基于人参皂苷次生苷的脂质体及其应用的制作方法

1.本发明涉及脂质体制备技术领域。更具体地说，本发明涉及一种基于人参皂苷次生苷的脂质体及其应用。


背景技术：

2.在中医方书中，很多具备美容作用的方剂都含有人参，或单味使用，或与其他药物、食物配合使用。现代研究表明，人参内服或外用都能起到保健及美容护肤的作用。由于其得天独厚的滋补美容效果，人参被广泛应用于化妆品中。人参作为我国中医药宝库中的“百草之王”，其美白嫩肤作用已是众所周知，因而人参提取物也就是人参皂苷作为多种化妆品中的主要美白成分。研究表明人参中的美白作用机制包括：对黑色素细胞一氧化氮合成酶的抑制作用，对黑色素细胞增殖的抑制从而减少黑色素合成，提高体内及皮肤表皮细胞内超氧化物歧化酶的活性，加强活性氧化自由基的消除，阻止体内有害物质的产生，从而减少或消除已经产生并积滞于体内的脂褐质。近年也有国外学者证明人参皂苷是酪氨酸酶抑制剂，低浓度即可抑制酪氨酸酶的活性，阻断多巴及多巴醌的合成，从而抑制黑色素的生成。其具体机理是与l
‑
酪氨酸竞争酪氨酸酶活性部位，从而抑制酪氨酸酶的活性，使皮肤洁白光滑。延缓皮肤衰老可以针对引起衰老的原因及衰老引起的生理病理变化采取措施。关于皮肤老化问题一般认为是由于胶原蛋白的流失和自由基的产生所引起的。人参皂苷及其水解后生成的次生苷可促进细胞的新陈代谢，加快衰老皮肤细胞核酸和蛋白质的合成，同时增加皮肤中sod含量和活性，发挥强大的抗氧化和清除自由基作用，减少脂质过氧化产物如mda的沉积，恢复细胞正常的生理功能。此外，人参皂苷还可刺激皮肤成纤维细胞的活性，促进胶原蛋白合成，使皮肤趋于年轻化，从而延缓皮肤衰老过程，发挥抗衰老作用。由上可见，人参皂苷具有悠久的美容应用历史，现代研究则进一步为其美白、抗皮肤衰老提供了科学研究。人参这种古老而现代的功效必将使其在化妆品中发挥卓越的作用。然而，在中国市场上现有的人参化妆品多添加人参总提取物和总人参皂苷，导致功效成分不明确，标准不统一，品质不稳定和皮肤吸收差。
3.脂质体是一种由磷脂等两性分子组成的人工膜结构。当磷脂等两性分子分散于水相中时，分子的疏水烷基尾链会倾向于相互聚集在一起，从而避开水相，而亲水的极性头基则会暴露在水相中，从而形成了具有双分子层结构的封闭囊泡，成为脂质体，其直径一般在25nm至1000nm之间。脂质体的组成成分一般都是人体内的固有成分(磷脂和胆固醇等)，对皮肤无刺激作用，且本身即对皮肤具有保护和美容作用，如脂质体中的某些磷脂可进入皮肤深层，并与皮肤深层细胞膜的磷脂起源物结合，使细胞膜流态化，从而增强细胞的代谢功能，起到活化细胞的作用。脂质体独特的双分子结构，使其存在一个内水相和一个环形的疏水区域，可以分别用来包封亲水性药物和疏水性难溶药物。作为功能性成分的载体，提高功能性成分的皮肤美容效果。通常，在现行大多数脂质体的制备过程中，需要添加一定比例的胆固醇。研究发现，胆固醇与磷脂一样是两亲分子，一端具有亲水性羟基，一端具有甾醇环和疏水烷基链，可以穿插在磷脂分子之间，从而加强膜脂双层的稳定性，增加膜脂的有序性
并降低其流动性。但当胆固醇过量使用会对机体产生不利影响，如动脉粥样硬化等。


技术实现要素：

4.本发明所要解决的技术问题是人参化妆品功效成分不明确、标准不统一、品质不稳定、皮肤吸收差、以及过量的胆固醇影响机体健康。为解决上述技术问题，本发明提供一种基于人参皂苷次生苷的脂质体、一种负载活性物质的脂质体、以及一种负载活性物质的脂质体的制备方法。本发明得到的基于人参皂苷次生苷的脂质体功效成分明确、品质稳定、皮肤吸收性好，本发明得到的负载活性物质的脂质体无添加胆固醇，避免胆固醇过量使用对机体产生不利影响，避免胆固醇过量损害机体健康。
5.为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种基于人参皂苷次生苷的脂质体，所述脂质体中含有磷脂和如式(1)所示的人参皂苷次生苷；
[0006][0007]
其中，r1为下述基团中的任何一种﹕
‑
o
‑
glc、
‑
o
‑
xyl、
‑
o
‑
rha、
‑
o
‑
ara、
‑
o
‑
lyx、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc、
‑
o
‑
glc(2
→
1)xyl、
‑
o
‑
glc(6
→
1)xyl、
‑
o
‑
glc(2
→
1)rha、
‑
o
‑
glc(6
→
1)rha、
‑
o
‑
glc(2
→
1)ara、
‑
o
‑
glc(6
→
1)ara、
‑
o
‑
glc(2
→
1)lyx、
‑
o
‑
glc(6
→
1)lyx、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(2
→
1)glc、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(6
→
1)glc、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(2
→
1)glc、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(6
→
1)glc、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(2
→
1)xyl、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(6
→
1)xyl、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(2
→
1)xyl、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(6
→
1)xyl、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(2
→
1)rha、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(6
→
1)rha、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(2
→
1)rha、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(6
→
1)rha、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(2
→
1)ara、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(6
→
1)ara、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(2
→
1)ara、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(6
→
1)ara、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(2
→
1)lyx、
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(6
→
1)lyx、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(2
→
1)lyx、
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(6
→
1)lyx﹔
[0008]
r2为或
[0009]
优选的是，所述磷脂、所述如式(1)所示的人参皂苷次生苷的质量比为30:1～2，较佳地为10:1～2，更佳地为3:1～2。
[0010]
优选的是，所述磷脂为天然卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂和脑磷脂中的一种。
[0011]
优选的是，所述如式(1)所示的人参皂苷次生苷在脂质体中的含量为0.1％～15％，较佳地为1％～10％，更佳地为5～10％。
[0012]
还提供一种负载活性物质的脂质体，所述的负载活性物质的脂质体是指将化妆品的活性物质中的一种或多种包封于基于人参皂苷次生苷的脂质体中。
[0013]
优选的是，所述化妆品中的活性物质包括白藜芦醇、辅酶q10、乙酰基二肽
‑
1鲸蜡酯、棕榈酰四肽
‑
7、棕榈酰五肽
‑
4。
[0014]
优选的是，所述白藜芦醇在负载活性物质的脂质体中的含量为10％；
[0015]
所述辅酶q10在负载活性物质的脂质体中的含量为1％。
[0016]
还提供一种负载活性物质的脂质体的制备方法，将磷脂和如式(1)所示的人参皂苷次生苷在醇类有机溶剂中混合，再加入所述化妆品中的活性物质，减压蒸发，直至成膜，水化，均质，即得脂质体溶液。
[0017]
优选的是，所述化妆品中的活性物质为乙酰基二肽
‑
1鲸蜡酯、棕榈酰四肽
‑
7、棕榈酰五肽
‑
4中的一种时，先将其在乙酸水溶液中溶解。
[0018]
优选的是，所述化妆品中的活性物质为乙酰基二肽
‑
1鲸蜡酯、棕榈酰四肽
‑
7、棕榈酰五肽
‑
4中的一种时，在成膜后采用氮气吹干，形成干燥的膜。
[0019]
本发明至少包括以下有益效果：
[0020]
基于人参皂苷次生苷的脂质体功效成分明确、品质稳定、皮肤吸收性好；
[0021]
人参皂苷次生苷极性降低，与胆固醇具有相似的结构特征，属于两亲性分子，是一种可以更好地用来替代胆固醇的天然植物来源的化合物；
[0022]
以人参皂苷次生苷为功能性膜材的脂质体，不仅完全替代了胆固醇(脂质体膜不含任何胆固醇类成分)，避免胆固醇过量损害机体健康，同时可以高效、稳定地包载具有不同化妆品功效的活性物成分，从而起到协同美白护肤功效。
[0023]
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
[0024]
图1为本发明实施例1的人参皂苷次生苷的冷冻透射电镜图；
[0025]
图2(a)为本发明实施例11的脂质体粒径示意图；
[0026]
图2(b)为本发明实施例11的卵磷脂：人参皂苷次生苷质量比为100:0时制备的脂质体冷冻透射电镜图；
[0027]
图2(c)为本发明实施例11的卵磷脂：人参皂苷次生苷质量比为90:10时制备的脂质体冷冻透射电镜图；
[0028]
图2(d)为本发明实施例11的卵磷脂：人参皂苷次生苷质量比为80:20时制备的脂质体冷冻透射电镜图；
[0029]
图2(e)为本发明实施例11的卵磷脂：人参皂苷次生苷质量比为70:30时制备的脂质体冷冻透射电镜图。
具体实施方式
[0030]
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0031]
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0032]
<实施例1>
[0033]
取卵磷脂：如式(1)所示的人参皂苷次生苷质量比为60：40共同溶于无水乙醇中，形成混合液，混合液中卵磷脂18mg/ml、人参皂苷次生苷12mg/ml，在室温条件下搅拌1h至完
全溶解，然后与水混合形成为5v/v％的脂质体乙醇水溶液；
[0034]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc，r2为
[0035]
实施例1的脂质体乙醇水溶液成像分析使用冷冻电镜(talos f200c 200kv)，首先使用pelco easiglow
tm glow discharge辉光放电使铜网(ted pella inc.,u.s.a.)亲水化。然后使用vitrobot fei
tm
制备低温tem样品，参数如下：blot times 4.5s和blot force 3,wait time 3.0s和bolt total 1,drain time 0s。样品液体先到液乙烷中快速冻结，再到液氮中冷却。然后用gatan 698 cryo
‑
transfer holder移至冷冻电镜成像。成像结果如图1所示，呈现中空脂质体结构。
[0036]
<实施例2>
[0037]
取大豆卵磷脂：如式(1)所示的人参皂苷次生苷质量比为60：30共同溶于无水乙醇中，形成混合液，混合液中卵磷脂18mg/ml、人参皂苷次生苷9mg/ml，在室温条件下搅拌1h至完全溶解，然后与水混合形成为8v/v％的脂质体乙醇水溶液；
[0038]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(2
→
1)glc，r2为
[0039]
<实施例3>
[0040]
取脑磷脂：如式(1)所示的人参皂苷次生苷质量比为60：20共同溶于无水乙醇中，形成混合液，混合液中卵磷脂18mg/ml、人参皂苷次生苷6mg/ml，在室温条件下搅拌1h至完全溶解，然后与水混合形成为10v/v％的脂质体乙醇水溶液；
[0041]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(6
→
1)xyl，r2为
[0042]
<实施例4>
[0043]
取天然卵磷脂：如式(1)所示的人参皂苷次生苷质量比为60：25共同溶于无水乙醇中，形成混合液，混合液中卵磷脂18mg/ml、人参皂苷次生苷7.5mg/ml，在室温条件下搅拌1h至完全溶解，然后与水混合形成为5v/v％的脂质体乙醇水溶液；
[0044]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(6
→
1)glc(6
→
1)lyx，r2为
[0045]
<实施例5>
[0046]
取氢化卵磷脂、如式(1)所示的人参皂苷次生苷共同溶于无水乙醇中，形成混合液，混合液中氢化卵磷脂2.25mg/ml、人参皂苷次生苷1.5mg/ml，在旋转蒸发仪上减压蒸发，溶剂蒸干后呈半透明均匀薄膜，然后将ph值7.4的磷酸盐缓冲液作为水化介质，于45℃下水化，细胞破碎仪(600w/4min)探头超声，加水至形成5ml脂质体溶液；
[0047]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(6
→
1)xyl，r2为
[0048]
<实施例6>
[0049]
取氢化卵磷脂、如下所示的人参皂苷原生苷，溶于乙醇中，形成混合液，混合液中氢化卵磷脂2.25mg/ml、人参皂苷原生苷1.5mg/ml，在旋转蒸发仪上减压蒸发，溶剂蒸干后
呈半透明均匀薄膜，然后将ph值7.4的磷酸盐缓冲液作为水化介质，于45℃下水化，细胞破碎仪(600w/4min)探头超声，加水至形成5ml脂质体溶液；
[0050]
其中，人参皂苷原生苷的结构式为
[0051]
<脂质体溶液稳定性试验>
[0052]
取实施例5和实施例6制备的脂质体溶液，将脂质体溶液稀释250倍待测。再将稀释后的脂质体溶液导入nanosight ns300颗粒跟踪分析仪，测定待测脂质体溶液的粒径，追踪得到的含人参皂苷次生苷或者人参皂苷原生苷的脂质体的粒径随时间的变化情况。测定结果如表1所示。
[0053]
表1
[0054][0055]
由表1可知，实施例5使用本发明的人参皂苷次生苷所得的脂质体粒径随时间变化不大，非常稳定，而实施例6的人参皂苷原生苷脂质体的粒径则随时间变大，有聚集现象，非常不稳定。
[0056]
<实施例7>
[0057]
取天然卵磷脂、油茶籽皂苷，加入乙醇中，无法溶解，不能形成脂质体溶液，其中，天然卵磷脂占比0.9mg/ml，油茶籽皂苷占比0.6mg/ml。
[0058]
<实施例8>
[0059]
取天然卵磷脂、绿茶皂苷，加入乙醇中，无法溶解，不能形成脂质体溶液，其中，天然卵磷脂占比0.9mg/ml，绿茶皂苷占比0.6mg/ml。
[0060]
<实施例9>
[0061]
取大豆卵磷脂、薯蓣皂苷，加入乙醇中，形成混合液，混合液中大豆卵磷脂为0.9mg/ml、薯蓣皂苷为0.6mg/ml，在旋转蒸发仪上减压蒸发，溶剂蒸干后呈半透明均匀薄膜，然后将ph值7.4的磷酸盐缓冲液作为水化介质，于45℃下水化，细胞破碎仪(600w/4min)探头超声，加水至形成5ml脂质体溶液。
[0062]
<实施例10>
[0063]
取蛋黄卵磷脂、如式(1)所示的人参皂苷次生苷，溶于乙醇中，形成混合液，混合液中蛋黄卵磷脂0.9mg/ml、人参皂苷次生苷0.6mg/ml，在旋转蒸发仪上减压蒸发，溶剂蒸干后
呈半透明均匀薄膜，然后将ph值7.4的磷酸盐缓冲液作为水化介质，于45℃下水化，细胞破碎仪(600w/4min)探头超声，加水至形成5ml脂质体溶液。
[0064]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(6
→
1)ara，r2为
[0065]
<稳定性试验>
[0066]
取实施例7至实施例10制备的溶液，将溶液稀释250倍待测。再将稀释后的溶液导入nanosight ns300颗粒跟踪分析仪，测定待测溶液的粒径，追踪得到溶液中的粒径随时间的变化。测定结果如表2所示。
[0067]
表2
[0068][0069]
如表2可知，实施例10使用本发明的人参皂苷次生苷所得的脂质体粒径随时间变化不大，非常稳定，而实施例9的薯蓣皂苷脂质体则在放置第二天有团聚凝胶状，非常不稳定。表明基于本实施例的人参皂苷次生苷的脂质体品质稳定。
[0070]
<实施例11>
[0071]
蛋黄卵磷脂：如式(1)所示的人参皂苷次生苷质量比分别为100:0、90:10、80:20、70:30，溶于乙醇中，形成混合液，混合液中的蛋黄卵磷脂和人参皂苷次生苷的总浓度为2.5mg/ml，在旋转蒸发仪上减压蒸发，溶剂蒸干后呈半透明均匀薄膜，然后将ph值7.4的磷酸盐缓冲液作为水化介质，于45℃下水化，细胞破碎仪(600w/4min)探头超声，加水至形成5ml脂质体溶液；
[0072]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(6
→
1)ara，r2为
[0073]
取100ul实施例11制备的脂质体溶液，将脂质体溶液稀释250倍待测。再将稀释后的脂质体溶液导入nanosight ns300颗粒跟踪分析仪，测定待测脂质体溶液的粒径，追踪所得到的含人参皂苷次生苷脂质体的粒径随蛋黄卵磷脂与人参皂苷次生苷质量比的变化，如图2(a)所示，实施例11均能形成粒径小于200nm的脂质体，且随着人参皂苷次生苷含量的增大，脂质体的粒径逐渐减小。
[0074]
采用冷冻电镜观察脂质体形貌，分别如图2(b)、图2(c)、图2(d)、图2(e)所示，形成的脂质体均具有良好的形貌，表明利用本发明提供的基于人参皂苷次生苷的脂质体具备制备通用性，图2(b)、图2(c)、图2(d)、图2(e)分别代表蛋黄卵磷脂：如式(1)所示的人参次生苷的质量比分别为100:0、90:10、80:20、70:30时制备的脂质体的冷冻透射电镜图。
[0075]
<实施例12>
[0076]
白藜芦醇
‑
人参皂苷次生苷脂质体的制备
[0077]
取蛋黄卵磷脂、如式(1)所示的人参皂苷次生苷和白藜芦醇，溶于乙醇中，形成混合液，混合液中蛋黄卵磷脂20mg/ml、人参皂苷次生苷2mg/ml、白藜芦醇2.2mg/ml，在旋转蒸发仪上减压蒸发，溶剂蒸干后呈半透明均匀薄膜，然后将ph值7.4的磷酸盐缓冲液作为水化介质，于45℃下水化，细胞破碎仪(600w/4min)探头超声，加水至形成5ml脂质体溶液；
[0078]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(6
→
1)ara，r2为
[0079]
<实施例13>
[0080]
辅酶q10
‑
人参皂苷次生苷脂质体的制备
[0081]
取蛋黄卵磷脂、人参皂苷次生苷和辅酶q10，溶于乙醇
‑
氯仿(v/v：5:2)中，形成混合液，混合液中蛋黄卵磷脂20mg/ml、人参皂苷次生苷2mg/ml、辅酶q10为50ul/ml，在旋转蒸发仪上减压蒸发，溶剂蒸干后呈半透明均匀薄膜，然后将ph值7.4的磷酸盐缓冲液作为水化介质，于50℃下水化，细胞破碎仪(600w/4min)探头超声，加水至形成5ml脂质体溶液；
[0082]
其中，r1基团为
‑
o
‑
glc(2
→
1)glc(2
→
1)xyl，r2为
[0083]
<脂质体溶液的性能评价>
[0084]
1、脂质体的粒径表征
[0085]
取100ul实施例12和实施例13制备的脂质体溶液，将脂质体溶液稀释250倍待测。再将稀释后的脂质体溶液导入nanosight ns300颗粒跟踪分析仪，测定待测脂质体溶液的粒径。
[0086]
2、包封性能测量
[0087]
2.1、白藜芦醇
‑
人参皂苷次生苷脂质体的包封率测量
[0088]
hplc方法参数如下，液相系统：agilent 1290 uhplc；色谱柱：poroshell 120 ec
‑
c18(2.1
×
100mm,2.7um)；流动相：乙腈
‑
水；流速：0.35ml
·
min
‑1；检测波长：306nm；柱温：25℃；进样量2ul。标准曲线建立：取白藜芦醇精密称定，置于10ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为储备液备用。精密量取储备液用乙醇稀释成质量浓度分别为5、10、20、40、80和160ug
·
ml
‑1的系列标准溶液。分别精密量取上述溶液各2μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以质量浓度(ρ,ug
·
ml
‑1)为横坐标，峰面积(a)为纵坐标进行线性回归，得回归方程为y＝38.706x+8.255，r2＝1。结果表明，白藜芦醇的质量浓度在5～80ug
·
ml
‑1内与峰面积呈良好的线性关系。
[0089]
取实施例12制备的脂质体溶液，精密量取0.2ml，加入乙醇破乳溶解脂质体并定容至2ml，按照上述hplc方法测定脂质体中白藜芦醇总量(m0)。另取实施例12制备的脂质体溶液，于3500r
·
min
‑1离心10min，精密量取上清液0.2ml，加入乙醇破乳溶解脂质体并定容于2ml的量瓶中，按照上述hplc方法测定被包封于脂质体中白藜芦醇的含量(m)。计算白藜芦醇脂质体的包封率。公式如下：ee％＝m/m0×
100％。
[0090]
2.2、辅酶q10
‑
人参皂苷次生苷脂质体的包封率测量
[0091]
hplc方法参数如下，液相系统：agilent 1290 uhplc；色谱柱：poroshell 120 ec
‑
c18(2.1
×
100mm，2.7um)；流动相：甲醇
‑
异丙醇(v/v:40/60)；流速：0.35ml
·
min
‑1；检测波长：275nm；柱温：25℃，进样量2ul。取实施例13制备的脂质体溶液，精密量取上清液0.2ml，加入异丙醇破乳溶解脂质体并定容至2ml，按照上述hplc的方法测定脂质体中辅酶q10的峰面积(a0)。由于辅酶q10样品为溶液状态，无法获得准确的质量数据，所以辅酶q10的脂质体以1％的体积比进行制备，即5ml脂质体溶液含有50ul的辅酶q10。另外q10脂质体溶液进行包封率测定时，不能采用标准曲线法进行定量辅酶q10，其包封率采用峰面积比较方法进行评估。另取所制备的脂质体溶液，于3500r
·
min
‑1离心10min，精密量取上清液0.2ml，加入异丙醇溶解并定容于2ml的量瓶中，按照上诉hplc的方法测定被包封于脂质体中辅酶q10的峰面积(a)。计算辅酶q10脂质体的包封率。公式如下：ee％＝a/a0×
100％。
[0092]
实施例12和实施例13的脂质体的粒径表征数据结果和包封率测量结果如表1所示。
[0093]
表3不同处方的脂质体的粒径和包封率
[0094][0095][0096]
从表3可知，所制备的含不同活性物的人参皂苷次生苷脂质体粒径均在200nm以下，两种测试的活性物均达到较高的包封率(大于95％)。
[0097]
3、脂质体的稳定性评价
[0098]
3.1脂质体耐寒实验
[0099]
取实施例12和实施例13包封活性物质的脂质体溶液1ml，分别倒入两支10ml的玻璃瓶内。把一支待检的溶液置于4℃的冰箱内，经24h后取出，恢复室温后与另一瓶内的脂质体(室温)进行粒径和包封率的比较。游离药物溶液(白藜芦醇水溶液和辅酶q10水溶液)也进行同样实验用于随行对比。
[0100]
3.2脂质体耐热实验
[0101]
取实施例12和实施例13包封活性物质的脂质体溶液1ml，分别倒入两支10ml的玻璃瓶内。把一支待检的溶液置于预先调节至40
±
1℃的恒温培养箱内，经24h后取出，恢复室温后与另一瓶内的脂质体(室温)进行粒径和包封率的比较。游离活性物质的溶液(白藜芦醇水溶液和辅酶q10水溶液)也进行同样实验用于随行对比。
[0102]
脂质体耐寒实验和脂质体耐热实验的数据结果如表4所示。
[0103]
表4不同配方的脂质体耐热与耐寒实验结果
[0104]
[0105]
从表4可知，制备的基于转化人参皂苷次生苷的白藜芦醇(res)脂质体与辅酶q10脂质体均可以在4℃与40℃条件下保持良好的粒径与包封率，从而说明本实验制备的脂质体具有较好的耐热与耐寒性。
[0106]
表5不同温度下中各脂质体中活性物质的保留率
[0107][0108][0109]
从表5可知，当温度不高于40℃时，制备的包封活性物质的脂质体对温度均有较好的稳定性。
[0110]
表6不同天数中各脂质体的光照稳定性
[0111]
时间存储(24hr)0天(包封率％)1天(包封率％)10天(包封率％)白藜芦醇脂质体95.591.982.5辅酶q10脂质体99.998.798.4
[0112]
从表6可知，制备的包封活性物质的脂质体对光照有较好的稳定性，强光照7天，白藜芦醇活性物包封率在82.5％，辅酶q10脂质体包封率保持在98.4％。
[0113]
表7不同天数中各脂质体中药物的保留率
[0114]
时间存储(24hr)0天1天10天白藜芦醇水溶液100％89.7％70.5％白藜芦醇脂质体100％100％82.0％辅酶q10水溶液100％93.5％74.4％辅酶q10脂质体100％94.8％70.1％
[0115]
从表7可知，随着时间延长，脂质体中的活性物质保留率开始下降，说明活性物质均有不同程度的降解。白藜芦醇脂质体略有助于延缓白藜芦醇本身在溶液中的降解。
[0116]
据文献《白藜芦醇脂质体的制备及评价》记载，白藜芦醇脂质体平均粒径约在200nm左右，包封率在90％以上，光照条件下储存10天后，白藜芦醇脂质体中药物保留率降为50％。据文献《辅酶q10脂质体注射剂的研究》记载，辅酶q10脂质体平均粒径约200nm，包封率达90％以上，光照条件下储存10天后，辅酶q10脂质体中辅酶q10药物保留率仅为1％。实施例中白藜芦醇脂质体与辅酶q10脂质体的粒径、包封率、药物保留率均好于文献记载。本实施例12和实施例13的脂质体在未加胆固醇的情况下，仍然具有较好的包封率，以特殊的经过转化的人参皂苷为功能性膜材的脂质体，使脂质体膜在不含任何胆固醇类成分的情况下，同时可以高效、稳定地包载具有不同化妆品功效的活性物质成分，从而起到了协同美白护肤功效。避免胆固醇与机体接触，保证机体健康。
[0117]
<实施例14>
[0118]
将200mg乙酰基二肽
‑
1鲸蜡酯溶于质量分数为20％乙酸水溶液中；将1g蛋黄卵磷
脂、100mg人参皂苷次生苷材料溶于乙醇溶液；将以上两种溶液混匀，置于圆底烧瓶中；减压蒸馏，除去瓶内的有机试剂与乙酸水溶液，瓶内形成一层均匀的脂质薄膜；利用氮气除去多余酸类成分与水分，形成干燥的薄膜；加入适量的水，将瓶内薄膜洗脱；用高压均质机进行均质化处理(400bar，2min)，得脂质体。
[0119]
<实施例15>
[0120]
将200mg棕榈酰四肽
‑
7溶于质量分数为20％乙酸水溶液中；将1g蛋黄卵磷脂、100mg人参皂苷次生苷材料溶于乙醇溶液；将以上两种溶液混匀，至于圆底烧瓶中；减压蒸馏，除去瓶内的有机试剂与乙酸水溶液，瓶内形成一层均匀的脂质薄膜；利用氮气除去多余酸类成分与水分，形成干燥的薄膜；加入适量的水，将瓶内薄膜洗脱；用高压均质机进行均质化处理(400bar，2min)，得脂质体。
[0121]
<实施例16>
[0122]
将200mg棕榈酰五肽
‑
4溶于质量分数为20％乙酸水溶液中；将1g蛋黄卵磷脂、100mg人参皂苷次生苷材料溶于乙醇溶液；将以上两种溶液混匀，至于圆底烧瓶中；减压蒸馏，除去瓶内的有机试剂与乙酸水溶液，瓶内形成一层均匀的脂质薄膜；利用氮气除去多余酸类成分与水分，形成干燥的薄膜；加入适量的水，将瓶内薄膜洗脱；用高压均质机进行均质化处理(400bar，2min)，得脂质体。
[0123]
<脂质体性能评价>
[0124]
对实施例14～16制备的脂质体，用malvern zetasizer仪器进行粒径与zeta电位评估，用agilent 6230 tof
‑
ms进行包封率评估。实验结果如表8所示。
[0125]
表8不同配方的脂质体的粒径和包封率
[0126][0127][0128]
由表8可知，实施例14～16制备的脂质体粒径均在100nm以下，三种脂质体的包封率均在90％以上，且三种脂质体溶液中胜肽含量均可接近2000ppm，表明基于本发明的人参皂苷次生苷制备的脂质体具有较好的包封效果。
[0129]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。