用于治疗移植物排斥、闭塞性细支气管炎综合征和移植物抗宿主病的阿维来司他

用于治疗移植物排斥、闭塞性细支气管炎综合征和移植物抗宿主病的阿维来司他
1.政府许可权
2.本发明是在美国国立卫生研究院授予的1ug3tr002448-01下的政府支持下完成的。政府对本发明享有一定的权利。
3.相关申请的交叉引用
4.本技术要求2019年9月17日提交的美国临时专利申请序列号62/901638的优先权的权益。本技术的内容通过引用并入本文。
技术领域
5.本发明涉及治疗或预防移植物排斥和移植物抗宿主病的新方法，所述方法包括向有需要的受试者施用嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他(alvelestat)或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。


背景技术：

6.器官、骨髓和人干细胞的移植促进了人健康。然而，移植受到免疫系统识别非自身组织并对其作出反应的能力的困扰。当组织来自遗传相似但不相同的供体并且存在人白细胞抗原(hla)组织类型不匹配时，这在同种异体移植中尤其是危险。
7.当接受者的免疫系统(特别是接受者的成熟αβ t细胞)识别在供体器官的细胞上表达的外源hla抗原时，可发生实体器官移植后的移植物排斥。其由宿主对错配供体抗原的同种异体反应性决定。急性排斥通常发生在移植后的最初数周至数月内，并且是发展为慢性排斥的主要风险因素。慢性排斥的其他风险因素包括感染。慢性排斥通常发生在移植后数月至数年内，并且是长期移植物丧失的主要原因。临床上，慢性排斥的特征在于导致同种异体移植物实质被纤维性瘢痕组织代替的缓慢过程。
8.肺移植是晚期肺病或不可逆肺衰竭患者的重要治疗选择：全球每年进行大约3,500例肺移植。然而，急性肺排斥在移植后第一年内影响约三分之一的所有肺移植接受者，并可发展为慢性肺排斥(或慢性肺同种异体肺移植物功能障碍(clad))，这仍然是肺移植后长期存活的主要障碍。其是移植后存活超过3个月的肺移植接受者的同种异体移植物丧失和死亡的主要原因。
9.肺移植相关的闭塞性细支气管炎综合征(lt-bos)是最常见形式的clad，并且显现为肺功能下降，此通常是进行性的。其被认为是由会导致闭塞性细支气管炎(ob)的肺同种异体移植物中小气道的炎症、破坏和纤维化引起。诊断后的中位存活期为3-5年[1]。
[0010]
尽管发病率较高，但目前尚无针对慢性移植物排斥、特别是针对lt-bos的适当治疗。lt-bos的目前选择包括免疫阻抑疗法(通常是三重组合)和新大环内酯类药物(例如阿奇霉素(azithromycin))，以及伴随的胃食管反流和感染的治疗。然而，支持目前可用疗法的证据有限，治疗反应通常较差，并且严重不良事件的风险较高：免疫阻抑疗法极大地损害免疫重建，此增加感染的风险。作为最后的手段，可考虑肺再移植，但结果较差并且供体器
官稀缺。因此，ishlt/ats/ers bos工作组在2014年得出结论，目前尚无可用的疗法被证明能在lt-bos的预防或治疗中产生显著益处[2]。
[0011]
作为移植排斥的又一并发症，移植物中含有的成熟供体αβ t细胞针对同种异体移植物的接受者产生的免疫应答可导致移植物抗宿主病(gvhd)。通常，gvhd见于同种异体造血干细胞移植的情况下，但其也在接受输血的免疫缺陷患者中出现。急性gvhd的特征在于对皮肤、肝和胃肠道的损伤，而慢性gvhd具有更多样的显现并且可类似于自身免疫综合征。护理标准是免疫阻抑疗法，但如上文所论述，这带来了不良事件的高风险并增加了感染的风险[10]。
[0012]
因此，需要治疗和预防慢性移植物排斥和gvhd、特别是lt-bos的新疗法。


技术实现要素：

[0013]
令人惊讶的是，嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)抑制剂(例如阿维来司他)可用于治疗和预防gvhd和移植物排斥反应、特别是在lt-bos中。这是意料之外的，因为通常认为gvhd和移植物排斥的主要驱动因子是t和b淋巴细胞，而不是嗜中性粒细胞。先前未证明ne抑制剂对gvhd或移植物排斥有效。具体来说，先前尚未认识到ne抑制剂可用于治疗或预防移植物排斥、特别是lt-bos。
[0014]
因此，本发明提供治疗或预防移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0015]
本发明还提供治疗或预防肺移植相关的闭塞性细支气管炎综合征(lt-bos)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0016]
本发明还提供治疗或预防移植物抗宿主病(gvhd)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0017]
本发明还提供治疗或预防与gvhd相关的闭塞性细支气管炎综合征(bos)、例如与造血干细胞移植相关的bos的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
附图说明
[0018]
图1是显示使用阿维来司他提高的存活率的一系列线图。balb/c小鼠接受8.5 gy tbi，之后从b10.d2供体移植单独t细胞耗尽的骨髓(tcdbm)、tcdbm+2
×
106个t细胞(tcdbm+t2e6)或tcdbm+t2e6+在预混合饮食颗粒中施用(图1a、1c、1e)或以添加到湿食物中的粉末形式施用(图1b、1d、1f)的三个剂量的阿维来司他中的一个(20mg/kg、50mg/kg或200mg/kg)。终点包括存活率(图1a、1b)、体重(图1c、1d)和gvhd评分(图1e、1f)。单独的实验(n＝5)一式两份进行，并且结果合并在图中(n＝10/组)。
[0019]
图2是显示不同剂量的t细胞对存活率(图2a)、体重(图2b)和gvhd评分(图2c)的作用的一系列线图。balb/c小鼠接受8.5 gy全身辐照(tbi)，之后从b10.d2供体移植单独t细胞耗尽的骨髓(tcdbm)、tcdbm+三个不同剂量的t细胞中的一个(1
×
106(tcdbm+t1e6)、1.5
×
106(tcdbm+t1、5e6)、2
×
106(tcdbm+t2e6))、或tcdbm+2
×
106个t细胞+在预混合饮食颗粒中施用的阿维来司他20mg/kg(tcdbm+t2e6+20mg/kg饮食)(n＝5/组)。接受tcdbm+t2e6+20mg/kg的小鼠的存活率高于单独接受tcdb+t2e6(p＜0.001)的小鼠，且与接受较低剂量t细胞的小鼠的存活率相当。
[0020]
图3是接受t细胞耗尽的骨髓+2
×
106个t细胞的小鼠中gvhd的一系列组织学发现。接受tcdbm+t2e6的小鼠的皮肤的组织学检查显示重度皮肤gvhd(a)，伴有明显的透明化/纤维化真皮、脂肪萎缩、毛囊丧失和偶见上皮细胞凋亡；同样，接受tcdbm+t2e6的小鼠的小肠粘膜的组织学检查显示重度肠道gvhd(b)，伴有明显的反应性/再生性上皮，有丝分裂活性和细胞凋亡增加。相反，单独接受tcdbm(无t细胞)的小鼠的皮肤的组织学检查未显示gvhd的体征(c)，伴有真皮内疏松的纤维结缔组织，皮下脂肪组织丰富，上皮和毛囊正常；同样地，单独接受tcdbm的小鼠的肠粘膜的组织学检查未显示gvhd的体征(d)，具有适当的细胞结构和健康外观的上皮。
[0021]
图4是显示gi gvhd的组织学评分的图。接受药物(20mg/kg)的小鼠具有明显较少gvhd(由经验丰富的病理学家以盲法方式评估)。
具体实施方式
[0022]
下面的描述是基于如下理解做出的，即本公开被认为是所要求保护的主题的范例，并且不旨在将所附权利要求限制于所阐释的特定实施方案。本公开提供对各种实施方案和技术的参考。然而，应理解，在本公开的精神和范围内，可进行许多变化和修改。在整个公开内容中使用的标题是为了方便而提供的，并且不应被解释为以任何方式限制权利要求。在任何标题下说明的实施方案可与在任何其他标题下阐释的实施方案组合。
[0023]
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。在整个说明书和随后的权利要求中，除非另有明确说明，否则以下术语定义具有以下含义。
[0024]
除非上下文另有要求，否则在整个本说明书和权利要求中，词语“包含(comprise)”及其变体例如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应以开放、包括性含义解释，即“包括但不限于”。
[0025]
当复数形式用于化合物、盐等时，这也意指单一化合物、盐等。
[0026]
除非使用的上下文清楚地另外指出，否则如本文所用术语“或”通常在包括“和/或”的意义上使用。
[0027]
同样在本文中，通过端点对数值范围的叙述包括包含在所述范围内的所有数值(例如，1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。
[0028]
如本文所用术语“约”意指所述值
±
所述值的10％。
[0029]
如本文所用，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是获得有益或所需结果的方法。对于本发明的目的，有益或所需结果包括但不限于缓和症状和/或减轻与疾病或疾患相关的症状的程度。“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括以下中的一种或多种：a)抑制疾病或疾患(例如，减轻由疾病或疾患引起的一种或多种症状，和/或减轻疾病或疾患的程度)；b)减缓或阻止与疾病或疾患相关的一种或多种症状的发展(例如，稳定疾病或疾患，延迟疾病或疾患的恶化或进展)；和c)缓解疾病或病症，例如引起临床症状的消退、改善
疾病状态、延迟疾病的进展、提高生活质量和/或延长存活期。
[0030]
如本文所用，“预防(prevention)”或“预防(preventing)”是指保护免于疾病或病症发作使得疾病的临床症状不发展的方案。因此，“预防”涉及在受试者中可检测到疾病的体征之前向受试者施用疗法(例如施用治疗物质)。受试者可以是处于发展疾病或病症的风险下的个体，例如具有已知与疾病或病症的发展或发作相关的一个或多个风险因素的个体。因此，本发明中的术语“预防”因此包括向将进行移植或最近已进行移植但尚未发展相关疾患的受试者施用。
[0031]
如本文所用术语“治疗有效量”或“有效量”是指有效引发所需生物学或医学反应的量，包括当施用给受试者用于治疗疾病时足以对疾病进行这种治疗的化合物的量。有效量将根据具体化合物和待治疗受试者的特征(例如年龄、体重等)而变化。有效量可包括一定范围的量。如本领域所理解，有效量可呈一个或多个剂量，即可能需要单一剂量或多个剂量来达成所需治疗终点。在施用一种或多种治疗剂的情况下可考虑有效量，并且如果与一种或多种其他剂联合，可以或已实现所需或有益结果，则可考虑以有效量给予单一剂。由于化合物的组合作用(例如，相加或协同作用)，任何共施用的化合物的合适剂量可任选地降低。
[0032]
术语“溶剂合物”在本文中用于描述包含本发明化合物和一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如乙醇或水)的分子复合物。当溶剂是水时，采用术语“水合物”，并且为避免任何疑问，术语“溶剂合物”包涵术语“水合物”。
[0033]
术语“药学上可接受的盐”意指生理学或毒理学上可耐受的盐，并且在适当时包括药学上可接受的碱加成盐和药学上可接受的酸加成盐。例如，当化合物含有碱性基团(例如氨基)时，可形成的药学上可接受的酸加成盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、磷酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、萘二磺酸盐、马来酸盐、己二酸盐、富马酸盐、马尿酸盐、樟脑酸盐、昔萘酸盐、对乙酰氨基苯甲酸盐、二羟基苯甲酸盐、羟基萘酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、油酸盐、硫酸氢盐等。也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。有关合适盐的综述，参见stahl和wermuth的“handbook of pharmaceutical salts：properties，selection and use”(wiley-vch，2011)。
[0034]“药学上可接受的”或“生理学上可接受的”是指适用于药学用途的化合物、盐、组合物、剂型等。
[0035]
术语“受试者”优选地是指通常已接受移植或即将接受移植的人。
[0036]
本文引用的所有文件均出于所有目的通过引用整体并入。
[0037]
阿维来司他
[0038]
本发明中使用的优选的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂是阿维来司他。
[0039]
阿维来司他是在wo 2005/026123 a1(实施例94，第85页)和[3]中描述的强效、口服生物可利用的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，所述文献通过引用整体并入本文。阿维来司他具有化学名称n-{[5-(甲磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-6-甲基-5-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-2-氧代-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1，2-二氢吡啶-3-甲酰胺，以及以下化学结构：
[0040][0041]
阿维来司他也称为azd9668和mph996。
[0042]
阿维来司他可以任何药学上可接受的形式(例如任何游离碱形式、盐形式和/或溶剂合物形式)用于本发明。阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物可以任何药学上可接受的物理形式、合适地固体形式存在。
[0043]
某些阿维来司他的盐描述于wo 2010/094964 a1中，其通过引用整体并入本文。阿维来司他的所述盐包括甲苯磺酸盐、对二甲苯-2-磺酸盐、氯化物、甲磺酸盐、乙磺酸盐、1，5-萘二磺酸盐和硫酸盐。
[0044]
优选地，在本发明的方法中使用阿维来司他游离碱或阿维来司他甲苯磺酸盐，更优选阿维来司他甲苯磺酸盐。
[0045]
阿维来司他也可以药学上可接受的前药形式用于本发明的任何方法中。
[0046]
嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂
[0047]
嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)是一种攻击并渐进地损害肺组织的酶。抑制ne的化合物综述于[13]中，并且从各种公开案中已知，所述公开案包括wo2017207430、wo2017102674、wo2016050835、wo2016050835、wo2016016368、wo2016016366、wo2016016365、wo2016016364、wo2016016363、wo2015124563、wo2016020070、wo2015091281、wo2014135414、wo2014122160、wo2015096873、wo2015096872、wo2014029832、wo2014029831、wo2014029830、wo2014009425、wo2013084199、wo2013037809、wo2011103774、wo2011110858、wo2011110859、wo2011110852、wo2011039528、wo2010034996、wo2009061271、wo2009058076、wo2009060206、wo2007137080、wo2007137080、wo2007140117、wo2008036379、wo2008036379、wo9962538、wo9962538、wo9962514、wo9739028、wo9616080、wo9533763、wo9533762、wo9527055、wo9311760、wo9220357、wo9215605、wo9215605、wo03058237、wo03031574、wo03031574、wo2008030158、wo2007129963、wo2007129962、wo2006098684、wo2005026124、wo2005026123、wo2005021509、wo2005021512、wo2004043924、wo2009060158、wo2009037413、wo2009013444、wo2007129060、wo2007107706、wo2007107706、wo2006136857、wo2006082412、wo2006082412、wo9623812、wo9521855、wo9401455、wo9324519、wo9321214、wo9321210、wo9321213、wo9321209、wo9321212、wo2006070012、wo2005082863、wo2005082863、wo2005082864、wo9912933、wo9912933、wo9912931、wo9736903、wo2004020412、wo2008104752、wo2008097676、wo200809767、wo2008085608，其各自通过引用并入。这些公开案中描述的每一种嗜中性粒细胞抑制剂都可用于本发明的方法中，并且如同在本文中单独公开的用于本发明的方法中一样提及。
[0048]
除了优选的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂阿维来司他之外，可用于本发明的其
他示例性嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂包括西维来司他(sivelestat)、ono-5046-na、地来司他(depelestat)、普拉斯汀(prolastin)、krp-109、dx-890、前弹力素(pre-elafin)、mnei、bay 85-8501、pol6014、α1-at、西丁醇(sirtinol)、ono-6818(2-(5-氨基-6-氧代-2-苯基-1，6-二氢-嘧啶-1-基)-n-[(1r，2r)-1-(5-叔丁基-1，3，4-噁二唑-2-基)-1-羟基-3-甲基丁-2-基]乙酰胺)、弹性蛋白酶抑制剂(elastatinal)、ssr 69071(2-[[6-甲氧基-4-(1-甲基乙基)-1，1-二氧代-3-氧代-1，2-苯并异噻唑-2(3h)-基]甲氧基]-9-[2-(1-哌啶基)哌啶基]-4h-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮)和m0398(n-(甲氧基琥珀酰基)-l-丙氨酰-l-丙氨酰-l-脯氨酰-l-缬氨酸氯甲基酮)；以及其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0049]
术语嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂包括化合物的所有药学上可接受的形式，例如所有药学上可接受的盐、溶剂合物、异构体和前药形式。
[0050]
在某些实施方案中，嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂是小分子化合物，即具有小于约900道尔顿的分子量。
[0051]
优选地，嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂是人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制剂。
[0052]
尽管本发明的许多实施方案涉及阿维来司他，但应理解，对于本文描述的每一和每个涉及“阿维来司他”的实施方案，本发明还提供了涉及“嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂”的用途的相应实施方案。
[0053]
治疗
[0054]
本发明通常提供治疗或预防有需要的受试者的移植物排斥、急性移植物排斥、慢性移植物排斥、clad、lt-bos、gvhd等的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0055]
因此，本发明提供治疗或预防有需要的受试者的移植物排斥的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0056]
移植物排斥也可称为器官移植排斥。
[0057]
本文所述方法可用于治疗或预防急性移植物排斥。在某些实施方案中，所述方法用于治疗急性移植物排斥。在其他实施方案中，所述方法用于预防急性移植物排斥。
[0058]
本文所述方法可用于治疗或预防慢性移植物排斥。在某些实施方案中，所述方法用于治疗慢性移植物排斥。在其他实施方案中，所述方法用于预防慢性移植物排斥。
[0059]
移植物可包含任何实体器官，特别是那些经常被移植的实体器官。因此，移植物可包含一个或多个选自由肾、心脏、肝、肺和胰腺组成的组的器官。
[0060]
心脏(cardiac)(即心脏(heart))同种异体移植物的慢性排斥显现为心脏同种异体移植物血管病变(cav)。这通常特征在于冠状血管闭塞。cav的5年发病率为30-40％。因此，本发明提供治疗或预防有需要的受试者的cav的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0061]
肾同种异体移植物的慢性排斥显现为心脏同种异体移植物肾病(can)。can是肾功能恶化的主要原因，并且占10年移植物丧失的几乎40％。因此，本发明提供治疗或预防有需要的受试者的can的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0062]
在优选的实施方案中，移植物包括肺。移植物可以是单肺移植或双肺移植物。移植
物可以是心-肺移植物。因此，本发明提供治疗或预防有需要的受试者的肺移植排斥的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。其可以是急性肺移植排斥或慢性肺移植排斥。
[0063]
肺同种异体移植物的慢性排斥显现为慢性同种异体肺移植物功能障碍(clad)。因此，本发明治疗或预防有需要的受试者的clad的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0064]
clad最常见的表型是肺移植相关的闭塞性细支气管炎综合征(lt-bos)。闭塞性细支气管炎(bronchiolitis obliterans)也可称为闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis)。典型特征包括闭塞性肺功能缺陷和呼气ct上的空气滞留/马赛克衰减。因此，本发明提供治疗或预防有需要的受试者的lt-bos的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0065]
根据本发明的预防lt-bos的方法对于处于lt-bos风险下的受试者特别有用。此类受试者可具有一种或多种选自由以下组成的组的风险因素：原发性移植物功能障碍、胃食管反流、感染、气道缺血、急性排斥、淋巴细胞性细支气管炎、微生物(如铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)和烟曲霉菌(aspergillus fumigatus))感染和定植、供体和接受者遗传物质、颗粒物质和存在hla抗体或针对自身抗原(例如k-α1微管蛋白和v型胶原)的抗体。
[0066]
本发明提供治疗或预防有需要的受试者的gvhd的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。gvhd在组织移植后显现。在一些实施方案中，移植物选自由皮肤、造血干细胞、血液和骨髓组成的组。在优选的实施方案中，移植物是造血干细胞。
[0067]
gvhd可为急性移植物抗宿主病(agvhd)。疾病可为慢性移植物抗宿主病(cgvhd)。急性gvhd通常特征在于对皮肤、肝和胃肠道的损伤，而慢性gvhd通常具有更多样的显现并且可类似于自身免疫综合征，伴有例如嗜酸性筋膜炎、硬皮病样皮肤病以及唾液腺和泪腺受累。
[0068]
另一个实施方案提供抑制包括agvhd和cgvhd在内的gvhd的症状发作的方法，所述方法包括向同种异体造血干细胞移植的接受者施用药学有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0069]
在上述涉及gvhd的方法中，gvhd的特征可在于对选自由眼、关节、筋膜、生殖器官、肺、肝、皮肤或胃肠道(例如口、食管)组成的组中的一种或多种的损伤。
[0070]
具体来说，在上述涉及gvhd的方法中，gvhd的特征可在于对选自由肺、肝、皮肤或胃肠道组成的组中的一种或多种的损伤。
[0071]
慢性gvhd可根据各种标准进行分类。美国国立卫生研究院2005年和2014年关于慢性gvhd临床试验标准的共识开发项目标准化了关于慢性gvhd分类系统的术语[16]。
[0072]
一个分类系统是nih严重程度评分，基于受累器官的数量和严重程度分为轻度、中度或重度。因此，在本发明涉及治疗cgvhd的方法中，受试者可患有cgvhd，根据nih严重程度评分为轻度、中度或重度。具体来说，cgvhd可为中度或重度，通常为重度。此外，本文提供用于改善患有cgvhd的受试者的cgvhd严重程度评分的方法，所述方法包括施用阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0073]
基于患者报告结果的另一个分类系统是lee cgvhd症状量表[17]。因此，本文提供用于改善cgvhd患者的lee cgvhd症状量表的方法，所述方法包括施用阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。具体来说，本文提供改善患有影响肺的cgvhd的受试者的lee cgvhd症状量表肺评分的方法，所述方法包括施用阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0074]
本发明还提供治疗或预防与gvhd相关的闭塞性细支气管炎综合征(bos)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。在优选的实施方案中，受试者正在接受造血干细胞移植。还提供用于治疗或预防与gvhd相关的闭塞性细支气管炎综合征(bos)的阿维来司他或其药学上可接受的盐。还提供阿维来司他或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防与gvhd相关的闭塞性细支气管炎综合征(bos)的药剂中的用途。
[0075]
在所述方法中，可在移植前向受试者施用ne抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。例如，可在移植前14天、7天、3天、2天或1天开始阿维来司他施用。
[0076]
在所述方法中，可在移植后向受试者施用ne抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。例如，可在移植当天或移植后1天、2天、3天、7天或14天开始阿维来司他施用。
[0077]
根据本发明的涉及bos、特别是lt-bos的方法还可包括改善受试者的一个或多个肺功能参数。
[0078]
具体来说，根据本发明的方法可改善受试者的fev1。用力呼气量(fev)是在设定的时间段、例如1秒(fev1)内测量的最大用力产生的空气呼气量。
[0079]
具体来说，根据本发明的方法可改善受试者的预测fev1％。预测fev1％是受试者的fev1与具有相似匹配种族或族裔、性别、年龄、身高和体重的正常人的预测fev1之比，以百分比表示。
[0080]
因此，还提供通过施用有效量的ne抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物来增加患有lt-bos的受试者中预测的fev1％的方法。
[0081]
在特定实施方案中，与基线fvc％预测测量值相比，用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物治疗使预测fev1％增加至少约1％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％、7.0％、8.0％、9.0％、10％、15％、20％、30％、40％或50％。在其他实施方案中，用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物治疗来预防fev1％恶化。
[0082]
根据本发明的涉及lt-bos的方法还可包括提高受试者的bos等级。1993年采用的bos分类方案提供一种基于移植后肺功能下降的严重程度的分期系统，并已用于临床决策和研究目的。这个分期系统最近一次修改是在2002年[2]。根据本发明使用2002年的bos分类方案：
[0083][0084]
因此，在涉及lt-bos的治疗的实施方案中，用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物治疗将bos分级提高了至少1级。在涉及lt-bos的治疗的其他实施方案中，用有效量的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物治疗来预防bos分级恶化。
[0085]
bos的诊断可由熟练的临床医生进行。成像测试(例如高分辨率胸部ct扫描)和肺功能测试可有助于检测bos。也可使用胸部x射线。也可进行手术肺活检以诊断bos。肺活检可显示小气道受累伴纤维蛋白性管腔闭塞。支气管肺泡灌洗(bal)可显示嗜中性粒细胞和/或淋巴细胞炎症。
[0086]
本发明中还提供治疗或预防与结缔组织疾病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、感染、中毒性烟雾暴露或史蒂文斯-约翰逊综合征(stevens-johnson syndrome)相关的bos的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0087]
在一些实施方案中，本发明方法中待治疗的患者的基线fev1为预测fev1的30％或更高，例如基线fev1为35％或更高，或40％或更高。患者的基线fev1可为预测fev1的20-90％，例如30-80％、35-75％或40-50％。
[0088]
不希望受理论的束缚，认为阿维来司他由于其抑制嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的能力而在本发明的方法中是有益的。因此，本发明还提供抑制患有本文所述任何疾患(包括移植物排斥或gvhd、特别是lt-bos)或处于其风险下的受试者的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。还提供通过抑制嗜中性粒细胞弹性蛋
白酶来治疗或预防本文所述任何疾患(包括移植物排斥或gvhd、特别是lt-bos)的上述方法中的每一者，所述方法包括向所述受试者施用有效量的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0089]
本发明还涉及用于改善本公开中提及的受试者、特别是患有影响肺的gvhd(例如慢性gvhd)的受试者的肺功能的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的ne抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0090]
本发明还涉及预防本公开中提及的受试者/特别是患有影响肺的gvhd(例如慢性gvhd)的受试者的肺功能恶化的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的ne抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0091]
本发明还涉及使本公开中提及的受试者、特别是患有影响肺的gvhd(例如慢性gvhd)的受试者的肺功能恶化稳定的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的ne抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。
[0092]
本发明还涉及预防本公开中提及的受试者、特别是患有gvhd(例如cgvhd)的受试者的疾病进展或恶化的方法。本发明还涉及用于使本公开中提及的受试者、特别是患有gvhd(例如cgvhd)的受试者的疾病稳定的方法。
[0093]
本发明还涉及用于预防本公开中提及的受试者、特别是患有gvhd(例如cgvhd)的受试者的疾病进展的方法。本发明还涉及用于使本公开中提及的受试者、特别是患有gvhd(例如cgvhd)的受试者的疾病稳定的方法。
[0094]
还提供用于治疗或预防移植物排斥、例如慢性或急性移植物排斥的阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。还提供用于治疗或预防肺移植相关的闭塞性细支气管炎综合征的阿维来司他或其药学上可接受的盐。还提供用于治疗或预防gvhd的阿维来司他或其药学上可接受的盐。
[0095]
还提供阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物在制造用于治疗或预防移植物排斥(例如慢性或急性移植物排斥)的药剂中的用途。还提供阿维来司他或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防肺移植相关的闭塞性细支气管炎综合征的药剂中的用途。还提供阿维来司他或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防gvhd的药剂中的用途。
[0096]
给药
[0097]
对于上文提及的治疗适应症，待施用的嗜中性粒细胞抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物的剂量将取决于所治疗的疾病、疾病的严重程度、施用方式、患者的年龄、体重和性别。此类因素可由主治医师确定。然而，一般来说，当以0.1mg/kg至100mg/kg(以活性成分测量)的日剂量向人施用化合物时，获得令人满意的结果。
[0098]
合适地，日剂量为每日0.5mg至1000mg，例如每日50mg至800mg，特别是每日50mg至600mg，更特别是120mg至550mg，甚至更特别是200mg至500mg。例如，每日剂量为约每日240mg、270mg、300mg、330mg、360mg、390mg、420mg、450mg或480mg。剂量可以单剂量或分剂量施用，例如其中总日剂量分成两个或更多部分，在一天中施用。剂量可每日施用，或每天多次(例如每日两次)、或每周多次、或每月、或每月多次施用。
[0099]
在特定实施方案中，每天两次(bid给药)施用阿维来司他或其药学上可接受的盐
和/或溶剂合物。在另一个实施方案中，每天两次施用阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物，其中每一剂量相当于高达240mg的阿维来司他游离碱，例如60mg每天两次、90mg每天两次、120mg每天两次、150mg每天两次、180mg每天两次、210mg每天两次或240mg每天两次。具体来说，每天两次施用120mg，或每天两次施用240mg。
[0100]
化合物可根据有效给药方案施用给个体持续所需的时间段或持续时间，例如至少一周、至少约一个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约6个月、至少约12个月、至少约24个月或更长。例如，在受试者生命的持续时间内，化合物可按每日或间歇方案施用。
[0101]
在本发明的所有方法中，阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物的剂量可根据剂量递增方案施用。这允许安全地剂量递增至高达例如240mg每日两次的标准的阿维来司他每日剂量。例如，根据本发明的高达标准240mg每日两次的阿维来司他剂量的剂量递增方案包括以60mg阿维来司他的剂量每日两次持续第一时间段、之后120mg阿维来司他的剂量每日两次持续第二时间段、之后180mg阿维来司他的剂量每日两次持续第三时间段、其后240mg阿维来司他的剂量每日两次来施用阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。第一、第二和第三时段可各自为10-20天，例如各自为约两周。具体来说，阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物以60mg每日两次持续两周、之后120mg每日两次持续两周、之后180mg每日两次持续两周、其后240mg每日两次来施用。剂量称为阿维来司他游离碱的当量。
[0102]
组合物
[0103]
嗜中性粒细胞抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物是以药物组合物的形式施用给受试者。
[0104]
因此，本发明提供治疗或预防本文所述的任何疾患的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含有效量的嗜中性粒细胞抑制剂、特别是阿维来司他或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0105]
药物组合物可用一种或多种药学上可接受的赋形剂制备，所述赋形剂可根据常规实践进行选择。
[0106]“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂，其已由美国食品和药品管理局批准用于人。所有组合物均可任选地含有赋形剂，例如在shesky等人，handbook of pharmaceutical excipients，第8版，2017中列出的那些赋形剂。赋形剂可包括抗坏血酸和其他抗氧化剂、螯合剂(例如edta)、碳水化合物(例如糊精)、羟烷基纤维素、羟烷基甲基纤维素、硬脂酸等。
[0107]
药物组合物包括适用于各种施用途径、包括口服施用的那些药物组合物。组合物可以单位剂型存在并且可通过药学领域众所周知的任何方法制备。此类方法包括使活性成分(例如，本公开的化合物或其药用盐)与一种或多种药学上可接受的赋形剂缔合的步骤。组合物可通过使活性成分与液体赋形剂或微细分散的固体赋形剂或两者均匀且紧密地缔合、然后(如果需要)使产品成型来制备。技术和配方通常可在remington：the science and practice of pharmacy，第22版，2012中找到。
[0108]
优选的药物组合物是固体剂型，包括固体口服剂型，例如片剂。片剂可含有赋形
剂，包括助流剂、填充剂、粘合剂等。
[0109]
在实施本文所述的方法中，药物组合物可以使化合物生物可利用的任何形式和途径施用。因此，药物组合物可通过多种途径施用，所述途径包括口服和肠胃外途径，更具体地通过吸入、皮下、肌肉内、静脉内、经皮、鼻内、直肠、阴道、眼部、局部、舌下和颊、腹膜内、静脉内、动脉内、经皮、舌下、肌肉内、直肠、经颊、鼻内、脂肪内、鞘内和通过例如导管或支架的局部递送。优选地，药物组合物是口服施用。
[0110]
当用于口服使用时，可制备片剂、含锭、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉剂或颗粒、乳液、硬胶囊或软胶囊、糖浆或酏剂。本文所述的适合口服施用的组合物可以离散单位(单位剂型)的形式存在，包括但不限于胶囊、扁囊剂或片剂，各自含有预定量的活性成分。优选地，药物组合物是片剂。
[0111]
水性组合物可以无菌形式制备，并且当意图通过非口服施用递送时，通常可以是等渗的。
[0112]
可与非活性成分组合以产生剂型的活性成分的量可根据预期的治疗受试者和特定的施用方式而变化。
[0113]
组合疗法
[0114]
在本发明中，所述方法可还包括向受试者施用一种或多种另外的治疗剂的步骤。一种或多种另外的治疗剂的施用可在嗜中性粒细胞抑制剂的施用之前、同时或之后发生。
[0115]
另外的治疗剂包括免疫阻抑剂、抗感染剂、抗炎剂和止痛剂。
[0116]
在特定实施方案中，一种或多种另外的治疗剂是免疫阻抑剂。例如，可施用一种、两种或优选地三种免疫阻抑剂。
[0117]
免疫阻抑剂可例如选自由以下组成的组：皮质类固醇(例如甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松(dexamethasone))、janus激酶抑制剂(例如托法替尼(tofacitinib))、钙调神经磷酸酶抑制剂(例如环孢素(cyclosporine)、他克莫司(tacrolimus))、mtor抑制剂(例如西罗莫司(sirolimus)、依维莫司(everolimus)、替西罗莫司(temsirolimus))、生物剂(例如阿巴西普(abatacept)、阿达木单抗(adalimumab)、阿那白滞素(anakinra)、赛妥珠单抗(certolizumab)、依那西普(etanercept)、戈利木单抗(golimumab)、英利昔单抗(infliximab)、依奇珠单抗(ixekizumab)、那他珠单抗(natalizumab)、利妥昔单抗(rituximab)、苏金单抗(secukinumab)、托珠单抗(tocilizumab)、优特克单抗(ustekinumab)、维多珠单抗(vedolizumab))、单克隆抗体(例如巴利昔单抗(basiliximab)、达克珠单抗(daclizumab))、酪氨酸激酶抑制剂(例如伊马替尼(imatinib))、沙利窦迈(thalidomide)、喷司他汀(pentostatin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、麦考酚酯(mycophenolate)和甲氨碟呤(methotrexate)。
[0118]
在某些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用免疫阻抑剂的三重组合(例如他克莫司、麦考酚酯和皮质类固醇)的步骤。
[0119]
一种或多种另外的治疗剂可为抗感染剂。抗感染剂包括抗生素、抗真菌剂、抗蠕虫药、抗疟药、抗原虫药、抗结核剂和抗病毒剂。
[0120]
一种或多种另外的治疗剂可选自由以下组成的组：泼尼松、甲基泼尼松、布地奈德、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、环孢素、他克莫司、西罗莫司、吗替
麦考酚酯(mycophenolate mofetil)、噻氯咪索(tilomisole)、依木巯(imuthiol)、抗胸腺细胞球蛋白、硫唑嘌呤、偶氮二甲酰胺、双吲哚基马来酰亚胺viii、布喹那(brequinar)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、ctla4-ig、环磷酰胺(cyclophosphamide)、去氧精胍菌素(deoxyspergualin)、地塞米松、来氟米特(leflunomide)、巯嘌呤、6-巯嘌呤、甲氨喋呤、甲基泼尼松龙、咪唑立宾(mizoribine)、单磷酸咪唑立宾、莫罗单抗cd3(muromonab cd3)、吗替麦考酚酯、okt3、rho(d)免疫珠蛋白、维生素d类似物、mc1288)、达克珠单抗、英利昔单抗、利妥昔单抗、托珠单抗、阿伦单抗(alemtuzumab)、甲氨喋呤、抗胸腺细胞球蛋白、地尼白介素2(denileukin diftitox)、坎帕斯-1h(campath-1h)、角质细胞生长因子、阿巴西普、瑞美特塞-l辛二酰苯胺羟肟酸(remestemcel-l suberoylanilide hydroxamic acid)、喷司他汀、沙利窦迈、甲磺酸伊马替尼、环磷酰胺、氟达拉滨(fludarabine)、okt3、美法仑(melphalan)、塞替哌(thiopeta)、和淋巴细胞免疫球蛋白、抗胸腺细胞和球蛋白。
[0121]
还应理解，单独地或在组合疗法或方案中组合施用的每种剂可以初始剂量施用，所述初始剂量然后可随时间由医学专业人员降低以达到较低的有效剂量。例如，在本文的组合和方案中，可以约1-2mg/kg/天的剂量向人患者施用全身性糖皮质类固醇(皮质类固醇)，例如泼尼松和甲基泼尼松。mtor剂的初始每日剂量包括每日一次给予的2-40mg的西罗莫司和每日两次给予的0.25-1mg的依维莫司。钙调神经磷酸酶剂的初始每日剂量包括约0.025-0.2mg/kg/天的他克莫司和约2.5-9mg/kg/天的环孢素。吗替麦考酚酯可以约250-3,000mg/天的初始每日剂量施用。这些剂中的每一种可在造血细胞移植后与药学有效量的如本文所述的syk抑制剂组合施用。在本文的不同实施方案中，可将用于治疗gvhd的剂局部例如以局部软膏或乳膏的形式或于滴眼制剂中施用于需要这种治疗的人。
[0122]
本发明还提供治疗gvhd的方法，所述方法还包括施用光疗法(也称为体外光化学疗法)的步骤。
[0123]
实施例
[0124]
通过参考以下实施例可更充分地理解本文提供的实施方案。这些实施例旨在说明本文提供的方法，但不以任何方式限制。对于本领域技术人员显而易见的是，可以进行各种改变和修改。这种修改也旨在落入所附权利要求的范围内。
[0125]
以下实施例中使用的阿维来司他可根据wo 2005/026123 a1(实施例94，第85页)合成。
[0126]
实施例1-阿维来司他是嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)的强效和特异性抑制剂
[0127]
如[3]中进一步讨论，获得以下结果。
[0128]
阿维来司他对人ne具有高结合亲和力(kd＝9.5nm)并有效抑制ne活性。阿维来司他对人ne的计算的
p
ic
50
(ic
50
)和ki值分别为7.9(12nm)和9.4nm。
[0129]
与另一种丝氨酸蛋白酶组织蛋白酶g相比，阿维来司他对人ne的选择性高至少600倍，并且与其他丝氨酸蛋白酶(蛋白酶-3、胰凝乳蛋白酶、胰弹性蛋白酶和胰蛋白酶)相比，对人ne的选择性高至少1900倍。
[0130]
阿维来司他对来自其他物种(包括小鼠)的ne显示出良好的交叉效力。
[0131]
全血、细胞相关和爆发释放测定中的
p
ic
50
(ic
50
)值分别为7.36(44nm)、7.32(48nm)和7.30(50nm)。
[0132]
所呈现的研究结果显示阿维来司他是一种特异性、强效和快速可逆的人ne抑制
剂。生化测定中阿维来司他对ne的强效抑制活性在全血和基于细胞的系统中得到证实。
[0133]
实施例2-阿维来司他显示针对gvhd的保护作用
[0134]
进行这个临床前研究以评估阿维来司他在预防gvhd中的功效。鉴于阿维来司他对鼠和人ne具有类似效力(pic50 6.5对比7.9)，临床前鼠研究是合理的[3]。
[0135]
本研究中使用的gvhd的鼠模型在[4]中进行了描述。balb/c接受者接受了致死辐照(8.5gy全身辐照)，之后移植来自b10.d2供体的t细胞耗尽的骨髓+/-纯化的t细胞。阴性对照仅接受t细胞耗尽的骨髓(tcdbm)(无t细胞，无gvhd)，而阳性对照接受tcdbm+2
×
106个t细胞(100％致死性gvhd)。在治疗组中，小鼠在第-1至45天通过预先混合的定制饮食或作为粉末添加到湿食物中以每天20mg/kg、50mg/kg和200mg/kg接受阿维来司他。这些剂量是基于理论上的考虑和先前关于啮齿动物的工作(例如[5])。选择这个方案以确保在辐照之前(第0天)至gvhd死亡期间有足够的药物水平。监测存活率(主要终点)、体重和gvhd评分(临床和组织学)([4]、[6])。为确保科学严谨性，实验一式两份进行。
[0136]
这些实验证实，与单独接受tcdbm的小鼠中100％存活率相比，向tcdbm中添加2
×
106个t细胞(tcdbm+t2e6)在5天时导致致死性gvhd，并显示与tcdbm+t2e6相比，在预混合的饮食颗粒中(图1a)或以与湿食物混合的粉末形式(图1b)添加阿维来司他导致存活率显著提高(对数秩p＝0.001 tcdbm+t2e6与tcdbm+t2e6+20mg/kg饮食；对数秩p＝0.01 tcdbm+t2e6与tcdbm+t2e6+20mg/kg湿食物)。实验(每组n＝5)一式两份进行，在每个剂量下评估总共20只小鼠(n＝10饮食，n＝10湿食物)。难以估计对体重或gvhd评分的影响，因为所有对照动物都在第5天死亡，尽管在所测试的三个剂量中，存活率或体重或gvhd评分的改善似乎没有剂量反应(图1c-1f)。
[0137]
接受2
×
106个t细胞的阳性对照小鼠的死亡比一些模型(例如c57bl/6-＞balb/c)([4]、[7]、[8])中报告的更快，但类似于其他模型(例如c3h/hej/c3heb/fej-＞(c3feb6)f1)[9]中报告的结果。然而，为了证实图1中观察到的死亡率是由t细胞介导的过程驱动，进行比较接受2
×
106个t细胞与较低剂量(1
×
106个t细胞和1.5
×
106个t细胞)的小鼠的另一个实验(图2a-c)。对t细胞剂量有明显的反应，1
×
106个t细胞在第45天无死亡，而更高t细胞剂量的死亡更快(cox比例风险模型的线性趋势测试p＜0.0001)(由于希望观察接受减少的t细胞的小鼠，因此跟踪小鼠比图1中更长的时间段)。同样，与单独2
×
106个t细胞相比，向接受2
×
106个t细胞的小鼠施用20mg/kg在预混合饮食颗粒中的阿维来司他再次显著提高了存活率，结果与1
×
106个t细胞和1.5
×
106个t细胞相当；这个实验是第五次重复，其中阿维来司他20mg/kg(在预混合饮食中或添加至湿食物中)产生存活优势。由于在5次实验中重复的最重度病例(2
×
106个t细胞，图1a-1b和图2a)已经观察到显著的存活优势，因此没有使用阿维来司他和较低剂量的t细胞进行额外的实验。
[0138]
在小鼠死亡后或在实验结束时处死小鼠后对小鼠进行尸检，并支持以下发现：接受tcdbm+t2e6的小鼠确实发生了gvhd(图3a-b)，而单独接受tcdbm的小鼠无gvhd迹象(图3c-d)。
[0139]
为了更好地表征t细胞和阿维来司他对器官毒性的作用，用接受t2e6或t2e6+20mg/kg饮食的小鼠(n＝5/组)重复上述实验，并在第4天处死用于组织学分析。组织由专攻gvhd的盲法病理学家审查，并基于架构(隐窝再生、表面侵蚀、溃疡、固有层炎症、萎缩、隐窝分支、内分泌细胞过多和潘氏细胞(paneth cell)过多)和上皮细胞学(空泡化、衰减、细胞
凋亡、脱落进入管腔、淋巴细胞浸润、嗜中性粒细胞浸润)评分。每个特征按0-4量表(0，正常；0.5，局灶性和罕见；1，局灶性和轻度；2，弥漫性和轻度；3，弥漫性和中度；4，弥漫性和重度)分级，并对于每个器官，将结果相加。虽然在第4天在接受阿维来司他的小鼠的皮肤或肝中未观察到毒性，但在肠中观察到异常(图4)，特别是隐窝再生、柱状衰减和细胞凋亡，并且在t2e6组中有病理增加的趋势(p＝0.08)。
[0140]
总之，这些结果证明在gvhd的鼠模型中使用阿维来司他在存活率方面存在显著差异，支持使用阿维来司他预防gvhd。
[0141]
讨论
[0142]
上述结果指示阿维来司他可有效治疗和预防gvhd。这一结果非常出人意料，因为gvhd的主要诱导物(如果非排他的)被认为是t和b淋巴细胞，而不是嗜中性粒细胞。广泛的研究已确立成熟的cd4
+
和/或cd8
+ t细胞启动gvhd，并且gvhd依赖于启动针对外来组织相容性抗原的同种免疫t细胞反应的接受者的抗原呈递细胞。具体来说，已证明，从供体细胞接种物中耗尽αβ t细胞预防啮齿动物、人和狗的gvhd[10]。
[0143]
鉴于t淋巴细胞在gvhd期间观察到的组织损伤的致病机制中的重要性，令人惊讶的是，阿维来司他(一种特异性靶向嗜中性粒细胞的药物)具有上述观察到的针对gvhd的作用，即增加gvhd模型中的存活率并减少胃肠道gvhd病理。嗜中性粒细胞先前已与gvhd病理有关，但在这些实验之前不知道抑制嗜中性粒细胞弹性蛋白酶将是一种可行的治疗策略。
[0144]
基于这些结果，发明人认识到阿维来司他(和更通常地嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂)将有效治疗或预防与gvhd的共同机制和病理相关的疾患。
[0145]
与gvhd一样，器官排斥也主要通过接受者cd4+和cd8+ t细胞对供体mhc衍生肽的同种异体识别来介导，接受者识别供体器官组织抗原。外源抗原通过从器官释放的供体抗原呈递细胞(apc)被呈递到接受者的免疫系统，所述供体抗原呈递细胞迁移到接受者的引流淋巴结，接受者树突状细胞在此处加工并呈递同种异体抗原并引发t细胞以激活并迁移回器官，在那里发生损伤。或者，接受者apc会拾取供体抗原并自我呈递[11]。在gvhd和慢性器官排斥两者中，引发并产生同种异体反应性t细胞并驱动致病过程。在动物模型的过继转移实验中，gvhd和移植物排斥两者都可通过t细胞转移这一事实证实同种异体t细胞的作用是共同途径。临床观察进一步证明了这一点，即由于慢性肺排斥观察到的bos的病理与由于骨髓和干细胞移植中的gvhd观察到的bos类似[12]。
[0146]
先前已经报道，在lt-bos患者的支气管肺泡灌洗液中检测到弹性蛋白酶衍生肽的水平升高[14]。然而，没有提出弹性蛋白酶在lt-bos中起致病作用，并且先前并不认为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制会提供治疗或预防器官排斥(包括lt-bos)的治疗策略。抑制ne的治疗作用将反映早在1999年的观察结果，即嗜中性粒细胞可在lt-bos中起作用[15]。
[0147]
鉴于在gvhd中观察到的显著结果，发明人用理论来说明嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂(例如阿维来司他)也将有效治疗或预防器官排斥。
[0148]
总而言之，这些发现支持使用阿维来司他的ne抑制在治疗或预防器官排斥、特别是与器官排斥相关的bos中具有有益作用的潜力。这是向前迈出的重要一步，因为目前还没有针对这些疾患的确立疗法。
[0149]
基于上述科学原理和数据，将在设计用于评估肺移植后在治疗和预防患者的bos方面的安全性和功效的临床试验中研究阿维来司他。
[0150]
实施例3-肺移植后患者中发生bos的预防
[0151]
阿维来司他作为多中心、随机、护理标准对照研究的一部分施用，以证明除了标准免疫阻抑方案之外，当预防性地给予肺移植接受者时，阿维来司他在提高存活率和预防bos方面的功效和安全性。
[0152]
在研究期间，肺移植后立即开始，向患者以高达240mg的剂量每日两次施用阿维来司他。疗法持续2年，并且可延长高达5年。
[0153]
纳入标准：
[0154]
·
已接受肺移植(单肺或双肺)的患者，
[0155]
·
能够在接受肺移植后30天内同意并入选的患者。
[0156]
排除标准：
[0157]
·
心-肺移植、肺再移植或另一实体器官移植史
[0158]
·
对扩张和/或支架置入无反应的临床显著狭窄
[0159]
·
活动性肺感染
[0160]
·
吻合部位失效
[0161]
主要终点：
[0162]
·
在第12周和第24周，阿维来司他与标准护理组的fev1差异(预测百分比)
[0163]
·
在第12周和第24周，阿维来司他与标准护理组的bos阶段/无bos存活率差异
[0164]
次要终点(与标准护理相比处于活动状态)：
[0165]
·
如由随机化后1年和2年的预测的平均fev1％测量的肺功能
[0166]
·
1年和2年时，阿维来司他与标准护理组的bos阶段
[0167]
·
长达2年的所有原因死亡率和移植相关死亡率
[0168]
·
发生ras
[0169]
·
症状
[0170]
·
安全性和耐受性
[0171]
·
无事件存活持续时间，其对应于介于随机化日期与死亡或出现在肺中开始的严重细菌和病毒感染(由sae的报告定义)之间的时间长度
[0172]
阿维来司他将在上述主要终点中的一个或多个中显示有效性。
[0173]
实施例4-肺移植后患者的bos的治疗
[0174]
阿维来司他作为多中心、随机、护理标准对照研究的一部分施用，以证明除了其标准免疫阻抑方案之外，当给予肺移植接受者时，阿维来司他在改善bos方面的功效和安全性。
[0175]
在研究期间，向肺移植后发生bos的患者以高达240mg的剂量每日两次施用阿维来司他。
[0176]
纳入标准：
[0177]
·
肺移植(单肺或双肺)
[0178]
·
诊断bos＞1期
[0179]
·
已排除肺疾病的其他原因
[0180]
排除标准：
[0181]
·
限制性同种异体移植物综合征
[0182]
·
需要改变免疫阻抑方案的患者
[0183]
·
活动性肺感染
[0184]
主要终点：
[0185]
·
在第12周、第24周和第48周和第106周，阿维来司他与标准护理组的fev1差异(预测百分比)
[0186]
·
在第12周和第24周，阿维来司他与标准护理组的bos阶段
[0187]
次要终点(与标准护理相比处于活动状态)：
[0188]
·
如由随机化后1年和2年的预测的平均fev1％测量的肺功能
[0189]
·
2年时，阿维来司他与标准护理组的bos阶段
[0190]
·
长达2年的所有原因死亡率和移植相关死亡率
[0191]
·
发生ras
[0192]
·
症状
[0193]
·
安全性和耐受性
[0194]
·
无事件存活持续时间，其对应于介于随机化日期与死亡或出现在肺中开始的严重细菌和病毒感染(由sae的报告定义)之间的时间长度。
[0195]
阿维来司他将在上述主要终点中的一个或多个中显示有效性。
[0196]
实施例5-阿维来司他在造血细胞移植(hct)后闭塞性细支气管炎综合征(bos)患者中的1期研究
[0197]
进行一项阿维来司他在hct后bos患者中的1期研究。
[0198]
方法：
[0199]
将hct之后年龄≥18岁的bos和慢性移植物抗宿主病(gvhd)患者招募至国家癌症研究所方案(nct02669251)。患者具有稳定的全身免疫阻抑，并且肺功能测试(pft)时预测fev1％≥30％。
[0200]
本1期研究具有2个部分：8周患者内剂量递增期，之后是允许长达6个月治疗的持续期。阿维来司他以60mg每日两次(这个剂量先前用于慢性肺病患者)开始口服给予，并且根据耐受性每2周增加，增加至120mg每日两次、180mg每日两次，最后240mg每日两次。患者持续这个剂量，直至完成持续期，或出现不可接受的毒性，剂量中断＞28天，或gvhd或bos进展。
[0201]
主要目标是基于剂量限制性毒性确定最大耐受剂量(mtd)。次要目标包括确定药代动力学、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)活性的标记以及血液和痰液中的炎症标记。在基线、剂量递增期的第4周、第8周以及持续期的第3个月和第6个月，进行pft和慢性gvhd评估。
[0202]
结果：
[0203]
入选7名患者(3名男性和4名女性)。入选时使用支气管扩张剂后的中位fev1为44％(范围38-74)。
[0204]
所有7名患者均能够耐受每日两次最高剂量240mg的阿维来司他剂量递增；未达到mtd。可能与研究治疗相关的最常见不良事件(ae)均为2级，并且包括肌酸酐增加(3名患者)、alt或ast升高(3名患者)和上呼吸道感染(3名患者)。可能与研究药物相关的唯一3级ae为1名患者需要住院的胃肠炎和呕吐以及1名患者的肺炎。
[0205]
3名患者完成了8周+6个月治疗的研究。四名患者需要中断给药，其中仅一名患者
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