胡芦巴碱在制备预防或治疗前列腺增生药物中的应用

1.本发明涉及药物应用技术领域，特别是涉及胡芦巴碱在制备预防或治疗前列腺增生药物中的应用。


背景技术：

2.前列腺增生一般指良性前列腺增生。良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，bph)是常见的中老年男性进展性疾病。由于人口老龄化问题的日益突出，bph的发病率显著提高。有研究发现，50岁以上男性bph发病率约50％，80岁以上男性的发病率高达90％，随着前列腺组织过度增大进一步导致膀胱出口梗阻，约50％以上60岁男性患者表现出不同程度的临床症状，如尿频、尿急、尿无力、尿潴留或因继发于膀胱逼尿肌超敏而出现偶尔急迫性尿失禁，严重影响患者的生活质量。目前，药物治疗仍是bph的一线治疗方法，也是轻、中度bph患者的首选治疗方式。
3.胡芦巴是豆科植物胡芦巴(trigonella foenum
‑
graecum l，tf)干燥成熟种子，味苦，性温，无毒，属于常用中药材之一，《国药的药理学》中记载它为滋养强精药，具有温肾助阳，散寒止痛，助膀胱气化之功能，临床上常配伍治疗前列腺增生。胡芦巴碱(trigonelline)是胡芦巴中的主要有效成分之一，现代药理学研究发现其具有降血糖、降低胆固醇、抗癌、抗氧化、镇静等功效。而胡芦巴碱是否对bph具有改善作用，未见报道。因此，研究胡芦巴碱对bph的作用对于解决中老年人前列腺增生具有现实意义。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供胡芦巴碱在制备预防或治疗前列腺增生药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过丙酸睾酮诱导法建立大鼠良性前列腺增生模型，采用组织学及分子生物学的方法，验证了胡芦巴碱对大鼠bph具有明显的改善作用，可用于制备预防或治疗前列腺增生的药物。
5.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
6.本发明提供胡芦巴碱在制备预防或治疗前列腺增生药物中的应用。
7.优选的是，所述药物的主效成分为胡芦巴碱或其医学上可接受的盐。
8.优选的是，所述前列腺增生为良性前列腺增生。
9.本发明公开了以下技术效果：
10.本发明通过丙酸睾酮诱导法建立大鼠良性前列腺增生模型，采用组织学及分子生物学的方法，发现胡芦巴碱可显著减轻前列腺湿重、降低前列腺指数；形态上观察到前列腺增生明显减轻；血清中的psa水平显著降低。充分验证了胡芦巴碱对大鼠bph具有明显改善作用，可以将胡芦巴碱用于制备预防或治疗前列腺增生药物。
附图说明
11.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所
需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
12.图1为胡芦巴碱对bph大鼠前列腺湿重、前列腺指数的影响；a：对bph大鼠前列腺湿重的影响，b：对bph大鼠前列腺指数的影响；与假手术组比较：
##
p<0.01；与bph组比较：*p<0.05，**p<0.01；
13.图2为胡芦巴碱对bph大鼠前列腺组织形态的影响(
×
100)；a：假手术组；b：模型组；c：非那雄胺组；d：25mg
·
kg
‑1胡芦巴碱组；e：50mg
·
kg
‑1胡芦巴碱组；f：100mg
·
kg
‑1胡芦巴碱组；
14.图3为胡芦巴碱对bph大鼠血清中psa的影响。
具体实施方式
15.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
16.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
17.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
18.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
19.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
20.以下实施例中所用试剂或材料如无特殊说明，均能通过商业渠道获取。
21.实施例1大鼠良性前列腺增生模型构建及病理检测
22.1、材料与方法
23.1.1动物选择
24.清洁级、健康、雄性sd大鼠60只，体重(250
±
20)g(宁夏医科大学实验动物中心，合格证号syxk(宁)2009－0001)。饲养于屏障动物实验设施[syxk(黑)2016001]，并按实验动物使用的3r原则给予人道的关怀。
[0025]
1.2药品和试剂
[0026]
胡芦巴碱盐酸盐(北京索莱宝科技有限公司，纯度：98％，批号：20201025)；丙酸睾酮注射液(天津金耀药业有限公司，批号1706061)；非那雄胺片(杭州默沙东制药有限公司，
批号r008311)，前列腺特异性抗原(psa)(上海江莱生物科技有限公司，批号：jl10345)
[0027]
1.3仪器
[0028]
‑
20℃低温冰箱(合肥荣事达电冰箱有限公司)；低温高速离心机(德国赫默公司)；自动酶标仪(上海thermo labsystems公司)；olympus chc
‑
212型光学显微镜(日本奥林巴斯公司)。
[0029]
1.4实验方法
[0030]
1.4.1分组
[0031]
60只雄性清洁级sd大鼠，随机分为6组：假手术组、模型组、阳性药物组(非那雄胺10mg
·
kg
‑1)、胡芦巴碱低(25mg
·
kg
‑1)、中(50mg
·
kg
‑1)、高(100mg
·
kg
‑1)剂量组，每组10只。饲养过程中，控制室温20℃～26℃，湿度40％～70％，光照12h/d，自由摄食、饮水，适应环境一周后开始实验。
[0032]
1.4.2造模及给药方法
[0033]
造模大鼠经腹腔注射2％戊巴比妥钠(40mg
·
kg
‑1)进行全身麻醉，无菌条件下逐层切开皮肤、筋膜，打开腹腔暴露双侧睾丸，结扎输精管后摘除双侧睾丸，逐层缝合。假手术组仅打开腹腔不摘除睾丸。第8天开始造模大鼠给予皮下注射丙酸睾酮5mg
·
kg
‑1，建立大鼠前列腺增生模型，假手术组给予同体积橄榄油皮下注射，持续28天。同时给予阳性药物组及胡芦巴碱低、中、高剂量组分别按照非那雄胺10mg
·
kg
‑1、胡芦巴碱25mg
·
kg
‑1、50mg
·
kg
‑1、100mg
·
kg
‑1剂量灌胃给药，假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，1次/d，连续给药28d。
[0034]
1.4.3标本采集及处理
[0035]
末次给药24h后，称取各组大鼠体重并记录，用20％乌拉坦6ml
·
kg
‑1腹腔注射麻醉大鼠，剖开腹腔，经腹主动脉采血，室温下静置1h，低温离心(4℃，3500r
·
min
‑1，10min)分离血清，
‑
20℃保存。摘除双侧前列腺组织，仔细剔除周围的筋膜及脂肪组织，置于预冷的生理盐水中漂洗，滤纸擦干后电子天平称取前列腺重量，计算前列腺指数(prostatic index，pi)(pi＝前列腺湿质量(g)/体质量(g)
×
100)。取前列腺背外侧叶置于4％多聚甲醛溶液中固定，进行组织形态学检测。
[0036]
1.4.4病理检测
[0037]
将大鼠前列腺背外侧叶在4％甲醛溶液中固定48h后，流水冲洗3h，依次经乙醇梯度脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋，室温下冷却过夜修块、切片，制成4μm病理切片，以苏木精
‑
伊红染色法染色，中性树脂封固，在光学显微镜下观察前列腺组织形态学变化。
[0038]
1.4.5psa检测
[0039]
取
‑
20℃冰箱冻存的大鼠血清，严格按照psa elisa检测试剂盒操作说明测定。
[0040]
1.5统计学方法
[0041]
实验结果以均数
±
标准差表示。用spss statistics 20软件进行统计分析。多组间均数的比较采用单因素方差分析(one
‑
way anova)分析，p≤0.05为差异具有统计学意义。
[0042]
2、结果
[0043]
2.1胡芦巴碱对bph大鼠前列腺湿重、前列腺指数的影响
[0044]
如图1a、b所示，与假手术组比较，模型组大鼠前列腺湿重及前列腺指数均显著升
高(p＜0.01)；与模型组比较，胡芦巴碱低、中、高剂量组及非那雄胺组能显著减轻前列腺湿重，降低前列腺指数(p＜0.05，p＜0.01)；差异具有统计学意义。
[0045]
2.2胡芦巴碱对bph大鼠前列腺组织形态的影响
[0046]
假手术组(图2a)镜下见前列腺腺体排列紧密，腺上皮、间质纤维组织未见增生，腺腔未见扩张；模型组(图2b)与假手术组比较，腺体排列无序，腺腔不规则，腺腔扩张，粘膜上皮形成皱襞，向管腔内突起，间质内见中性粒细胞浸润，伴血管及间质纤维结缔组织增生；非那雄胺组(图2c)、胡芦巴碱低、中、高剂量组(图2d
‑
f)与模型组相比，腺体数量减少，形状较规则，腺上皮细胞呈单层排列，极少突入管腔内，皱襞减少，间质纤维组织增生减少，无明显炎细胞浸润。
[0047]
2.3胡芦巴碱对bph大鼠血清中psa的影响
[0048]
如图3所示，与假手术组比较，模型组大鼠血清中的psa水平显著升高(p＜0.01)；与模型组比较，非那雄胺组及胡芦巴碱低、中、高剂量组大鼠血清中的psa水平显著降低(p＜0.01)。
[0049]
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。