本发明涉及田基黄提取液的药物新用途，尤其是在制备防治肺损伤药物中的应用。
背景技术：
：肺损伤，尤其是急性肺损伤，是一类急性呼吸窘迫综合征,是临床常见的急危重症。急性肺损伤的病理改变主要包括肺部广泛的炎症反应、中性粒细胞招募、肺间隙水肿、上皮细胞完整性破坏、微血管渗透性增加及气体交换障碍等方面。据统计，急性肺损伤致死率可占医院死亡总人数的34.9％。目前尚无被fda和cfda批准针对性治疗急性肺损伤的药物。因此，研发针对预防和治疗急性肺损伤的药物，从而降低急性肺损伤的临床死亡率，具有迫切的必要性和广大的市场需求。田基黄，又叫地耳草，民间别名有小元宝草、雀舌草、七层塔等，为藤黄科金丝桃属植物hypericumjapomicumthumb的干燥全草。广泛分布于长江流域及其以南各地，原植物主产于广东、广西、四川、贵州以及江西等地。现代药理作用研究表明其具有抑菌、抗病毒、抗肝损伤、抗氧化以及抑制癌细胞等多种药理功效。技术实现要素：本发明经试验证明：在脂多糖诱导的小鼠肺损伤模型中，田基黄水煎液可显著抑制肺损伤中的肺水肿、炎性细胞浸润及细胞凋亡的病理特征，具有显著疗效。在慢性烟熏模型中，田基黄水煎液可显著延缓小鼠肺功能的退化，显著降低小鼠肺泡灌洗液中中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的浸润，并显著抑制小鼠肺组织中各炎症因子水平的升高，达到抑制肺部炎症的目的。由此本发明首次公开田基黄在制备防治肺损伤中肺炎、肺水肿及肺上皮和内皮细胞坏死药物中的新用途。具体实施方式实例1：田基黄对脂多糖所致小鼠急性肺损伤的药效作用评价实验材料：脂多糖o55:b5、戊巴比妥钠、memmertufe400烘箱、mettlertoledoms205du十万分之一电子天平。实验动物：spf级别雄性balb/c小鼠42只，8-9周龄，体重18-20g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司(动物许可证编号scxk(鲁)20190003,使用许可证编号syxk(粤)2016-0112)。实验方法：小鼠购买后在恒温恒湿spf级动物房适应72小时。将小鼠随机分成4组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、田基黄低剂量组、高剂组。田基黄低、高剂量组分别灌胃田基黄水煎浓缩液1g生药/kg和4g生药/kg，连续三天，每天一次，空白和模型对照组灌胃等体积生理盐水。最后一次灌胃给药后3小时，采用0.5ml戊巴比妥钠(65mg/kg)腹腔注射对小鼠进行麻醉。对于模型组、田基黄低、高剂量组小鼠，将50μl脂多糖055:b5溶液(0.8mg/ml)缓慢滴注入小鼠鼻腔至完全吸收，建立小鼠急性肺损伤模型。空白对照组小鼠接受同等体积生理盐水滴鼻处理。脂多糖造模24小时后，采用脱颈法将小鼠处死，采集小鼠全肺组织放入灭菌离心管中，于30秒内置于液氮中保存。将保存在液氮中的肺组织放至室温30分钟后称量湿重。将干燥皿于80℃干燥24小时后取出，放至室温后称重。随后于80℃恒重1小时后取出，放至室温后称重。干燥皿恒重后，将肺组织置于干燥皿中，于80℃干燥48小时取出，放至室温后称重。随后于80℃恒重1小时后取出，放至室温后称重。连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下即达到恒重标准。脂多糖造模24小时后，将小鼠处死并采集肺组织约400mg。向肺组织中加入1mlpbs-10％triton作为裂解液，匀浆。采用bca蛋白浓度试剂盒测定蛋白浓度后，调整上样量为50μg总蛋白，100μl总体积，用试剂盒测定肺组织样品中髓过氧化物酶mpo的含量、髓过氧化物酶mpo活力及乳酸脱氢酶ldh活力。表中数据以均值±标准差呈现，多组间差异分析采用单因素方差分析beforroni法，spss22.0软件实现，p值小于0.01认定具有统计学差异。实验结果：结果见表1，与空白对照组小鼠相比，模型对照组肺损伤(ali)小鼠出现显著肺水肿(p<0.01),伴随髓过氧化物酶mpo在肺中表达和活力的上升(p<0.01)以及乳酸脱氢酶ldh活力的升高(p<0.01)，说明脂多糖诱导的ali模型可有效模拟出肺损伤中肺水肿，以中性粒细胞为代表的淋巴细胞的聚集浸润以及肺上皮/内皮细胞坏死这三大病理指证。田基黄水煎液可有效抑制ali中肺部炎症的进程，减轻肺水肿、局部中性粒细胞浸润及细胞坏死的情况(p<0.01)。表1对脂多糖诱导的小鼠肺损伤症抑制作用(均值±标准差,n＝6-8)**与模型对照组比较p<0.01实施例2：对烟熏所造成的慢性肺损伤的改善作用实验动物：spf级balb/c小鼠，雄性，体重19-23g，购于广东省医学实验动物中心(广州，中国)。饲养条件：12小时日夜交替，温度21℃，湿度60％，自由采食。实验仪器：烟熏箱(自制不锈钢箱体0.8m×0.8m×1m)；十万分之一分析天平(德国acculab公司，型号：alc-210-4)；5430r高速离心机(德国eppendorf公司)；多孔超微量核酸蛋白分析仪(美国biotek公司，型号：epoch)；超低温冰箱(中国海尔公司，型号：dw-86l486)；涡旋混匀仪(美国si公司，型号：si-0246)；xt-2000iv全自动动物血液分析仪(日本sysmex公司)等。实验分组：动物随机分为空白组、烟熏模型组，田基黄低剂量组(1g生药/kg)、高剂量组(4g生药/kg)及罗氟司特组(5mg/kg)，每组8只动物。造模方法及给药：动物适应饲养1周后烟熏造模，每天烟熏1次，10支香烟/1h，连续8周。每支烟含焦油量11mg，烟气烟碱量1.0mg，一氧化碳量13mg。正常组在无烟环境中饲养。给药组于第3周开始给药，每次烟熏前1h灌胃给药(灌胃体积0.2ml)。于相应时间点腹腔注射4％水合氯醛0.25ml麻醉。剪开小鼠喉颈部皮肤，暴露气管。于甲状软骨下方开口，插入气管导管并用棉线结扎。将插管后的小鼠放进pft小动物肺功能分析系统体描箱，测定准静态肺顺应性(cchord)，同时也测定50ms内用力呼气量(fev50)及用力肺活量(fvc)，以计算fev50/fvc。于相应时间点每组取8只小鼠，脱颈椎处死后于腹部横开口，剪破胸膈膜，再沿两侧肋骨向上剪开至能前整个前胸揿开，以镊子挑起全肺剪下，用小号封口袋封装，放于-80℃冰箱保存。剪开喉部皮肤和肌肉，小心分离气管，用眼科剪在甲状软骨下方开口，以5ml注射针头行气管插管并扎紧。打开胸腔后从气管插管处注入0.5ml生理盐水对全肺进行灌洗，连续3次，合并3次支气管肺泡灌洗液(balf)，3000rpm离心，细胞沉淀以含2％胎牛血清的pbs缓冲液300μl重悬，以全自动五分类动物血液分析仪进行白细胞分类计数，计算中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞数量。肺组织与组织匀浆液1mg:10μl的比例混合，用玻璃匀浆器匀磨肺组织，制备10％肺组织匀浆液，使用bca法测定肺组织匀浆液的总蛋白含量，使用elisa法测定肺组织匀浆液中tnfα、il-6、ltb4、il-1β、il-18的含量，按试剂盒说明书操作测定，各细胞因子含量表示为pg/mg蛋白。实验结果见表2～表4。1、田基黄水煎液能显著抑制小鼠cchord的升高和fev50/fvc的降低，延缓小鼠的肺功能的退化。实验结果见表2。表2对慢性烟熏小鼠肺功能的影响组别cchord(ml/cmh2o)fev50/fvc空白组0.037±0.00170.412±0.053模型组0.064±0.0025**0.235±0.033**田基黄低剂量组0.047±0.0026##0.320±0.036##田基黄高剂量组0.043±0.0031##0.378±0.042##罗氟司特0.045±0.0032#0.388±0.047##与空白组对比，*表示p<0.05，**表示p<0.01；与模型组对比，#表示p<0.05，##表示p<0.012、田基黄水煎液能显著降低慢性烟熏小鼠肺泡灌洗液中中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的浸润。实验结果见表3。表3慢性烟熏小鼠肺泡灌洗液白细胞计数与空白组对比，*表示p<0.05，**表示p<0.01；与模型组对比，#表示p<0.05，##表示p<0.013、田基黄水煎液能显著抑制慢性烟熏小鼠肺组织中tnfα、il-6、ltb4、il-1β、il-18水平的升高，达到抑制炎症的目的。实验结果见表4。表4对慢性烟熏小鼠肺组织中炎症因子的影响与空白组对比，*表示p<0.05，**表示p<0.01；与模型组对比，#表示p<0.05，##表示p<0.01。当前第1页12