淫羊藿炮制的一体化制备方法与流程

本发明涉及中药材制备方法
技术领域：
，具体涉及淫羊藿炮制的一体化制备方法。
背景技术：
：中药从药用植物到中药饮片，经历了产地加工和饮片炮制2个环节。前者的目标产物是中药材，后者的目标产物为中药饮片。近些年，国家加大了中药饮片的监管力度，但问题饮片时有出现，很大程度是由于加工混乱造成的，因此，一些学者提出中药材产地加工与饮片炮制一体化概念(简称一体化)，旨在从源头抓起，杜绝问题隐患，确保饮片质量及临床安全和疗效。淫羊藿醇浸出物、总黄酮、朝藿定a-c、淫羊藿苷和宝藿苷i具有显著的药理活性。现代药理学研究表明，淫羊藿醇浸出物具有抗氧化和神经保护作用；淫羊藿总黄酮具有抗骨质疏松、抗氧化、增强免疫、神经保护作用、抗衰老和肾保护作用；朝藿定a具有抗菌和抗氧化活性；朝藿定b具有抗骨质疏松、抗菌和抗氧化活性；朝藿定c具有抗骨质疏松、抗氧化、抗菌和抗肿瘤的活性；淫羊藿苷具有抗骨质疏松、保护神经、抗肿瘤、抗炎和抗氧化等活性；宝藿苷ⅰ具有抗肿瘤、抗骨质疏松、降血糖和抗氧化活性。研究表明淫羊藿的主要活性成分是黄酮类，其中朝藿定a-c、淫羊藿苷和宝藿苷i的含量较高。技术实现要素：本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了淫羊藿炮制的一体化制备方法。为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：淫羊藿炮制的一体化制备方法，是将鲜淫羊藿烘至一定含水量或阴干后，切丝，加羊油炒干即可；所述鲜淫羊藿为鲜心叶淫羊藿；所述烘干温度为30℃-120℃；所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的0％-100％；所述羊油的加入量为鲜淫羊藿重量的20％；所述阴干后需闷润切丝。进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述制备方法为：将鲜淫羊藿直接切丝后，加入羊油炒干，所述羊油的加入量为鲜淫羊藿重量的20％。进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述烘干温度为50℃，所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的0％-100％。进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述烘干温度为30℃-120℃；所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的30％。进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述烘干温度为70-120℃；所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的30％。本发明的有益效果为：本发明提供的淫羊藿炮制的一体化制备方法，能大大的缩短加工时间，与传统饮片加工方法相比，因避免了药材二次闷润的过程，极大程度地保留了淫羊藿中的活性成分，能有效的促进淫羊藿的开发利用；采用此制备方法炮制的淫羊藿药材，无掉渣现象，总黄酮含量较高，dpph自由基和超氧阴离子自由基清除能力较强，且淫羊藿苷和宝藿苷ⅰ的含量和、5种主要黄酮含量和、醇浸出物含量相对较高。附图说明图1显示为不同工艺样品照片。图2显示为淫羊藿中5种黄酮类成分(a-对照品，b-样品，1-朝藿定a，2-朝藿定b，3-朝藿定c，4-淫羊藿苷，5-宝藿苷1)图3显示为s1-s12的5种黄酮含量和。图4显示为s12-s22的5种黄酮含量和。图5显示为s1-s12的总黄酮含量。图6显示为s12-s22的总黄酮含量。图7显示为醇浸出物含量。图8显示为s12-s22的dpph自由基清除率。图9显示为s12-s22的羟自由基清除率。图10显示为s12-s22的超氧阴离子自由基清除率。具体实施方式本实验从鲜心叶淫羊藿(以下简称淫羊藿)出发，以5种主要黄酮(朝藿定a-c、淫羊藿苷、宝藿苷ⅰ，以下简称5种黄酮)含量和、总黄酮含量、醇浸出物含量和自由基清除率为指标，采用烘箱干燥法干燥，并用羊脂油炒制优选最佳的产地加工炮制一体化工艺，共设计了21个新工艺，1个传统工艺，分别是：趁鲜切丝，加20％羊油炒干，制得样品s1；烘箱50℃烘至含水量为药材原始含水量不同百分比(0％-90％，即一成至完全干燥)时，分别取出切丝，加20％羊油炒干，制得10个饮片样品(s2-s11)；将鲜药材用传统方法阴干，加20％羊油炒干，制得饮片样品s12；在不同温度(30-120℃)分别烘至含水量为药材原始含水量的30％(七成干)时，取出切丝，加20％羊油炒干，制得10个饮片样品(s13-s22)。实施例1：1试剂、仪器与药材1.1试剂朝藿定a(110623-72-8)、朝藿定b(110623-73-9)、朝藿定c(110642-44-9)、淫羊藿苷(489-32-7)、宝藿苷ⅰ(113558-15-9)对照品，均购自宝鸡市辰光生物科技有限公司；甲醇、乙腈(oceanpak，瑞典)，乙腈和乙酸均为色谱纯；其他试剂均为分析纯。1.2仪器十万分之一分析天平(赛多利斯科学仪器，北京有限公司)；安捷伦1260ⅱ高效液相色谱仪；超声波清洗仪(kq-400kde型高功率数控超声波清洗仪)；紫外分光光度计(uv-1700，shimadzu)；fa2004分析电子天平(上海良华仪器仪表有限公司)。1.3药材淫羊藿药材采自甘肃省礼县中坝乡，采收时间：2019年6月10日，由礼县春天药业提供，由甘肃中医药大学附属医院杨锡仓主任中药师鉴定为心叶淫羊藿(epimediumbrevicomumaxim.)的叶。2方法及结果2.1样品制备①趁鲜切丝，加20％的羊油炒干，制得样品s1；②烘箱50℃烘至含水量为药材原始含水量不同百分比(0％～90％)时，分别取出切丝，加20％的羊油炒干，制得10个样品(s2-s11)；③将鲜药材用传统方法阴干，加20％的羊油炒干，制的样品s12；④实验发现50℃下干燥至七成干的时，5种主要黄酮成分含量和最高，且高于传统工艺，因此设计在不同温度(30～120℃)分别烘至含水量为药材原始含水量的30％时，取出切丝，加20％的羊油炒干，制得10个样品(s13-s22)。样品信息及具体工艺见表1。表12.2指标成分测定2.2.1水分含量测定根据2015年版《中国药典》四部项下0831干燥失重测定法测定。2.2.2五种黄酮含量测定采用hplc法，按2015年版《中国药典》淫羊藿项下炙淫羊藿中淫羊藿苷和宝藿苷ⅰ含量的测定方法测定5种黄酮含量。2.2.2.1样品制备按药典规定制备样品溶液。取药材0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声提取(20℃，频率160hz)1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μl滤膜过滤，即得。2.2.2.2色谱条件色谱条件如下：色谱柱：agilentzorbaxeclipsexdb-c18柱；柱温：30℃；进样量：20μl；检测波长：270nm；流动相：乙腈-水洗脱程序如表2所示。表2时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0～29752529～3075～5925～4130～5559412.2.2.3含量测定标准曲线绘制：精密称取朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、宝藿苷i对照品适量，分别加甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中，分别吸取200μl，置于1ml容量瓶中，混合均匀，得含朝藿定a、b、c、淫羊藿苷、宝藿苷ⅰ分别为0.59、0.54、0.50、0.50和0.52mg/ml的混合对照品溶液，稀释成系列混合对照品溶液，将上述系列对照品溶液各注入液相色谱仪20μl，根据峰面积分别绘制标准曲线。样品测定：取样品溶液10μl注入高效液相色谱仪，根据各标准曲线测定黄酮含量。2.2.3总黄酮含量测定按2015年版《中国药典》淫羊藿项下总黄酮的测定方法测定。2.2.3.1样品制备同“2.2.2.1”。2.2.3.2对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品2.50mg，加甲醇制成每ml含0.500mg的溶液，得对照品溶液。分别取对照品原液0、100、200、300、400、500μl，置于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得标准品系列溶液。2.2.3.3标准曲线的绘制以空白溶剂较零，在270nm波长下测定系列对照品溶液的吸光值a，测定三次，取平均值，以淫羊藿苷对照品的浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。2.2.3.4含量测定精密吸取供试品溶液50μl，置于5ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀。测定吸光值a，平行三份，根据吸光值a计算总黄酮含量。2.2.4醇浸出物含量测定按2015年版《中国药典》四部醇浸出物项下测定方法测定。2.2.5抗氧化活性测定2.2.5.1提取方法同“2.2.2.1”。2.2.5.2测定方法dpph自由基清除实验20mgdpph加无水乙醇定容于250ml容量瓶中，即为dpph储备液。样品液稀释10倍后取1ml；加入1mldpph储备液。混匀后，避光30min后，在517nm处测定吸光度a样品，用无水乙醇代替样品溶液测得空白组吸光值a空白。清除率＝(a空白-a样品)/a空白×100％羟自由基清除实验称取40mg结晶紫加水定容于250ml容量瓶，得0.4mm结晶紫。称取na2hpo4·12h2o晶体35.81g溶解，用500ml容量瓶定容，得0.2mol/l的na2hpo4溶液。称取nah2po4·2h2o晶体3.12g溶解，用100ml容量瓶定容，得0.2mol/l的nah2po4溶液。取前者81ml，再取后者19ml混合，即得。量取20ml30％h2o2加水定容于100ml容量瓶，得6％h2o2。称取0.112gfeso4·7h2o加水定容于100ml，得2mmfeso4。向离心管中分别加入0.4mm结晶紫1.0ml，pbs(ph7.4)2.6ml，2mmfeso40.1ml，分别加入样品0.2ml，最后加入6％h2o20.1ml，水浴37℃加热30min，在584nm处测定吸光度a。清除率＝(a1-a2)/(a3-a2)×100％a1：1.0ml结晶紫+2.6mlpbs+0.1mlfeso4+0.2ml样品储备液+0.1mlh2o2；a2：1.0ml结晶紫+2.6mlpbs+0.1mlfeso4+0.2ml蒸馏水+0.1mlh2o2；a3：1.0ml结晶紫+2.6mlpbs+0.1mlfeso4+0.3ml蒸馏水。超氧阴离子自由基清除实验称取12.11gtris-base溶于1000ml容量瓶，得0.1mtris-base液。量取36％-38％hcl4.29ml定容于500ml容量瓶，得0.1mhcl。量取tris液500ml+hcl液229ml+水定容于1000ml容量瓶，得tris-hcl(50mm)缓冲液。精密量取10ml0.1mhcl加水定容于100ml容量瓶，得10mmhcl。称取0.1261g邻苯三酚用10mmhci定容于100ml容量瓶，得10mm邻苯三酚溶液。量取ph值为8.2的tris-hcl缓冲液3.3ml，置于试管中，分别加入0.6ml样品储备液，再加入10mmol/l邻苯三酚0.1ml，摇匀后，静置30min，在320nm处测定吸光度。清除率＝[1－(a1－a2)/a3]×100％a1：3.3mltris－hcl+0.1ml邻苯三酚+0.6ml样品储备液；a2：3.3mltris－hcl+0.1ml蒸馏水+0.6ml样品储备液；a3：3.3mltris－hcl+0.1ml邻苯三酚+0.6ml蒸馏水。2.3结果2.3.1含水量结果药典规定淫羊藿的水分不得高于12％，根据表3显示的水分测定结果，上述淫羊藿样品中水分均低于药典规定。表3样品编号含水量(％)样品编号含水量(％)s14.00s12(传统)6.14s24.16s135.15s34.22s145.72s44.41s155.59s54.17s165.54s64.53s174.98s74.57s185.00s84.25s194.81s94.43s204.67s104.43s214.70s114.11s224.242.3.25种黄酮含量结果《中国药典》2015年版一部淫羊藿项下规定炙淫羊藿饮片的淫羊藿苷和宝藿苷ⅰ的含量和不得少于0.60％，50℃烘至含水量为药材原始含水量不同百分比(0％～100％)时所得11个样品中淫羊藿苷和宝藿苷ⅰ的含量在0.98-1.32％之间，均满足药典要求。除s8(50℃烘至七成干，切丝，加羊油炒干)外，其他样品的5种主要黄酮含量均低于传统样品，结果见表4。实验发现50℃下干燥至七成干(样品s8)的时，5种主要黄酮成分含量和最高，且高于传统工艺。因此又在不同温度(30～120℃)下分别烘至含水量为药材原始含水量的30％时(七成干)，取出切丝，加20％的羊油炒干，制得10个样品(s13-s22)。测得s13-s22样品中淫羊藿苷和宝藿苷ⅰ的含量在1.14-1.51％，均满足药典要求，含量结果见表5，随着烘制温度的增加，5种黄酮含量和呈先增加后减低的趋势，70℃烘制开始(s17)，5种黄酮含量和均高于传统工艺所得样品(s12)，100℃烘制所得样品(s20)中5种黄酮含量和最高。表4表52.3.3总黄酮含量结果50℃下将鲜心叶淫羊藿烘至不同含水量，切丝，加羊油炒干所得样品(s1-s11)中总黄酮含量均低于传统工艺所得样品(s12)，结果见表6。随着烘制温度的增加，总黄酮含量呈先增加后降低的趋势，从70℃(s17)开始，总黄酮含量高于传统工艺所得样品(s12)，100℃所得样品中(s20)总黄酮达到了最高，与5种主要黄酮含量结果具有一致性。结果见表7。表6样品编号含量(％)样品编号含量(％)s16.01s76.58s26.27s86.76s36.36s96.49s46.40s106.82s56.59s115.84s66.23s12(传统)7.05表7样品编号含量(％)样品编号含量(％)s12(传统)7.05s187.14s136.46s197.25s146.74s207.28s156.37s217.15s166.95s226.63s177.042.3.4醇浸出物含量结果22个工艺制得的样品中醇浸出物含量差异不大，说明不同制备工艺对醇浸出物的影响不大，结果见表8。表82.3.5抗氧化活性结果鲜心叶淫羊藿在50℃下烘制不同含水量切丝后，加羊油炒干所得样品(s1-s11)中总黄酮含量均低于传统工艺所得样品(s12)，因此，对其抗氧化活性不再进行研究。对传统工艺及不同温度烘制七成干样品(s12-s22)的醇提取物进行体外抗氧化活性研究，发现dpph自由基和超氧阴离子自由基清除活性与5种主要黄酮含量和以及总黄酮含量成正相关，当5种黄酮含量和以及总黄酮含量达到最大时，dpph自由基和超氧阴离子自由基清除率也达到了最大(分别为37.61％和60.21％)，羟自由基清除活性与5种主要黄酮含量无明显的关联性。三种自由基清除活性结果见表9。表9样品编号dpph自由基清除率％羟自由基清除率％超氧阴离子自由基清除率％s12(传统)35.8846.5354.61s1332.3741.4055.09s1432.4944.0956.37s1532.9638.5855.61s1631.6339.4655.08s1735.4740.1256.24s1836.3140.2158.59s1937.3742.9558.48s2037.6134.9760.21s2136.5942.9758.53s2236.4738.7454.423小结本发明实验对鲜淫羊藿产地加工炮制一体化工艺进行了研究，设计了21个新工艺和一个传统工艺，以5种黄酮含量和(朝藿定a-c，淫羊藿苷、宝藿苷ⅰ)、醇浸出物含量和总黄酮含量以及抗氧化活性为指标，优选最佳的产地加工炮制一体化工艺。表10显示为本发明工艺与传统工艺的操作比较。表10淫羊藿在不同含水量下切丝，加20％的羊油炒干所得样品的淫羊藿苷和宝藿苷ⅰ的含量在0.98-1.33％，均满足药典要求，除s8(50℃烘制七成干，切丝，加羊油炒干)，5种主要黄酮含量和均低于传统工艺所得样品(s12)。将鲜淫羊藿叶在不同温度下烘制七成干，切丝，加20％的羊油炒干制得10个样品(s13-s22)，测定其黄酮类成分含量，发现随着温度的增加，5种主要黄酮和总黄酮含量均呈先增加后降低的趋势，其中s20(100℃烘制七成干，切丝，加羊油炒干)中5种主要黄酮和总黄酮含量均最高。22个工艺制得的样品中醇浸出物含量差异不大，说明不同制备工艺对醇浸出物的影响不大。鲜心叶淫羊藿在50℃下烘制不同含水量切丝后，加羊油炒干所得样品(s1-s11)中总黄酮含量均低于传统工艺所得样品(s12)，对传统工艺及不同温度烘制七成干样品(s12-s22)的醇提取物进行体外抗氧化活性研究，发现dpph自由基和超氧阴离子自由基清除活性与5种主要黄酮含量和以及总黄酮含量成正相关，当5种黄酮含量和以及总黄酮含量达到最大时，dpph自由基和超氧阴离子自由基清除率也达到了最大，羟自由基清除活性与5种主要黄酮含量无明显的关联性。最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12