一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法，其是选取干海参为原料，粉碎后加入正己烷或石油醚进行萃取脱脂处理；脱脂处理后的海参粉去除有机溶剂，加入乙醇萃取去除皂苷；干燥后置于酶解灌中，加入水，充分溶胀后，加入动物蛋白水解酶和胰蛋白酶进行一次酶解，灭酶；所得到的海参酶解液离心，超滤后所得的超滤液置于酶解罐中加入风味蛋白水解酶进行酶解处理，灭酶；调节pH值后冷却低温，静置，离心，超滤，收集截留液干燥，得海参多糖干品。本发明的制备方法工艺合理，技术先进，操作可行；采用本制备方法制取的海参多糖，经测定：蛋白含量低于0.5%。
【专利说明】一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及多糖的制备，尤其是一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法。
【背景技术】
[0002]我们知道，海参多糖是海参体壁的重要组成成分，大量的文献证实海参多糖具有抗凝血、抗肿瘤、增强免疫力、降血脂等多种生物活性。因此，在功能性食品和海洋药物开发方面展现出了良好的应用前景。
[0003]海参多糖在海参体壁中以糖肽键与蛋白相连。蛋白是影响海参多糖品质的主要杂质，采用适当方法降低产物中蛋白含量是制备高纯度海参多糖的关键。去除蛋白的方法有多种，通常采用Sevage法及三氯乙酸法等，然而这些方法在去除蛋白时效率低，同时会造成多糖的大量损失，不利于产业化生产。
[0004]目前，还未见过到制备低蛋白含量海参多糖的报道。
【发明内容】
[0005]为了克服现有技术中Sevage法及三氯乙酸法等方法制取多糖存在去除蛋白时效率低、多糖损失大的不足，本发明提供一种工艺合理、技术先进、操作可行的低蛋白高纯度海参多糖的制备方法。该制备方法是米用酶解_超滤_酶解_超滤偶联法制备海参多糖，其提取所得多糖蛋白质含量极低，具有纯度高，免疫原性低等特性。
[0006]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法，其特征在于:经过下列工艺步骤:
Cl)原料选取与处理选取干海参为原料，进行粉碎处理，过100~300目筛，得海参粉，备用；
(2)脱脂处理将步骤(1)所得到的海参粉加入正己烷或石油醚进行萃取脱脂处理6~IOh ;其中，所述的正己烧或石油醚的用量为海参粉质量的4~10倍；
(3)脱除皂苷将步骤(2)脱脂处理后的海参粉去除正己烷或石油醚，加入浓度为60~85%的乙醇萃取处理24~48h，脱除皂苷；其中，所述的乙醇的用量为脱脂处理后的海参粉质量的6~20倍；
(4)一次酶解将步骤(3)中脱除皂苷后的海参粉去除乙醇，真空干燥后置于酶解灌中，加入脱除皂苷后的海参粉质量的15~40倍的纯净水，充分溶胀后加热至100°C保持20~30min，杀灭微生物；冷却至45~55°C，加入动物蛋白水解酶酶解2~3h ;其中，所述的动物蛋白水解酶的酶用量为脱除皂苷后的海参粉质量的0.3~5% ;调节pH值7.0~8.0,加入胰蛋白酶酶解5~6h，其中，所述的胰蛋白酶的酶用量为脱除皂苷后的海参粉质量的0.3~5% ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20~30min，得海参一次酶解液；
(5)—次超滤将步骤(4)中所得到的海参一次酶解液离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参一次超滤液；
(6)二次酶解将步骤(5)收集的海参一次超滤液置于酶解罐中，加入超滤液体积的3~6倍的纯净水，加热至45~55°C，加入风味蛋白水解酶酶解3~4h，其中，所述的风味蛋白水解酶的酶用量为脱除皂苷后的海参粉质量的0.3~5% ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20~30min ;得海参二次酶解液；
(7)二次超滤将步骤(6)所得到海参二次酶解液调节pH值4~5，冷却至2~5°C，静置6~12h ;离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参二次超滤液；
(8)干燥将步骤(7)所得到的海参二次超滤液喷雾干燥，得海参多糖干品。
[0007]本发明选取干海参为原料，粉碎后加入正己烷或石油醚进行萃取脱脂处理；脱脂处理后的海参粉去除有机溶剂，加入乙醇萃取去除皂苷；干燥后置于酶解灌中，加入水，充分溶胀后，加入动物蛋白水解酶和胰蛋白酶进行一次酶解，灭酶；所得到的海参酶解液离心，超滤后所得的超滤液置于酶解罐中加入风味蛋白水解酶进行酶解处理，灭酶；调节PH值后冷却低温，静置，离心，超滤，收集截留液干燥，得海参多糖干品。本发明采用酶膜偶联的方法，其蛋白质脱除率高，对多糖损失少；其采用有机溶剂正己烷或石油醚进行脱脂处理；采用乙醇萃取去除皂苷，使所得到的海参多糖纯度高。采用本发明的制备方法制取的海参多糖，经测定:蛋白含量低于0.5%。并经动物实验证实，所提取所得海参多糖免疫原性低。本发明的低蛋白高纯度海参多糖的制备方法，其工艺合理，技术先进，操作可行，适合大规模工厂化生产。
【具体实施方式】
[0008]下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0009]实施例1
一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法，经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理选取干海参为原料，进行粉碎处理，过200目筛，得海参粉，备
用；
(2)脱脂处理将步骤(1)所得到的海参粉加入海参粉质量6倍的正己烷，萃取脱脂处理8h ；
(3)脱除皂苷将步骤(2)脱脂处理后的海参粉抽滤去除正己烷，再加入浓度为80%的乙醇萃取处理36h，脱除皂苷；其中，乙醇的用量为脱脂处理后的海参粉质量的14倍；
(4)一次酶解将步骤(3)中脱除皂苷后的海参粉去除乙醇，真空干燥，干燥后置于酶解灌中，加入脱除皂苷后的海参粉质量的30倍的纯净水，充分溶胀后加热至100°C保持25min,杀灭微生物；冷却至50°C，加入脱除皂苷后的海参粉质量1.5%的动物蛋白水解酶酶解2.2h ;调节pH值7.5，加入脱除皂苷后的海参粉质量1%的胰蛋白酶酶解5.5h ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶25min，得海参一次酶解液；
(5)一次超滤将步骤(4)中所得到的海参一次酶解液采用三足式离心机，控制转速2000rpm,离心，收取上清液；上清液再采用碟片式离心机，控制转速4000rpm,离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参一次超滤液；
(6)二次酶解将步骤(5)收集的海参一次超滤液置于酶解罐中，加入超滤液体积的4倍的纯净水，加热至50°C`，加入脱除皂苷后的海参粉质量2%的风味蛋白水解酶酶解3.5h ；酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶25min ;得海参二次酶解液；(7)二次超滤将步骤(6)所得到海参二次酶解液调节pH值4.5，冷却至4°C，静置IOh ;采用管式离心机，控制转速12000rpm，离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参二次超滤液；
(8)干燥将步骤(7)所得到的海参二次超滤液喷雾干燥，得海参多糖干品。
[0010]本实施例所给出的制备方法，其工艺合理，技术先进，操作可行；采用本制备方法制取的海参多糖，经测定:蛋白含量为0.40%。
[0011]实施例2
一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法，经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理选取干海参为原料，进行粉碎处理，过300目筛，得海参粉，备
用；
(2)脱脂处理将步骤(1)所得到的海参粉加入海参粉质量10倍的石油醚，萃取脱脂处理6h ； (3)脱除皂苷将步骤(2)脱脂处理后的海参粉离心去除石油醚，加入浓度为85%的乙醇萃取处理24h，脱除皂苷；其中，所述的乙醇的用量为脱脂处理后的海参粉质量的6倍；
(4)一次酶解将步骤(3)中脱除皂苷后的海参粉抽滤去除乙醇，海参粉真空干燥，干燥后置于酶解灌中，加入脱除皂苷后的海参粉质量的40倍的纯净水，充分溶胀后加热至100°C保持20min，杀灭微生物；冷却至55°C，加入脱除皂苷后的海参粉质量5%的动物蛋白水解酶酶解2h ;调节pH值8.0，加入脱除皂苷后的海参粉质量0.3%的胰蛋白酶酶解6h ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶30min，得海参一次酶解液；
(5)一次超滤将步骤(4)中所得到的海参一次酶解液采用三足式离心机，控制转速2000rpm，离心，收集上清液；上清液再采用管式离心机，控制转速12000rpm，离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参一次超滤液；
(6)二次酶解将步骤(5)收集的海参一次超滤液置于酶解罐中，加入超滤液体积的6倍的纯净水，加热至55°C，加入脱除皂苷后的海参粉质量5%的风味蛋白水解酶酶解3h ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶30min ;得海参二次酶解液；
(7)二次超滤将步骤(6)所得到海参二次酶解液调节pH值5，冷却至5°C，静置6h;采用管式离心机，控制转速12000rpm，离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参二次超滤液；
(8)干燥将步骤(7)所得到的海参二次超滤液喷雾干燥，得海参多糖干品。
[0012]本实施例所给出的制备方法，其工艺合理，技术先进，操作可行；采用本制备方法制取的海参多糖，经测定:蛋白含量为0.44%。
[0013]实施例3
一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法，经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理选取干海参为原料，进行粉碎处理，过100目筛，得海参粉，备
用；
(2)脱脂处理将步骤(1)所得到的海参粉加入海参粉质量4倍的石油醚，萃取脱脂处理 IOh ；
(3)脱除皂苷将步骤(2)脱脂处理后的海参粉离心去除石油醚，加入浓度为60%的乙醇萃取处理48h，脱除皂苷；其中，所述的乙醇的用量为脱脂处理后的海参粉质量的20倍；(4)一次酶解将步骤(3)中脱除皂苷后的海参粉抽滤去除去除乙醇，海参粉真空干燥后置于酶解灌中，加入脱除皂苷后的海参粉质量的15倍的纯净水，充分溶胀后加热至100°C保持30min，杀灭微生物；冷却至45°C，加入脱除皂苷后的海参粉质量0.3%的动物蛋白水解酶酶解3h ;调节pH值7.0，加入脱除皂苷后的海参粉质量5%的胰蛋白酶酶解5h ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20min，得海参一次酶解液；
(5)一次超滤将步骤(4)中所得到的海参一次酶解液采用三足式离心机，控制转速2000rpm，离心，收集上清液；上清液再采用管式离心机，控制转速12000rpm，离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参一次超滤液；
(6)二次酶解将步骤(5)收集的海参一次超滤液置于酶解罐中，加入超滤液体积的3倍的纯净水，加热至45°C，加入脱除皂苷后的海参粉质量0.3%的风味蛋白水解酶酶解4h ；酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20min ;得海参二次酶解液； (7)二次超滤将步骤(6)所得到海参二次酶解液调节pH值4，冷却至2°C，静置12h;采用管式离心机，控制转速12000rpm，离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参二次超滤液；
(8)干燥将步骤(7)所得到的海参二次超滤液喷雾干燥，得海参多糖干品。
[0014]本实施例所给出的制备方法，其工艺合理，技术先进，操作可行；采用本制备方法制取的海参多糖，经测定:蛋白含量为0.42%。
【权利要求】
1.一种低蛋白高纯度海参多糖的制备方法，其特征在于:经过下列工艺步骤: (1)原料选取与处理选取干海参为原料，进行粉碎处理，过100~300目筛，得海参粉，备用； (2)脱脂处理将步骤(1)所得到的海参粉加入正己烷或石油醚进行萃取脱脂处理.6~IOh ;其中，所述的正己烧或石油醚的用量为海参粉质量的4~10倍； (3)脱除皂苷将步骤(2)脱脂处理后的海参粉去除正己烷或石油醚，加入浓度为60~85%的乙醇萃取处理24~48h，脱除皂苷；其中，所述的乙醇的用量为脱脂处理后的海参粉质量的6~20倍； (4)一次酶解将步骤(3)中脱除皂苷后的海参粉去除乙醇，真空干燥后置于酶解灌中，加入脱除皂苷后的海参粉质量的15~40倍的纯净水，充分溶胀后加热至100°C保持20~30min，杀灭微生物；冷却至45~55°C，加入动物蛋白水解酶酶解2~3h ;其中，所述的动物蛋白水解酶的酶用量为脱除皂苷后的海参粉质量的0.3~5% ;调节pH值7.0~8.0,加入胰蛋白酶酶解5~6h，其中，所述的胰蛋白酶的酶用量为脱除皂苷后的海参粉质量的.0.3~5% ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20~30min，得海参一次酶解液； (5)—次超滤将步骤(4)中所得到的海参一次酶解液离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参一次超滤液； (6)二次酶解将步骤(5)收集的海参一次超滤液置于酶解罐中，加入超滤液体积的3~6倍的纯净水，加热至45~55°C，加 入风味蛋白水解酶酶解3~4h，其中，所述的风味蛋白水解酶的酶用量为脱除皂苷后的海参粉质量的0.3~5% ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20~30min ;得海参二次酶解液； (7)二次超滤将步骤(6)所得到海参二次酶解液调节pH值4~5，冷却至2~5°C，静置6~12h ;离心，收取上清液；将上清液通过分子量为1000ODa的滤膜超滤，收集截留液，得海参二次超滤液； (8)干燥将步骤(7)所得到的海参二次超滤液喷雾干燥，得海参多糖干品。
【文档编号】C08B37/00GK103724442SQ201310649424
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】袁文鹏, 张绵松, 胡炜, 刘昌衡, 孙永军, 孟秀梅, 王志伟, 鞠文明, 唐晓波, 毕春雨 申请人:山东好当家海洋发展股份有限公司, 山东省科学院生物研究所