一种槐花发酵组合物、制备方法、应用与流程

1.本发明涉及化妆品加工技术领域，具体是一种槐花发酵组合物、制备方法、应用。


背景技术：

2.槐花在中药领域是指豆科植物槐的干燥花及花蕾。槐花具有凉血止血、清肝泻火的功效。现代研究表明，槐花含有黄酮类、皂苷、多糖、少量鞣质等化学成分，因此，具有止血、降血糖、抗氧化、抗菌以及保护肠胃等作用。
3.目前，在现有技术对槐花中的以黄酮类、皂苷、多糖、少量鞣质等化学成分为主的活性成分的提取方式主要为发酵法，通过利用发酵的方法对槐花中的活性成分进行提取以提高槐花中活性成分的利用率。现阶段，已经有发酵型槐花茶酒的开发，利用的菌种为安琪酵母，最终得到的槐花茶酒酒精度为13.5％，为一款茶酒；另外还有利用根霉、米曲霉和酵母对槐花进行发酵，制作槐花甜酒酿；除此之外，还有用乳酸菌对槐花进行发酵，得到槐花发酵液，但是最终发酵完成之后，较比发酵之前，发酵液中的活性物质含量并没有一个明显的提升。
4.因此，以上技术方案在实际使用时存在以下不足：现有技术中的槐花提取方式存在无法有效提升槐花中活性物质含量并可直接应用于化妆品的问题。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种槐花发酵组合物，以解决上述背景技术中提出的现有的槐花提取方式存在无法有效提升槐花中活性物质含量并可直接应用于化妆品的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.一种槐花发酵组合物，所述槐花发酵组合物是以槐花发酵培养基为原料，通过接入白肉灵芝对所述槐花发酵培养基进行恒温震荡发酵后再进行灭菌、离心分离制得；其中，所述槐花发酵培养基包括以下的原料：槐花水提液、蛋白粉、葡萄糖。
8.本发明实施例的另一目的在于提供一种所述槐花发酵组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
9.将槐花发酵培养基中接入白肉灵芝，然后在温度是20-35℃、转速是100-200r/min的恒温震荡条件下进行培养1-7天，灭菌后进行离心除去沉淀，得到所述槐花发酵组合物。
10.本发明实施例的另一目的在于提供一种采用上述的槐花发酵组合物的制备方法制备得到的槐花发酵组合物。
11.本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的槐花发酵组合物在制备化妆品和/或护肤品中的应用。
12.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
13.(1)本发明提供的槐花发酵组合物相对于其他常规的槐花发酵提取液具有更高的多糖含量，具有更强的抗氧化活性。
14.(2)本发明提供的槐花发酵组合物相对于常规的槐花提取液具有更强的活性，更
高的活性物质提取率，而且提取过程更温和。
15.(3)本发明所得到的槐花发酵组合物可以直接作为槐花发酵化妆品，除了具有较强的抗氧化活性之外，还具有一定的抗炎功效和酪氨酸酶抑制活性，可用于制备舒缓类化妆品和美白类化妆品，解决了现有的槐花提取方式存在无法有效提升槐花中活性物质含量并可直接应用于化妆品的问题，具有广阔的应用前景。
附图说明
16.图1为本发明一实施例提供的dpph自由基清除实验结果图。
17.图2为本发明一实施例提供的槐花发酵组合物对酪氨酸酶的抑制率结果图。
具体实施方式
18.下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细地说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
19.本发明实施例提供的一种槐花发酵组合物，所述槐花发酵组合物是以槐花发酵培养基为原料，通过接入白肉灵芝对所述槐花发酵培养基进行恒温震荡发酵后再进行灭菌、离心分离制得；其中，所述槐花发酵培养基包括以下的原料：槐花水提液、蛋白粉、葡萄糖。
20.作为本发明的另一优选实施例，所述槐花水提液的制备方法是将槐花进行干燥粉碎得到槐花粉，然后按照料液比为1:10-1:100的质量比进行加入水，再进行恒温振荡提取，离心后取上清液进行过滤，得到所述槐花水提液。
21.作为本发明的另一优选实施例，在所述的槐花水提液的制备方法中，所述恒温振荡提取是在50℃-100℃的温度以及80r/min-200r/min的转速下进行提取1-5h。
22.作为本发明的另一优选实施例，在所述的槐花水提液的制备方法中，所述离心后取上清液进行过滤具体是在恒温振荡提取后静置至常温，然后在1000r/min-8000r/min的转速下进行离心5min-30min，弃沉淀，取上清液，将上清液过滤，即为所述槐花水提液。
23.作为本发明的另一优选实施例，在所述的槐花水提液的制备方法中，所述粉碎是粉碎至40-200目。
24.作为本发明的另一优选实施例，所述水可以是选自纯净水、矿泉水、蒸馏水、去离子水或软水中的任意一种，这里并不作限定，可以根据需要进行选择。
25.优选的，所述水是去离子水。
26.作为本发明的另一优选实施例，所述白肉灵芝又称西藏灵芝(学名：ganoderma leucocontextum)，是多孔菌科真菌灵芝的子实体，菌盖呈棕红至紫黑色，菌肉为白色，菌柄短而粗。
27.优选的，所述槐花水提液的制备方法是将槐花进行干燥粉碎至40-200目，得到槐花粉，然后将得到的槐花粉置于三角瓶中，按照料液比为1:10-1:100的质量比进行加入去离子水，放入到水浴恒温振荡器中进行恒温振荡提取，所述恒温振荡提取具体是在50℃-100℃的温度以及80r/min-200r/min的转速下进行提取1-5h；在恒温振荡提取后静置至常温，然后在1000r/min-8000r/min的转速下进行离心5min-30min，弃沉淀，取上清液，将上清
液过滤，即为所述槐花水提液。
28.作为本发明的另一优选实施例，所述槐花发酵培养基包括以下按照重量份的原料：槐花水提液90-110份、蛋白粉0.05-0.5份、葡萄糖0.5-3份。
29.作为本发明的另一优选实施例，所述槐花发酵培养基的制备方法是按照比例称取槐花水提液、蛋白粉、葡萄糖进行混合均匀，在105-125℃灭菌10-40min后静置至常温，制得所述槐花发酵培养基。
30.优选的，所述槐花发酵培养基的制备方法是将得到的槐花水提液中加入0.5wt％-3wt％的葡萄糖和0.05wt％-0.5wt％的蛋白粉，分装到500毫升的锥形瓶中，每瓶100-300毫升，封口后，进行灭菌，灭菌温度为105-125℃，灭菌时间为10-40min；灭菌完成后，取出静置至常温，即为槐花发酵培养基。
31.在本发明实施例中，通过利用灵芝菌(这里所提到的灵芝菌为白肉灵芝)对槐花进行发酵得到槐花发酵组合物，所述槐花发酵组合物相对于其他槐花发酵提取液具有更高的多糖含量，具有更强的抗氧化活性，可以直接作为化妆品使用，也可以作为添加剂添加到化妆品中。
32.本发明实施例还提供一种所述槐花发酵组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
33.将槐花发酵培养基中接入白肉灵芝，然后在温度是20-35℃、转速是100-200r/min的恒温震荡条件下进行培养1-7天，灭菌后进行离心除去沉淀，得到所述槐花发酵组合物。
34.需要说明的是，本发明得到的槐花发酵组合物可以直接作为槐花发酵化妆品，也可以还包括对槐花发酵组合物进一步复配得到护肤水、面膜液、乳液以及膏霜等化妆品，都为本发明所保护的范围。
35.作为本发明的另一优选实施例，在所述的槐花发酵组合物的制备方法中，所述灭菌的灭菌温度为80-121℃，灭菌时间为15-60min。
36.作为本发明的另一优选实施例，所述接入白肉灵芝时的接菌量是2wt％-15wt％，即在槐花发酵培养基中接入2wt％-15wt％的槐花发酵培养基重量的白肉灵芝。
37.作为本发明的另一优选实施例，在所述的槐花发酵组合物的制备方法中，所述离心除去沉淀时的离心转速是1000r/min-8000r/min，离心时间是5min-40min。
38.本发明实施例还提供一种采用上述的槐花发酵组合物的制备方法制备得到的槐花发酵组合物。
39.本发明实施例还提供一种上述的槐花发酵组合物在制备化妆品和/或护肤品中的应用。
40.以下通过列举具体实施例对本发明的槐花发酵组合物的技术效果做进一步的说明。
41.实施例1
42.一种槐花发酵组合物，其制备方法具体包括以下步骤：
43.将槐花进行干燥粉碎至100目，得到槐花粉，将得到的槐花粉置于三角瓶中，按照料液比为1:40的质量比进行加入去离子水，放入到水浴恒温振荡器中，在80℃的温度下以及120r/min下提取2h，取出，静置至常温后，在4000r/min的转速下，离心20min，弃沉淀，取上清液。在得到的上清液中加入2wt％的葡萄糖和0.2wt％的蛋白粉，分装到500毫升的锥形瓶中，每瓶300毫升，封口后，进行灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间为15min。灭菌完成后，
取出静置至常温后接入白肉灵芝，接种量为5wt％，接菌完成后，在恒温震荡培养箱中，在25℃、160r/min条件下培养5天后，进行灭菌，灭菌温度为80℃，灭菌时间为60min。灭菌完成后进行离心，离心转速为6000r/min，离心时间为15min。取上清液，即为槐花发酵组合物。
44.实施例2
45.一种槐花发酵化妆品，具体是将实施例1中制备的槐花发酵组合物(上清液)中加入0.5wt％的己二醇和0.5wt％的对羟基苯乙酮，混合均匀，即为槐花发酵化妆品。
46.实施例3
47.一种槐花发酵组合物，是以槐花发酵培养基为原料，通过接入白肉灵芝对所述槐花发酵培养基进行恒温震荡发酵后再进行灭菌、离心分离制得；其中，所述槐花发酵培养基包括以下的原料：槐花水提液90克、蛋白粉0.05克、葡萄糖0.5克。其中，所述槐花水提液的制备方法是将槐花进行干燥粉碎至40目，得到槐花粉，将得到的槐花粉置于三角瓶中，按照料液比为1:10的质量比进行加入去离子水，放入到水浴恒温振荡器中，在50℃的温度下，200r/min的转速下，提取5h，取出，静置至常温后在1000r/min的转速下进行离心30min，弃沉淀，取上清液，将上清液过滤，即为槐花水提液。
48.在本发明实施例中，所述槐花发酵组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
49.1)称取上述的槐花水提液并加入葡萄糖和蛋白粉，分装到500毫升的锥形瓶中，每瓶100毫升，封口后，进行灭菌，灭菌温度为105℃，灭菌时间为40min。灭菌完成后，取出静置至常温，即为槐花发酵培养基。
50.2)在步骤(2)中得到的槐花发酵培养基中接入白肉灵芝，接种量为2wt％，接菌完成后，在恒温震荡培养箱中，20℃、100r/min条件下，培养7天。发酵完成后，进行灭菌，灭菌温度为80℃，灭菌时间为60min。灭菌完成后进行离心，离心转速为1000r/min，离心时间为40min。取上清，即为槐花发酵组合物。
51.实施例4
52.一种槐花发酵组合物，是以槐花发酵培养基为原料，通过接入白肉灵芝对所述槐花发酵培养基进行恒温震荡发酵后再进行灭菌、离心分离制得；其中，所述槐花发酵培养基包括以下的原料：槐花水提液110克、蛋白粉0.5克、葡萄糖3克。其中，所述槐花水提液的制备方法是将槐花进行干燥粉碎至200目，得到槐花粉，将得到的槐花粉置于三角瓶中，按照料液比为1:100的质量比进行加入去离子水，放入到水浴恒温振荡器中，在100℃的温度下，80r/min的转速下，提取1h，取出，静置至常温后在8000r/min的转速下进行离心5min，弃沉淀，取上清液，将上清液过滤，即为槐花水提液。
53.在本发明实施例中，所述槐花发酵组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
54.1)称取上述的槐花水提液并加入葡萄糖和蛋白粉，分装到500毫升的锥形瓶中，每瓶300毫升，封口后，进行灭菌，灭菌温度为125℃，灭菌时间为10min。灭菌完成后，取出静置至常温，即为槐花发酵培养基。
55.2)在步骤(2)中得到的槐花发酵培养基中接入白肉灵芝，接种量为15wt％，接菌完成后，在恒温震荡培养箱中，35℃、200r/min条件下，培养1天。发酵完成后，进行灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间为15min。灭菌完成后进行离心，离心转速为8000r/min，离心时间为5min。取上清，即为槐花发酵组合物。
56.实施例5
57.一种槐花发酵组合物，是以槐花发酵培养基为原料，通过接入白肉灵芝对所述槐花发酵培养基进行恒温震荡发酵后再进行灭菌、离心分离制得；其中，所述槐花发酵培养基包括以下的原料：槐花水提液100克、蛋白粉0.2克、葡萄糖2克。其中，所述槐花水提液的制备方法是将槐花进行干燥粉碎至100目，得到槐花粉，将得到的槐花粉置于三角瓶中，按照料液比为1:40的质量比进行加入去离子水，放入到水浴恒温振荡器中，在70℃的温度下，100r/min的转速下，提取2h，取出，静置至常温后在4000r/min的转速下进行离心15min，弃沉淀，取上清液，将上清液过滤，即为槐花水提液。
58.在本发明实施例中，所述槐花发酵组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
59.1)称取上述的槐花水提液并加入葡萄糖和蛋白粉，分装到500毫升的锥形瓶中，每瓶200毫升，封口后，进行灭菌，灭菌温度为115℃，灭菌时间为25min。灭菌完成后，取出静置至常温，即为槐花发酵培养基。
60.2)在步骤(2)中得到的槐花发酵培养基中接入白肉灵芝，接种量为8wt％，接菌完成后，在恒温震荡培养箱中，30℃、150r/min条件下，培养3天。发酵完成后，进行灭菌，灭菌温度为100℃，灭菌时间为25min。灭菌完成后进行离心，离心转速为4000r/min，离心时间为22min。取上清，即为槐花发酵组合物。
61.实施例6
62.与实施例1相比，除了是按照料液比为1:20的质量比进行加入去离子水外，其他与实施例1相同。
63.实施例7
64.与实施例1相比，除了是按照料液比为1:70的质量比进行加入去离子水外，其他与实施例1相同。
65.实施例8
66.与实施例1相比，除了是按照料液比为1:90的质量比进行加入去离子水外，其他与实施例1相同。
67.实施例9
68.与实施例1相比，除了是按照料液比为1:100的质量比进行加入去离子水外，其他与实施例1相同。
69.实施例10
70.与实施例1相比，除了是将槐花粉碎至40目外，其他与实施例1相同。
71.实施例11
72.与实施例1相比，除了是将槐花粉碎至80目外，其他与实施例1相同。
73.实施例12
74.与实施例1相比，除了是将槐花粉碎至200目外，其他与实施例1相同。
75.实施例13
76.与实施例1相比，除了是将去离子水替换为纯净水外，其他与实施例1相同。
77.实施例14
78.与实施例1相比，除了是将去离子水替换为矿泉水外，其他与实施例1相同。
79.实施例15
80.与实施例1相比，除了是将去离子水替换为软水外，其他与实施例1相同。
81.实施例16
82.与实施例1相比，除了接入白肉灵芝时的接菌量是2wt％外，其他与实施例1相同。
83.实施例17
84.与实施例1相比，除了接入白肉灵芝时的接菌量是12wt％外，其他与实施例1相同。
85.实施例18
86.与实施例1相比，除了接入白肉灵芝时的接菌量是15wt％外，其他与实施例1相同。
87.实施例19
88.与实施例1相比，除了是在50℃的温度下以及80r/min下提取5h外，其他与实施例1相同。
89.实施例20
90.与实施例1相比，除了是在100℃的温度下以及200r/min下提取1h外，其他与实施例1相同。
91.实施例21
92.与实施例2相比，除了在所述的槐花水提液的制备方法中，具体是在静置至常温后再在1000r/min的转速下进行离心30min外，其他与实施例2相同。
93.实施例22
94.与实施例2相比，除了在所述的槐花水提液的制备方法中，具体是在静置至常温后再在8000r/min的转速下进行离心5min外，其他与实施例2相同。
95.实施例23
96.一种槐花发酵化妆品，其制备方法具体包括以下步骤：
97.(1)将槐花进行干燥粉碎至40-200目，得到槐花粉，将得到的槐花粉置于三角瓶中，按照料液比为1:10-1:100的质量比进行加入去离子水，放入到水浴恒温振荡器中，在50℃-100℃的温度下，80r/min-200r/min的转速下，提取1-5h，取出，静置至常温后在1000r/min-8000r/min的转速下进行离心5min-30min，弃沉淀，取上清液，将上清液过滤，即为槐花水提液。
98.(2)将步骤(1)中得到的槐花水提液中加入0.5wt％-3wt％的葡萄糖和0.05wt％-0.5wt％的蛋白粉，分装到500毫升的锥形瓶中，每瓶100-300毫升，封口后，进行灭菌，灭菌温度为105-125℃，灭菌时间为10-40min。灭菌完成后，取出静置至常温，即为槐花发酵培养基。
99.(3)在步骤(2)中得到的槐花发酵培养基中接入白肉灵芝菌，接种量为2wt％-15wt％，接菌完成后，在恒温震荡培养箱中，20-35℃、100-200r/min条件下，培养1-7天。发酵完成后，进行灭菌，灭菌温度为80-121℃，灭菌时间为15-60min。灭菌完成后进行离心，离心转速为1000-8000r/min，离心时间为5-40min。取上清，即为槐花发酵组合物。将得到的槐花发酵组合物直接作为槐花发酵化妆品，或对槐花发酵组合物进一步复配得到护肤水、面膜液、乳液以及膏霜等化妆品。
100.一：抑菌性能检测
101.1、实验菌株
102.痤疮丙酸杆菌菌株cgmcc1.5085：购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。
103.2、培养基
104.脑心浸液培养基：小牛脑浸粉12.5g/l；牛心浸粉5g/l；磷酸氢二钠2.5g/l；葡萄糖2g/l；氯化钠5g/l；蛋白胨10g；ph值7.4
±
0.1。购自北奥博星生物技术有限公司。
105.3、实验方法
106.分别称量适量营养琼脂加入不同三角瓶中，各加入少量蒸馏水加热溶解，备用；用接种环挑取各试管斜面的菌种分别置于带含无菌水的试管中，用振荡器将试管中的细胞分散，制得菌悬液，浓度为108个/ml。用移液器吸取0.5ml菌悬液分别注入不同培养皿中；向各培养皿内注入15ml-20ml的熔化状的培养基(约45℃)，将菌液与培养基混合均匀待其冷却；将牛津杯垂直放入培养基，轻轻压入，后向杯内加满测试样品水溶液(约240微升)，盖上培养皿盖子置于37℃厌氧培养箱中，培养24小时，观察牛津杯周围抑菌圈的有无及大小。由于牛津杯所吸附的测试样品慢慢向四周扩散，因此在牛津杯的周围就出现清晰的抑菌圈。抑菌圈的大小代表测试样品抗菌力的高低。抑菌圈直径越大表明防腐体系的防腐效能越强。
107.4、实验结果
108.表1槐花发酵组合物对痤疮丙酸杆菌抑制效果
[0109][0110][0111]
通过表中实验结果可以得出，由实施例1制得的槐花发酵组合物具有一定的抑菌效果。
[0112]
二：槐花发酵组合物的抗氧化性能检测
[0113]
dpph是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，dpph的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对dpph自由基的清除效果。
[0114]
取不同量的实施例1制备得到的槐花发酵组合物溶于去离子水中，制得体积百分浓度为5％、10％、20％、40％、80％的一系列待测液，以维生素c为阳性对照。
[0115]
dpph自由基清除实验的具体实验步骤为：
[0116]
(1)取等体积(3ml)的待测液与2
×
10-4
mol/l的dpph溶液混匀(a1管)；
[0117]
(2)取等体积(3ml)的无水乙醇(待测物溶剂)与2
×
10-4
mol/l的dpph溶液混匀(a2管)；
[0118]
(3)取等体积(3ml)的无水乙醇与待测液混匀(a3管)；
[0119]
(4)反应30min后，在517nm下测a1管、a2管、a3管吸光度值。
[0120]
清除率计算公式为：清除率(％)＝[(a2+a3)-a1]/a2ꢀꢀꢀ
(1)
[0121]
以待测液的体积百分浓度为横坐标，清除率为纵坐标，制作dpph自由基清除作用曲线，其中，a：不同浓度的槐花发酵组合物，b：维生素c(1mg/ml)。
[0122]
由图1可知，实施例1所得槐花发酵组合物的清除dpph自由基的ic50为17.44％，说明槐花发酵组合物具有很强的抗氧化能力。
[0123]
三：槐花发酵组合物的美白性能检测：
[0124]
(1)c1、c2、t1、t2管的物质加入量参照表3。
[0125]
(2)c2管配好摇匀后，在37℃水浴锅中水浴加热10min，波长475nm下调零。
[0126]
(3)c1管溶液配好摇匀，37℃水浴10min后，加酪氨酸酶1ml，继续水浴10分钟，测定c1吸光度值。
[0127]
(4)按(1)(2)同样方法，以t2调零测定t1吸光度值。
[0128]
(5)计算样品对酪氨酸酶的活性抑制率t(％)。公式：t(％)＝(c1-t1)/c1
×
100％
[0129][0130]
槐花发酵组合物对酪氨酸酶的抑制率见图2。
[0131]
1％熊果苷为酪氨酸酶活性抑制实验的阳性对照，其对酪氨酸酶活性抑制率为97.43％。10％槐花发酵组合物可抑制25.40％的酪氨酸酶活性。因此槐花发酵组合物具有一定的抑制酪氨酸酶活性的作用。
[0132]
综上所述，现有技术中并没有一款通过发酵能够显著提升槐花中活性物质含量并直接应用于化妆品的槐花发酵化妆品。本发明提供的一种槐花发酵组合物及其制备方法，利用灵芝菌对槐花进行发酵，得到的槐花发酵组合物可以直接作为化妆品，并且槐花发酵组合物中的活性物质含量显著高于未发酵的槐花提取液。
[0133]
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。