一种光透明剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及生物成像技术领域，尤其涉及一种光透明剂及其制备方法。


背景技术：

2.近年来，随着光学设备的发展，光的医学应用发展的越来越成熟，并且还催生了一些新的学科，比如生物医学光子学。目前，光已经在疾病的临床诊断与治疗中广泛应用，包括医学成像(比如荧光成像、上转换成像、光热成像、光声成像等)，光治疗(包括光热治疗、光动力治疗、激光消融、紫外线疗法等)以及光遗传学。在医学成像方面，临床上使用近红外光激发吲哚菁绿(icg)荧光成像来实时观测其在人体内的清除情况，以此来判断病人的肝脏储备功能。光热治疗方面，在2019年，rastinehad等人报告了基于金-二氧化硅纳米粒子的肿瘤光热治疗的第一项临床试验，该疗法通过立体定向套管针/激光纤维治疗前列腺癌患者，15名接受治疗的患者中有13名在治疗后1年没有癌症迹象，表明肿瘤光热治疗的广阔临床前景。光动力治疗方面，早在1978年，光动力治疗已经被dougherty等人应用于临床肿瘤治疗，使用的光敏剂分子为血卟啉衍生物，其能够特异性地蓄积在肿瘤部位。之后越来越多的光敏剂分子，包括卟吩姆钠，替莫卟吩，氨基乙酰丙酸，甲基氨基酮戊酸盐，天门冬酰基二氢卟酚等等被发展出来并应用于临床肿瘤光动力治疗。光遗传学方面，2016年3月，retrosense公司正式开始实施视网膜色素变性的光遗传学临床试验rst-001项目，并成功完成了第一例病人的实验，这也是世界上首例光遗传学临床治疗。虽然光在医学中的临床应用已经发展了几十年，并且也获得了令人振奋的阶段性的临床效果，但是如果深入思考，可以发现目前报导的临床研究还只是停留在浅表的疾病诊断及治疗的层面上。几十年的临床研究足以继续深入到对深部疾病的诊断治疗层面，但并没有，这是因为光的组织穿透深度不足的缺点决定了当前光的临床研究只能停留在浅表疾病层面。
3.光的组织穿透深度有限主要是由组织实质与组织间质液之间折射指数的差异造成，折射指数的差异造成光在穿越组织的过程中被高度散射，从而导致随深度增加光能量迅速衰减。为了增强光的组织穿透深度，tuchin于1997年提出了组织光透明化技术的概念，其原理为通过将组织间质液置换为折射指数与组织实质折射指数相近的光透明剂，从而降低光在穿越组织过程中的散射程度，进而增强光的组织穿透深度。目前的光透明剂主要应用于离体组织的光透明化，例如2013年takeshi imai实验室发明的seedb方法用于离体大脑的荧光成像，其能够使大脑光透明化的同时而不会淬灭荧光蛋白和亲脂性的神经示踪剂；又如mason实验室在2013年报导了一种非溶剂的光透明剂clear
t
用于全胚的光透明化，从而荧光观察全胚的神经元状态。虽然这些报导的光透明剂的组织光透明化效果很好，但它们本身毒性比较大，因此它们只适用于离体组织的组织光透明化。生物相容性好的光透明剂用于活体组织的光透明化也有少许报导，比如朱等人使用聚乙二醇400(peg400)作为光透明剂，噻酮作为促渗剂，二者以体积比9:1的比例混合得到新型光透明剂用于活体大鼠的皮肤光透明化。但是这些光透明剂的折射指数与组织实质还是存在一定的差别，不能实现最优的组织光透明化，并且不同部位的组织的折射指数也略有不同，而这些报导的光
透明剂的折射指数不能按需任意调节来适用不同组织实质的光透明化，所以实现活体组织的光透明化仍然存在巨大的挑战。
4.况且现有光透明剂的光医学应用主要局限于光学成像或者光学荧光成像领域，并未见光透明剂在其他光医学领域如光治疗或者光遗传学等领域有所应用，而对于其他新兴的光学领域增强光穿透深度来提高其效果是非常有必要，且具有重大的临床意义与价值。


技术实现要素：

5.针对现有技术存在的不足，本发明提出了一种光透明剂及其制备方法。
6.作为本发明的第一目的，提供了一种光透明剂；相比于其他传统的光透明剂，该光透明剂可以很好地与具有不同折射指数的组织相匹配，实现不同组织的光透明化；并且，该光透明剂可以降低组织对光的散射程度，从而增强光的组织穿透深度。
7.具体而言，所述光透明剂包括第一组分和第二组分；其中：
8.所述第一组分由体积比为(0.2～5.0)：1的peg400和甘油组成；
9.所述第二组分为噻酮；
10.所述第一组分与所述第二组分的体积比为(1～50)：1。
11.本发明发现，按照上述配比制得的光透明剂不仅可以降低组织对光的散射程度、增强光的组织穿透深度，还具有良好的生物相容性，适用于临床使用。
12.为了进一步增强光的组织穿透深度，本发明对光透明剂的配比进行了优化，具体如下：
13.作为优选，所述第一组分由体积比为(0.5～2.5)：1的peg400和甘油组成。
14.作为优选，所述第一组分与所述第二组分的体积比为(2～30)：1。
15.作为优选，所述第一组分由体积比为(0.7～0.8)：1的peg400和甘油组成。
16.作为优选，所述第一组分与所述第二组分的体积比为(19～20)：1。
17.本发明还发现，由体积比为(0.7～0.8)：1的peg400和甘油组成的第一组分与噻酮，按照(19～20)：1的体积比复配得到的光透明剂的光透过深度显著优于现有技术。
18.作为本发明的第二目的，提供了上述光透明剂的制备方法，包括如下步骤：
19.(1)将甘油加入peg400中，搅拌均匀，得第一组分；
20.(2)将噻酮熔化后加入所述第一组分，搅拌均匀。
21.按照上述方法制得的光透明剂效果更佳。
22.作为优选，所述熔化在40～45℃下进行。
23.作为本发明的第三目的，提供了上述光透明剂的使用方法，其特征在于，包括：
24.将所述光透明剂涂抹于待透明化处理的部位，在35～40℃下处理时间为5min～2h。
25.作为优选，所述处理时间为20～30min。
26.作为优选，在透明化处理之后，还包括恢复光不透明处理的步骤：将生理盐水涂抹于被透明化处理的部位，处理时间为2～30min；优选为5～10min。
27.在上述技术方案中，将所述光透明剂涂抹于特定组织处，并孵育一定时间可以使得涂抹处组织处由光不透明变为光透明，有利于光的组织穿透深度增加，从而提高光医学的效果；另外，光医学需求结束后，将生理盐水涂抹于被透明化处理的部位，可重新使组织
恢复到光不透明状态，以此实现按需的组织光透明化处理。
28.作为本发明的第四目的，提供了上述光透明剂在光医学中的应用。
29.具体地，本发明提供的光透明剂可用于医学成像(包括荧光成像、上转换发光成像、光热成像、光声成像等)、光学治疗(包括近红外及可见光光热治疗、近红外/可见光/上转换光动力治疗、激光消融、紫外线疗法等)、光遗传学等；适用于光透明化的组织包括活体或者离体的脑组织、颅骨组织、皮肤组织、肌肉组织等，不同组织实质的折射指数均在1.3至1.6的范围内，该光透明剂的折射指数可以与不同组织实质的折射指数精确匹配，从而增强光在不同组织中的穿透深度。
30.本发明的有益效果：
31.本发明通过选择特定的组分在特定配比下复配得到的光透明剂可以降低组织对光的散射程度，相较于现有技术中的其他光透明剂，本发明的光透明剂的光组织穿透深度更大。
附图说明
32.图1为本发明中光热治疗猪皮覆盖肿瘤模拟的深部肿瘤的示意图。
33.图2为实施例1～4的光透明剂所致的猪皮组织光透明程度图片。
34.图3为实施例1、对比例1～2的光透明剂所致的猪皮组织光透明程度图片。
35.图4为实施例1的光透明剂处理猪皮30分钟前后的光学照片。
36.图5为实施例1的光透明剂处理不同时间的活体大鼠的腹部皮肤的光透明程度图片。
37.图6为实施例1的光透明剂处理14天后的大鼠与健康大鼠的主要脏器组织切片。
38.图7a为p(nipam-b-tba)聚合物的合成路线图；图7b为p(nipam-b-aa)聚合物的合成路线图；图7c为p(nipam-b-tba)与p(nipam-b-aa)聚合物的核磁氢谱；图7d为p(nipam-b-aa)的凝胶渗透色谱图。
39.图8a为银纳米立方体的透射电子显微镜图；图8b为银纳米立方体的紫外吸收光谱图。
40.图9a为金纳米笼(gncs)的透射电子显微镜图以及s元素的能量色散谱图；图9b为p(nipam-b-aa)修饰的金纳米笼(pgncs)的透射电子显微镜图以及s元素的能量色散谱图。
41.图10为gncs与pgncs的粒径和电位图。
42.图11为pgncs(20μg ml-1
)被实施例1的光透明剂处理30分钟的猪皮覆盖后，使用被808nm激光(1.0w cm-2
)照射5分钟的升温曲线。
43.图12为pgncs孵育的h22细胞被实施例1的光透明剂处理30分钟的猪皮覆盖后，被808nm激光(1.0w cm-2
)照射5分钟后的细胞存活率。
44.图13为通过尾静脉注射注射pgncs后，使用被实施例1的光透明剂处理30分钟的猪皮覆盖肿瘤，然后立马用808nm激光(1.0w cm-2
)照射15分钟的肿瘤部位实时温度曲线图。
45.图14为h22瘤体积随时间变化曲线。
具体实施方式
46.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
47.实施例1
48.本实施例提供一种光透明剂，包括第一组分和第二组分；其中：
49.所述第一组分由体积比为0.73：1的peg400和甘油组成；
50.所述第二组分为噻酮；
51.所述第一组分与所述第二组分的体积比为19：1。
52.本实施例同时提供上述光透明剂的制备方法，包括如下步骤：
53.(1)将1.1ml甘油加入0.8ml peg400中，通过磁力搅拌器充分搅拌混合均匀，得第一组分；
54.(2)将噻酮置于玻璃瓶中，油浴加热至45℃使噻酮熔化，然后使用移液枪吸取0.1ml噻酮液体加入到所述第一组分中，使用磁力搅拌器充分搅拌混合均匀，即得。
55.实施例2
56.本实施例提供一种光透明剂，与实施例1的区别仅在于：所述第一组分由体积比为3：2的peg400和甘油组成，所述第一组分与所述第二组分的体积比为10：1。
57.实施例3
58.本实施例提供一种光透明剂，与实施例1的区别仅在于：所述第一组分由体积比为11：8的peg400和甘油组成，所述第一组分与所述第二组分的体积比为19：1。
59.实施例4
60.本实施例提供一种光透明剂，与实施例1的区别仅在于：所述第一组分由体积比为2：3的peg400和甘油组成，所述第一组分与所述第二组分的体积比为10：1。
61.对比例1
62.本对比例提供一种光透明剂，与实施例1的区别仅在于：将peg400替换为丙二醇、将甘油替换为果糖。
63.对比例2
64.本对比例提供一种光透明剂，与实施例1的区别仅在于：将peg400替换为葡萄糖(5％)、将甘油替换为α-硫代甘油。
65.试验例1
66.取实施例1～4和对比例1～2的光透明剂，分别涂抹于3毫米厚的猪皮表面，然后将猪皮置于乘以生理盐水的培养皿中，将培养皿放于37℃恒温箱内孵育。30分钟后，取出猪皮并用无菌棉球擦除光透明剂，用紫外分光光度计测量808nm光对不同光透明剂处理后猪皮的透光率情况。如图2所示，猪皮被实施例1的光透明剂处理时，其对808nm的光的透过率最高，导致的光的衰减系数最小。从图3可以看出，相比于对比例1～2的光透明剂，实施例1的光透明剂赋予猪皮组织更强的光透过率和更小的光衰减系数。从图4可以看出，实施例1的光透明剂能够有效地光透明化猪皮组织。
67.上述结果表明本发明的光透明剂能够最大化程度地使离体猪皮组织光透明化。
68.随后，本试验例使用sd活体大鼠验证其是否可以实现活体组织的光透明化，具体如下：
69.将实施例1的光透明剂涂抹于褪去毛发的大鼠腹部皮肤，如图5所示，随着实施例1的光透明剂的处理时间延长，大鼠腹部皮肤对于808nm的透光率增加，并且光衰减系数降低。并且，当擦除实施例1的光透明剂后，转而用生理盐水涂抹光透明化的大鼠腹部皮肤，该
处皮肤的光透过率又随时间延长显著降低，这表明本发明的光透明剂具备赋予活体组织更优的光透明化特性，并且这一特性能够很容易地被生理盐水“擦除”，因此，可以按需将组织透明化与消除透明化，有利于临床医生操作以及增强病人的顺应性。图6为健康大鼠和经实施例1的光透明剂处理14天后的主要组织脏器的he切片，从中可以看出经实施例1的光透明剂处理14天后的大鼠脏器与健康大鼠脏器无异，并未见明显的病变，表明本发明的光透明剂具有良好的生物相容性，可以安全用于病人组织的光透明化。
70.试验例2
71.本试验例利用亲水性聚合物修饰的光热剂-金纳米笼(pgncs)对光透明剂增强光的组织穿透深度进行验证(如图1所示)，具体如下：
72.(1)亲水性嵌段聚合物p(nipam-b-aa)的制备：
73.采用原子转移自由基聚合法制备亲水性嵌段聚合物p(nipam-b-aa)，以n-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸叔丁酯(tba)为两个单体前物，双[2-(2
′-
溴代异丁酰氧基)乙基]二硫化物(biboeds)为引发剂，氯化亚铜(cucl)为催化剂，三(2-二甲氨基乙基)胺(me6tren)为催化剂配体，丙酮与水四比一的混合溶液为溶剂进行atrp反应，nipam:tba:biboeds:me6tren:cucl摩尔比＝100:100:0.5:1:1。称量1.13克nipam加入到100毫升schlenk反应容器管中，然后加入4毫升丙酮和1毫升超纯水，磁力搅拌器充分搅拌将nipam溶解，然后向其中加入50微升me6tren和16微升的biboeds溶液并混合均匀。之后用液氮冷冻8分钟、油泵抽真空8分钟、然后灌充超纯氩气10分钟，进行三个循环，然后加入10mg cucl，第四次进行液氮冷冻8分钟、真空泵抽真空20分钟、灌充超纯氩气20分钟，然后将schlenk反应容器管置于0℃低温恒温浴容器内反应24小时；之后加入2.6毫升第二个已经脱除氧气的单体tba，继续于0℃低温恒温浴容器内反应48小时，即得到粗制的聚合反应产物p(nipam-b-tba)(如图7a所示)。然后用100毫升丙酮稀释得到的p(nipam-b-tba)，过中性氧化铝柱去除催化剂，之后使用旋转蒸发仪旋蒸去除溶剂，加入超纯水将p(nipam-b-tba)沉淀出来，抽滤得到精制的p(nipam-b-tba)，然后使用冻干机将其冻干。冻干后采用三氟乙酸将丙烯酸叔丁酯(tba)水解成丙烯酸。称取1克干燥后的p(nipam-b-tba)置于250毫升圆底烧瓶中，加入20毫升二氯甲烷溶解，然后加入2毫升三氟乙酸在30℃油浴锅中搅拌进行水解。24小时后，将水解产物进行旋蒸除去溶剂和三氟乙酸，得到粗制的p(nipam-b-aa)，然后使用无水乙醚沉淀p(nipam-b-aa)，离心得到沉淀产物p(nipam-b-aa)(如图7b所示)，将其置于烘箱内50℃烘干。将得到的产物进行核磁氢谱分析(如图7c所示)和凝胶渗透色谱测定(如图7d所示)，核磁结果通过以n-异丙基丙烯酰胺(nipam)次甲基氢积分面积设为1，积分n-异丙基丙烯酰胺(nipam)中异丙基上的氢和丙烯酸叔丁酯(tba)中叔丁基上的氢，可以看出n-异丙基丙烯酰胺(nipam)与丙烯酸叔丁酯(tba)的摩尔比为1:1，与理论相符。gpc测得其分子量，所得结果与理论分子量相符，并且pdi为1.13，表明分子量分布较为均一。
[0074]
(2)金纳米笼(gncs)的制备主要分为两步：第一步为通过醇还原法制备银纳米立方体，第二步为以银纳米立方体为模板，通过氯金酸与银纳米立方体的电化学置换法合成gncs。
[0075]
银纳米立方体的具体制备方法如下：采用乙二醇(eg)作溶剂，将50毫升乙二醇(eg)置于250毫升圆底烧瓶中并油浴加热至150℃，10分钟后，将0.6毫升硫氢化钠的eg溶液(浓度为3.0毫摩尔每升)，12.5毫升pvp的eg溶液(20毫克每毫升)，以及5毫升盐酸的eg溶液
(3.0毫摩尔每升)加入到上述体系，在磁力搅拌下预热10分钟。之后加入4.0毫升的三氟乙酸的eg溶液(282毫摩尔每升)，继续反应45分钟即得到粗制的银纳米立方体。向粗制的银纳米立方体的eg溶液中加入其2倍体积量的丙酮，超声震荡5分钟，然后使用离心机进行离心(10000转每分钟*10分钟)，去除上清，加入40毫升超纯水，超声分散5分钟后继续离心(10000转每分钟*10分钟)两次即得到纯化的银纳米立方体。将纯化的银纳米立方体用5毫升超纯水超声分散，并使用原子吸收色谱仪测量其浓度，置于4℃冰箱中保存备用。通过透射电子显微镜(tem)与紫外吸收光谱仪对得到的银纳米立方体进行表征，图8a显示制备得到银纳米立方体为正方体形状，尺寸大约为40nm左右。图8b显示所得银纳米立方体的最大吸收峰值为460nm，证明银纳米立方体形貌均一。
[0076]
gncs的具体制备方法如下：将10毫升银纳米立方体体(6.7毫摩尔每升)加入到盛有90毫升超纯水的250毫升圆底烧瓶中，向其中加入150毫克pvp，并充分搅拌使pvp溶解。然后将该体系油浴加热至100℃，预热10分钟后，使用微量注射泵以42毫升每小时的速度将氯金酸逐滴滴入上述体系中，以此开始电化学置换法制备金纳米笼。期间使用分光光度计监测所得gncs的最大吸收峰位置，当最大吸收峰位于808纳米处时停止加入氯金酸。继续反应5分钟后，得到粗制的金纳米笼。将粗制的金纳米笼使用氨水清洗一次，无水乙醇和超纯水各清洗2次，然后离心(10000转每分钟*10分钟)得到纯化的gncs。将纯化后的gncs用超纯水超声分散均匀，并使用原子吸收色谱仪测量其浓度，置于4℃冰箱中保存备用。通过图9a的tem图可以看出制备得到的gncs粒径约为50nm，并且可以看出所有的gncs具有空腔。其水合粒径约为90nm，zeta电位约为-15mv。这些结果表明gncs已被成功合成出来。
[0077]
(3)制备p(nipam-b-aa)亲水性聚合物修饰的gncs，即pgncs，具体步骤如下：
[0078]
称取5毫克p(nipam-b-aa)溶于5毫升超纯水中，并使用1.0m的氢氧化钠水溶液调节ph值到8.0，然后将配制好的p(nipam-b-aa)逐滴滴入到10毫升金纳米笼水溶液(0.2mg/ml)中，磁力搅拌反应3天，然后使用离心机离心(15000转每分钟
×
15分钟)弃除上清后，重新用超纯水离心清洗两遍即得到pgncs，将得到的pgncs分散于2毫升超纯水中并置于4℃冰箱中备用。由图9b的tem图片可以看出有一层4.3nm厚的p(nipam-b-aa)通过金-硫键锚定在gncs的表面，即得到的pgncs。由于带有负电性的p(nipam-b-aa)锚定于gncs表面，所以pgncs的水合粒径相较于gncs增加到了130nm左右，zeta电位降低到了-20mv左右(如图10所示)。
[0079]
(4)取1.0毫升pgncs水溶液(20μg ml
–1)置于四通比色皿中，然后在比色皿上方覆盖未被实施例1额光透明剂处理的3毫米厚的猪皮、以及被实施例1的光透明剂处理30分钟后的3毫米厚的猪皮，之后使用808nm激光(1.0w cm-2
)照射5分钟，每个30秒使用近红外热成像仪记录一次pgncs水溶液的实时温度。图11显示覆盖猪皮的pgncs水溶液在808nm激光照射下升温效果不明显，在5分钟时间内温度只升高了2℃，而当覆盖有实施例1的光透明剂处理后的猪皮时，pgncs水溶液在808nm激光照射下升温效果显著增强，5分钟内温度升高了12.1℃，这些结果表明本发明的光透明剂显著增强光的组织穿透深度，从而造成更高的光热效果。
[0080]
试验例3
[0081]
光热能够直接杀伤肿瘤细胞，本试验例选用h22小鼠肝癌细胞作为模型进行验证，具体如下：
[0082]
首先将不同浓度的pgncs的rpmi 1640培养基溶液与h22细胞共孵育，然后在细胞培养皿上方覆盖3毫米厚猪皮、以及实施例1的光透明剂处理30分钟后的3毫米厚的猪皮，之后马上施加808nm激光(1.0w cm-2
)进行照射5分钟，继续培养24小时，然后使用cck-8方法检测细胞活力。如图12所示，当细胞与pgncs孵育不施加光照时，pgncs几乎没表现出任何细胞毒性，但是当施加光照时，pgncs表现出明显的细胞毒性，并且pgncs的半数抑制浓度(ic50)为4毫克每升，当施加光照并且细胞上方覆盖猪皮时，pgncs对h22的细胞毒性又几乎消失，这是由于808nm激光在穿过猪皮时大部分光都被吸收或散射掉，能量损失严重，到达pgncs处的光能量不足以产生足够高的热量杀伤h22细胞。但当猪皮被实施例1的光透明剂处理30分钟后，pgncs对h22细胞的毒性又重新恢复，pgncs的半数抑制浓度(ic50)为8.7毫克每升左右，略小于没有猪皮覆盖的pgncs+光的细胞毒性。结果证明，实施例1的光透明能够显著增强光的猪皮组织穿透深度，从而显著增强pgncs的肿瘤细胞光热杀伤能力。
[0083]
试验例4
[0084]
取6周龄balb/c雄性小鼠25只，于小鼠右后腿皮下注射100ul h22肿瘤细胞(肿瘤细胞密度为2000万细胞/ml)，待肿瘤长至大约300mm3后，随机分成5组，每组5只。采用尾静脉注射的方式给第一组荷瘤小鼠注射100ul的pbs，给第2-5组荷瘤小鼠尾静脉注射100ul的pgncs溶液(注射剂量为11.1mg kg-1
)。注射后，第1组与3组荷瘤小鼠的肿瘤直接808nm激光(1w cm-2
)照射肿瘤15分钟；第4组荷瘤小鼠的肿瘤使用3毫米厚的猪皮覆盖，然后用808nm激光(1w cm-2
)照射肿瘤15分钟；第4组荷瘤小鼠的肿瘤使用3毫米厚的猪皮(预先使用实施例1的光透明剂处理30分钟)覆盖，然后用808nm激光(1w cm-2
)照射肿瘤15分钟。在光照期间实时用近红外热成像仪监控肿瘤温度。
[0085]
图13为pgncs的体内光热行为的近红外图像，从中可以看出注射pgncs并覆盖有3mm猪皮(预先使用实施例1的光透明剂处理30分钟)的小鼠肿瘤在照射15分钟后温度升高12℃，这与未覆盖猪皮的肿瘤升温仅相差8℃左右，并且显著高于注射pgncs并覆盖有3mm猪皮的肿瘤升温效果(仅升温6℃左右)。这些结果与上面结果得出的结论一致，即本发明的光透明剂能够显著增强光的组织穿透深度，从而引起更高的肿瘤升温幅度。
[0086]
试验例5
[0087]
基于上述良好的肿瘤升温效果，在上述同样的实验条件下，本实验例也研究了实施例1的光透明剂对于肿瘤光热治疗效果提升。在经过光照治疗后，每两天对小鼠进行体重、瘤长与瘤宽数据记录，并根据公式：瘤体积＝瘤长
×
瘤宽
×
瘤宽/2，计算肿瘤体积。图14为各组小鼠的肿瘤生长曲线图，从中可以看出pgncs+光组的小鼠肿瘤生长最为缓慢，而pgncs+猪皮(预先经实施例1的光透明剂处理30分钟)+光组的小鼠肿瘤也生长较为缓慢，治疗14天后的肿瘤体积明显小于pgncs+猪皮+光组，这一结果也归因于实施例1的光透明剂增强光的组织穿透深度。
[0088]
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。