内源性硫化氢缓释制剂及其制备方法及其应用与流程

1.本发明涉及医药技术领域，具体地，涉及一种内源性硫化氢缓释制剂及其制备方法及其在类风湿关节炎治疗方面的应用。


背景技术：

2.s-炔丙基半胱氨酸(sprc)，是大蒜提取物烯丙基半胱氨酸(sac)的结构类似物。其可以通过作用于体内的胱硫醚-γ-裂解酶(cse)，促进内源性h2s的生成，是一种良好的内源性h2s供体。在先前课题组的实验中发现，采用缺血缺氧的细胞模型及冠状动脉结扎大鼠心梗模型，sprc可通过调节内源性h2s水平，对缺血缺氧的心肌起到保护作用，降低心梗的梗死面积。同时，sprc还可通过抗炎作用发挥神经保护作用，其作用机制也与调节内源性h2s水平相关。此外，也有报道称，sprc也可以通过增强cse活性，产生内源性h2s，实现对于类风湿性关节炎的治疗作用。
3.然而，在现有报道中，大多是将sprc溶于水中后，直接注射或口服入动物体内，这样的操作，容易造成sprc的瞬时浓度过高，不可避免地会导致局部h2s浓度过高的问题。而高浓度的h2s，不仅可能降低sprc的治疗效果，而且更严重的情况，还可能出现h2s中毒等严重的不良反应。因此，制备一种能缓慢释放sprc的制剂，从而实现h2s的缓慢释放，对于提高sprc的治疗效果和减少毒副作用，显得十分有必要。


技术实现要素：

4.有鉴于此，有必要提供一种内源性硫化氢缓释制剂。
5.还有必要提供一种内源性硫化氢缓释制剂的制备方法。
6.还有必要提供一种内源性硫化氢缓释制剂的应用。
7.一种内源性硫化氢缓释制剂，包括药物活性部分、药物活性成分载体和释放阻滞剂，药物活性部分、药物活性成分载体和释放阻滞剂通过乳剂挥发法所制备。
8.优选的，所述药物活性部分为炔丙基半胱氨酸和/或炔丙基半胱氨酸衍生物，所述炔丙基半胱氨酸衍生物包括s-炔丙基半胱氨酸。
9.优选的，所述药物活性成分载体为乳酸-羟基乙酸共聚物，乳酸和羟基乙酸的聚合物分子量在5000-50000g/mol之间。
10.优选的，所述释放阻滞剂为明胶水溶液，明胶水溶液的浓度为0.001％-30％。
11.优选的，药物活性部分、药物活性成分载体和释放阻滞剂的质量比为1：1-50：1-40。
12.一种内源性硫化氢缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：
13.步骤一，炔丙基半胱氨酸和/或炔丙基半胱氨酸衍生物溶解于明胶水溶液中，其中，反应温度维持在30-50℃，制得内水相；
14.步骤二，将改内水相分散于含有聚乳酸-羟基乙酸的聚合物的有机溶剂中，乳化，制得初乳，然后将初乳分散于聚乙烯醇的水溶液中，乳化，制得乳液，搅拌，分离提纯，即制
得。
15.一种内源性硫化氢缓释制剂的应用，将内源性硫化氢缓释制剂用于类风湿关节炎的治疗。给药频率为每三天一次，治疗周期为一个月。
16.内源性硫化氢缓释制剂，根据处方的微调，其对于s-炔丙基半胱氨酸的体外缓慢释放可达7-30天。其可实现体内硫化氢1-15天的缓慢释放。
17.本发明拟采用sprc作为药物活性成分，辅以药物活性成分载体(乳酸-羟基乙酸共聚物)和阻滞剂(明胶)，实现了sprc在体外的缓慢释放，进而长时间维持了h2s在体内的血药浓度，同时，也可以观察到其对于大鼠类风湿关节炎症状的明显缓解作用。
18.将该内源性硫化氢缓释制剂皮下注射入大鼠，可以实现大鼠体内硫化氢浓度的缓慢升高，以及大鼠类风湿关节炎的治疗。
19.内源性硫化氢缓释制剂在类风湿关节炎治疗方面的应用，包括以下步骤：诱发大鼠关节炎模型，使用皮下注射不同量的内源性硫化氢缓释制剂，通过ugo sile 7140体积描记器测量所有动物组的爪体积，并且测量体重。关节发炎评分为每肢0到4，其中0＝无发炎迹象，1-4＝炎症程度增加，每只动物最高评分16。
20.相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
21.(1)本发明所述的内源性硫化氢缓释制剂具有良好的体内外缓释性能；
22.(2)本发明所述的内源性硫化氢缓释制剂对于s-炔丙基半胱氨酸具有良好的缓释性能；
23.(3)本发明所述的内源性硫化氢缓释制剂对于s-炔丙基半胱氨酸的载药量、包封率高；
24.(4)本发明所述的内源性硫化氢缓释制剂实现了体内硫化氢的缓慢释放；
25.(5)本发明所述的内源性硫化氢缓释制剂可以降低治疗类风湿关节炎时的给药频率；
26.(6)本发明制备工艺简单可行，具有良好的经济效益及广阔的应用前景。
附图说明
27.图1为实施例1所制备的内源性硫化氢缓释制剂的扫描电镜示意图。
具体实施方式
28.为了使本发明技术方案更容易理解，现结合附图采用具体实施例的方式，对本发明的技术方案进行清晰、完整的描述。
29.实施例1
30.一种内源性硫化氢缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：
31.首先将40mg的sprc溶于200μl的明胶溶液(5％，w/v)中作为内水相。然后将内水相添加到油相中(300mg的plga溶解在1ml dcm中)，并以12,000rpm的速度乳化30s。保持初乳直至下降至室温，然后将初乳在50ml的pva溶液(1％，w/v)中乳化以获得水包油包水双重乳液，并在磁力作用下进一步分散到300ml的pva溶液(1％，w/v)中搅拌4小时以蒸发二氯甲烷。然后将混悬液离心，沉淀物用蒸馏水洗涤3次以除去颗粒表面上残留的未负载的sprc，最后，通过冷冻干燥得到所述的内源性硫化氢缓释制剂。
32.图1为实施例1所制备的内源性硫化氢缓释制剂的扫描电镜示意图，从图1可以看出制备得到的内源性硫化氢缓释制剂是一种球状结构。
33.实施例2
34.一种内源性硫化氢缓释制剂的载药量和包封效率的测定方法，包括以下步骤：
35.称重约100mg不同的持续释放h2s的供体，并在超声处理下与2ml的二氯甲烷混合15分钟，直到颗粒完全溶解。然后用8ml蒸馏水摇晃稀释混合物10分钟，以完全提取sprc，然后将溶液静置20分钟。用1290infinity ii lc系统分析上清液。每个样品一式三份进行，并根据下面列出的方程式进行计算：
36.载药量(％)＝(sprc初始进料的重量-上清液中sprc的重量)/(微球的重量)
37.包封率(％)＝(初始进料的sprc重量-上清液中sprc的重量)/(初始进料的sprc重量)
38.表1为实施例1所制备的内源性硫化氢缓释制剂的载药量与包封率。
39.表1：
40.载药量(％)包封率(％)7.59
±
0.4164.52
±
0.41
41.文献报道的某阿霉素微球，载药量约为2.35％
±
0.84，包封率约为54.99％
±
2.63。实施例1所制备的微球较之有着更高的载药量和包封率，且并未有文献报道或市售载s-炔丙基半胱氨酸的微球制剂。
42.实施例3
43.一种内源性硫化氢缓释制剂体外sprc释放的研究，包括以下步骤：
44.首先将50mg的sprc粉末和内源性硫化氢缓释制剂分散在3ml的磷酸盐缓冲盐水(ph＝7.4)中，然后转移到透析袋中，并在摇浴中在搅拌下将其浸入47ml的pbs中，在37℃的条件下摇动100次/min。以预定的时间间隔取出样品溶液，并立即补充等体积的磷酸盐缓冲盐水。将样品溶液离心，然后通过1290infinity ii lc系统进行进一步分析。
45.对于内源性硫化氢缓释制剂体外sprc释放的研究结果中，所制备内源性硫化氢缓释制剂与sprc粉末相比，有着明显的体外缓释作用。
46.实施例4
47.一种内源性硫化氢缓释制剂对血浆硫化氢水平升高的研究，包括以下步骤：
48.将42只体重(200
±
20)g的雄性sd大鼠随机分为7组(n＝6)，对照组皮下注射5ml的生理盐水，其余每组皮下注射5ml相应的药剂。sprc组和内源性硫化氢缓释制剂组所含的sprc分别相当于25、50、100mg/kg(大鼠体重)的剂量。以注射后的1h，2h，3h，5h，7h，12h，24h，36h，48h，72h，96h，120h，144h和168h的预定时间间隔采集血液样本。
49.sprc与内源性硫化氢缓释制剂对于体内硫化氢浓度的研究结果中，所制备内源性硫化氢缓释制剂与sprc粉末相比，有着明显的长时间提升血中硫化氢浓度的作用。
50.实施例5
51.一种内源性硫化氢缓释制剂在类风湿关节炎治疗方面的应用，包括以下步骤：
52.通过在大鼠尾根部皮下注射100μl弗氏完全佐剂(10mg/ml)建立佐剂诱发的关节炎大鼠模型，而对照组则注射100μl盐水。总共48只大鼠随机分为八组：
53.对照组(n＝6)：无干预。
54.模型组(n＝6)：注射弗氏完全佐剂后无需进一步干预。
55.sprc(25)组(n＝6)：每3天皮下注射5ml sprc溶液(相当于25mg/kg sprc)，持续30天。
56.sprc(50)组(n＝6)：皮下注射，每3天注射5ml sprc溶液(相当于50mg/kg sprc)，持续30天。
57.sprc(100)组(n＝6)：每3天皮下注射5ml sprc溶液(相当于100mg/kg sprc)，持续30天。
58.内源性硫化氢缓释制剂(25)组(n＝6)：每3天皮下注射5ml内源性硫化氢缓释制剂混悬液(相当于25mg/kg sprc)，持续30天。
59.内源性硫化氢缓释制剂(50)组(n＝6)：每3天皮下注射5ml内源性硫化氢缓释制剂混悬液(相当于50mg/kg sprc)，持续30天。
60.内源性硫化氢缓释制剂(100)组(n＝6)：每3天皮下注射5ml内源性硫化氢缓释制剂混悬液(相当于100mg/kg sprc)，持续30天。
61.在注射弗氏完全佐剂后的第0、5、15、20、25和30天，通过ugo sile7140体积描记器测量所有动物组的爪体积，并且测量体重。关节发炎评分为每肢0到4，其中0＝无发炎迹象，1-4＝炎症程度增加，每只动物最高评分16。
62.sprc与内源性硫化氢缓释制剂在类风湿关节炎治疗方面的结果中，所制备内源性硫化氢缓释制剂与sprc粉末相比，对于大鼠足肿胀有着明显的抑制作用。
63.将该内源性硫化氢缓释制剂皮下注射入大鼠，可以实现大鼠体内硫化氢浓度的缓慢升高，以及大鼠类风湿关节炎的治疗。内源性硫化氢缓释制剂在类风湿关节炎治疗方面的应用，包括以下步骤：诱发大鼠关节炎模型，使用皮下注射不同量的内源性硫化氢缓释制剂，通过ugo sile 7140体积描记器测量所有动物组的爪体积，并且测量体重。关节发炎评分为每肢0到4，其中0＝无发炎迹象，1-4＝炎症程度增加，每只动物最高评分16。
64.应当注意，在此所述的实施例仅为本发明的部分实施例，而非本发明的全部实现方式，所述实施例只有示例性，其作用只在于提供理解本发明内容更为直观明了的方式，而不是对本发明所述技术方案的限制。在不脱离本发明构思的前提下，所有本领域普通技术人员没有做出创造性劳动就能想到的其它实施方式，及其它对本发明技术方案的简单替换和各种变化，都属于本发明的保护范围。