一种治疗慢性肝炎的中药组合物及其应用

1.本发明涉及一种中药组合物及其应用，具体涉及一种治疗慢性肝炎的中药组合物及其应用，属于中医药领域。


背景技术：

2.慢性肝炎是由于肝炎病毒侵入人体后，未被机体及时清除，造成的肝脏的慢性损害和重度损害。症见面色苍白或双目、面色黄染，倦怠乏力，胸脘痞满，不思饮食，脾肿大，蜘蛛痣，肝掌，肝功能轻至重度异常。严重地影响人体健康，甚则造成人的死亡。对社会生产、学习、生活、家庭带来极大的伤害。特别是乙肝病发展成慢性肝炎的机率较大。我国人口中，患乙肝的人甚多，目前又没有特别有效的药物治疗。
3.祖国医学虽无慢性肝炎的名称，但其临床症状相当于“黄疸”、“急黄”、“胁疼”、“虚劳”等病症范围，是由于湿热内蕴，郁久不解，伤及人体元气所致。文献报道中采用疏肝腱脾法治疗慢肝者甚多。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种治疗慢性肝炎的中药组合物及其应用，该中药组合物具有活血祛瘀、养肝育阴之功，在治疗慢性肝炎方面效果显著。
5.作为本发明的一个方面，本发明提供一种治疗慢性肝炎的中药组合物，所述中药组合物由如下原料药制成：丹参、北沙参、麦冬、地黄、赤芍、黄芪、太子参、猪苓、泽泻、川芎、枳壳、甘草。
6.优选的，所述中药组合物由如下原料药制成：丹参60
‑
300重量份、北沙参60
‑
300重量份、麦冬30
‑
180重量份、地黄25
‑
140重量份、赤芍50
‑
250重量份、黄芪50
‑
250重量份、太子参50
‑
250重量份、猪苓25
‑
140重量份、泽泻30
‑
180重量份、川芎25
‑
140重量份、枳壳25
‑
140重量份、甘草8
‑
45重量份。
7.进一步优选的，所述中药组合物由如下原料药制成：丹参90
‑
260重量份、北沙参90
‑
260重量份、麦冬50
‑
150重量份、地黄40
‑
110重量份、赤芍80
‑
210重量份、黄芪80
‑
210重量份、太子参80
‑
210重量份、猪苓40
‑
110重量份、泽泻50
‑
150重量份、川芎40
‑
110重量份、枳壳40
‑
110重量份、甘草12
‑
35重量份。
8.更进一步优选的，所述中药组合物由如下原料药制成：丹参120
‑
210重量份、北沙参120
‑
210重量份、麦冬80
‑
120重量份、地黄52
‑
80重量份、赤芍100
‑
160重量份、黄芪100
‑
160重量份、太子参100
‑
160重量份、猪苓52
‑
80重量份、泽泻80
‑
120重量份、川芎52
‑
80重量份、枳壳52
‑
80重量份、甘草15
‑
28重量份。
9.最优选的，所述中药组合物由如下原料药制成：丹参167重量份、北沙参167重量份、麦冬100重量份、地黄67重量份、赤芍133重量份、黄芪133重量份、太子参133重量份、猪苓67重量份、泽泻100重量份、川芎67重量份、枳壳67重量份、甘草20重量份；
10.或，丹参130重量份、北沙参195重量份、麦冬85重量份、地黄75重量份、赤芍110重
量份、黄芪155重量份、太子参110重量份、猪苓75重量份、泽泻85重量份、川芎75重量份、枳壳55重量份、甘草26重量份；
11.或，丹参195重量份、北沙参130重量份、麦冬112重量份、地黄55重量份、赤芍155重量份、黄芪110重量份、太子参155重量份、猪苓55重量份、泽泻112重量份、川芎55重量份、枳壳75重量份、甘草16重量份。
12.上述技术方案中，所述中药组合物可以是上述原料药组成或制成的任何形式，包括：上述原料药分别粉碎后再混合而成的组合物；或，上述原料药混合后经粉碎得到的组合物；或，上述原料药混合后按常规提取方法提取后得到提取物，提取物进一步经过精制纯化工艺得到有效部位，将上述提取物、有效部位进一步按照常规制剂工艺制备得到常规口服剂型。
13.上述常规提取方法包括浸渍提取、煎煮提取、回流提取、渗漉提取、超声提取、微波提取等；所述提取溶剂包括水或常规有机溶剂，如乙醇、甲醇、乙酸乙酯、石油醚、异丙醇等；所述精制纯化工艺包括萃取、柱层析分离、高效液相色谱分离等。
14.上述常规口服剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液。制备上述剂型时需要加入常用药学可接受的辅料，包括：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。
15.本发明中药组合物除了以原料药的形式进行投料，还可以上述比例的提取物形式或者制成颗粒进行投料。
16.作为本发明的另一个方面，本技术进一步提供一种治疗慢性肝炎的中药组合物，所述中药组合物的原料为：丹参提取物60
‑
300重量份、北沙参提取物60
‑
300重量份、麦冬提取物30
‑
180重量份、地黄提取物25
‑
140重量份、赤芍提取物50
‑
250重量份、黄芪提取物50
‑
250重量份、太子参提取物50
‑
250重量份、猪苓提取物25
‑
140重量份、泽泻提取物30
‑
180重量份、川芎提取物25
‑
140重量份、枳壳提取物25
‑
140重量份、甘草提取物8
‑
45重量份。
17.优选的，所述中药组合物由如下原料制成：丹参提取物90
‑
260重量份、北沙参提取物90
‑
260重量份、麦冬提取物50
‑
150重量份、地黄提取物40
‑
110重量份、赤芍提取物80
‑
210重量份、黄芪提取物80
‑
210重量份、太子参提取物80
‑
210重量份、猪苓提取物40
‑
110重量份、泽泻提取物50
‑
150重量份、川芎提取物40
‑
110重量份、枳壳提取物40
‑
110重量份、甘草提取物12
‑
35重量份。
18.进一步优选的，所述中药组合物由如下原料制成：丹参提取物120
‑
210重量份、北沙参提取物120
‑
210重量份、麦冬提取物80
‑
120重量份、地黄提取物52
‑
80重量份、赤芍提取物100
‑
160重量份、黄芪提取物100
‑
160重量份、太子参提取物100
‑
160重量份、猪苓提取物52
‑
80重量份、泽泻提取物80
‑
120重量份、川芎提取物52
‑
80重量份、枳壳提取物52
‑
80重量份、甘草提取物15
‑
28重量份。
19.最优选的，所述中药组合物由如下原料制成：丹参提取物167重量份、北沙参提取物167重量份、麦冬提取物100重量份、地黄提取物67重量份、赤芍提取物133重量份、黄芪提
取物133重量份、太子参提取物133重量份、猪苓提取物67重量份、泽泻提取物100重量份、川芎提取物67重量份、枳壳提取物67重量份、甘草提取物20重量份。
20.在上述技术方案中，所述提取物可以是各原料药的水提物，或有机溶剂提取物，或水提物/有机溶剂提取物经过进一步精制纯化工艺得到的精制物，或进一步制成的配方颗粒。
21.所述有机溶剂选自甲醇、20～95％乙醇溶液、丙酮中的一种或几种；
22.制备上述提取物所用的提取方法包括回流提取、浸渍提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式，或者不同提取方法的组合。
23.本发明所涉及的原料药丹参、北沙参、麦冬、地黄、赤芍、黄芪、太子参、猪苓、泽泻、川芎、枳壳、甘草均符合《中国药典》(2020版)的记载。
24.作为本发明的另一个方面，本发明还提供所述中药组合物在制备治疗慢性肝炎和/或肝硬化的药物中的应用。
25.优选的，所述中药组合物在制备改善肝功能的药物中的应用。
26.优选的，所述中药组合物在制备抗乙肝病毒的药物中的应用。
27.本方以丹参，沙参为君。丹参苦微寒功擅活血祛瘀，《日华诸家本草》谓其“破宿血，生新血”，本方重用意在活血消瘀。沙参甘质微寒，养阴生阴，以扶其正，补阴液之不足。麦冬，生地，赤芍，黄芪为臣。其中麦冬，生地均为甘寒之品，能生阴液，助君药沙参以养阴保肝。赤芍苦微寒，活血祛瘀，与君药丹参同用，可增强本方活血祛瘀之功能。黄芪甘温，健脾益气，利水消肿。太子参、猪苓、泽泻、川芎、枳壳为佐。其中太子参健脾益气；猪苓，泽泻利水消肿，川芎活血祛瘀；血瘀水停，气机不利，故用枳壳以舒气，同时能防止养阴药所致的脾胃之气壅滞，故为佐。生甘草调和诸药，故为使。本方诸药配伍使用，共奏活血祛瘀，养阴利水之功效。
具体实施方式
28.实施例1
29.组方：丹参167g、北沙参167g、麦冬100g、地黄67g、赤芍133g、黄芪133g、太子参133g、猪苓67g、泽泻100g、川芎67g、枳壳67g、甘草20g；
30.制备方法：以上十二味，加水煎煮，滤过，滤液减压浓缩，加入对羟基苯甲酸乙酯0.5g，加水调整总量至1000ml，搅匀，灌装，灭菌，即得。
31.规格：每ml含生药1.22g，每瓶装75ml。
32.用法用量：口服，一次75ml，一日2次。
33.实施例2
34.组方：丹参130g、北沙参195g、麦冬85g、地黄75g、赤芍110g、黄芪155g、太子参110g、猪苓75g、泽泻85g、川芎75g、枳壳55g、甘草26g；
35.制备方法、规格及用法用量同实施例1。
36.实施例3
37.组方：丹参195g、北沙参130g、麦冬112g、地黄55g、赤芍155g、黄芪110g、太子参155g、猪苓55g、泽泻112g、川芎55g、枳壳75g、甘草16g；
38.制备方法、规格及用法用量同实施例1。
39.实施例4
40.组方：丹参155g、北沙参180g、麦冬92g、地黄70g、赤芍125g、黄芪140g、太子参125g、猪苓70g、泽泻92g、川芎72g、枳壳58g、甘草22g；
41.制备方法：以上十二味，加70％乙醇回流提取，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩，加入对羟基苯甲酸乙酯0.5g，加水调整总量至1000ml，搅匀，灌装，灭菌，即得。
42.规格：每ml含生药1.2g，每瓶装75ml。
43.用法用量：口服，一次75ml，一日2次。
44.实施例5
45.组方：丹参180g、北沙参155g、麦冬105g、地黄58g、赤芍140g、黄芪125g、太子参140g、猪苓58g、泽泻105g、川芎58g、枳壳68g、甘草18g；
46.制备方法、规格及用法用量同实施例4。
47.实施例6
48.组方：丹参100g、北沙参255g、麦冬55g、地黄105g、赤芍85g、黄芪195g、太子参85g、猪苓105g、泽泻55g、川芎105g、枳壳43g、甘草33g；
49.制备方法、规格及用法用量同实施例4。
50.实施例7
51.组方：丹参255g、北沙参100g、麦冬135g、地黄43g、赤芍195g、黄芪85g、太子参195g、猪苓43g、泽泻135g、川芎43g、枳壳105g、甘草13g；
52.制备方法：以上十二味，加60％乙醇渗漉提取，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩，加入对羟基苯甲酸乙酯0.5g，加水调整总量至1000ml，搅匀，灌装，灭菌，即得。
53.规格：每ml含生药1.3g，每瓶装75ml。
54.用法用量：口服，一次75ml，一日2次。
55.实施例8
56.组方：丹参110g、北沙参240g、麦冬72g、地黄92g、赤芍95g、黄芪170g、太子参95g、猪苓92g、泽泻72g、川芎92g、枳壳48g、甘草30g；
57.制备方法、规格及用法用量同实施例7。
58.实施例9
59.组方：丹参240g、北沙参110g、麦冬128g、地黄48g、赤芍170g、黄芪95g、太子参170g、猪苓48g、泽泻128g、川芎48g、枳壳92g、甘草14g；
60.制备方法、规格及用法用量同实施例7。
61.实施例10
62.组方：丹参80g、北沙参270g、麦冬45g、地黄120g、赤芍70g、黄芪220g、太子参70g、猪苓120g、泽泻45g、川芎120g、枳壳35g、甘草38g；
63.制备方法：以上十二味，加水渗漉提取，滤过，滤液减压浓缩，减压干燥(或喷雾干燥)，粉碎成细粉，加糊精适量，用乙醇制成颗粒，干燥，压片，制成片剂。
64.实施例11
65.组方：丹参270g、北沙参80g、麦冬160g、地黄35g、赤芍220g、黄芪70g、太子参220g、猪苓35g、泽泻160g、川芎35g、枳壳120g、甘草11g；
66.制备方法同实施例10。
67.实施例12
68.组方：丹参70g、北沙参290g、麦冬33g、地黄135g、赤芍60g、黄芪240g、太子参60g、猪苓135g、泽泻33g、川芎135g、枳壳28g、甘草42g；
69.制备方法同实施例10。
70.实施例13
71.组方：丹参290g、北沙参70g、麦冬175g、地黄28g、赤芍240g、黄芪60g、太子参240g、猪苓28g、泽泻175g、川芎28g、枳壳135g、甘草9g；
72.制备方法同实施例10。
73.实施例14
74.组方：丹参颗粒167g、北沙参颗粒167g、麦冬颗粒100g、地黄颗粒67g、赤芍颗粒133g、黄芪颗粒133g、太子参颗粒133g、猪苓颗粒67g、泽泻颗粒100g、川芎颗粒67g、枳壳颗粒67g、甘草颗粒20g；
75.以上颗粒分别由各原料药采用水提法制备而成：如丹参颗粒，取丹参，加水煎煮，滤过，滤液减压浓缩，减压干燥(或喷雾干燥)，粉碎成细粉，加糊精适量，用乙醇制成颗粒。
76.实施例15
77.组方：丹参颗粒130g、北沙参颗粒195g、麦冬颗粒85g、地黄颗粒75g、赤芍颗粒110g、黄芪颗粒155g、太子参颗粒110g、猪苓颗粒75g、泽泻颗粒85g、川芎颗粒75g、枳壳颗粒55g、甘草颗粒26g；
78.以上颗粒制备方法同实施例14。
79.实施例16
80.组方：丹参颗粒195g、北沙参颗粒130g、麦冬颗粒112g、地黄颗粒55g、赤芍颗粒155g、黄芪颗粒110g、太子参颗粒155g、猪苓颗粒55g、泽泻颗粒112g、川芎颗粒55g、枳壳颗粒75g、甘草颗粒16g；
81.以上颗粒制备方法同实施例14。
82.实施例17
83.组方：丹参提取物167g、北沙参提取物167g、麦冬提取物100g、地黄提取物67g、赤芍提取物133g、黄芪提取物133g、太子参提取物133g、猪苓提取物67g、泽泻提取物100g、川芎提取物67g、枳壳提取物67g、甘草提取物20g；
84.以上提取物分别为各原料药的水提取物。即各原料药以水为溶媒采用常规方法提取得到。
85.实施例18
86.组方：丹参提取物100g、北沙参提取物255g、麦冬提取物55g、地黄提取物105g、赤芍提取物85g、黄芪提取物195g、太子参提取物85g、猪苓提取物105g、泽泻提取物55g、川芎提取物105g、枳壳提取物43g、甘草提取物33g；
87.以上提取物分别为各原料药的水提取物。即各原料药以水为溶媒采用常规方法提取得到。
88.实施例19
89.组方：丹参提取物255g、北沙参提取物100g、麦冬提取物135g、地黄提取物43g、赤芍提取物195g、黄芪提取物85g、太子参提取物195g、猪苓提取物43g、泽泻提取物135g、川芎
提取物43g、枳壳提取物105g、甘草提取物13g；
90.以上提取物分别为各原料药的水提取物。即各原料药以水为溶媒采用常规方法提取得到。
91.实施例20
92.组方：丹参提取物110g、北沙参提取物240g、麦冬提取物72g、地黄提取物92g、赤芍提取物95g、黄芪提取物170g、太子参提取物95g、猪苓提取物92g、泽泻提取物72g、川芎提取物92g、枳壳提取物48g、甘草提取物30g；
93.以上所述提取物为各原料药的70％乙醇提取物。即各原料药以70％乙醇为溶媒采用常规方法提取得到。
94.实施例21
95.组方：丹参提取物240g、北沙参提取物110g、麦冬提取物128g、地黄提取物48g、赤芍提取物170g、黄芪提取物95g、太子参提取物170g、猪苓提取物48g、泽泻提取物128g、川芎提取物48g、枳壳提取物92g、甘草提取物14g；
96.以上提取物分别为各原料药的水提取物。即各原料药以水为溶媒采用常规方法提取得到。
97.实施例22
98.组方：丹参提取物70g、北沙参提取物290g、麦冬提取物33g、地黄提取物135g、赤芍提取物60g、黄芪提取物240g、太子参提取物60g、猪苓提取物135g、泽泻提取物33g、川芎提取物135g、枳壳提取物28g、甘草提取物42g；
99.以上提取物分别为各原料药的水提取物。即各原料药以水为溶媒采用常规方法提取得到。
100.实施例23
101.组方：丹参提取物290g、北沙参提取物70g、麦冬提取物175g、地黄提取物28g、赤芍提取物240g、黄芪提取物60g、太子参提取物240g、猪苓提取物28g、泽泻提取物175g、川芎提取物28g、枳壳提取物135g、甘草提取物9g；
102.以上提取物分别为各原料药的水提取物。即各原料药以水为溶媒采用常规方法提取得到。
103.效果实施例一
104.本临床试验拟对照治疗试验，治疗组总例数不少于60例(肝硬化和慢性肝炎各30例)，对照组60例。试验病例选择时，采用住院病例和门诊病例，随访期间不得加服治疗同类病症药物。试验的全部结果进行统计学处理和评价。本组观察组和对照组各60例，实验条件、性别构成比、年龄、病程及病情分布方面统计学处理无显著差异(p>0.05)。
105.(一)试验方法
106.1病例选择标准
107.诊断标准：参照《中药新药临床研究指导原则》及中国中医药学会内科肝病委员会1991年天津会议标准
108.(1)中医辨证
109.主症：
①
胁肋疼痛、
②
腹胀尿少、
③
舌质红少苔
110.次症：
①
胁下积块、
②
周身乏力、
③
口干口渴、
④
下肢水肿、
⑤
脉沉细
111.辨证要求：具备主症
①‑③
即可诊断；具备主症两项次症三项即可诊断。
112.(2)西医诊断标准：根据《病毒性肝炎防治方案》(1995年5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订)而制定。
113.2观测指标
114.(1)安全性观测：
①
血、尿、便常规化验；
②
心电图；
③
尿素氮。
115.(2)疗效观测：慢性肝炎的临床症状；慢性肝炎的体征；血清总胆红素tbil、谷丙转氨酶alt、谷草转氨酶ast；血清hbsag、抗
‑
hbs、hbeag、抗
‑
hbe、抗
‑
hb、hbv
‑
dna测定。
116.3疗效判定标准
117.根据《中药新药临床研究指导原则》中病毒性肝炎的慢性肝炎疗效判定标准。
118.显效：中医主次症治疗后积分下降值70％
‑
90％；肝脾肿大稳定不变或缩小，无压痛及叩痛；肝功检查正常，以上各项指标稳定半年以上者。
119.有效：中医主次症治疗后积分下降值50％
‑
70％；肝脾肿大稳定不变，且无明显压痛及叩痛；肝功检查正常或原值下降50％以上，并持续三个月者。
120.无效：中医主次症治疗后积分下降值<20％；疗程结束后，alt不下降者。肝硬化疗效判断标准参考以上慢性肝炎疗效判断标准。
121.4实验药物
122.观察组：实施例1制备的中药组合物，75ml/次、3次/日，口服。
123.对照组：乙肝益气解郁冲剂，由柴胡(醋炙)、枳壳、白芍、丹参、黄芪、党参、黄连组成，20g/次、3次/日，口服
124.疗程：均为三个月
125.(二)临床试验结果
126.1观察组与对照组总有效率考察结果
127.结果见表1。
128.表1观察组和对照组总有效率考察结果
[0129][0130]
结果表明，观察组中总有效率与对照组相比统计学处理有显著差异(p<0.05)。说明本发明中药组合物能显著提高临床疗效。
[0131]
两组治疗后临床症状均有改善，本发明中药组合物治疗前后症状减轻或消失更为明显，特别是在胁肋隐痛、腹胀症状改善上与对照组相比有显著性差异。提示本发明中药组合物能有效的改善临床症状。服用本发明中药组合物后，患者舌、脉象有明显好转，提示本发明中药组合物具有养阴活血通络的作用，对阴虚血淤而致的症状体征治疗效果满意。
[0132]
2观察组和对照组生化指标考察结果
[0133]
结果见表2
‑
3。
[0134]
表2观察组和对照组生化指标考察结果
‑
1(x
±
sd)
[0135][0136]
表3观察组和对照组生化指标考察结果
‑
2(x
±
sd)
[0137][0138]
结果表明，本发明中药组合物治疗后患者肝功能恢复较好，特别是对降低alt、tbil和转肽酶、碱性磷酸酶有明显疗效，与对照组有显著差异(p<0.05)。提示该方对恢复肝功能有确切疗效。
[0139]
3观察组和对照组乙肝标记物检测结果
[0140]
结果见表4。
[0141]
表4观察组和对照组乙肝标记物检测结果
[0142][0143]
经本发明中药组合物治疗后例病人hbeag阴转2例，阴转率6.9％，hbv
‑
dna阴转2例，阴转率5.3％,，提示该药具有一些促进病毒指标阴转的作用。
[0144]
4安全性评价
[0145]
结果见表5。
[0146]
表5本发明中药组合物对血、尿、便常规和肾功能的影响
[0147][0148]
结果表明，治疗后患者血、尿、便常规和肾功能bun及心电图与治疗前比较无改变，说明本发明中药组合物临床应用对心、肾脏器无毒副作用和不良影响。
[0149]
5随访结果
[0150]
本发明中药组合物治疗慢性乙型肝炎3月后，随访3个月，随访病人40例，平均年龄39.05
±
11.17。本发明中药组合物治疗慢性乙型肝炎停药后3个月，总有效率仍稳定在100.0％，治疗后与随访时对比分析无明显变化。患者在随访时肝功能指标检测有进一步好转，提示该药有稳定的疗效。
[0151]
(三)总结
[0152]
以上临床试验研究结果显示，本发明中药组合物治疗慢性乙型肝炎是有效的，具体体现在下面几个方面：
[0153]
1、提高临床治疗效果：该药治疗后的显效率达36.7％，与对照组相比有显著差异，反映其疗效肯定；服用3月后随访发现，患者临床症状和体征无反复或恶化，肝功能稳定，观察指标与治疗后相比有继续好转，提示该药有稳定持续的疗效；
[0154]
2、改善肝功能生化指标：治疗肝炎改善肝功能是很重要的一点。该药有效的恢复患者肝功能，特别是恢复alt、tbil、ggt的疗效更为突出，与对照组相比有显著性差异；
[0155]
3、改善临床症状体征：该药治疗后病人症状减轻，疗程结束时症状均明显好转，提示该药能缓解症状，促进肝功能的恢复；
[0156]
4、抗病毒作用：该药治疗后6.9％病人病毒复制指标阴转，提示该药有抑制病毒复制的作用，但不显著；
[0157]
5、无明显毒副作用：服用本发明中药这后患者未发现发热、皮疹和心率等不良反应，心电图、血、尿、便和bun正常，提示该药应用时无毒副作用和不良反应。
[0158]
效果实施例二
[0159]
(一)实验材料
[0160]
1受试药物：实施例1制备的合剂。
[0161]
2剂量设计：本发明中药组合物临床人日用量为178g生药，人按60公斤计算为2.97g生药/kg，试验用剂量按动物与人公斤体重折算，中剂量约相当于人临床等效剂量，再按1/2和2倍临床剂量各设一个剂量组，即大鼠灌胃剂量为32、16、8g生药/kg，小鼠灌胃剂量为64、32、16g生药/kg。
[0162]
3阳性对照药：朝阳丸，北京双桥制药公司出品，批号：991101，动物给药剂量按动物与人公斤体重折算，大鼠临床等效剂量为0.18g/kg(ig)，小鼠为0.36g/kg(ig)。
[0163]
4试剂：丙氨酸氨基转换酶(alt)、天门冬氨酸氨基转换酶(ast)，总蛋白、白蛋白测定试剂盒，均为北京北化精细化学品有限公司临床诊断试剂分厂产品。其它试剂均为市售分析纯。环磷酰胺，中美合资山西泰盛制药有限公司生产，批号990108。
[0164]
5动物：wistar大鼠，体重190
‑
210g，昆明种小鼠，体重18
‑
20g，雌雄各半，均由中国医学科学院动物研究所提供，动物合格证号分别为医动字01
‑
3008和医动字第01
‑
3001号。
[0165]
6仪器：uv
‑
754连续式分光光度计，上海第三分析仪器厂产品。
[0166]
(二)实验方法及结果
[0167]
1对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响
[0168]
取wistar大鼠，按体重随机分为5组，即正常对照组、肝损伤模型组、朝阳丸组、中药组合物高、中剂量组。除正常对照组外，各组动物腹腔注射30％ccl4植物油0.2ml/100g体重，每周两次，共七周，正常对照组ip生理盐水。造模同时每日ig给药一次(1ml/100g体重，正常对照组ig同体积的蒸馏水)，连续给药7周。实验结束前，动物禁食12小时，将动物摘眼球采血，以3000转/分离心10分钟，分离血清，测定gpt、got、总蛋白、白蛋白，采血后将动物处死，取肝组织作羟脯氨酸测定肝胶原蛋白含量。
[0169]
结果见表6
‑
7。
[0170]
表6本发明中药组合物对四氯化碳致大鼠肝损伤的影响
[0171][0172][0173]
表7本发明中药组合物对大鼠肝胶原蛋白的影响
[0174][0175]
注：与正常组相比
#
p<0.05，
##
p<0.01；与模型组比较，
*
p<0.05。
[0176]
结果表明，本发明中药组合物可抑制多次注射ccl4引起的大鼠血清转氨酶的升高、总蛋白和白蛋白降低，减少肝胶原蛋白含量。
[0177]
2本发明中药组合物的利尿作用
[0178]
取昆明种小鼠，体重18
‑
20g，雄性，随机分为5组，即正常对照组、朝阳丸组、中药组合物高、中、低剂量组，每组20只。各组动物每日上午ig给药一次(正常对照组ig同体积的蒸馏水)，连续给药5天。于实验前，将小鼠禁食12小时，轻压小鼠下腹以排尽余尿，每鼠ip生理盐水1ml作水负荷，30分钟后，ig给药，将小鼠放入铺有数层滤纸的简易代谢笼中(滤纸先精密称重)，每笼2只，而后每小时换纸一次，共观察5小时，称出滤纸增加的重量作为尿量。
[0179]
结果见表8。
[0180]
表8本发明中药组合物对小鼠的利尿作用(n＝20)
[0181][0182]
注：与模型组比较，*p<0.05。
[0183]
结果表明，本发明中药组合物有一定的利尿作用，以药后1
‑
3小时作用明显。
[0184]
3对免疫功能的影响
‑
迟发型变态反应(dth)
[0185]
取昆明种小鼠，体重18
‑
20g，雄性，随机分为5组，即正常对照组、朝阳丸组、保肝养阴合剂高、中、低三个剂量组，每组10只。每日上午ig给药一次(正常对照组ig同体积的蒸馏水)，连续给药5天后，小鼠iv 2％(v/v)绵羊红细胞(srbc)致敏，0.2ml/只，4天后，用游标卡尺测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20％srbc(20μl/鼠)，注射后24小时再次测量左后足跖厚度。以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示dth的程度。
[0186]
结果见表9。
[0187]
表9本发明中药组合物对正常小鼠迟发型变态反应的影响(x
±
sd)
[0188][0189]
注：与对照组比较，*p<0.05。
[0190]
结果表明，本发明中药组合物高剂量组对小鼠迟发型过敏反应有一定的增强作用。
[0191]
4对免疫功能的影响
‑
脾脏抗体生成细胞检测
[0192]
取昆明种小鼠，体重20g，雄性，随机分为6组，即正常对照组、环磷酰胺组、朝阳丸组、保肝养阴合剂高、中、低组，每组10只。每日上午ig给药一次(正常对照组ig同体积的蒸馏水)，连续9天，药后第五天，每只鼠iv 2％(v/v)srbc 0.2ml/只致敏，然后除正常对照组外，各组小鼠腹腔注射15mg/kg体重环磷酰胺0.2ml/20g，次日再注射一次，共两次。致敏第5天放血处死小鼠，取出脾脏，用磷酸缓冲液制成脾细胞悬液(5
×
106脾细胞/ml)。依次加入脾细胞悬液、0.2％srbc和豚鼠血清(补体)，混匀，置37℃水浴中温育1小时，离心，吸取上清
液，在分光光度计(413nm波长)测定吸收度。
[0193]
结果见表10。
[0194]
表10本发明中药组合物对小鼠脾脏抗体生成细胞数的影响(x
±
sd)
[0195][0196]
注：与正常组相比，
##
p<0.01；与模型组比较，
*
p<0.05。
[0197]
结果表明，本发明中药组合物能有提高小鼠脾脏抗体细胞生成量的作用，中剂量组与模型组相比有显著性差异。
[0198]
(三)结论
[0199]
本发明中药组合物可抑制ccl4所致大鼠血清gpt、got升高，提高血清蛋白量，肝组织检查显示，能改善病理变化并抑制肝糖元含量降低，以高剂量组作用明显；对免疫系统的影响，能明显提高小鼠脾脏抗体细胞生成量，并对羊红细胞所致小鼠迟发型超敏反应有一定的增强作用；通过小鼠利尿试验，显示药物亦可增加排尿量，以药后1
‑
3小时作用明显。以上试验表明，本发明中药组合物具有较好的活血化瘀养阴利水功效，为临床用药提供了药效学基础。