本发明属于医药技术领域，具体涉及一种海参多糖组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
人体大约携带3.9×1013个细菌，其中绝大多数存在于肠道中。据统计，人的肠道菌群中存在大约1000万种不重复的基因，约是人类基因组的150倍。因此，肠道菌群的代谢能力远超人体细胞的代谢能力。此外，肠道菌群的组成和丰度与人体的机能和代谢存在显著的相关性。肠道菌群紊乱易增加机体患胰岛素抵抗、血脂异常、慢性炎症、癌症以及免疫力低下的风险，从而导致肥胖、二型糖尿病、非酒精性脂肪肝等多种代谢综合征的产生。因此，调节和维持肠道菌群的平衡对于维持宿主的健康具有重要作用。人体最大的微生态系统，其中大量的微生物称肠道菌群。肠道菌群的组成和结构的改变和一些复杂得到疾病如行为失调、代谢性疾病等有关。比如自闭症、肝性脑病、过敏症、肥胖病、糖尿病及各种神经疾病等。肠道菌群主要是由厚壁菌门(firmicutes)、拟杆菌门(bacteroidetes)、变形菌门(proteobacteria)、放线菌门(actinobacteria)、梭杆菌门(fusobacteria)等组成。其中最主要的是拟杆菌门和厚壁菌门，占据着超过98％的绝对优势。
目前已经销售的肠道菌群调节产品主要包括益生菌类产品、低聚糖类等益生元产品，日常饮食可以影响肠道菌群的组成。目前我国调节肠道菌群类的食品从原料组成上可分以益生菌为主要原料的活菌类食品和以益生元为主要原料的非活菌类食品。益生菌(probiotics)是指能够促进肠内菌群生态平衡，对宿主起有益作用的活的微生物制剂。常见的益生菌主要包括两大类：分别为双歧杆菌(bifidobacterium)和乳杆菌(lactobacillus)。摄取适量的益生菌，能对宿主产生一种或多种特殊的功能性健康益处，因此，益生菌在功能食品及药品中有着广阔的应用前景。益生元(prebiotics)是指不易被消化的食品成分，通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，而对寄主产生有益的影响，从而改善寄主健康的物质。2016年12月，国际益生菌与益生元科学协会更新了对益生元的定义和范围：能够被宿主体内的菌群选择性利用并转化为有益于宿主健康的物质被称作益生元。它就像是有益菌的食物，能促进人体内有益菌的生长，同时抑制有害菌。益生元基于化学结构可分为两类：itf菊粉型果聚糖和gos低聚半乳糖，大多数商业用益生元为寡糖，如低聚异麦芽糖、低聚果糖、低聚半乳糖等。
然而益生菌类产品菌种单一，不能满足人体肠道中复杂菌群体系的需求，在一定程度上限制了其应用；低聚糖类等益生元产品，单独使用效果有限，并且作为碳水化合物，低聚糖被代谢后可为机体供能，限制了糖尿病、肥胖等人群的食用。
技术实现要素：
为克服现有技术缺陷，提供一种海参多糖组合物及其制备方法和应用，本发明采用了以下技术方案：
本发明一方面提供了一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参200～400份、桑叶100～200份、马齿苋100～200份、鸡内金50～150份以及麦芽50～150份；
进一步的，所述海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参240～360份、桑叶120～180份、马齿苋120～180份、鸡内金80～120份以及麦芽80～120份；
进一步的，所述海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参300份、桑叶150份、马齿苋150份、鸡内金100份以及麦芽100份。
本发明的另一方面还提供了一种海参多糖组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1：制备海参多糖提取物：按重量比例称取海参、桑叶以及马齿苋，混合均匀后粉碎成100～300目，加入其3～8倍质量的60～80℃的纯水浸提1～3次，冷却至室温后以1000～3000r/min的转速离心，弃离心沉淀得上清液，上清液经40～60℃浓缩后，加入其3～5倍质量60～80v/v％乙醇水溶液进行沉淀，静置24～48h，收集沉淀后采用sephdexlh-20凝胶柱色谱进行分离，依次采用20v/v％甲醇水溶液、30v/v％甲醇水溶液、40v/v％甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液后冷冻干燥，即得；
s2：制备鸡内金和麦芽提取物：按重量比例称取鸡内金和麦芽，混合均匀后粉碎成100～300目，加入3～8倍质量的60～80℃的20～40v/v％乙醇水溶液超声提取1～3次，冷却至室温后滤过，合并滤液，在40～60℃下减压浓缩至干，即得；
s3：将s1、s2所得提取物混合粉碎后，即得海参多糖提取物。
进一步的，s1中所述的粉碎粒度为200目；
进一步的，s1中所述浸提时纯水质量为海参、桑叶以及马齿苋质量之和的6倍；浸提温度为75℃；提取次数为2次；
进一步的，s1中所述离心转速为1500r/min；
进一步的，s1中所述浓缩温度为50℃；
进一步的，s1中所述加4.5倍质量70v/v％的乙醇水溶液进行沉淀；静置时间为36h；
进一步的，s2中所述的粉碎粒度为200目；
进一步的，s2中所述超声提取的条件为：加入鸡内金和麦芽质量之和6倍、30v/v％的乙醇水溶液；温度为的70℃；提取次数为2次；
进一步的，s2中所述浓缩温度为50℃；
本发明的第三方面提供了一种调节肠道菌群的药物组合物，包括上述任一种海参多糖组合物和药学上可接受的载体。
进一步的，所述药物组合物为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂或口服液。
本发明的第四方面提供了一种调节肠道菌群的保健食品组合物，包括上述任一种海参多糖组合物和食品上可接受的载体。
本发明的第五方面请求保护上述任一种海参多糖组合物在制备调节胃肠道菌群药物或在制备调节胃肠道菌群的保健食品组合物中的用途。
有益效果：
海参是棘皮动物门(echindermata)海参纲(holothurioidea)生物,全世界约有1100种海参,我国有100多种；全世界可食用海参40多种,我国有20多种。海参具有较高的药用价值,本身又作为食品使用,《本草从新》描述其为“补肾益精,养血润燥；治精血亏损、虚弱劳怯、阳痿、梦遗、小便频数”。《本草纲目拾遗》中也记载“海参性温补,足敌人参,故名海参；味甘咸,补肾经,益精髓”。研究表明,海参的营养作用主要缘于其体内的多糖。
海参多糖由氨基半乳糖、己糖醛酸、岩藻糖、硫酸酯基组成,是海参体壁的重要组成成分。海参多糖具有多种生物活性,在食品与药品领域均有重要的研究意义。
桑叶，性味甘、苦，寒。归经归肺、肝经。作为药食同源的中药，功能主治疏散风热，清肺润燥，清肝明目。用于风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花。
马齿苋，性味酸，寒。作为药食同源的中药，功能主治清热利湿，凉血解毒。用于细菌性痢疾，急性胃肠炎，急性阑尾炎，乳腺炎，痔疮出血，白带；外用治疔疮肿毒，湿疹、带状疱疹。
鸡内金，性味甘，平。归脾、胃、小肠、膀胱经。鸡内金作为药食同源的中药，功能主治健胃消食，涩精止遗。用于食积不消，呕吐泻痢，小儿疳积，遗尿，遗精。
麦芽，性味甘，平。归脾、胃经。功能主治行气消食，健脾开胃，退乳消胀。用于食积不消，脘腹胀痛，脾虚食少，乳汁郁积，乳房胀痛，妇女断乳。麦芽作为药食同源的中药，用于脾虚食少，乳汁郁积。现代医学研究发现，麦芽富含淀粉酶、转化糖酶、b族维生素、脂肪、磷脂、糊精、麦芽糖、葡萄糖等多种有益成分。
本发明将上述药食同源的中药组分配伍使用，以海参为君药，发挥补益精血的作用，以桑叶、马齿苋合为臣药，补益的同时增加清热功能，抑制有害细菌生长，以麦芽、鸡内金何为佐使药物，帮助消化、调理肠胃，以达到健胃润肠的功效。以上诸味组方，充分发挥了各中药组分的治疗和保健功效，使各自优势互补，能够有效调节胃肠道菌群、保护胃肠粘膜，进而提高免疫力的功能。
具体实施方式
下面将对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
实施例1：
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参200g、桑叶100g、马齿苋100g、鸡内金50g以及麦芽50g；其制备方法包括以下步骤：
s1：制备海参多糖提取物：按重量比例称取海参、桑叶以及马齿苋，混合均匀后粉碎成300目，加入其8倍质量的80℃的纯水浸提3次，冷却至室温后以3000r/min的转速离心，弃离心沉淀得上清液，上清液经60℃浓缩后，加入其5倍质量80v/v％乙醇水溶液进行沉淀，静置48h，收集沉淀后采用sephdexlh-20凝胶柱色谱进行分离，依次采用20v/v％、30v/v％、40v/v％的甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液后冷冻干燥，即得；s2：制备鸡内金和麦芽提取物：按重量比例称取鸡内金和麦芽，混合均匀后粉碎成300目，加入8倍质量的80℃的40v/v％乙醇水溶液超声提取3次，冷却至室温后滤过，合并滤液，在60℃下减压浓缩至干，即得；s3：将s1、s2所得提取物混合粉碎后，即得海参多糖提取物。
实施例2：
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参400g、桑叶200g、马齿苋200g、鸡内金150g以及麦芽150g；其制备方法包括以下步骤：
s1：制备海参多糖提取物：按重量比例称取海参、桑叶以及马齿苋，混合均匀后粉碎成100目，加入其3倍质量的60℃的纯水浸提1次，冷却至室温后以1000r/min的转速离心，弃离心沉淀得上清液，上清液经40℃浓缩后，加入其3倍质量60v/v％乙醇水溶液进行沉淀，静置24h，收集沉淀后采用sephdexlh-20凝胶柱色谱进行分离，依次采用20v/v％、30v/v％、40v/v％的甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液后冷冻干燥，即得；s2：制备鸡内金和麦芽提取物：按重量比例称取鸡内金和麦芽，混合均匀后粉碎成100目，加入3倍质量的60℃的20v/v％乙醇水溶液超声提取1次，冷却至室温后滤过，合并滤液，在40℃下减压浓缩至干，即得；s3：将s1、s2所得提取物混合粉碎后，即得海参多糖提取物。
实施例3：
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参240g、桑叶120g、马齿苋120g、鸡内金80g以及麦芽80g；其制备方法包括以下步骤：
s1：制备海参多糖提取物：按重量比例称取海参、桑叶以及马齿苋，混合均匀后粉碎成200目，加入其6倍质量的75℃的纯水浸提2次，冷却至室温后以1500r/min的转速离心，弃离心沉淀得上清液，上清液经50℃浓缩后，加入其4.5倍质量70v/v％乙醇水溶液进行沉淀，静置36h，收集沉淀后采用sephdexlh-20凝胶柱色谱进行分离，依次采用20v/v％、30v/v％、40v/v％的甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液后冷冻干燥，即得；s2：制备鸡内金和麦芽提取物：按重量比例称取鸡内金和麦芽，混合均匀后粉碎成200目，加入6倍质量的70℃的30v/v％乙醇水溶液超声提取2次，冷却至室温后滤过，合并滤液，在50℃下减压浓缩至干，即得；s3：将s1、s2所得提取物混合粉碎后，即得海参多糖提取物。
实施例4：
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参360g、桑叶180g、马齿苋180g、鸡内金120g以及麦芽120g；其制备方法同实施例3。
实施例5
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参300g、桑叶150g、马齿苋150g、鸡内金100g、麦芽100g；其制备方法同实施例3。
实施例6
将实施例5获得的中药组合物按照质量比100：300∶100加入微粉硅胶、低取代羟丙基纤维素，混匀，干燥，粉碎，过筛，制粒，干燥，整粒，填充胶囊，制备成1000粒胶囊，即得。
实施例7
将实施例5获得的中药组合物按照质量比100g：200g∶100g：100g加入淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基甲基纤维素，混匀，制成粗颗粒，干燥，粉碎，过筛，制颗粒，整粒，加入0.5％硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。
实施例8
将实施例5获得的中药组合物按照质量比100g：200g：200g加入羧甲基淀粉、微晶纤维素，混匀，干燥，粉碎，过筛，制粒，干燥，整粒，填充胶囊，制备成1000粒保健胶囊，即得。
对比例1
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参450g、桑叶150g、鸡内金100g以及麦芽100g；其制备方法同实施例3。
对比例2
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参450g、马齿苋150g、鸡内金100g以及麦芽100g；其制备方法同实施例3。
对比例3
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：桑叶300g、马齿苋300g、鸡内金100g以及麦芽100g；其制备方法同实施例3。
对比例4
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参300g、桑叶150g、马齿苋150g以及鸡内金200g；其制备方法同实施例3。
对比例5
一种海参多糖组合物，由以下重量份的原料制成：海参300g、桑叶150g、马齿苋150g以及麦芽200g；其制备方法同实施例3。
实验例
1.模型制备及给药方法：
动物普通饲料喂养1周以适应环境，然后将小鼠随机分9组，每组10只；正常对照组(正常饲喂小鼠，且不给药，仅同时灌胃蒸馏水0.5g)；模型组(模型组按体重每日皮下注射0.2mld-半乳糖，同时灌胃蒸馏水0.5g)；阳性对照药组(皮下注射0.2ml/dd-半乳糖，同时分别灌胃0.5g/d金双歧片(双歧杆菌乳杆菌三联活菌片，内蒙古双齐药业股份有限公司，批号：201809200))；给药组(皮下注射0.2ml/dd-半乳糖，同时分别灌胃0.5g/d实施例5组的中药组合物)；对比例1组(皮下注射0.2ml/dd-半乳糖，同时分别灌胃0.5g/d对比例1组的中药组合物)；对比例2组(皮下注射0.2ml/dd-半乳糖，同时分别灌胃0.5g/d对比例2组的中药组合物)；对比例3组(皮下注射0.2ml/dd-半乳糖，同时分别灌胃0.5g/d对比例3组的中药组合物)；对比例4组(皮下注射0.2ml/dd-半乳糖，同时分别灌胃0.5g/d对比例4组的中药组合物)；对比例5组(皮下注射0.2ml/dd-半乳糖，同时分别灌胃0.5g/d对比例5组的中药组合物)。实验期30d，当模型组小鼠出现脊椎隆起，体形消瘦，毛色灰暗稀疏，行动迟缓等体征，证明造模成功，末次给药后禁食24h，然后处死各组小鼠，取回盲部内容物检测肠道菌群变化。
2.肠道菌群检测：参见本领域的常规检测方法，计算公式:cfu/g＝菌落数×47×稀释倍数/标本重量(g)。
3.内毒素检测：用眼球采血法采集小鼠血液，将血液装在去热原处理的离心管里(用去热原肝素抗凝)。500r/min离心5min后，取血浆，置于无菌试管中，严格按内毒素检测试剂盒说明书操作测定内毒素含量。
4.实验结果：
4.1体内有益菌和有害菌含量测定正常对照组小鼠毛非常活跃、发浓密、光亮，模型组小鼠失去光亮、毛色灰暗稀疏，行动迟缓。各组小鼠肠道正常菌群定量检测经过d-半乳糖灌胃后，模型组小鼠与正常对照组相比，肠道菌群菌量发生明显改变，其中模型组双歧杆菌、乳酸杆菌数量减少，肠球菌和肠杆菌增加(p＜0.05)，说明模型组小鼠出现菌群失调，这证明使用d-乳糖造模成功。阳性对照药组、给药组(实施例5组)、对比例1～5组与模型组相比，肠道菌群数量相比肠杆菌和肠球菌数量均降低(p＜0.05)，而乳酸杆菌和双歧杆菌数量均增加，差异有统计学意义(p＜0.05)；给药组与阳性对照药组相比，肠道菌群数量相比肠杆菌和肠球菌数量均降低，乳酸杆菌和双歧杆菌数量均增加，差异存在统计学意义(p＜0.05)，给药组与对比例1～5组相比，肠道菌群数量相比肠杆菌和肠球菌数量均降低(p＜0.05)，而乳酸杆菌和双歧杆菌数量均增加，差异有统计学意义(p＜0.05)；实验数据见表1。由此可见，给药组和阳性对照药、对比例1～5组相比，均能降低小鼠体内有害菌数量而提高有益菌数量，且本发明处方获得的中药组合物各药物之间具有协同作用，效果较佳。
表1正常对照组、模型组、阳性对照药组、给药组以及对比例1～5组小鼠肠道菌群检测结果比较(logn/g,
4.2各组小鼠血内毒素含量测定结果见表2。
表2小鼠血内毒素含量测定
由此可见，正常组、阳性对照药组、给药组以及对比例1～5组的血内毒素含量均比模型组降低，且差异有统计学意义(p＜0.05)；而给药组的血内毒素含量均低于阳性对照药组以及对比例1～5组，且差异有统计学意义(p＜0.05)。
需要说明的是，本发明临床研究所选取的药品为本发明具有代表性的配方及其制备方法所得的药品，本发明所包含的其它配方及制备方法所得药品涉及的试验及其结果，由于篇幅限制，在此不一一穷举，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。