1.本发明涉及干细胞制剂技术领域，尤其是涉及一种治疗脂溢性脱发的干细胞制剂。
背景技术：
2.随着人们生活节奏的加快，年轻人的压力也越来越大，越来越多的年轻人“未老先衰”，过早地步入了脱发者的行列，即使年龄较小的刚毕业的大学生和处在快节奏生活环境中的年轻白领们，也因为面临巨大的社会压力和心理压力，致使脱发成为不得不重视的严峻问题。脱发已成为世界难题！根据《中国脱发人群调查》数据显示，我国脱发人群约2亿，九成不治不会好转。男性脱发人数约1.3亿，我国男性脱发率近20%，20岁~40岁男士是脱发主力军，30岁左右发展最快，比上一代人的脱发年龄提前了20年。现有资料发现，男性型脱发者最小从17岁开始出现。学生脱发人群占我国脱发总人群的40%以上——脱发人群正趋向年轻化。科学研究表明，造成脱发的原因有多种，超过90%是雄激素性脱发，这是因为人体毛囊对体内雄激素的自然代谢产物二氢睾酮（dth）非常敏感。 dht在人的青春期发育时可以促进雄性性征(如脸部毛发)发育，但在成年后，体内过多的dht却会有负面作用，比如导致青春痘、粉刺、前列腺肥大和雄性激素脱发。成年男女都可能因为体内雄激素代谢的变化而脱发，不过男性尤为常见。秃顶对人的形象影响很大，严重影响了人们的生活。
3.间充质干细胞（msc）是一种多能干细胞，具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。已有研究显示，msc注入裸鼠皮下后，一方面能分化为毛囊上皮细胞和毛乳头细胞，归巢位置以毛囊外根鞘和毛乳头处多见，另一方面间充质干细胞能分泌多种细胞因子，如hgf、fgf、vegf等，介导细胞间信号转导，修复受损的毛囊，激活毛囊干细胞，帮助毛囊恢复生长周期，促进头发生长。脐带间充质干细胞（uc
‑
mscs）属于间充质干细胞的一种，免疫原性低、原始性高，取材于临床足月分娩的婴儿脐带，属于医疗废弃物，来源广泛，便于临床推广使用。
4.研究表明，mscs的旁分泌作用是mscs促进细胞增殖、维持细胞功能的主要作用机制之一。旁分泌作用分泌物包含mirna、mrna、脂质体和蛋白质等多种生物细胞因子和生长因子，这些物质都参与调节营养活动。研究证明，旁分泌所产生的外泌体能够发挥出与mscs相似的一些生物学功能，同时也被证实出能应用于组织修复和一些疾病中，因此在科学研究中具有一定的应用前景。
5.但是，不同种类的干细胞，采用不同的培养方式，得到的干细胞其功能是有差异的，优化一种合适的干细胞及培养方法，使其具有有意治疗脂溢性脱发的目的是一个亟待解决的问题。
技术实现要素：
6.为了解决以上技术问题，本发明提供了一种治疗脂溢性脱发的干细胞制剂，其对
脂溢性脱发具有显著的治疗作用。
7.本发明的技术方案如下：一种治疗脂溢性脱发的干细胞制剂，其由如下重量份的原料混合而成：干细胞培养浓缩液
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8.5
‑
9.5甘油
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0.3
‑
0.7丙二醇
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0.1
‑
0.3乙醇
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0.2
‑
0.4。
8.进一步的，各原料的重量份为：干细胞培养浓缩液
ꢀꢀꢀꢀꢀ
8.7
‑
9.2。
9.进一步的，各原料的重量份为：干细胞培养浓缩液
ꢀꢀꢀꢀꢀ
9甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5丙二醇
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0.2乙醇
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0.3。
10.进一步的，所述原料中还包括含量为1.5
×
10
‑5‑
5.0
×
10
‑5mol/l的壳聚糖。
11.进一步的，所述原料中还包括含量为3
×
10
‑5‑
3.5
×
10
‑5mol/l的壳聚糖。
12.进一步的，所述的干细胞培养浓缩液采用如下的方法制备而成：s1 取脐带，洗涤至无血迹；两头各剪掉1cm后，把脐带剪成2
‑
3cm的小段，再次洗涤至无血迹；s2 取出脐带中的华通胶，剪至1
±
0.1mm3大小；移至培养瓶中放入37℃、5%co2的培养箱内培养过夜；s3 吸取15ml原代细胞培养基于培养瓶中；于37℃、5%co2的培养箱内培养，每7天换一次液，并在倒置显微镜下观察细胞的形态和生长情况，至细胞融合度达70
‑
80%止，此为p0代脐带间充质干细胞；s4 继续培养p0代脐带间充质干细胞的融合度达到80
‑
90%时，进行细胞传代培养：将培养瓶的旧培养基吸弃，加入10ml生理盐水洗涤两遍；弃掉生理盐水，加入2ml细胞消化液，放入培养箱消化1min；加入10ml细胞传代培养基终止消化，将细胞收集到离心管；s5 1200rpm/min离心8min；s6 吸弃培养基，重新加入10ml细胞传代培养基重悬，按8
×
104个细胞/ml进行传代培养；s7 培养至p3代，添加含有5ng/ml重组灵芝免疫调节蛋白的无血清培养基继续培养72h，收集培养诱导后的细胞培养原液；s8 采用低温超速离心的方式对细胞培养原液进行浓缩，超速离心时选用截留30 kd分子量蛋白的滤网进行浓缩，得到浓缩液即为干细胞培养浓缩液。
13.综上所述，本发明具有如下的有益技术效果：1.本发明采用重组灵芝免疫调节蛋白（rlz
‑
8）诱导脐带间充质干细胞，使干细胞分泌更多hgf\igf
‑
1\vegf等因子，更加适用于脂溢性脱发的头发再生。
14.2.本发明通过对干细胞培养浓缩液进行进一步的加工，得到的制剂能在脱发部位保持长久的活性，更有利于毛发的生长。
具体实施方式
15.下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
16.干细胞培养浓缩液的制备：s1取脐带，洗涤至无血迹；两头各剪掉1cm后，把脐带剪成2
‑
3cm的小段，再次洗涤至无血迹；s2 取出脐带中的华通胶，剪至1
±
0.1mm3大小；移至培养瓶中放入37℃、5%co2的培养箱内培养过夜；s3吸取15ml原代细胞培养基于培养瓶中；于37℃、5%co2的培养箱内培养，每7天换一次液，并在倒置显微镜下观察细胞的形态和生长情况，至细胞融合度达70
‑
80%止，此为p0代脐带间充质干细胞；s4继续培养p0代脐带间充质干细胞的融合度达到80
‑
90%时，进行细胞传代培养：将培养瓶的旧培养基吸弃，加入10ml生理盐水洗涤两遍；弃掉生理盐水，加入2ml细胞消化液，放入培养箱消化1min；加入10ml细胞传代培养基终止消化，将细胞收集到离心管；s51200rpm/min离心8min；s6吸弃培养基，重新加入10ml细胞传代培养基重悬，按8
×
104个细胞/ml进行传代培养；s7 培养至p3代，添加含有5ng/ml rlz
‑
8的无血清培养基继续培养72h，收集培养诱导后的细胞培养原液；s8 采用低温超速离心的方式对细胞培养原液进行浓缩，超速离心时选用截留30 kd分子量蛋白的滤网进行浓缩，得到浓缩液即为干细胞培养浓缩液。
17.制备三批次的干细胞培养浓缩液，测有效成分的含量，其平均值为：浓缩后kgf浓度为2683.24
µ
g/ml；igf
‑
1浓度为2854.33
µ
g/ml； fgf浓度为 712.32
µ
g/ml；egf浓度为498.57
µ
g/ml；kgf浓度为 1123.54
µ
g/ml；vegf浓度为 913.69
µ
g/ml。
18.实施例1 取干细胞培养浓缩8.5g、甘油0.3g、丙二醇0.1g、乙醇0.2g混合而成治疗脂溢性脱发的干细胞制剂。
19.实施例2取干细胞培养浓缩9.5g、甘油0.7g、丙二醇0.3g、乙醇0.4g混合而成治疗脂溢性脱发的干细胞制剂。
20.实施例3取干细胞培养浓缩9g、甘油0.5g、丙二醇0.2g、乙醇0.3g混合而成治疗脂溢性脱发的干细胞制剂。
21.实施例4所述治疗脂溢性脱发的干细胞制剂还包括有1.5
×
10
‑5mol/l的壳聚糖。
22.实施例5所述治疗脂溢性脱发的干细胞制剂还包括有5.0
×
10
‑5mol/l的壳聚糖。
23.实施例6所述治疗脂溢性脱发的干细胞制剂还包括有3
×
10
‑5mol/l的壳聚糖。
24.实施例7
所述治疗脂溢性脱发的干细胞制剂还包括有3.5
×
10
‑5mol/l的壳聚糖。
25.药效试验模型的建立取小鼠在背部长2.0cm*1.5cm面积大小的长方形区域，用3%苦味酸溶液染成黄色脱毛观察区。每天上午在选取染色区域内的小鼠背部皮下注射1.0mg/kg体重的丙酸睾酮注射液，模型组联系皮下注射丙酸睾酮3周后，小鼠背部毛色灰暗，失去光泽，于4周后逐渐出现毛发脱落，残存毛发变得纤细、质脆。则视为脂溢性脱发模型成功建立。
26.2.实验方法取建模完成后的小鼠80只，每组10只，雌雄各半。
27.对照组：取任意一组，第1
‑
63天，分别于每天8：00和16：00腹腔注射生理盐水，其中，第4
‑
63天，每天上午8：30还需皮下注射生理盐水，注射量为1kg小鼠重量1mg，每天给药一次。
28.模型组：取剩余的7组，第1
‑
63天，分别于每天8：00和16：00腹腔注射生理盐水，其中，第4
‑
63天，每天上午8：30每组分别注射实施例1
‑
6制备成的制剂，注射量为1kg小鼠重量1mg，每天给药一次。
29.观察各组脱发小鼠使用干细胞制剂前后的毛发数量变化（根/mm2）：
组别使用前毛发数量（根/mm2）使用后毛发数量（根/mm2）毛发出油情况毛囊的变化实施例16822486不再出油毛囊结构完整实施例27282897不再出油毛囊结构完整实施例36542353不再出油毛囊结构完整实施例47672965不再出油毛囊结构完整实施例56892436不再出油毛囊结构完整实施例67682359不再出油毛囊结构完整实施例76892458不再出油毛囊结构完整对照组647639出油情况更严重毛囊组织萎缩
本发明采用脂溢性脱发动物模型使用我们制备的新型生发剂后，脱发部位的毛发得到了再生，毛发数量得到了显著的增加。并且皮肤不再出油：而未使用新型生发剂的小鼠，其脱发现象更加严重，并且皮肤出油率增加。
30.本发明的生发剂对脂溢性脱发小鼠和经过新型生发剂治疗后的脂溢性脱发小鼠体内激素水平进行检测，发现脂溢性脱发动物模型体内的雄激素 、双氢辜酣以及 5a 还原酶的表达水平处于严重的紊乱状态：而经过新型生发剂治疗后的脂溢性脱发小鼠，其体内的上述三种激素水平与正常小鼠体内的激素水平完全一致。
31.本发明的生发剂对脂溢性脱发小鼠和经过新型生发剂治疗后的脂溢性脱发小 鼠皮肤组织中的毛囊结构进行病理学染色分析，发现脂溢性脱发小鼠皮肤组织中没有完整的毛囊，其毛囊结构被油脂包裹，并且已完全萎缩，丧失了为毛发继续提供营养成分的能力 ：而经过新型生发剂治疗后的脂溢性脱发小鼠，其皮肤组织中的毛囊结构完整，具备毛发再生的各项条件，并且毛囊组织周围无任何油脂堆积。
32.经过斑秃小鼠经过新型生发剂的治疗，其脱发部位己长出了新的毛发，并且新长出的毛发质地与正常小鼠的毛发无任何差别；而未经过新型生发剂治疗的斑秃小鼠，其脱发部位没有再生出新的毛发 。
33.对斑秃小鼠和经过新型生发剂治疗后的斑秃小鼠体内激素水平进行检测，发现斑秃动物模型体内的雌激素、辜自同以及孕自目的表达水平处于严重的紊乱状态：而经过新型生发剂治疗后的斑秃小鼠 ，其体内的上述三种激素水平与正常小鼠体内的激素水平完全一 致。
34.对斑秃小鼠和经过新型生发剂治疗后的斑秃小鼠皮肤组织中的毛囊结构进行病理学染色分析，发现斑秃小鼠皮肤组织中大部分的毛囊组织己经萎缩，丧失了维持再生出新毛发的能力：而经过新型生发剂治疗后的斑秃小鼠，其皮肤组织中的毛囊结构完整，具备毛发再生的各项条件。
35.以上均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。