梣酮在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用

1.本发明属于皮肤病药物领域，具体涉及梣酮在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用。


背景技术：

2.过敏性疾病主要包括过敏性皮肤病、过敏性呼吸道疾病、过敏性消化道疾病等，是临床上的常见病、多发病。
3.过敏性皮肤病在皮肤病中占有很大一部分比例，过敏原通过多种途径进入人体，与体内抗体结合后产生致敏现象，形成免疫复合物，刺激肥大细胞脱颗粒，释放组胺、白三烯等递质，从而诱发ige介导i型变态反应，导致皮肤红肿、溃烂、瘙痒等，由于影响外观，导致患者自卑，严重影响患者睡眠及生活治疗。过敏反应过程包括致敏、激发和效应3个阶段，具有发作迅速、反应强烈、但消退较快的特点，一般情况下不会破坏组织细胞，但严重过敏反应可危及生命。目前过敏性皮肤病的发病率不断攀升，然而其整体控制率却极低，严重影响着患者身体健康和生活质量，因此，过敏性皮肤病的预防、诊断、治疗和控制亟需被重视。
4.过敏皮肤病药物治疗以局部外用药为主，必要时加用系统药物。局部治疗的药物主要包括：(1)糖皮质激素；(2)钙调磷酸酶抑制剂，如他克莫司、吡美莫司。系统治疗的药物主要包括：(1)糖皮质激素，如泼尼松、曲安奈德；(2)抗组胺药物，如苯海拉明、依巴斯汀、氯雷他定、西替利嗪、咪唑斯汀等；(3)免疫抑制剂，如环孢素、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤。这些药物针对过敏反应的不同环节，疗效较明确，起效迅速，但存在针对部分患者无效、停药后易复发、不良反应多，如嗜睡、口干、头晕等各种问题。
5.相比过敏性皮肤病的高发率，现有药物尚不能满足临床需求，有必要发现和研制新型抗过敏药物。


技术实现要素：

6.本发明目的在于提供梣酮在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用。
7.本发明的目的通过下述技术方案实现：
8.梣酮在制备治疗过敏性皮肤病药物中的应用；
9.梣酮(fraxinellone)，化学名为3
‑
(3
‑
呋喃基)
‑
3a,4,5,6
‑
四氢
‑
3a,7
‑
二甲基苯酞，结构如下所示：
10.11.进一步地，所述的过敏性皮肤病包括荨麻疹、湿疹、接触性皮炎、异位性皮炎、过敏性紫癜、药疹中的一种或多种；
12.进一步地，所述过敏性皮肤病是由免疫球蛋白e介导的皮肤病；
13.所述药物的剂型可以是口服剂型或外用剂型；
14.所述口服剂型可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂或糖浆剂；
15.所述外用剂型可以是微乳剂、乳剂、乳膏剂、喷雾剂或凝胶剂；
16.所述的药物还可以含有一种以上药学上可以接受的载体；所述的载体优选为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂等。
17.本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
18.1、本发明首次利用梣酮治疗免疫球蛋白e(ige)介导的皮肤病药物，尤其是梣酮治疗过敏性皮肤病，为过敏性皮肤病的治疗提供了一种新的药物。
19.2、梣酮可促进th1型细胞产生ifn
‑
γ。将25mg/kg梣酮给予被动皮肤过敏的小鼠，皮肤组织肥大细胞脱颗粒被抑制，抑制率达34.01％。将50mg/kg梣酮给予被动皮肤过敏的小鼠，皮肤肥大细胞脱颗粒抑制率达54.34％。将100mg/kg梣酮给予被动皮肤过敏的小鼠，皮肤肥大细胞脱颗粒抑制率达62.5％。
附图说明
20.图1是各组小鼠皮肤蓝斑反应结果；
21.图2是各组小鼠表皮的苏木精
‑
伊红染色(he染色)结果(
×
100)；
22.图3是各组小鼠肥大细胞的甲苯胺蓝染色结果(
×
100)；
23.其中，a：正常组；b：模型组；c：25mg/kg梣酮；d：50mg/kg梣酮；e：100mg/kg梣酮；f：氯雷他定组。
具体实施方式
24.下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
25.实施例1
26.被动皮肤过敏试验(pca)
27.致敏：sd大鼠，体重200～250g，雌雄兼有，由广东省实验动物中心提供。取所述sd大鼠10只，每只腹腔注射含1mg卵白蛋白和10mg氢氧化铝生理盐水混合液1ml进行免疫；隔日1次，共3次，于末次致敏12d后处死，从腹主动脉取血，3000r
·
min
‑1离心10min，取上清液，制得抗血清，
‑
20℃保存备用。
28.被动致敏：balb/c小鼠，雌雄各半，18～22g，spf级，购自浙江维通利华实验动物技术有限公司。取60只balb/c小鼠，随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、梣酮低剂量组、梣酮中剂量组、梣酮高剂量组。
29.梣酮低、中、高剂量组分别按照25、50、100mg/kg灌胃，阳性组按照1.5mg/kg灌胃氯雷他定生理盐水溶液，模型组与正常组给予相应体积生理盐水，连续7d；第4d开始脱毛，在小鼠背中线两侧，距脊柱1cm处剪毛。第5d灌胃后，取抗卵蛋白血清(由上一步骤制得)在小
鼠脊柱两侧皮内对称注射总0.1ml(正常组不注射)。致敏后48h后即第7d末次给药后尾静脉注射5％卵蛋白+0.5％伊文斯蓝生理盐水溶液，进行抗原攻击。
30.30min后观察背部皮肤蓝斑的数量及大小，立即眼球取血，静置1h以上，3000r/min离心10min，取上清血，按照试剂盒说明书操作，用多功能酶标仪检测血清ige、inf
‑
γ、il
‑
4和il
‑
10的吸光度，根据标准曲线方程计算血清中各指标的浓度。
31.取脾脏，使用电子天平精密称定，计算脾指数(脾指数＝脾脏重量(mg)/小鼠体重(10g)，)。
32.摘取注射部位皮肤，放入10％甲醛溶液中，制石蜡切片，脱蜡，部分he染色，观察组织形态；部分甲苯胺蓝染色，显微镜下控制呈色后透明、封片。
33.通过高倍镜计数100个肥大细胞中脱颗粒细胞数，计算抑制率。
34.抑制率(％)＝(1
‑
给药组脱颗粒率/模型组脱颗粒率)
×
100％。
35.如图1所示，正常组小鼠未出现明显蓝斑，致敏部位皮肤蓝色染料渗出量较少，模型组皮肤出现明显蓝斑，伊文斯蓝渗出量明显增加，蓝斑较密集，颜色较深，数量显著增加(p<0.01)，说明造模成功。
36.与模型组相比，梣酮低、中、高剂量组蓝斑数量明显减少(p<0.05)，颜色较浅，伊文斯蓝渗出量均明显降低，说明低、中、高剂量梣酮均有明显的抗过敏效果。
37.药物组之间比较，梣酮低、中剂量组背部的蓝斑反应无明显差异，而与梣酮低、中剂量组比较，梣酮高剂量组背部蓝斑明显数量更少、颜色更浅，表明100mg/kg梣酮的抗过敏药效是最显著的。
38.各组小鼠直径3mm以上的蓝斑数量的统计见表1。与正常组相比，模型组蓝斑数量显著增加，表明造模成功。与模型组相比，梣酮低、中、高剂量组蓝斑数量显著降低，表明各剂量梣酮均有抗过敏效果。低、中、高剂量梣酮随剂量升高蓝斑数量有减少趋势，但无统计学差异。
39.表1各组小鼠的蓝斑数量比较(n＝10)
[0040][0041]
注：与正常组比较，
＊＊
p＜0.01；与模型组比较，
##
p＜0.01，
#
p＜0.05。
[0042]
脾脏指数可粗略反映机体免疫状态，由于过敏性皮肤病被认为是免疫相关性疾病，故考察了药效实验各组动物脾脏指数，结果见表2。与正常组比较，模型组脾指数显著升高(p<0.05)，说明造模成功。与模型组比较，梣酮中、高剂量组的脾指数显著降低(p<0.05)，而梣酮低剂量组无显著变化。药物组之间比较，与梣酮低剂量组比较，梣酮高剂量组脾指数
显著降低(p<0.01)，而梣酮中、高剂量组之间无显著变化。
[0043]
表2各组小鼠的脾指数比较(n＝10)
[0044][0045]
注：与正常组比较，
＊
p＜0.05；与模型组比较，
##
p＜0.01，
#
p＜0.05；与梣酮低剂量组比较，
δ
p＜0.01。
[0046]
正常组皮肤真皮组织排列紧密有序，炎性细胞较少。与正常组比较，模型组炎性细胞浸润增加，毛细血管扩张，组织间水肿明显，说明造模成功。与模型组比较，梣酮高剂量组炎性细胞明显减少，毛细血管收缩、水肿减轻，皮肤状态趋于正常；而梣酮低、中剂量组皮肤病理状态改善不显著，见图2。
[0047]
正常组肥大细胞胞质间颗粒排列整齐，个别细胞脱颗粒，且脱掉的颗粒数较少。与正常组相比，模型组细胞核周围颗粒排列紊乱，脱颗粒的细胞明显变多，且大量颗粒从细胞脱出。与模型组相比，各给药组脱颗粒状态均有明显改善，与梣酮低剂量组比较，梣酮中、高剂量组肥大细胞脱颗粒减少；而梣酮中、高剂量组之间无明显差异，见图3。
[0048]
与正常组比较，模型组皮肤脱颗粒的肥大细胞比例显著增加(p<0.01)；与模型组比较，梣酮低、中、高组皮肤肥大细胞脱颗粒率均显著降低(p<0.001)；与梣酮低、中剂量组比较，梣酮高剂量组的肥大细胞脱颗粒率显著降低(p<0.01)；阳性对照药氯雷他定组与梣酮中、高剂量组无统计学差异，见表3。
[0049]
表3各组小鼠皮肤肥大细胞脱颗粒率和抑制率(n＝10)
[0050][0051]
注：与正常组比较，
＊
p＜0.01；与模型组比较，
#
p＜0.01；与梣酮低、中剂量组比较，
δ
p＜0.01。
[0052]
血清抗原ige是过敏反应密切关联指标。与正常组比较，模型组血清中ige的表达水平显著增加(p<0.05)；与模型组比较，梣酮高剂量组ige的表达水平显著降低(p<0.05)，而梣酮低剂量组ige的表达水平进一步升高(p<0.01)；药物组之间比较，与梣酮低、高剂量组之间差异具有统计学意义(p<0.01)，见表4。
[0053]
表4各组小鼠血清的ige比较(n＝10)
[0054][0055]
注：与正常组比较，
＊
p＜0.05；与模型组比较，
##
p＜0.01，
#
p＜0.05；与梣酮低剂量组比较，
δ
p＜0.01。
[0056]
炎症因子是过敏反应的内在病理变化。与正常组比较，模型组小鼠血清中il
‑
4表达水平显著升高、而ifn
‑
γ的表达量显著降低(p＜0.01或p＜0.05)。与模型组比较，各给药组il
‑
4的表达量无显著变化；梣酮中、高剂量组血清中ifn
‑
γ的表达水平显著升高(p＜0.01或p＜0.05)；梣酮低剂量组与氯雷他定组血清中表达量无显著改变。与梣酮低剂量组比较，梣酮高剂量组的显著升高(p＜0.01)，优于阳性对照组，见表5。
[0057]
表5各组小鼠血清的il
‑
4、inf
‑
γ的表达量变化(n＝10)
[0058][0059]
注：与正常组比较，
＊
p＜0.05；与模型组比较，
##
p＜0.01，
#
p＜0.05；与梣酮低剂量组比较，
δ
p＜0.01。
[0060]
以上结果可以看出，25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg梣酮均可有效降低小鼠蓝斑数量，抑制小鼠肥大细胞脱颗粒，其中高剂量组优于阳性对照药氯雷他定；中高剂量梣酮可降低病态升高的脾指数和ifn
‑
γ，高剂量组显著降低ige，但阳性对照药对上述指标无显著影响，提示梣酮抗过敏作用机制不同于氯雷他定。
[0061]
实施例2
[0062]
含有梣酮的片剂
[0063]
配方：梣酮200g，乳糖88g，羟甲基淀粉钠9g，硬脂酸镁3g。
[0064]
制法：按配方称取梣酮原料药、乳糖和羟甲基淀粉钠(75％的配方量)混合，过120目筛3次，混匀。加入粘合剂适量制成软材，软材过18目筛，湿颗粒置烘箱中50℃干燥1h，用18目筛整粒，加入硬脂酸镁，及羟甲基淀粉钠(25％的配方量)，混匀，压片，即得。
[0065]
实施例3
[0066]
含有梣酮的胶囊
[0067]
配方：梣酮180g，淀粉50g，糊精50g。
[0068]
制法：称取梣酮原料药，加淀粉、糊精，混匀，用90％乙醇作为润湿剂进行湿法制粒，于50℃下真空干燥后制粒，过40目筛和200目筛除去细粉，湿度低于60％环境下将药粉颗粒装入3号胶囊，即得。
[0069]
实施例4
[0070]
含有梣酮的颗粒剂
[0071]
配方：梣酮40g，β
‑
环糊精200g，水200g，无水乙醇50g。
[0072]
制法：β
‑
环糊精溶于水，加热搅拌使之溶解；梣酮溶于无水乙醇后，缓慢滴入β
‑
环糊精水溶液中，搅拌；冷却后过滤得结晶，洗涤、干燥，粉碎，过40目筛，即得。
[0073]
实施例5
[0074]
含有梣酮的糖浆剂
[0075]
配方：梣酮35g，枸橼酸8g，丙二醇60g，丙三醇40g，苯甲酸钠1g，蔗糖350g，香精1g，加水至1000ml。
[0076]
制法：称取梣酮加入到丙二醇中搅拌超声至溶解，再加入丙三醇搅拌均匀；称取蔗糖加入约4/5配制量的纯化水加热煮沸，放冷，并加入苯甲酸钠搅拌15min，控制ph值在3.0，在不断搅拌下加入溶解的落新妇苷溶液，搅拌45min，滤过，冷却至室温，加入香精纯化水定容至配制量搅拌均匀，即得。
[0077]
实施例6
[0078]
含有梣酮的微乳
[0079]
配方：梣酮1.00g，油酸聚乙二醇甘油酯0.50g，聚氧乙烯氢化蓖麻油el353.00g，二乙二醇单乙基醚1.00g，加水至10.00g。
[0080]
制法：按上述处方，称取油酸聚乙二醇甘油酯(labrafil m 1944cs)、聚氧乙烯氢化蓖麻油el35和二乙二醇单乙基醚(transcutol hp)，搅拌混均，加入梣酮，继续搅拌，待药物完全溶解，加入蒸馏水，继续匀速揽拌得到初乳，将初乳超声至形成淡黄色透明的o/w型中药组分组合微乳，即得。
[0081]
实施例7
[0082]
含有梣酮的乳剂
[0083]
配方：梣酮0.8g，油酸聚乙二醇甘油酯2.00g，聚氧乙烯40氢化蓖麻油2.40g，二乙二醇单乙基醚0.80g，加水至10.00g。
[0084]
制法：按以上处方，称取油酸聚乙二醇甘油酯(labrafil m 1944cs)，聚氧乙烯40氢化蓖麻油(rh40)g，二乙二醇单乙基醚(transcutol hp)g，搅拌混均，加入梣酮，待药粉完
全溶解，缓慢加入蒸馏水，继续匀速揽拌得到初乳，将初乳超声后得到不透明的乳剂，即得。
[0085]
实施例8
[0086]
含有梣酮的乳膏剂
[0087]
配方：梣酮0.50g，十八醇1.20g，白凡士林0.80g，单硬脂酸甘油酯0.60g，吐温80 0.25g，甘油0.69g，尼泊金乙酯0.01g，加水至10.00g。
[0088]
制法：按以上处方，称取油相，十八醇、白凡士林、单硬脂酸甘油酯，水相，吐温80、甘油、尼泊金乙酯、蒸馏水，将油相、水相分别置于80℃水浴锅中加热，待完全溶解后，将水相缓慢倒入油相中，边加边搅拌，均匀，最后加入梣酮原料药，继续搅拌至冷却，即得。
[0089]
实施例9
[0090]
含有梣酮的喷雾剂
[0091]
配方：梣酮2.50g，乙醇8.00g，氮酮0.70g，吐温80 0.80g，甘油0.50g，苯甲酸钠0.20g，加水至100.00g。
[0092]
制法：按以上处方，称取梣酮和乙醇，充分溶解，再依次加入氮酮、吐温
‑
80、甘油、苯甲酸钠和水，搅拌均匀，过滤，罐装，即得。
[0093]
实施例10
[0094]
含有梣酮的凝胶剂
[0095]
配方：梣酮2.5g，卡波姆940 0.4g，甘油10.0g，无水乙醇10.0g，氮酮2.0g，吐温
‑
80 1.0g，尼泊金乙酯0.1g，三乙醇胺适量，加水至100.0g。
[0096]
制法：称取卡波姆940、甘油、无水乙醇、蒸馏水，搅拌均匀后放置过夜，加入梣酮，搅拌均匀，依次再加入氮酮、吐温
‑
80，蒸馏水加至100g，三乙醇胺调节ph至5，加入0.1g尼泊金乙酯，搅拌充分，混匀，即得。
[0097]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。