一种用于化妆品中保湿因子的提取方法与流程

[0001]
本发明涉及化妆品制备技术领域，特别地，涉及一种用于化妆品中保湿因子的提取方法。


背景技术：

[0002]
由于现在环境污染严重，空气中的灰尘等直接与面部肌肤接触，很容易吸附在肌肤上堵塞毛孔，电脑辐射源影响到人体内分泌系统的紊乱，从而使皮肤代谢不规律。影响皮肤健康与否的关键因素是皮肤的含水量。通常表皮和真皮的含水量大约为75％；角质层的含水量为10～20％的皮肤会呈现出健康的状态，一般不低于10％。角质层的含水量若低于10％，则会出现皮肤干燥的问题，例如皱纹、脱皮、晦暗等。
[0003]
近年来化妆品行业发展迅速，同时人们对美容产品要求也不断提高，各种功能性、剂型及独特外观的化妆产品吸引消费的眼球。化妆品是以涂抹、喷洒或其他类似的方法，施于人体表面任何部位(例如皮肤、指甲、口唇、口腔等)，以达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰等目的的产品。不管是什么类型的化妆品，保湿都是最根本、最关键的要求。
[0004]
随着美容化妆品行业的发展，天然提取类产品由于使用安全、作用温和、效果明显等优点而得到欢迎。一般是通过相应加工得到含有有效成分的植物提取物，并添加到化妆品中。目前，市面上的产品，为了增加此类化妆品的保湿功能，添加大量吸湿剂如透明质酸类、生物发酵多糖类等，大部分分子量过大，造成肤感油腻不清爽，保湿效果欠佳。


技术实现要素：

[0005]
本发明目的在于提供一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，以解决现有化妆品保湿效果欠佳的技术问题。
[0006]
为实现上述目的，本发明提供了一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：
[0007]
(1)先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；
[0008]
(2)然后将冬虫夏草接种至发酵培养基中，发酵，得到发酵物ⅰ；
[0009]
(3)接着向发酵物ⅰ中接种透明颤菌，发酵，得到发酵物ⅱ；
[0010]
(4)再向发酵物ⅱ中加入中性蛋白酶，酶解处理，然后加入三氟乙酸，水解反应并灭酶、回收三氟乙酸，最后采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0011]
优选的，步骤(1)中，脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每2～3小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为5～8℃。
[0012]
优选的，步骤(1)中，以重量份计，脱脂的具体方法为：将1份沥干的脱盐水母放入4～6份1.5～2.5mol/l氢氧化钾溶液中，0.6～0.8mpa和5～8℃条件下处理40～50分钟，取出
后用双蒸水冲洗3～5次即可。
[0013]
优选的，步骤(1)中，水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：1～2：4～6。
[0014]
优选的，步骤(1)中，将娑罗子、荔枝叶粉碎至100～200目。
[0015]
优选的，步骤(1)中，高压均质的工艺条件为：50～70mpa高压均质2～3次。
[0016]
优选的，步骤(1)中，灭菌的工艺条件为：120～125℃灭菌25～30分钟。
[0017]
优选的，步骤(2)的具体方法为：先将冬虫夏草以3～5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以5～7％体积接种量接种至发酵培养基中，14～16℃发酵2～3天，即得发酵物ⅰ。
[0018]
进一步优选的，以重量份计，所述种子培养基的组成如下：土豆粒200～220份，麦麸50～55份，葡萄糖15～20份，蛋白胨4～6份，磷酸二氢钾2～4份，硫酸镁2～3份，维生素b10.01～0.02份，琼脂15～25份，青稞粉5～8份，水900～1100份，自然ph。
[0019]
优选的，步骤(3)的具体方法为：先将透明颤菌以3～5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以3～5％体积接种量接种至发酵物ⅰ中，31～32℃发酵2～3天，即得发酵物ⅱ。
[0020]
进一步优选的，所述种子培养基为水溶液，包含：乳糖20～40g/l，蛋白胨4～6g/l，硫酸铵0.1～0.5g/l，磷酸氢二钾0.3～0.5g/l，磷酸二氢钾0.1～0.2g/l，硫酸镁16～20g/l，硫酸锰3～7g/l，硫酸亚铁0.1～0.3g/l，氯化钙0.1～0.3g/l，过氧化氢酶8000～10000u/l。
[0021]
优选的，步骤(4)中，发酵物ⅱ、中性蛋白酶、三氟乙酸的质量比为1：0.02～0.03：0.01～0.02。
[0022]
优选的，步骤(4)中，酶解反应的工艺条件为35～45℃搅拌反应2～3小时；水解反应的工艺条件为：90～100℃搅拌反应15～18分钟。
[0023]
优选的，步骤(4)中，三氟乙酸的回收方法为50～60℃真空回收。
[0024]
优选的，步骤(4)中，超临界co2萃取法的工艺条件为：温度30～35℃、压力10～12mpa、分离压力9～11mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0025]
本发明还提供了上述提取方法得到的一种用于化妆品中的保湿因子。
[0026]
本发明还提供了上述保湿因子在化妆品中的应用。
[0027]
本发明具有以下有益效果：
[0028]
本发明先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；然后将冬虫夏草接种至发酵培养基中，发酵，得到发酵物ⅰ；接着向发酵物ⅰ中接种透明颤菌，发酵，得到发酵物ⅱ；再向发酵物ⅱ中加入中性蛋白酶，酶解处理，然后加入三氟乙酸，水解反应并灭酶、回收三氟乙酸，最后采用超临界co2萃取法提取，得到一种保湿因子，可以添加至化妆品中，对皮肤无刺激，具有良好的保湿效果。
[0029]
其中，水母含有丰富的胶原蛋白，娑罗子、荔枝叶中含有丰富的多糖，胶原蛋白和多糖都是天然保湿因子，但是分子量较大，皮肤无法吸收。申请人将水母、娑罗子和荔枝叶混合制成了发酵培养基，然后接种冬虫夏草，发酵形成冬虫夏草菌丝体，一方面，发酵培养基中含有的蛋白质促进冬虫夏草生长，利于虫草多糖的合成，另一方面，冬虫夏草菌丝体中
含有皮肤容易吸收的氨基酸、多糖等，增强保湿效果。同时，大分子物质的降解也有利于减轻对皮肤的刺激作用。
[0030]
向发酵物ⅰ中接种透明颤菌，透明颤菌是一种专性好氧的革兰氏阴性丝状菌，发酵生成血红蛋白，具有运输氧的功能且氧解离速率常数很大。血红蛋白可以与胶原蛋白、多糖等形成氢键作用，血红蛋白在向皮肤运输氧的同时促进了胶原蛋白、多糖对皮肤的渗透作用，进而发挥保湿效果。另外，透明颤菌发酵也会形成胞外多糖，进一步增强对皮肤的保湿效果。
[0031]
发酵物ⅱ利用中性蛋白酶酶解处理，使得胶原蛋白进一步降解，加入三氟乙酸水解，使得多糖进一步降解，从而获得小分子、能被皮肤吸收的氨基酸、多糖等营养成分，从而增强保湿效果。最后还采用超临界co2萃取法提取，高效提取其中的营养成分，强化保湿效果。
[0032]
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。
具体实施方式
[0033]
以下对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
[0034]
本发明涉及的冬虫夏草，保藏号为accc50560，购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；透明颤菌为atcc 15551。
[0035]
实施例1：
[0036]
一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：
[0037]
(1)先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；
[0038]
(2)然后将冬虫夏草接种至发酵培养基中，发酵，得到发酵物ⅰ；
[0039]
(3)接着向发酵物ⅰ中接种透明颤菌，发酵，得到发酵物ⅱ；
[0040]
(4)再向发酵物ⅱ中加入中性蛋白酶，酶解处理，然后加入三氟乙酸，水解反应并灭酶、回收三氟乙酸，最后采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0041]
步骤(1)中，脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每2小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为8℃。
[0042]
步骤(1)中，脱脂的具体方法为：将1kg沥干的脱盐水母放入4kg 2.5mol/l氢氧化钾溶液中，0.6mpa和8℃条件下处理40分钟，取出后用双蒸水冲洗5次即可。
[0043]
步骤(1)中，水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：1：6。
[0044]
步骤(1)中，将娑罗子、荔枝叶粉碎至100目。
[0045]
步骤(1)中，高压均质的工艺条件为：70mpa高压均质2次。
[0046]
步骤(1)中，灭菌的工艺条件为：125℃灭菌25分钟。
[0047]
步骤(2)的具体方法为：先将冬虫夏草以5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以5％体积接种量接种至发酵培养基中，16℃发酵2天，即得
发酵物ⅰ。
[0048]
所述种子培养基的组成如下：土豆粒220g，麦麸50g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾4g，硫酸镁2g，维生素b10.02g，琼脂15g，青稞粉8g，水900g，自然ph。
[0049]
步骤(3)的具体方法为：先将透明颤菌以5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以3％体积接种量接种至发酵物ⅰ中，32℃发酵2天，即得发酵物ⅱ。
[0050]
所述种子培养基为水溶液，包含：乳糖40g/l，蛋白胨4g/l，硫酸铵0.5g/l，磷酸氢二钾0.3g/l，磷酸二氢钾0.2g/l，硫酸镁16g/l，硫酸锰7g/l，硫酸亚铁0.1g/l，氯化钙0.3g/l，过氧化氢酶8000u/l。
[0051]
步骤(4)中，发酵物ⅱ、中性蛋白酶、三氟乙酸的质量比为1：0.03：0.01。
[0052]
步骤(4)中，酶解反应的工艺条件为45℃搅拌反应2小时；水解反应的工艺条件为：100℃搅拌反应15分钟。
[0053]
步骤(4)中，三氟乙酸的回收方法为60℃真空回收。
[0054]
步骤(4)中，超临界co2萃取法的工艺条件为：温度30℃、压力12mpa、分离压力9mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0055]
实施例2：
[0056]
一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：
[0057]
(1)先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；
[0058]
(2)然后将冬虫夏草接种至发酵培养基中，发酵，得到发酵物ⅰ；
[0059]
(3)接着向发酵物ⅰ中接种透明颤菌，发酵，得到发酵物ⅱ；
[0060]
(4)再向发酵物ⅱ中加入中性蛋白酶，酶解处理，然后加入三氟乙酸，水解反应并灭酶、回收三氟乙酸，最后采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0061]
步骤(1)中，脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每3小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为5℃。
[0062]
步骤(1)中，脱脂的具体方法为：将1kg沥干的脱盐水母放入6kg 1.5mol/l氢氧化钾溶液中，0.8mpa和5℃条件下处理50分钟，取出后用双蒸水冲洗3次即可。
[0063]
步骤(1)中，水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：2：4。
[0064]
步骤(1)中，将娑罗子、荔枝叶粉碎至200目。
[0065]
步骤(1)中，高压均质的工艺条件为：50mpa高压均质3次。
[0066]
步骤(1)中，灭菌的工艺条件为：120℃灭菌30分钟。
[0067]
步骤(2)的具体方法为：先将冬虫夏草以3％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以7％体积接种量接种至发酵培养基中，14℃发酵3天，即得发酵物ⅰ。
[0068]
所述种子培养基的组成如下：土豆粒200g，麦麸55g，葡萄糖15g，蛋白胨6g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁3g，维生素b10.01g，琼脂25g，青稞粉5g，水1100g，自然ph。
[0069]
步骤(3)的具体方法为：先将透明颤菌以3％体积接种量接种至种子培养基中，培
养，得到种子液；然后将种子液以5％体积接种量接种至发酵物ⅰ中，31℃发酵3天，即得发酵物ⅱ。
[0070]
所述种子培养基为水溶液，包含：乳糖20g/l，蛋白胨6g/l，硫酸铵0.1g/l，磷酸氢二钾0.5g/l，磷酸二氢钾0.1g/l，硫酸镁20g/l，硫酸锰3g/l，硫酸亚铁0.3g/l，氯化钙0.1g/l，过氧化氢酶10000u/l。
[0071]
步骤(4)中，发酵物ⅱ、中性蛋白酶、三氟乙酸的质量比为1：0.02：0.02。
[0072]
步骤(4)中，酶解反应的工艺条件为35℃搅拌反应3小时；水解反应的工艺条件为：90℃搅拌反应18分钟。
[0073]
步骤(4)中，三氟乙酸的回收方法为50℃真空回收。
[0074]
步骤(4)中，超临界co2萃取法的工艺条件为：温度35℃、压力10mpa、分离压力11mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0075]
实施例3：
[0076]
一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：
[0077]
(1)先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；
[0078]
(2)然后将冬虫夏草接种至发酵培养基中，发酵，得到发酵物ⅰ；
[0079]
(3)接着向发酵物ⅰ中接种透明颤菌，发酵，得到发酵物ⅱ；
[0080]
(4)再向发酵物ⅱ中加入中性蛋白酶，酶解处理，然后加入三氟乙酸，水解反应并灭酶、回收三氟乙酸，最后采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0081]
步骤(1)中，脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每2小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为6℃。
[0082]
步骤(1)中，脱脂的具体方法为：将1kg沥干的脱盐水母放入5kg 2mol/l氢氧化钾溶液中，0.7mpa和6℃条件下处理45分钟，取出后用双蒸水冲洗4次即可。
[0083]
步骤(1)中，水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：1.5：5。
[0084]
步骤(1)中，将娑罗子、荔枝叶粉碎至200目。
[0085]
步骤(1)中，高压均质的工艺条件为：60mpa高压均质3次。
[0086]
步骤(1)中，灭菌的工艺条件为：122℃灭菌28分钟。
[0087]
步骤(2)的具体方法为：先将冬虫夏草以4％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以6％体积接种量接种至发酵培养基中，15℃发酵3天，即得发酵物ⅰ。
[0088]
所述种子培养基的组成如下：土豆粒210g，麦麸52g，葡萄糖18g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁2.5g，维生素b10.015g，琼脂20g，青稞粉7g，水1000g，自然ph。
[0089]
步骤(3)的具体方法为：先将透明颤菌以4％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以4％体积接种量接种至发酵物ⅰ中，32℃发酵2天，即得发酵物ⅱ。
[0090]
所述种子培养基为水溶液，包含：乳糖30g/l，蛋白胨5g/l，硫酸铵0.3g/l，磷酸氢二钾0.4g/l，磷酸二氢钾0.15g/l，硫酸镁18g/l，硫酸锰5g/l，硫酸亚铁0.2g/l，氯化钙
0.2g/l，过氧化氢酶9000u/l。
[0091]
步骤(4)中，发酵物ⅱ、中性蛋白酶、三氟乙酸的质量比为1：0.025：0.015。
[0092]
步骤(4)中，酶解反应的工艺条件为40℃搅拌反应2小时；水解反应的工艺条件为：95℃搅拌反应17分钟。
[0093]
步骤(4)中，三氟乙酸的回收方法为55℃真空回收。
[0094]
步骤(4)中，超临界co2萃取法的工艺条件为：温度33℃、压力11mpa、分离压力10mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0095]
对比例1
[0096]
一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：
[0097]
(1)先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；
[0098]
(2)省略；
[0099]
(3)接着向发酵培养基中接种透明颤菌，发酵，得到发酵物ⅱ；
[0100]
(4)再向发酵物ⅱ中加入中性蛋白酶，酶解处理，然后加入三氟乙酸，水解反应并灭酶、回收三氟乙酸，最后采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0101]
步骤(1)中，脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每2小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为8℃。
[0102]
步骤(1)中，脱脂的具体方法为：将1kg沥干的脱盐水母放入4kg 2.5mol/l氢氧化钾溶液中，0.6mpa和8℃条件下处理40分钟，取出后用双蒸水冲洗5次即可。
[0103]
步骤(1)中，水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：1：6。
[0104]
步骤(1)中，将娑罗子、荔枝叶粉碎至100目。
[0105]
步骤(1)中，高压均质的工艺条件为：70mpa高压均质2次。
[0106]
步骤(1)中，灭菌的工艺条件为：125℃灭菌25分钟。
[0107]
步骤(3)的具体方法为：先将透明颤菌以5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以3％体积接种量接种至发酵培养基中，32℃发酵2天，即得发酵物ⅱ。
[0108]
所述种子培养基为水溶液，包含：乳糖40g/l，蛋白胨4g/l，硫酸铵0.5g/l，磷酸氢二钾0.3g/l，磷酸二氢钾0.2g/l，硫酸镁16g/l，硫酸锰7g/l，硫酸亚铁0.1g/l，氯化钙0.3g/l，过氧化氢酶8000u/l。
[0109]
步骤(4)中，发酵物ⅱ、中性蛋白酶、三氟乙酸的质量比为1：0.03：0.01。
[0110]
步骤(4)中，酶解反应的工艺条件为45℃搅拌反应2小时；水解反应的工艺条件为：100℃搅拌反应15分钟。
[0111]
步骤(4)中，三氟乙酸的回收方法为60℃真空回收。
[0112]
步骤(4)中，超临界co2萃取法的工艺条件为：温度30℃、压力12mpa、分离压力9mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0113]
对比例2
[0114]
一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：
[0115]
(1)先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；
[0116]
(2)然后将冬虫夏草接种至发酵培养基中，发酵，得到发酵物ⅰ；
[0117]
(3)省略；
[0118]
(4)再向发酵物ⅰ中加入中性蛋白酶，酶解处理，然后加入三氟乙酸，水解反应并灭酶、回收三氟乙酸，最后采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0119]
步骤(1)中，脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每2小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为8℃。
[0120]
步骤(1)中，脱脂的具体方法为：将1kg沥干的脱盐水母放入4kg 2.5mol/l氢氧化钾溶液中，0.6mpa和8℃条件下处理40分钟，取出后用双蒸水冲洗5次即可。
[0121]
步骤(1)中，水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：1：6。
[0122]
步骤(1)中，将娑罗子、荔枝叶粉碎至100目。
[0123]
步骤(1)中，高压均质的工艺条件为：70mpa高压均质2次。
[0124]
步骤(1)中，灭菌的工艺条件为：125℃灭菌25分钟。
[0125]
步骤(2)的具体方法为：先将冬虫夏草以5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以5％体积接种量接种至发酵培养基中，16℃发酵2天，即得发酵物ⅰ。
[0126]
所述种子培养基的组成如下：土豆粒220g，麦麸50g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾4g，硫酸镁2g，维生素b10.02g，琼脂15g，青稞粉8g，水900g，自然ph。
[0127]
步骤(4)中，发酵物ⅰ、中性蛋白酶、三氟乙酸的质量比为1：0.03：0.01。
[0128]
步骤(4)中，酶解反应的工艺条件为45℃搅拌反应2小时；水解反应的工艺条件为：100℃搅拌反应15分钟。
[0129]
步骤(4)中，三氟乙酸的回收方法为60℃真空回收。
[0130]
步骤(4)中，超临界co2萃取法的工艺条件为：温度30℃、压力12mpa、分离压力9mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0131]
对比例3
[0132]
一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：
[0133]
(1)先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，灭菌，得到发酵培养基；
[0134]
(2)然后将冬虫夏草接种至发酵培养基中，发酵，得到发酵物ⅰ；
[0135]
(3)接着向发酵物ⅰ中接种透明颤菌，发酵，得到发酵物ⅱ；
[0136]
(4)再将发酵物ⅱ采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0137]
步骤(1)中，脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每2小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为8℃。
[0138]
步骤(1)中，脱脂的具体方法为：将1kg沥干的脱盐水母放入4kg 2.5mol/l氢氧化
钾溶液中，0.6mpa和8℃条件下处理40分钟，取出后用双蒸水冲洗5次即可。
[0139]
步骤(1)中，水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：1：6。
[0140]
步骤(1)中，将娑罗子、荔枝叶粉碎至100目。
[0141]
步骤(1)中，高压均质的工艺条件为：70mpa高压均质2次。
[0142]
步骤(1)中，灭菌的工艺条件为：125℃灭菌25分钟。
[0143]
步骤(2)的具体方法为：先将冬虫夏草以5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以5％体积接种量接种至发酵培养基中，16℃发酵2天，即得发酵物ⅰ。
[0144]
所述种子培养基的组成如下：土豆粒220g，麦麸50g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾4g，硫酸镁2g，维生素b10.02g，琼脂15g，青稞粉8g，水900g，自然ph。
[0145]
步骤(3)的具体方法为：先将透明颤菌以5％体积接种量接种至种子培养基中，培养，得到种子液；然后将种子液以3％体积接种量接种至发酵物ⅰ中，32℃发酵2天，即得发酵物ⅱ。
[0146]
所述种子培养基为水溶液，包含：乳糖40g/l，蛋白胨4g/l，硫酸铵0.5g/l，磷酸氢二钾0.3g/l，磷酸二氢钾0.2g/l，硫酸镁16g/l，硫酸锰7g/l，硫酸亚铁0.1g/l，氯化钙0.3g/l，过氧化氢酶8000u/l。
[0147]
步骤(4)中，超临界co2萃取法的工艺条件为：温度30℃、压力12mpa、分离压力9mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0148]
对比例4
[0149]
一种用于化妆品中保湿因子的提取方法，具体步骤如下：先将新鲜水母进行脱盐、脱脂处理，绞碎成水母浆，然后将娑罗子、荔枝叶粉碎后加入水母浆中，高压均质，最后采用超临界co2萃取法提取，得到所述的保湿因子。
[0150]
脱盐的具体方法为：先将新鲜水母用自来水清洗3次，将污垢、沙粒和水母排泄物清洗干净，然后将水母置于5倍体积的双蒸水中浸泡2天，每2小时换水一次，浸泡完毕后用agno3溶液检测浸泡液，检测水中氯离子含量，以无肉眼可见白色混浊为标准；其中，浸泡温度为8℃。
[0151]
脱脂的具体方法为：将1kg沥干的脱盐水母放入4kg 2.5mol/l氢氧化钾溶液中，0.6mpa和8℃条件下处理40分钟，取出后用双蒸水冲洗5次即可。
[0152]
水母浆、娑罗子、荔枝叶的质量比为10：1：6。
[0153]
将娑罗子、荔枝叶粉碎至100目。
[0154]
高压均质的工艺条件为：70mpa高压均质2次。
[0155]
超临界co2萃取法的工艺条件为：温度30℃、压力12mpa、分离压力9mpa、co2流量12l/h条件下进行超临界co2萃取，得到的萃取液即为保湿因子。
[0156]
试验例
[0157]
选择年龄25～40岁的70名志愿者进行皮肤刺激性试验，男女各半，随机分为7组，每组男女各半。利用iq ultimatetm来实施皮肤斑贴试验。向ultimatetm分别滴加25μl实施例1～3或对比例1～4所得保湿因子，并将贴剂剪成1cm
×
1cm来附着于皮肤。附着斑贴24小时，在去除贴剂1小时及去除贴剂24小时之后，由2名专家根据国际接触性皮炎研究组(international contact dermatitis research group：icdrg)的判定标准以皮肤刺激指
数观察皮肤刺激程度，结果见表1。皮肤刺激区分标准如下：
[0158]
皮肤刺激指数0.00-0.25，非刺激性；
[0159]
皮肤刺激指数0.26-1.00，弱刺激性；
[0160]
皮肤刺激指数1.01-2.50，中等刺激性；
[0161]
皮肤刺激指数2.51-4.00，强刺激性。
[0162]
表1.皮肤刺激性试验
[0163] 皮肤刺激指数(1小时后)皮肤刺激指数(24小时后)实施例10.000.00实施例20.000.00实施例30.000.00对比例10.870.53对比例20.820.50对比例31.221.03对比例43.022.92
[0164]
筛选70例皮肤健康、无皮肤病过敏史的志愿者，年龄25～40岁，男女各半，随机分为7组，每组男女各半，在25℃、80％rh的房间内，使用洗面奶清洁全脸，用清水将泡沫冲洗干净后用纸巾或干毛巾吸干多余水分。
[0165]
分别使用实施例1～3或对比例1～4所得保湿因子均匀涂抹在脸部皮肤表面，按摩至吸收，人均涂抹量为1g，利用水分测试仪分别测试涂抹前和涂抹后2小时、10小时的皮肤含水量(取平均值)，结果见表2。
[0166]
表2.保湿效果考察
[0167][0168][0169]
由表1和表2可知，实施例1～3所得保湿因子对皮肤无刺激，且具有良好的保湿效果。
[0170]
对比例1略去步骤(2)，对比例2略去步骤(3)，对比例3略去步骤(4)中的酶解、水解
步骤，对比例4略去发酵、酶解和水解等处理步骤，这些天然产物对皮肤具有一定的刺激性，而且保湿效果明显变差，说明适当降解、纯化处理有利于保湿效果的改善。
[0171]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。