用于防止脱发或促进毛发生长的包含黄瓜、茄子和蜗牛提取物的混合物作为活性成分的组合物的制作方法

1.本公开涉及一种用于防止脱发或促进毛发生长的包含黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物作为活性成分的组合物，特别是一种化妆品组合物和一种用于皮肤外用的药物组合物。


背景技术：

2.头发是皮肤附属物中的一种。它在形态上来源于上皮，在出生后2个月形成。头发根据其粗细分为细毫毛和粗硬终毛。头发以特定的周期生长，不会立即脱落。每个毛囊都会经历活跃和静止阶段。在生长期，即毛发生长初期，毛球中的细胞生长活跃，导致毛发生长。在人的头发中，85％的毛囊持续3至6年处于生长期，5％持续2至3周处于毛发生长中期，其中毛囊开始萎缩，其余10％持续3至4个月处于休止期，其中头发停止生长，平均每天脱落约50至100根头发(jin
‑
san lee(1998).hair graying and hair loss,dongui bogam,healthy lifestyle research group,inhwa publishing)。脱发的原因包括遗传因素、营养不良、内分泌失调、组织紊乱、蠕形螨、头部压迫、头皮屑、自身免疫疾病、局部感染等(min
‑
jeong kim(2005).hair and scalp,yelim,pp.110
‑
111)。尽管脱发是毛囊中与毛发生长密切相关的激素、蛋白质等代谢紊乱引起的，但许多社会文化因素的变化可能直接或间接影响脱发，如现代社会社交活动增加导致压力增加，西化饮食习惯导致营养失衡等(j.kor.soc.cosm.vol.13,no.3(2007),pp.1366
‑
1375)。
3.脱发在很大程度上可以分为两种类型。第一种称为男性型秃发、老年性脱发或雄激素性脱发，常见于中年男性，脱发开始于额顶和顶叶。第二种称为斑秃，主要始于枕部，呈圆形或椭圆形的秃斑，边界较清晰。这种脱发甚至可以发生在青春期。脱发不仅限于男性，也可能发生在女性中。特别是女性，脱发通常始于顶叶，尽管频率低于男性，但也会发生斑秃(m.inaba等人，androgenetic alopecia,springer
‑
berlag,tokyo,japan,1996)。
4.医学和传统方法目前可用于预防和治疗脱发。医疗方法包括药物、手术、营养疗法、膳食补充剂等。目前，米诺地尔(mxd)和非那雄胺被美国食品和药物管理局(fda)批准为促进毛发生长的药物。但是，停药后会再次脱发，据报道，长期使用会导致皮炎等副作用(kaufman k.d.(1996),elsevier science,pp.363
‑
365)。
5.[相关技术参考]
[0006]
[非专利文件]
[0007]
jin
‑
san lee(1998).hair graying and hair loss,dongui bogam,healthy lifestyle research group,inhwa publishing。
[0008]
min
‑
jeong kim(2005).hair and scalp,yelim,pp.110
‑
111。
[0009]
j.kor.soc.cosm.vol.13,no.3(2007),pp.1366
‑
1375。
[0010]
m.inaba等人，androgenetic alopecia,springer
‑
berlag,tokyo,japan,1996。
[0011]
kaufman k.d.(1996)elsevier science,pp.363
‑
365。


技术实现要素：

[0012]
技术问题
[0013]
本公开旨在提供一种用于防止脱发或促进毛发生长的包含黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物作为活性成分的组合物，其增加真皮乳头细胞中的肝细胞生长因子(hgf)、角质形细胞生长因子(kgf)和胰岛素样生长因子1(igf
‑
1)的表达，在脱毛6周龄c57bl/6小鼠的毛发生长测试中表现出与米诺地尔相当的毛发生长效果，在人临床测试中表现出改善脱发的效果。
[0014]
技术方案
[0015]
本公开提供了用于防止脱发或促进毛发生长的组合物，其包含黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物作为活性成分。
[0016]
组合物还可包含侧柏叶和苦参根提取物的混合物。
[0017]
组合物还可包含干地黄、干姜、当归根、墨旱莲、隔山消、谷子和糙米中的一种或多于一种的提取物。
[0018]
组合物还可包含选自鱼腥草和甘草中的一种或多于一种的提取物。
[0019]
组合物可以是化妆品组合物。
[0020]
化妆品组合物可配制为以下物质中的一种：生发液、护发素、亮发素、头发洗剂、头发营养洗剂、洗发香波、润发精、焗油膏、发乳、头发营养霜、头发保湿霜、头发按摩霜、发蜡、头发气雾剂、发膜、头发营养膜、洗发皂、洗发乳、发油、干发制剂、护发制剂、染发剂、毛发卷曲制剂、毛发脱色剂、发胶、发釉、美发制剂、定型剂、头发保湿剂、摩丝和喷发胶。
[0021]
组合物可以是用于皮肤外用的药物组合物。
[0022]
用于皮肤外用的药物组合物可以是选自以下物质的用于皮肤外用的任何药物组合物：乳膏、凝胶、贴剂、喷雾剂、软膏、膏药、乳液、搽剂、糊剂和巴布剂。
[0023]
有益效果
[0024]
本公开的用于防止脱发或促进毛发生长的组合物，其含有黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物作为活性成分，是一种天然物质，对人成纤维细胞和真皮乳头细胞不表现出细胞毒性。已证实其增加已知在诱导新毛囊和维持毛发生长中起关键作用的真皮乳头细胞中的肝细胞生长因子(hgf)、角质细胞生长因子(kgf)和胰岛素样生长因子1(igf
‑
1)的表达，在脱毛6周龄c57bl/6小鼠的毛发生长测试中表现出与米诺地尔相当的毛发生长效果，并且在人临床测试中表现出改善脱发的效果。
附图说明
[0025]
图1显示在测试实施例4中测试的测试组小鼠的背部图像，以研究毛发生长效果随时间的变化。
[0026]
图2显示在测试实施例5中测试前后参与者头顶周围毛发生长的图像。
具体实施方式
[0027]
本公开涉及用于防止脱发或促进毛发生长的组合物，其包含黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物作为有效成分；特别涉及化妆品组合物、皮肤外用药物组合物或功能性保健食品组合物。
[0028]
在下文中，更详细地描述本公开。
[0029]
黄瓜是葫芦科一年生匍匐藤本植物。它已发展为各种栽培品种，并作为蔬菜在全球范围内种植。它的果实可以食用。黄瓜含有95％以上的水分和少量的各种维生素和矿物质，并富含抗坏血酸酶。
[0030]
具体地，组合物中使用的黄瓜是除去约1至3厘米的带苦味的顶端和底端的果实。更具体地，可以除去黄瓜的种子以增强防止脱发和促进毛发生长的活性。
[0031]
茄子在温带地区是一年生的，但在热带地区是多年生的。它原产于印度，在热带和温带气候中广泛种植。果实蒸或炸后食用。在韩国，它是从新罗王朝开始种植的。它在13世纪被引入欧洲，但没有像东亚那样积极地作为食物种植。
[0032]
具体地，组合物中使用的茄子是为了增强防止脱发和促进毛发生长的活性而除去茎的茄子。
[0033]
蜗牛总体是指属于腹足纲的软体动物。在韩国，已知约有35种，包括肚脐蜗牛、左手蜗牛、真蜗牛、新娘蜗牛等。据《东医宝鉴》介绍，蜗牛性寒、味咸、微毒、治疗脱肛、止渴。
[0034]
具体地，组合物中使用的蜗牛是除去内脏的蜗牛。更具体地，蒸蜗牛5至30分钟后，可以除去内脏，以增强防止脱发和促进毛发生长的活性。
[0035]
在本公开中，组合物或提取物的混合物不仅包括通过将各种材料混合、然后使用提取溶剂提取得到的提取物，还包括通过提取各种材料、然后将其混合得到的提取物。
[0036]
组合物可包含以下物质的混合物：固体含量为4至16重量份、特别是8至16重量份的黄瓜或黄瓜提取物，固体含量为2至8重量份、特别是4至8重量份的茄子或茄子提取物，和固体含量为1至4重量份的蜗牛或蜗牛提取物。当组合物中的一种或多于一种成分缺失或其含量超出上述范围时，与防止脱发和促进毛发生长的活性相关的胰岛素样生长因子1(igf
‑
1)、肝细胞生长因子(hgf)和角质细胞生长因子(kgf)中的至少一种基因表达降低。
[0037]
在本公开中，组合物或提取物可以用水、有机溶剂或其组合提取。有机溶剂可以是c1至c4醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、己烷或其组合，但不限于此。c1至c4醇可以是例如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇。乙醇是最优选的。提取溶剂的用量可以为原料重量的2至20倍、特别是4至10倍。
[0038]
提取物可以通过天然物质提取领域的技术人员已知的任何提取方法来制备。例如，可以通过在20至100℃、特别是约50至90℃的提取温度下进行热水提取、冷沉淀提取、回流冷凝提取或超声提取1至30小时，特别是通过连续进行热水提取1至5次来制备。在将得到的提取物在减压下过滤并且用真空蒸发器除去溶剂后，可将其通过冷冻干燥而得到提取物。
[0039]
组合物还可包含侧柏叶和苦参根提取物的混合物。
[0040]
侧柏叶是指属于柏科侧柏(thuja orientalis l.)的幼枝和嫩叶。侧柏叶用于治疗流鼻血、呕血、便血、血尿、崩漏，因为它可以清血热，也用于咳嗽、气喘、痰多、脱发、脂溢性皮炎、外伤出血等。据报道药效除抗菌作用外，对减少出血时间、止咳化痰、降血压、平喘等有效。鳞片状小叶交替排列，中叶为菱形。
[0041]
苦参根是指蝶形花科多年生草本植物苦参(sophora flavescens)的根。已知含有苦参碱、氧化苦参碱、槐醇、阿那齐林(anazirine)、甲基半胱氨酸、野靓叶素(baptifolin)等生物碱和黄腐酚、异黄腐酚等黄酮类化合物，已知具有利尿、抗心律失常和抗菌活性。
[0042]
具体地，组合物可含有固体含量为2至8重量份的侧柏叶或侧柏叶提取物和固体含量为2至8重量份的苦参根或苦参根提取物，以增强防止脱发和促进毛发生长的效果。
[0043]
组合物还可含有选自干地黄、干姜、当归根、墨旱莲、隔山消、谷子和糙米中的一种或多于一种的提取物。
[0044]
组合物可进一步含有固体含量为1至4重量份的干地黄或干地黄提取物，固体含量为1至4重量份的干姜或干姜提取物，固体含量为1至4重量份的当归根或当归根提取物，固体含量为1至4重量份的墨旱莲或墨旱莲提取物，固体含量为1至4重量份的隔山消或隔山消提取物，固体含量为1至4重量份的谷子或谷子提取物，或固体含量为1至4重量份的糙米或糙米提取物，用于降低对人成纤维细胞和真皮乳头细胞的细胞毒性，同时保持防止脱发和促进毛发生长的活性。
[0045]
此外，组合物可进一步含有选自鱼腥草和甘草中的一种或多于一种的提取物。
[0046]
组合物还可以含有1至4重量份固体含量的鱼腥草或鱼腥草提取物，或1至4重量份固体含量的甘草或甘草提取物，用于改善头皮炎症、头皮瘙痒和头皮屑，同时保持防止脱发和促进毛发生长的活性。
[0047]
黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物，黄瓜、茄子、蜗牛、侧柏叶和苦参根提取物的混合物，或组合物中所含的其他天然物质的提取物是通常用作天然药物的天然物质。基于组合物的总重量，它们可以具体地0.001至90重量％、更具体地0.001至10重量％包含在组合物中，但不特别限于此。
[0048]
本公开的组合物可以用作化妆品组合物或皮肤外用的药物组合物，以达到防止脱发和促进毛发生长的效果。
[0049]
当本公开的组合物用作化妆品组合物时，除黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物作为活性成分之外，其还可含有化妆品组合物中常用的成分，例如水溶性维生素、油溶性维生素、多肽、多糖、鞘脂、海藻提取物等。
[0050]
水溶性维生素可以是可用于化妆品中的任何一种。具体地，可用于本公开的水溶性维生素可包括维生素b1、维生素b2、维生素b6、吡哆醇、氯化吡哆醇、维生素b
12
、泛酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、维生素c、维生素h等，其盐(盐酸硫胺素、抗坏血酸钠等)或其衍生物(抗坏血酸
‑2‑
磷酸钠、抗坏血酸
‑2‑
磷酸镁等)。水溶性维生素可以通过微生物转化、微生物培养纯化、酶法、化学合成等常用方法获得。
[0051]
油溶性维生素可以是可用于化妆品的任何一种。具体地，可用于本公开的油溶性维生素可包括维生素a、胡萝卜素、维生素d2、维生素d3、维生素e(d
‑
α
‑
生育酚或l
‑
α
‑
生育酚)等，及其衍生物(抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸二棕榈酸酯、d/l
‑
α
‑
生育酚乙酸酯、d/l
‑
α
‑
生育酚维生素e烟酸酯、d/l
‑
泛醇、d
‑
泛醇、泛醇乙醚等)等。油溶性维生素可通过微生物转化、微生物培养纯化、酶法、化学合成等常用方法获得。
[0052]
多肽可以是可用于化妆品中的任何一种。具体地，可以使用胶原蛋白、水解胶原蛋白、明胶、弹性蛋白、水解弹性蛋白、角蛋白等。多肽可以通过微生物培养纯化、酶法、化学合成等常用方法纯化获得，也可以从猪、牛等的表皮、蚕丝等天然物质中纯化获得。
[0053]
多糖可以是可用于化妆品中的任何一种。具体地，可以使用羟乙基纤维素、黄原胶、透明质酸钠、硫酸软骨素或其盐(例如钠盐)等。例如，通常可以从哺乳动物或鱼类中纯化硫酸软骨素或其盐。
[0054]
鞘脂可以是可用于化妆品中的任何一种。具体地，可以使用神经酰胺、植物鞘氨醇、鞘糖脂等。鞘脂通常可以从哺乳动物、鱼、贝类、酵母、植物等中纯化，或者可以通过化学合成获得。
[0055]
海藻提取物可以是可用于化妆品中的任何一种。具体地，可以使用褐藻提取物、红藻提取物、绿藻提取物等，或从海藻提取物中纯化的角叉菜胶、海藻酸、海藻酸钠、海藻酸钾等。海藻提取物可以通过常规方法从海藻中纯化获得。
[0056]
如果需要，除了上述描述的成分外，化妆品组合物还可以包含化妆品中常用的其他成分。
[0057]
可进一步添加的成分可包括油或脂肪、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机颜料或无机颜料、有机粉末、uv吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、ph控制剂、醇、着色剂、香料、血液循环促进剂、清凉剂、止汗剂、纯化水等。
[0058]
油或脂肪可包括基于酯的油或脂肪、基于烃的油或脂肪、基于硅的油或脂肪、基于氟的油或脂肪、动物油或脂肪、植物油或脂肪等。
[0059]
基于酯的油或脂肪可以是三
‑2‑
乙基己酸甘油酯、2
‑
乙基己酸十六烷醇酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸乙酯、棕榈酸辛酯、异硬脂酸异十六烷醇酯、硬脂酸丁酯、亚油酸乙酯、亚油酸异丙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异十六烷醇酯、肉豆蔻酸异硬脂醇酯、棕榈酸异硬脂醇酯、肉豆蔻酸辛基十二烷醇酯、癸二酸二乙酯、己二酸二异丙酯、新戊酸异烷醇酯、三(辛基癸酸)甘油酯、三羟甲基丙烷三
‑2‑
乙基己酸酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、季戊四醇四2
‑
乙基己酸酯、辛酸十六烷醇酯、月桂酸癸酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸癸酯、肉豆蔻酰肉豆蔻酸酯、肉豆蔻酸十六烷醇酯、硬脂酰硬脂酸酯、油酸癸酯、蓖麻油酸十六烷醇酯、月桂酸异硬脂醇酯、肉豆蔻酸异十三烷醇酯、棕榈酸异十六烷醇酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸异十六烷醇酯、油酸异癸酯、油酸辛基十二烷醇酯、亚油酸辛基十二烷醇酯、异硬脂酸异丙酯、2
‑
乙基己酸十六十八烷醇酯、2
‑
乙基己酸硬脂醇酯、异硬脂酸己酯、乙二醇二辛酸酯、乙二醇二油酸酯、丙二醇二癸酸酯、丙二醇二(辛酸辛酯)、丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二癸酸酯、新戊二醇二辛酸酯、三辛酸甘油酯、三十一烷酸甘油酯、三异棕榈酸甘油酯、三异硬脂酸甘油酯、新戊酸辛基十二烷醇酯、辛酸异硬脂醇酯、异壬酸辛酯、新癸酸己基癸酯、新癸酸辛基十二烷醇酯、异硬脂酰异硬脂醇酯、异硬脂酸辛基癸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、柠檬酸三异鲸蜡酯、柠檬酸三异烷醇酯、柠檬酸三异辛酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、乳酸十六烷醇酯、乳酸辛基癸酯、柠檬酸三乙酯、乙酰柠檬酸三乙酯、乙酰柠檬酸三丁酯、柠檬酸三辛酯、苹果酸二异硬脂醇酯、羟基硬脂酸2
‑
乙基己酯、琥珀酸二
‑2‑
乙基己酯、己二酸二异丁酯、癸二酸二异丙酯、癸二酸二辛酯、胆固醇硬脂酸酯、胆固醇异硬脂酸酯、胆固醇羟基硬脂酸酯、胆固醇油酸酯、二氢胆固醇油酸酯、植物甾醇异硬脂酸酯、植物甾醇油酸酯、异十六烷基12
‑
硬脂酰羟基硬脂酸酯、硬脂酰12
‑
硬脂酰羟基硬脂酸酯、异硬脂酰12
‑
硬脂酰羟基硬脂酸酯等。
[0060]
基于烃的油或脂肪可以是角鲨烷、液体石蜡、α
‑
石蜡、异链烷烃、地蜡、石蜡、液体异链烷烃、聚丁烯、微晶蜡、凡士林等。
[0061]
基于硅的油或脂肪可以是聚甲基硅氧烷、甲基苯基硅氧烷、甲基环聚硅氧烷、八甲基聚硅氧烷、十甲基聚硅氧烷、十二甲基环硅氧烷、二甲基硅氧烷
‑
甲基十六烷氧基硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷
‑
甲基硬脂酰氧基硅氧烷共聚物、烷基改性的硅油、氨基改性的硅油
等。
[0062]
基于氟的油或脂肪可以是全氟聚醚等。
[0063]
动物或植物油或脂肪可以是鳄梨油、杏仁油、橄榄油、芝麻油、米糠油、红花油、大豆油、玉米油、菜籽油、杏油、棕榈仁油、棕榈油、蓖麻油、葵花油、葡萄籽油、棉籽油、椰子油、石栗子油、麦胚芽油、米胚芽油、乳木果油、月见草油、澳洲坚果油、池花籽油、蛋黄油、牛油、马油、貂油、深海鱼油、荷荷芭油、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、液体羊毛脂、氢化蓖麻油等。
[0064]
保湿剂可以是水溶性低分子量保湿剂、油溶性低分子量保湿剂、水溶性聚合物、油溶性聚合物等。
[0065]
水溶性低分子量保湿剂可以是丝氨酸、谷氨酰胺、山梨糖醇、甘露糖醇、吡咯烷酮羧酸钠、甘油、丙二醇、1,3
‑
丁二醇、乙二醇、聚乙二醇b(聚合度n＝2或大于2)、聚丙二醇(聚合度n＝2或大于2)、聚甘油b(聚合度n＝2或大于2)、乳酸、乳酸盐等。
[0066]
油溶性低分子量保湿剂可以是胆固醇、胆固醇酯等。
[0067]
水溶性聚合物可以是羧乙烯基聚合物、聚天冬氨酸、黄蓍胶、黄原胶、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、水溶性甲壳素、壳聚糖、糊精等。
[0068]
油溶性聚合物可以是聚乙烯吡咯烷酮
‑
二十碳烯共聚物、聚乙烯吡咯烷酮
‑
十六碳烯共聚物、硝基纤维素、糊精脂肪酸酯、高分子量硅氧烷等。
[0069]
润肤剂可以是长链酰基谷氨酸胆固醇酯、胆固醇羟基硬脂酸酯、12
‑
羟基硬脂酸、硬脂酸、松香酸、羊毛脂脂肪酸胆固醇酯等。
[0070]
表面活性剂可以是非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂等。
[0071]
非离子表面活性剂可以是自乳化单硬脂酸甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯(poe)山梨糖醇酐脂肪酸酯、poe山梨糖醇脂肪酸酯、poe甘油脂肪酸酯、poe烷基醚、poe脂肪酸酯、poe氢化蓖麻油、poe蓖麻油、聚氧乙烯/聚氧丙烯(poe/pop)共聚物、poe/pop烷基醚、聚醚改性的硅氧烷、月桂酸烷醇酰胺、氧化烷基胺、氢化大豆磷脂等。
[0072]
阴离子表面活性剂可以是脂肪酸皂、α
‑
酰基磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷基硫酸盐、poe烷基醚硫酸盐、烷基酰胺硫酸盐、烷基磷酸酯、poe烷基磷酸酯、烷基酰胺磷酸酯、烷酰基烷基牛磺酸盐、n
‑
酰基氨基酸盐、poe烷基醚羧酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基磺基乙酸钠、酰化氢化胶原蛋白肽、全氟烷基磷酸酯等。
[0073]
阳离子表面活性剂可以是烷基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基溴化铵、鲸蜡硬脂基三甲基氯化铵、二硬脂酰二甲基氯化铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、山嵛基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、二乙基氨基乙基酰胺硬脂酸酯、二甲基氨基丙基酰胺硬脂酸酯、羊毛脂衍生物的季铵盐等。
[0074]
两性表面活性剂可以是羧基甜菜碱、氨基甜菜碱、磺基甜菜碱、羟基磺基甜菜碱、氨基磺基甜菜碱、磷酸酯甜菜碱、氨基羧酸盐、咪唑啉衍生物、氨基胺等。
[0075]
有机颜料或无机颜料可以是无机颜料，例如硅酸、二氧化硅、硅酸镁、滑石、绢云母、云母、高岭土、胭脂、粘土、膨润土、钛包覆云母、氯氧化铋、氧化锆、氧化镁、氧化锌、氧化钛、氧化铝、硫酸钙、硫酸钡、硫酸镁、碳酸钙、碳酸镁、氧化铁、群青、氧化铬、氢氧化铬、炉甘
石及其复合物；有机颜料，例如聚酰胺、聚酯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、乙烯基树脂、尿素树脂、酚醛树脂、氟树脂、硅树脂、丙烯酸类树脂、三聚氰胺树脂、环氧树脂、聚碳酸酯树脂、二乙烯基苯
‑
苯乙烯共聚物、丝粉、纤维素、ci颜料黄、ci颜料橙等；或无机颜料和有机颜料的混合物。
[0076]
有机粉末可以是金属皂，例如硬脂酸钙，烷基金属磷酸盐如十六酸锌钠、月桂酸锌、月桂酸钙等，酰基氨基酸的多价金属盐如n
‑
月桂酰
‑
β
‑
丙氨酸钙、n
‑
月桂酰
‑
β
‑
丙氨酸锌、n
‑
月桂酰甘氨酸钙等，氨基磺酸多价金属盐如n
‑
月桂酰牛磺酸钙、n
‑
棕榈酰牛磺酸钙等，n
‑
酰基碱性氨基酸如n
‑
ε
‑
月桂酰
‑
l
‑
赖氨酸、n
‑
ε
‑
棕榈酰赖氨酸、n
‑
α
‑
棕榈酰鸟氨酸、n
‑
α
‑
月桂酰精氨酸、n
‑
α
‑
氢化牛脂脂肪酸酰精氨酸等，n
‑
酰多肽如n
‑
月桂酰甘氨酰甘氨酸等，α
‑
氨基脂肪酸如α
‑
氨基辛酸、α
‑
氨基月桂酸等，聚乙烯、聚丙烯、尼龙、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、二乙烯基苯
‑
苯乙烯共聚物、四氟乙烯等。
[0077]
uv吸收剂可以是对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸戊酯、对氨基苯甲酸辛酯、乙二醇水杨酸酯、水杨酸苯酯、水杨酸辛酯、水杨酸苄酯、水杨酸丁基苯酯、水杨酸高孟酯、肉桂酸苄酯、对甲氧基肉桂酸2
‑
乙氧基乙酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、二对甲氧基肉桂酸单
‑2‑
乙基己烷甘油酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、二异丙基和二异丙基肉桂酸酯的混合物、尿刊酸、尿刊酸乙酯、羟基甲氧基二苯甲酮、羟基甲氧基二苯甲酮磺酸及其盐、二羟基甲氧基二苯甲酮、二羟基甲氧基二苯甲酮二磺酸钠、二羟基二苯甲酮、四羟基二苯甲酮、4
‑
叔丁基
‑
4'
‑
甲氧基二苯甲酰甲烷、2,4,6
‑
三苯胺
‑
对(羰基
‑
2'
‑
乙基己基
‑
1'
‑
氧基)
‑
1,3,5
‑
三嗪、2
‑
(2
‑
羟基
‑5‑
甲基苯基)苯并三唑等。
[0078]
杀菌剂可以是桧木醇、三氯生、三氯羟基二苯醚、葡萄糖酸氯己定、苯氧乙醇、间苯二酚、异丙基甲基苯酚、薁、水杨酸、吡啶硫酮锌、苯扎氯铵、光敏剂301、单硝基愈创木酚钠、十一碳烯酸等。
[0079]
抗氧化剂可以是丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、异抗坏血酸等。
[0080]
ph控制剂可以是柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸、苹果酸钠、富马酸、富马酸钠、琥珀酸、琥珀酸钠、氢氧化钠、磷酸一氢钠等。
[0081]
醇可以是高级醇，例如十六烷醇等。
[0082]
另外添加的成分不限于上述成分，并且任何上述成分可在不对本公开的目的和效果产生负面影响的范围内使用，具体地，基于组合物的总重量，以0.001至50重量％、更具体地0.001至3重量％的量使用。
[0083]
本公开的化妆品组合物可以是溶液、乳液、黏性混合物等形式。
[0084]
本公开的化妆品组合物中所含的成分除了活性成分外，还可以包含化妆品组合物中常用的成分，例如，常用的佐剂或载体，如稳定剂、增溶剂、维生素、色素、香料等。
[0085]
本公开的化妆品组合物可以制成本领域通常制备的任何剂型，例如糊剂、霜剂、凝胶剂、粉剂、喷雾剂、溶液剂、乳液剂、混悬剂、洗剂、皂剂、处理剂、含表面活性剂的清洁剂、油剂、粉底、乳液粉底、蜡粉底等，但不限于此。
[0086]
更具体地，可以将其制成制剂，例如润肤液、皮肤柔软剂、爽肤水、收敛剂、洁肤液、牛奶润肤露、保湿乳液、滋养乳液、按摩霜、滋养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精油、滋养精油、面膜、肥皂、洁面泡沫、洁面乳、洁面霜、润肤露或沐浴露。
[0087]
当本公开的制剂为糊剂、霜剂或凝胶剂时，动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄
蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌等可用作载体成分。
[0088]
当本公开的制剂是粉剂或喷雾剂时，乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末可用作载体成分。特别地，喷雾剂还可包含喷射剂，例如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。
[0089]
当本公开的制剂是溶液剂或乳液剂时，可以使用溶剂、增溶剂或乳化剂作为载体成分。实例包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3
‑
丁基二醇油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇或山梨醇酐脂肪酸酯。
[0090]
当本发明的制剂是悬浮剂时，液体稀释剂例如水、乙醇或丙二醇，悬浮剂例如乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯山梨醇酐酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、黄蓍胶等可用作载体成分。
[0091]
当本公开的制剂是含表面活性剂的清洁剂时，脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉鎓衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等可用作载体成分。
[0092]
当本公开的组合物用作皮肤外用药物组合物时，以组合物的总重量计，其可含有0.1至50重量％的黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物作为活性成分。
[0093]
本公开的皮肤外用药物组合物还可含有适当的通常用于制备药物组合物的载体、赋形剂或稀释剂。
[0094]
本公开的药物组合物可配制成口服剂型例如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂，根据常用方法的外用制剂、栓剂和灭菌注射液。可包含在药物组合物中的载体、赋形剂或稀释剂可包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。制剂采用常用的稀释剂或赋形剂，例如填充剂、增量剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等制备。口服固体制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂通过将活性成分与至少一种赋形剂(例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等)混合而制备。此外，除了简单的赋形剂外，还使用润滑剂，例如硬脂酸镁或滑石粉。口服液体制剂包括混悬剂、内服液体制剂、乳液剂、糖浆剂等，除了常用的简单稀释剂例如水和液体石蜡之外，还可含有多种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。肠胃外给药的制剂包括无菌水溶液、非水溶液、混悬剂、乳液剂、冻干制剂和栓剂。作为非水溶液或悬浮剂，可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、可注射酯例如油酸乙酯等。作为栓剂的基质，可以使用硬脂(witepsol)、聚乙二醇(macrogol)、吐温61、可可脂、甘油三月桂酸酯(laurin butter)、甘油明胶等。具体地，可以提供皮肤外用制剂形式的药物组合物，例如软膏、硬膏、洗剂、搽剂、糊剂或巴布剂。
[0095]
本公开的药物组合物可以口服或肠胃外施用。具体而言，肠胃外施用是局部施用。
[0096]
本公开的药物组合物的优选给药剂量可以由本领域技术人员适当地确定，但是它根据患者的状况和体重、疾病的严重程度、药物类型、施用途径和施用时期而变化。为了实现所需效果，本公开的药物组合物可以以0.0001至100mg/kg、具体地0.001至10mg/kg的日剂量施用。施用可以一天进行一次或数次。施用剂量不以任何方式限制本公开的范围。
[0097]
本发明的药物组合物可制成可施用于头皮的任何剂型，例如液体、乳膏、糊剂、固体等。此外，还可制成香波、护发素、护发水、生发液等，用于通过添加常用添加剂来促进毛发生长，也可制成其气雾剂型制剂。
[0098]
因此，根据本公开一方面的药物组合物可以包含药学上可接受的载体或添加剂。
[0099]
药物组合物可以施用于各种哺乳动物，包括大鼠、小鼠、家畜、人等，并且可以例如通过口服、直肠内、静脉内、肌肉内、皮下、硬膜内或脑室内施用来施用。因此，可以将药物组合物制备成本领域已知的普通药物制剂。药物组合物可以制成任何剂型，包括口服制剂、注射剂、栓剂、透皮施用制剂和经鼻施用制剂，而不受限制。具体地，可制成口服制剂，例如液体剂、混悬剂、粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、乳液剂、糖浆剂、气雾剂或提取物。
[0100]
各个制剂可以通过加入药学上可接受的载体或添加剂来制备。作为代表性实例，可以使用选自稀释剂、助流剂、黏合剂、崩解剂、甜味剂、稳定剂和防腐剂中的一种或多于一种作为载体来制备用于口服施用的制剂，以及选自香料、维生素和抗氧化剂中的一种或多于一种可用作添加剂。
[0101]
载体或添加剂可以是任何药学上可接受的载体或添加剂。具体地，稀释剂可以是乳糖、葡萄糖、蔗糖、玉米淀粉、大豆油、微晶纤维素、山梨糖醇、木糖醇或甘露糖醇，助流剂可以是硬脂酸镁或滑石，黏合剂可以是聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基纤维素。而且，崩解剂可以是羧甲基纤维素钙、羟基乙酸淀粉钠、波拉克林钾或交联聚维酮，甜味剂可以是白糖、果糖、山梨糖醇或阿斯巴甜，稳定剂可以是羧甲基纤维素钠、β
‑
环糊精、白蜂蜡或黄原胶，防腐剂可以是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸钾。
[0102]
除了上述成分以外，天然香料例如李子香料、柠檬香料、凤梨香料、香草香料，天然果汁，天然着色剂例如叶绿酸、黄酮，甜味剂例如果糖、蜂蜜、糖醇或糖，或者酸味剂例如柠檬酸或柠檬酸钠可以用作已知添加剂来改善风味。
[0103]
在上述制剂中，用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、非水溶液、混悬剂、乳液剂、冻干制剂、栓剂等。对于非水溶液或混悬剂的制备，可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、可注射酯例如油酸乙酯等。作为栓剂的基质，可以使用硬脂、聚乙二醇、吐温61、可可脂、甘油三月桂酸酯、甘油明胶等。
[0104]
为了达到预防或治疗脱发或前列腺增生的效果，药物组合物的施用剂量可以是0.01至10g/kg/天，特别是1至5g/kg/天，以组合物活性成分提取物的干粉计，每天一次至数次，施用剂量可根据患者的年龄、性别、体重和饮食、排泄率和共同施用的药物适当增加或减少。因此，考虑到有效量的范围来制备根据本公开的药物组合物，并且可以根据专家的判断或个体需要使用专门的方法或以预定的时间间隔来施用配制的单位剂量制剂。
[0105]
本公开的组合物可以是功能性保健食品组合物并且可以包含生理学上可接受的载体或添加剂。
[0106]
在本公开中，“功能性保健食品”是指由功能性保健食品相关法律规定的对人体具有功能性用途的原料或成分制备和加工的食品。“功能性”是指出于控制与人体结构和功能相关的营养物或获得对健康有益的作用例如生理功能的目的而摄取的食品。
[0107]
根据本公开的功能性保健食品组合物可以配制成本领域已知的普通功能性保健食品。功能性保健食品可以制成例如粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、输液剂、液体剂、提取物、口香糖、茶剂、果冻、饮料。可以使用本领域已知的任何载体或
添加剂作为生理上可接受的载体或添加剂。
[0108]
功能性保健食品组合物可以含有黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物，其是本公开组合物的活性成分，基于食品的总重量，其量为0.01至20重量％、具体地0.2至10重量％。当它制备为饮料时，每100ml可以含有0.1至30g、具体地0.2至5g的量的活性成分。
[0109]
除了提取物之外，饮料还可以包含其他成分，并且还可包含饮料中常用的各种调味剂、天然碳水化合物等。天然碳水化合物可以包括常见的糖类，例如单糖(例如葡萄糖、果糖等)、二糖(例如麦芽糖、蔗糖等)和多糖(例如糊精、环糊精等)，以及糖醇例如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等。而且，调味剂可以包括天然调味剂(例如，索马甜、甜叶菊提取物等)和合成调味剂(例如，糖精、阿斯巴甜等)。具体地，每100ml饮料通常可以包含约1至20g、具体地约5至12g的量的天然碳水化合物。
[0110]
下文中，通过具体实施例等更详细地描述本公开。然而，这些实施例等用于更具体地描述本公开，对于本领域技术人员而言明显的是，本公开的范围不受其限制。
[0111]
实施例1
‑
1：黄瓜、茄子和蜗牛混合物的提取物的制备
[0112]
通过将新鲜黄瓜清洗、去掉约2厘米的顶端和底端、垂直对半切开、去掉黄瓜籽然后将其干燥而得到干黄瓜，通过去掉茄茎并且然后将其干燥而得到干茄子，通过将蜗牛蒸10分钟、去除内脏然后将其干燥而得到干蜗牛，以重量比4:2:1混合干黄瓜、干茄子和干蜗牛并且加入10重量当量的水之后，在90℃下进行提取10小时，将提取物在减压下过滤。使用真空蒸发器浓缩滤液，然后冷冻干燥以制备黄瓜、茄子和蜗牛的提取物。
[0113]
实施例1
‑
2：黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物的制备
[0114]
清洗新鲜黄瓜并去除约2厘米的顶端和底端。将新鲜黄瓜垂直切成两半，去除黄瓜籽。加入5重量当量水后，在90℃下进行提取10小时，然后将提取物在减压下过滤。使用真空蒸发器浓缩滤液，然后冷冻干燥以制备黄瓜提取物。
[0115]
通过去除茄茎然后干燥而获得干茄子，在加入5重量当量的水后，在90℃提取10小时。在减压下过滤后，使用真空蒸发器浓缩滤液，然后冷冻干燥以制备茄子提取物。
[0116]
将蜗牛蒸10分钟并且去除内脏后，在加入10重量当量的水之后，在90℃下进行提取10小时。在减压下过滤后，使用真空蒸发器浓缩滤液，然后冷冻干燥以制备蜗牛提取物。
[0117]
通过将黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物以4:2:1的重量比混合来制备黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物。
[0118]
实施例1
‑
3:黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物的制备
[0119]
通过以2:2:1的重量比混合实施例1
‑
2的黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物来制备黄瓜、茄子和蜗牛提取物的混合物。
[0120]
实施例1
‑
4:黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物的制备
[0121]
通过以1:1:1的重量比混合实施例1
‑
2的黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物来制备黄瓜、茄子和蜗牛提取物的混合物。
[0122]
对比实施例1
‑
1：黄瓜提取物和茄子提取物的混合物的制备
[0123]
通过以2:1的重量比混合实施例1
‑
2的黄瓜提取物和茄子提取物来制备黄瓜和茄子提取物的混合物。
[0124]
对比实施例1
‑
2：黄瓜提取物和蜗牛提取物的混合物的制备
[0125]
通过以4:1的重量比混合实施例1
‑
2的黄瓜提取物和蜗牛提取物来制备黄瓜和蜗牛提取物的混合物。
[0126]
对比实施例1
‑
3：茄子提取物和蜗牛提取物的混合物的制备
[0127]
通过以2:1的重量比混合实施例1
‑
2的茄子提取物和蜗牛提取物来制备茄子和蜗牛提取物的混合物。
[0128]
实施例2
‑
1：黄瓜、茄子、蜗牛、侧柏叶和苦参根混合物的提取物的制备
[0129]
通过将新鲜黄瓜清洗、去掉约2厘米的顶端和底端、垂直对半切开、去掉黄瓜籽然后干燥而得到干黄瓜，通过去掉茄茎并且然后干燥而得到干茄子，通过将蜗牛蒸10分钟、去除内脏然后干燥而得到干蜗牛，在干黄瓜、干茄子、干蜗牛、干侧柏叶和干苦参根以4:2:1:1:1的重量比混合并且加入10重量当量的水之后，在90℃下进行提取10小时，然后将提取物在减压下过滤。使用真空蒸发器浓缩滤液，然后冷冻干燥以制备黄瓜、茄子、蜗牛、侧柏叶和苦参根混合物的提取物。
[0130]
实施例2
‑
2：黄瓜、茄子、蜗牛、侧柏叶、苦参根、干姜、墨旱莲、隔山消、当归根和地黄混合物的提取物的制备
[0131]
通过将新鲜黄瓜洗净、去掉约2厘米的顶端和底端、垂直对半切开、去掉黄瓜籽然后干燥而得到干黄瓜，通过去掉茄茎并且干燥而得到干茄子，通过将蜗牛蒸10分钟、去除内脏然后干燥而得到干蜗牛，在干黄瓜、干茄子、干蜗牛、干侧柏叶、干苦参根、干姜、干墨旱莲、干隔山消、干当归根和干地黄以4:2:1:1:1:0.5:0.5:0.5:0.5:0.5的重量比混合并且加入10重量当量的水之后，在90℃下进行提取10小时，然后将提取物在减压下过滤。使用真空蒸发器浓缩滤液，然后冷冻干燥以制备黄瓜、茄子、蜗牛、侧柏叶、苦参根、干姜、墨旱莲、隔山消、当归根和地黄混合物的提取物。
[0132]
实施例2
‑
3：黄瓜、茄子、蜗牛、侧柏叶、苦参根、干姜、墨旱莲、隔山消、当归根和鱼腥草混合物的提取物的制备
[0133]
通过将新鲜黄瓜洗净、去掉约2厘米的顶端和底端、垂直对半切开、去掉黄瓜籽然后干燥而得到干黄瓜，通过去掉茄茎然后干燥而得到干茄子，通过将蜗牛蒸10分钟、去除内脏并且然后干燥而得到干蜗牛，在干黄瓜、干茄子、干蜗牛、干侧柏叶、干苦参根、干姜、干墨旱莲、干隔山消、干当归根和干鱼腥草以4:2:1:1:1:0.5:0.5:0.5:0.5:0.5的重量比混合并且加入10重量当量的水之后，在90℃下进行提取10小时，然后将提取物在减压下过滤。使用真空蒸发器浓缩滤液，然后冷冻干燥以制备黄瓜、茄子、蜗牛、侧柏叶、苦参根、干姜、墨旱莲、隔山消、当归根和鱼腥草混合物的提取物。
[0134]
测试实施例1：人成纤维细胞的细胞毒性
[0135]
由于毛发生长受角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞的分化和增殖调节(hirobe t,histol histopathol 1995；10:223
‑
237)，米诺地尔促进各种皮肤细胞和毛囊细胞的增殖(messenger ag,rundegren j.br j dermatol 2004；150:186
‑
194)，成纤维细胞的增殖被认为是毛发生长的重要因素。
[0136]
人成纤维细胞(atcc,american type culture collection,cat.no.crl
‑
2076)以5x104个细胞/ml的浓度接种在24孔板上。包含10％牛血清白蛋白的imdm(iscove's modified dulbecco's medium；gibco,usa)用作培养基。24小时后，将培养基替换为包含0％牛血清白蛋白的imdm(iscove's modified dulbecco'smedium；gibco,usa)并以1、10、
50或250μg/ml的浓度加入10μl的测试样品(实施例1
‑
1、2
‑
1、2
‑
2或2
‑
3)后，将细胞在含5％co2的培养箱中在37℃下培养3天。培养完成后，去除上清液。加入200μl的5％pbs(磷酸盐缓冲盐水)洗涤后，然后向每孔加入1.0ml的25μg/ml mtt溶液，4小时后去除mtt，向每个孔加入1.0ml dmso后，测定在570nm处的吸光度。细胞存活率通过样品在570nm处的吸光度除以阴性对照组在570nm处的吸光度，然后乘以100来计算。结果见表1。
[0137]
[表1]
[0138]
样品浓度(μg/ml)11050250阴性对照100％100％100％100％实施例1
‑
1101.5％97.7％87.3％
**
85.1％
**
实施例2
‑
190.4％
*
96.4％90.5％
*
90.1％
*
实施例2
‑
295.8％96.7％97.1％96.6％实施例2
‑
398.7％100.1％98.7％105.2％
**
[0139]
作为研究人成纤维细胞增殖的结果，实施例1
‑
1和2
‑
1在高达10μg/ml时未显示细胞毒性，并且甚至在250μg/ml时显示出85％或高于85％的细胞存活率。特别地，实施例2
‑
2在高达250μg/ml时未表现出细胞毒性，实施例2
‑
3甚至在250μg/ml时提高了细胞存活率(**，p<0.01)。
[0140]
测试实施例2:真皮乳头细胞的细胞毒性
[0141]
真皮乳头细胞是毛发真皮乳头的主要组分之一，由真皮乳头细胞产生和分泌的生长因子(碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)、内皮素
‑
1(et
‑
1)、干细胞因子(scf)等)促进毛发基质细胞的生长和分化(paus r,foitzik k.differentiation2004；72:489
‑
511；fujie t等人，j dermatol sci 2001；25:206
‑
212；botchkarev va等人，j investig dermatol symp proc 2003；8:46
‑
55)。一般来说，认为它们在诱导新毛囊和维持毛发生长方面起着关键作用(jahoda ca等人，nature 1984；311:560
‑
562；kamp h等人，exp dermatol 2003；12:662
‑
672；krugluger w等人，exp dermatol 2005；14:580
‑
585.)。因此，可以说真皮乳头细胞的活化和增殖是促进毛发生长的新物质开发的重要因素。
[0142]
将真皮乳头细胞以5x104个细胞/ml的浓度接种到24孔板上。包含10％牛血清白蛋白的dmem(dulbecco’s modified eagle’s medium,brl,usa)用作培养基。24小时后，将培养基替换为包含0％的牛血清白蛋白的dmem(dulbecco’s modified eagle’s medium,brl,usa)并以1、10、50或250μg/ml的浓度加入10μl的各个测试样品(实施例1
‑
1、2
‑
1、2
‑
2或2
‑
3)后，将细胞在含5％co2的培养箱中在37℃下培养3天。培养完成后，去除上清液。加入200μl的5％pbs(磷酸盐缓冲盐水)洗涤并且向每个孔加入1.0ml的25μg/ml mtt溶液后，4小时后去除mtt，向每个孔加入1.0ml dmso后，测定在570nm处的吸光度。细胞存活率使用与测试实施例1相同的方法计算。结果示于表2中。
[0143]
[表2]
[0144]
[0145][0146]
作为真皮乳头细胞增殖的研究结果，在10μg/ml或大于10μg/ml的浓度下，所有测试组的细胞增殖显著增加(*，p＜0.05；**，p＜0.01)。
[0147]
测试实施例3：毛发相关基因表达增加的研究
[0148]
进行rt
‑
pcr(反转录聚合酶链式反应)以研究对于毛发相关基因胰岛素样生长因子1(igf
‑
1)、肝细胞生长因子(hgf)和角质细胞生长因子(kgf)表达的作用。将真皮乳头细胞以80％的密度接种到100mm的细胞培养皿中，然后在37℃下在5％co2培养箱中培养24小时。使用含有10％牛血清白蛋白的dmem(dulbecco’s modified eagle’s medium,brl,usa)作为培养基。在加入100μg/ml样品(实施例1
‑
1、1
‑
2、1
‑
3和1
‑
4；对比实施例1
‑
1、1
‑
2和1
‑
3；实施例2
‑
1、2
‑
2和2
‑
3)或1μg/ml米诺地尔作为阳性对照组后，细胞培养18小时，按照promega方法通过加入1ml trizol((invitrogen,usa)来分离rna。使用紫外检测器在260nm处定量rna后，进行rt
‑
pcr。rt
‑
pcr使用rt
‑
pcr试剂盒(all
‑
in
‑
one rt
‑
pcr kit，superbio，korea)在以下条件下进行40个循环：在50℃下逆转录持续30分钟，然后在96℃下逆转录3分钟、94℃下逆转录30秒、58℃下逆转录30秒和72℃下逆转录1分钟灭活逆转录酶。结果表示为相对于阴性对照组的表达百分比(％)(表3)。
[0149]
[表3]
[0150]
[0151][0152]
与阴性对照组相比，阳性对照组的米诺地尔显著增加了hmf、igf
‑
1和kgf的表达水平(**，p<0.01)。
[0153]
实施例1
‑
1的黄瓜、茄子和蜗牛混合物的提取物的效果与实施例1
‑
2的黄瓜提取物、茄子提取物和蜗牛提取物的混合物的效果相当，与阴性对照组相比，均显著提高了hmf、igf
‑
1和kgf的表达水平(**，p<0.01；***，p<0.005)。实施例1
‑
3和1
‑
4显示，随着黄瓜提取物的重量比降低，hmf、igf
‑
1和kgf的表达水平也降低。
[0154]
对比实施例1
‑
1的不含蜗牛提取物的黄瓜提取物和茄子提取物的混合物，对比实施例1
‑
2的不含茄子提取物的黄瓜提取物和蜗牛提取物的混合物，以及对比实施例1
‑
3的不含黄瓜提取物的茄子提取物和蜗牛提取物的混合物，与阴性对照组相比，显著降低了igf
‑
1的表达水平(***，p<0.005)，对比实施例1
‑
1和对比实施例1
‑
3显著降低了kgf的表达水平(**，p<0.01)。
[0155]
实施例2
‑
1、2
‑
2和2
‑
3显著增加了hmf、igf
‑
1和kgf的表达水平(*，p<0.05；**，p<0.01)。
[0156]
测试实施例4：研究促进毛发生长作用的动物实验
[0157]
使用c57bl/6小鼠研究了本公开的组合物的促进毛发生长的作用。将49到51天龄的c57bl/6n小鼠在毛发生长中期使用蜡在背部完全脱毛。在应用0.2ml的实施例2
‑
1或实施例2
‑
3时，以固体含量为1重量％或20重量％或5重量％的米诺地尔作为阳性对照组，用水稀释，每天一次，持续16天，监测毛发生长效果。使用蒸馏水作为阴性对照组。毛发生长指数随时间的变化通过3分制进行评价(参见表4)。图1显示实验期间小鼠背部图像。0分表示没有
毛发生长，粉红色皮肤，0.5分表示皮肤颜色为灰色，没有可见的毛发生长，1分表示在生长阶段皮肤颜色为灰色或黑色，没有毛发，1.5分表示出现一些毛发生长，2分表示短毛普遍生长，2.5分表示毛发长到中等长度，3分表示毛发完全长密。
[0158]
[表4]
[0159][0160]
直到第12天，测试组之间没有可见的显著差异。在第16天，在实施例2
‑
1的20％的施用组和1％的施用组的所有小鼠中观察到毛发生长。四分之二的小鼠显示背部毛发生长相对均匀，而其他小鼠显示毛发长度差异很大。与实施例2
‑
1的施用组相比，实施例2
‑
3的20％施用组和1％施用组显示出均匀的毛发生长并且具有更长的毛发长度。在实施例2
‑
3的1％施用组中，四分之一的小鼠在背部显示完全生长的毛发。其他三只小鼠显示背部长出浓密的毛发，但背部上方和下方的毛发显示出短毛。阳性对照组，即米诺地尔5％施用组，显示背部毛发生长，但与其他组相比，毛发长度相对较短。
[0161]
测试实施例5：临床测试
[0162]
有脱发症状的40名男性和40名女性对象(55
‑
78岁，居住在韩国京畿道骊州)，随机分为4组，每组20人，并要求使用表5中所述的香波3个月，每天睡前使用一次。
[0163]
[表5]
[0164][0165][0166]
3个月后观察使用每种香波的对象的头发和头皮状况。脱发的改善和头发头皮状况的改善采用5分制评价(1分：恶化；2分：没有变化；3分：略有改善；4分：改善；5分：大幅改善)。表6给出了平均分数。
[0167]
[表6]
[0168] 阴性对照实施例2
‑
1实施例2
‑
3毛发生长2.24.84.6改善头皮屑2.04.84.6改善头皮炎症2.04.44.6改善头皮瘙痒1.44.04.2脱发减少2.04.74.6总体满意度2.24.84.7
[0169]
实施例2
‑
1和2
‑
3在新头发的生长和头皮炎症的减轻或改善方面显示出优异的效果，并且在头发厚度和硬度的改善方面也表现出优异效果。因此，大多数参加测试的对象都表示满意。
[0170]
图2为参与测试的对象在测试前和测试后(左：测试前，右：使用3个月后)头顶周围毛发变化的图像。可以看出，对象头顶周围的毛发密度增加。