作为酒精分解物质的乙醛破坏睾丸内细胞，从而减少睾酮的分泌，吸烟又会减少睾酮的分泌，增加更年期综合征的发生。

就男性更年期症状而言，在身体上表现为，肌肉量和肌力、身体脂肪量和体毛、骨密度下降，内脏脂肪增加，在精神上表现为，智力活动、认知功能和空间定向能力下降，伴随疲劳、抑郁、急躁的情绪变化和睡眠障碍。性功能变化的特征性表现为性欲和勃起功能的减退。但是，这样的男性更年期综合征不仅会带来勃起功能障碍的问题，而且还伴随血脂异常、心血管疾病、腹部肥胖、肌力下降、骨骼密度下降、动力下降、记忆力和注意力下降等各种症状，因此如果被忽视，可能会危及生活质量。

另外，接骨木(elderberry)是一种忍冬科(caprifoliaceae)的具有匍匐枝的落叶阔叶灌木，主要生长在河边和森林地区，长在各种土壤和排水良好的向阳地，具有在-20℃下也能够生存的耐寒性和耐湿性。在韩国，它也被称为金色莓或金色葡萄，果实中含有蛋白质、碳水化合物、单宁、维生素c、钾、镁、钙等多种矿物质，多酚、花色素苷和黄酮醇的含量高。由于具有高抗氧化性，因此在民间疗法中作为感冒药来长期使用，并且已知对腹泻、腹痛、风湿病和抗致突变性有效。

(专利文献1)韩国专利文献第10-1870940号：包含夜关门和红参的用于改善男性更年期综合症的保健食品组合物

(专利文献2)韩国专利公开文献第2018-0111317号：包含山茱萸、葛根和截叶铁扫帚的复合提取物作为有效成分的男性更年期综合症预防用、改善用和治疗用组合物

技术实现要素：

技术课题

本发明人等为了开发出针对男性更年期综合征的有效的治疗剂而以浆果提取物作为对象进行了研究，其结果确认到，浆果当中的接骨木的提取物不仅使睾丸细胞中的睾酮分泌增加而且还使男性更年期动物模型中的睾酮分泌增加，由此完成了本发明。

因此，本发明的课题在于提供一种男性更年期综合症的预防用、治疗用或改善用组合物。

解决课题的手段

为了解决上述课题，本发明提供一种含有西洋接骨木(sambucusnigra)提取物作为有效成分的男性更年期综合症的预防用、治疗用或改善用药物组合物。

此外，本发明提供一种含有西洋接骨木(sambucusnigra)提取物作为有效成分的男性更年期综合症的预防用或改善用食品组合物。

发明效果

本发明的西洋接骨木提取物通过不仅增加睾丸细胞中的作为男性荷尔蒙的睾酮的分泌量，而且增加男性更年期综合征动物模型中的作为男性荷尔蒙的睾酮的分泌量的机制，对于缓解男性更年期综合征具有优异的效果，因此含有该西洋接骨木提取物作为有效成分的本发明的组合物对于男性更年期综合征的预防、治疗或改善有效，可有效地用作药物组合物或食品组合物。

附图说明

图1表示出经过其他浆果类的提取物和西洋接骨木的提取物的处理之后的睾丸细胞的睾酮分泌能力的确认结果，其中所述提取物是经过热水、乙醇处理而获得的。

图2表示出经过不同浓度的西洋接骨木的热水提取物处理之后的睾丸细胞中的睾酮分泌能力的确认结果。

图3表示出经过不同浓度的西洋接骨木的热水提取物处理之后的睾丸细胞中的睾酮分泌能力的确认结果。

图4表示出经过西洋接骨木的热水提取物处理之后的高龄动物模型中的血清内睾酮分泌能力改善效果的确认结果。

具体实施方式

下面详细说明本发明。

本发明提供一种含有西洋接骨木提取物作为有效成分的男性更年期综合症的预防用、治疗用或改善用药物组合物。

西洋接骨木(sambucusnigra)作为黑接骨木(sambucol)的制剂而被公认为对于因流感病毒引起的疾病是有效的，但是至今为止尚未报道过像本发明这样的与男性更年期综合症的相关性。

本发明定义的男性更年期综合症包括关节或肌肉疼痛、骨质疏松、多汗症、睡眠障碍、兴奋、神经质、情绪焦虑、嗜睡、疲劳、肌力下降、抑郁症、精力下降、性欲下降、勃起减少、衰老或泌尿生殖系功能下降。

关于睾丸细胞中的睾酮分泌效果，将本发明的西洋接骨木提取物、与覆盆子的水提取物与覆盆子的乙醇提取物进行比较实验的结果，确认到西洋接骨木提取物对于睾酮分泌效果非常地优异。

本发明的组合物使血中的睾酮含量得以增加。

本发明中用作原料的西洋接骨木提取物包括：由西洋接骨木经过浸出、煎出而得到的浸出液、将该浸出液的一部分或全部再次进行浓缩而得到的浓缩液、或者再次将该浓缩物进行干燥而制造的提取浓缩液以及提取液中含有的发挥主要效果的化学物质本身。

本发明的提取液可以利用本领域公知的常用方法制造，也即使用常用的溶剂、利用通常使用的冷浸、回流冷却提取、热水提取、室温提取、加热提取、超声波提取、超临界提取等方法来制造。

具体地，可使用选自纯净水、碳原子数1～6的醇、甘油、碳原子数2～6的亚烷基二醇、碳原子数1～6的烷烃、碳原子数1～6的卤代烃、碳原子数2～6的烷基链烷酸酯以及它们的混合物中的提取溶剂。更详细地说，可使用选自纯净水、甲醇、乙醇、1，2-丙二醇、甘油、乙二醇、丁二醇、丙二醇、二氯甲烷、二氯乙烷、己烷、乙酸乙酯及其混合物中的提取溶剂。优选可以使用纯净水作为溶剂。

此时，提取溶剂的使用量为原料重量的5倍～30倍体积量，更优选5～20倍。

关于提取温度，本领域技术人员可根据提取方法选择适宜的各种温度范围，例如可在20℃～100℃范围中选择，但不限于该范围。此外，提取时间根据提取方法而不同，本领域技术人员可以选择适宜的提取时间，可以在1小时左右～数日范围之间进行1次或多次，但不限于此。对于上述使用第1次提取溶剂进行提取获得的提取物而言，可以根据常用方法进行过滤、去除杂质而以液体状态来获得，或者将获得的液态提取物利用常用方法进行减压浓缩和/或干燥而以粉末状态来获得。

此外，将本发明的提取物作为组成成分来使用时，可以作为冷冻干燥后的粉末形态来使用，也可以作为分散或溶解于水或常用有机溶剂中的液体形式来使用。

为了给药，上述药物组合物优选制成除了上述有效成分之外还包含一种以上的药学上可接受的载体的药物组合物。相对于组合物的总重量，本发明的组合物包含0.01至99重量％的上述西洋接骨木提取物。然而，不限定于如上所述的组成。

包含本发明的提取物的组合物可以进一步包含通常用于制备药物组合物中的适宜的载体、赋形剂和稀释剂。

包含根据本发明的提取物的组合物可分别根据常用的方法制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳剂、糖浆、气溶胶等口服剂型，外用制剂，栓剂和无菌注射溶液的形态来制剂化后使用，其中可包含的载体、赋形剂和稀释剂可以举出乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、硬脂酸镁和矿物油。制剂化时，使用通常使用的填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂来制备。用于口服的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂是在提取物中混合至少一种以上的赋形剂，至少混合面精、淀粉、碳酸钙(calciumcarbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶等来制得。除单纯的赋形剂外，还可使用硬脂酸镁、滑石粉等润滑剂。

用于口服的液体制剂包括悬浮剂、溶液剂、乳剂、糖浆等。其中除了包含通常使用的单纯的稀释剂水和液体石蜡之外，还可以包含润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等各种赋形剂。非口服给药的制剂包括无菌水溶液、非水溶剂、悬浮剂、乳剂，冻干制剂和栓剂。作为非水溶剂和悬浮剂，可以使用丙二醇(propylenenglycol)、聚乙二醇、橄榄油等植物油和油酸乙酯等可注射的酯。作为栓剂的基质，可以使用硬脂(witepsol)、聚乙二醇(macrogol)、吐温(tween)61、可可脂、月桂酸酯、甘油明胶等。

本发明的提取物的优选给药量根据患者的状况和体重、疾病的严重程度、药物形态，给药途径和给药时间而不同，可以由本领域技术人员适当地选择。为了获得理想的效果，将提取物以每天0.01mg/kg至10g/kg，优选以1mg/kg至1g/kg的量给药。对于给药，可以每天给药一次，也可以分几次给药。因此，无论从哪一方面，上述给药量并不限定本发明的范围。

本发明的组合物可以通过各种途径使用于老鼠、小鼠、家畜和人等哺乳动物。可以预期所有的给药方式，例如可以通过口服、直肠或静脉等方法给药。

另外，本发明的西洋接骨木可以用作预防和改善男性更年期综合症的食品组合物，相对于上述食品组合物的总重量，包含0.01重量％至95重量％的上述西洋接骨木提取物，优选包含1重量％至80重量％的上述西洋接骨木提取物。

当将本发明的组合物用作食品组合物时，除了有效成分西洋接骨木提取物之外，还可另外包含在制作食品时通常添加的成分，例如蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养素、调味剂和香味剂。

上述碳水化合物的实例包括：葡萄糖、果糖等单糖，麦芽糖、蔗糖、寡糖等二糖，糊精和环糊精等多糖这样的常用的糖；以及木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等糖醇。作为香味剂，可以使用天然香味剂和合成香味剂。

为了预防和改善男性更年期障碍，本发明的食品组合物可以以与上述药物组合物相同的方式制剂化，并根据《健康功能食品法》第6727号用作健康功能性食品，或者可以添加到各种食品中。当制剂化为健康功能性食品时，可以制成或加工成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、悬浮液、乳剂、糖浆等给药形态，或者茶袋、浸出茶、保健饮料等形态。当添加到各种食品中时，对上述食品的种类没有特别的限制。可添加本发明西洋接骨木提取物的食品实例包括肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、快餐类(snack)、饼干类，比萨、拉面、其他面条、口香糖类、包括冰淇淋的乳制品、各种汤、饮料、茶、保健饮品，酒精饮料和复合维生素等，包括通常意义上的所有健康食品。

当将本发明的食品组合物制成保健饮品时，除了包含本发明的西洋接骨木提取物外，还可以包含柠檬酸、液态果糖、糖、葡萄糖、醋酸、苹果酸、果汁等。

另外，上述食品组合物除了包含上述成分之外还可包含各种营养剂、维生素、电解质、调味剂、着色剂，果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、用于碳酸饮料的碳酸化剂等。此外，本发明的食品组合物可包含用于制作天然果汁、饮料和蔬菜饮料的果肉。这些成分可以单独使用或组合使用。

以下记载本发明的优选实施例和实验例。以下实施例和实验例仅仅是为了更清楚地表现本发明，本发明并不限于以下实施例。

实施例1：西洋接骨木提取物的制备

在购入的新鲜西洋接骨木的鲜果100g中加入10倍溶剂(1l)，利用装有回流冷却装置的加热套，共提取2次，历时2小时，然后利用金属检测器使用10～25μm过滤器进行了两次过滤。利用减压浓缩器将各提取物浓缩至6.0～8.0brix％，冻干成粉末，并在-20℃冷冻保存以备使用。在该实验中，将粉末状提取物利用蒸馏水(d.w)溶解成不同浓度来使用。

比较例1：覆盆子的水提取物的制备

除了代替西洋接骨木鲜果而使用覆盆子鲜果之外，与上述实施例1同样地操作制作了覆盆子的水提取物。

比较例2：覆盆子的乙醇提取物的制备

除了代替西洋接骨木鲜果而使用覆盆子鲜果、并使用70％乙醇作为提取溶剂之外，与上述实施例1同样地操作制作了覆盆子的乙醇提取物。

实验例1：西洋接骨木提取物的细胞内睾酮分泌能力的确认

1)睾丸细胞(leydigcell)的培养

睾丸细胞(leydigcell)tm3细胞使用了美国典型培养物保藏中心(atcc)出售的细胞。使用将dulbeccomodifiedeagle培养基(dmem，高葡萄糖)与ham’sf-12k(kaighn’s)培养基以1∶1混合之后、添加了2.5％胎牛血清(fbs)、5％马血清和1％青霉素-链霉素的培养基，在co2培养箱(formascientific，inc.)培养了睾丸细胞。在显微镜下观察确认细胞已稳定后用于实验中。

2)睾丸细胞(leydigcell)内睾酮分泌能力的评估

在24孔培养板中以1×10⁵/孔的浓度分配tm3细胞后，稳定24小时。之后，将培养基替换为无血清培养基，将提取物按浓度(μg/ml)稀释，并向每个孔处理，在24小时后回收每个孔中的培养基。对回收的培养基进行离心分离获得上清液，然后基于睾酮elisa试剂盒(ab108666，uk)中记载的方法进行分析，以确认上清液中睾酮的浓度。

通过elisa分析试剂盒测定利用实施例1的提取物以及比较例1和比较例2的覆盆子提取物处理过的睾丸细胞培养液中生成的睾酮浓度，将其结果示于图1。参见图1，与正常对照组相比，在利用覆盆子水提取物、覆盆子乙醇提取物和西洋接骨木热水提取物处理过的组当中，利用西洋接骨木热水提取物处理过的组的睾酮分泌量的增加最高，由此可以确认西洋接骨木热水提取物对于睾酮分泌功能是有效的。

为了确认不同浓度提取物的睾酮分泌效果，将西洋接骨木热水提取物处理成低浓度(5、10、20μg/ml)和高浓度(1、25、50、100μg/ml)，测定了睾丸细胞内的睾酮分泌量。参照图2和图3可以确认，与正常对照组相比，从5μg/ml以上的浓度开始，分泌量依赖于浓度，分泌量显著增加。从这些结果可以确认，西洋接骨木热水提取物使睾丸细胞中的睾酮分泌量增加，可改善由于荷尔蒙变化尤其是睾酮减少而引起的症状之一的男性更年期症状。

实验例2：由男性更年期综合征动物模型确认西洋接骨木提取物的睾酮分泌能力

1)男性更年期动物模型和实验概要

在购入并驯化23周龄的雄性sd老鼠(韩国samtaco)之后，在每个老鼠的体重约510g(6个月大)时，每个测试组使用9只老鼠，在试验结束1周前购入并驯化11周龄的雄性sd老鼠(韩国samtaco)，在12周龄时，由9只鼠构成一组。

以6个月大的高龄老鼠作为对照组，并设计以下实验组：对于高龄老鼠，每天口服一次300mg/kg西洋接骨木热水提取物，每周7次，共口服给药12周，以形成用于确认男性更年期的改善的组。

2)血清内睾酮分泌能力的评估

为了分析尸检前血清内睾酮的分泌能力，对于所有实验组的老鼠，通过颈静脉取血。使血液凝固约30分钟后，以10,000rpm离心分离5分钟以分离血清。分离血清后，根据睾酮elisa试剂盒(ab108666，uk)中记载的方法进行分析，以检查血清内睾酮数值。

其结果，与对照组相比，口服西洋接骨木热水提取物的一组中睾酮的分泌量虽然不显著增加，但是有增加，从而确认了西洋接骨木热水提取物对睾酮的分泌能力有效果(图4)。从这些结果可以确认，西洋接骨木热水提取物使高龄雄性老鼠中的睾酮分泌能力增加，改善了由于荷尔蒙变化尤其是睾酮减少而导致的症状之一的男性更年期症状。

3)测定肝脏毒性、脂蛋白和甘油三酯数值的变化

为了分析血清内生化指标，在尸检时通过腹大静脉从所有组的老鼠中获取血液。使血液凝固约30分钟后，以10,000rpm离心分离5分钟以分离血清。分离血清后，为了确认肝功能(ast、alt)、脂蛋白(总胆固醇(t-cho)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c))a和甘油三酯(triglyceride)的数值，使用生化分析仪(au480，beckmancoulter，美国)对这些值进行了测定，其结果示于表1。

表1

结果可以确认，与对照组相比，所有西洋接骨木热水提取物给药组中均没有观察到统计学上有意义的变化，因此可以确认没有肝脏毒性。与12周龄的幼鼠相比，6个月大的雄性更年期老鼠对照组中胆固醇和甘油三酯数值显著地增加，但使用了西洋接骨木热水提取物的情况下，虽不显著但这些值显示了减少的趋势。由该结果可以确认，西洋接骨木热水提取物没有肝脏毒性，并且在降低胆固醇和甘油三酯方面也是有效的。

从上述结果可以看出，西洋接骨木提取物不仅能够增加睾丸细胞的睾酮分泌能力而且也能增加雄性更年期动物的睾酮分泌能力，因此具有改善男性更年期的功能。