1.本发明涉及梓醇的新用途，具体是梓醇在制备促进缺血超长随意皮瓣存活的药物的作用。
背景技术：2.近年来随着我国经济水平不断提高，工业、能源等行业呈高速发展的趋势，由此导致的与职业、交通行为等相关的大面积创伤及组织缺损等病例也在不断增加。这类创伤在修复后多遗留不同程度的畸形和功能障碍，尤其是手部和颜面部的创伤畸形。而病患对完美外形、功能恢复的要求日益提升，创面问题的修复技术和治疗手段成为医学的一项重要思考。皮瓣修复是临床上修复创面、重建功能、改善外形常用的外科干预手段，随着显微、解剖技术以及医患对美学要求的发展，皮瓣也由之前的带蒂皮瓣、肌皮瓣等发展为现在较常用的游离皮瓣、穿支皮瓣等，创面修复也不用禁锢于先局部后远位，先带蒂后游离的传统创面重建阶梯原则。临床上，随意皮瓣作为创面修复最基本且最常用的手术方法因其“灵活性”、“随意性”，被临床上广泛应用于修复组织缺损。而随意皮瓣的血液灌注有限，皮瓣远端往往发生缺血坏死的术后并发症，为了使皮瓣在转移过程中能顺利成活，设计皮瓣时对其长度和宽度比例有一定的限制，如果长宽比例超过了规定的1.5-2：1的限制，皮瓣转移术后就可能发生远端部分皮瓣组织营养代谢障碍导致坏死。由于皮瓣受个体差异、皮瓣供区、受区血流因素和局部缺血时间、炎症反应等因素的影响，其坏死机制至今仍未完全阐明，从而影响了皮瓣修复的临床应用。因此，研究皮瓣远端坏死的发生机制，进一步提高皮瓣的成活率已成为目前皮瓣修复的研究重点，这对临床上提高皮瓣应用范围有重要的意义。如何能改善随意皮瓣远端的血供状况以及组织对缺血的耐受能力，有效减少可能发生的缺血坏死，成为创面治疗修复中核心问题之一，具有较强的社会价值、经济价值和理论、实践研究价值。
3.梓醇是一种环烯醚萜苷类化合物，主要存在于地黄等植物中。梓醇具有广泛的药理作用,目前已知有抗癌、神经保护、抗炎、利尿、降血糖及抗肝炎病毒等作用。地黄是我国大宗常饮用药材，在我国的资源储量十分丰富。但是梓醇苷对皮瓣存活的影响未见报道，研究其新的疗效具有广阔的经济、社会效益。
技术实现要素：4.针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供梓醇新作用，克服现有治疗手段的不足，为缺血超长随意皮瓣存活临床治疗开拓了更多的选择。
5.为实现上述目的，本发明提供本发明涉及梓醇在制备促进缺血超长随意皮瓣存活的药物的作用。
6.进一步的，所述缺血超长随意皮瓣的规格为3cm x 9cm。
7.进一步的，药物为静脉注射剂药物。
8.进一步的，所述静脉注射剂药物载体成分包括生理盐水。
group)和高剂量梓醇组(high-dose catalpol group)，每组20只。大鼠腹腔注射2％戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉，俯卧位固定四肢和牙齿。待麻醉生效后,用剃毛器初步剃去大鼠背部躯干的毛发,蒸馏水滋润未除尽的毛发,并均匀涂抹脱毛膏。等待3分钟后,用塑料薄片轻轻除去乳膏,重复该过程,直到完全去除毛发。在大鼠的背部正中设计一个以其两髂嵴连线为蒂部的皮瓣纵轴与大鼠背部长轴平行的尺寸为3cm x 9cm的改良mcfarlane皮瓣:各边予美兰溶液标记,术中沿标记线逐层切开皮肤、分离皮下组织至深筋膜浅层,边暴露边电凝或结扎创面活跃出血处,皮瓣与深筋膜完全分离后,用手术刀切断皮瓣蒂部两条对称骶动脉,保留真皮下毛细血管网,彻底止血。最后,使用4-0医用慕丝尼龙缝线间断原位缝合皮瓣。各组大鼠术后用4万单位庆大霉素腹腔内注射,创缘予碘伏消毒并涂擦红霉素软膏预防感染。整个手术过程严格遵守无菌原则。为防止大鼠手术后的“自伤”影响实验结果的准确性，将大鼠戴上研究组成员设计的头套，单独饲养在笼子里。为减少外科手术造成的失误，所有手术均由一人完成。为方便术后观察,根据皮瓣血供特点,将皮瓣三等分为皮瓣近端区(i区)、皮瓣中间区(ii区)和皮瓣远端区(iii区)，如图2a所示。大鼠的水的和食物由实验室统一提供,并控制实验室的温度(25摄氏度、湿度40-60％)及光照条件适宜且相同。腹腔注射生理盐水(50ml/kg)抗休克。
28.高、低剂量梓醇组：分别以50mg/kg和20mg/kg梓醇腹腔注射；生理盐水对照组：相同剂量腹腔注射，均每日1次，时间段相同，连续7天。因大鼠有自残现象，为避免其术后回头撕咬伤口影响皮瓣存活，均为其带上防止其自残的“颈套”，如图2b所示，并独笼喂养。
29.实施例3：皮瓣存活面积比与皮瓣存活状况检测
30.皮瓣存活面积比与皮瓣存活状况检测术后1～7d，每大肉眼观察大鼠皮瓣色泽、质地、组织弹性以及有无毛发生长或坏死现象。术后7d，采用100g/l水合氯醛麻醉大鼠(8ml/kg)并处死，以透明纸准确描记大鼠皮瓣成活面积及皮瓣总面积并裁剪，以电子秤称质量。计算皮瓣成活面积百分比[皮瓣成活面积透明纸质量
÷
皮瓣总表面积透明纸质量
×
100％]。每只大鼠测量两次，取其平均值。存活区域呈现粉红色，质地柔软，有新毛发生长；坏死区域呈皮瓣颜色发黑，组织回缩、弹性差，质地坚硬，切割组织不出血。病理表现为组织崩解、细胞核消失、炎症细胞广泛浸润、有局灶出血。
[0031]
结果：术后7天，梓醇低剂量组的中间区域皮瓣颜色淡红，仅见少量黑痂，弹性较好，远端区域颜色发黑，表明有痂壳，弹性差，原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃，出血量多，肉膜下无积血，积液，血管丰富。梓醇高剂量组的中间区域皮瓣颜色淡红，弹性较好，远端区域颜色发黑，表明有痂壳，弹性差，原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃，出血量多，肉膜下无积血，积液，血管丰富。生理盐水组皮瓣中间区域及远端区域颜色均发黑，表面有痂壳形成，弹性极差，原位掀起皮瓣见皮瓣出血较少，肉膜下炎性分泌物较多，血管相对较疏，其结果如图3a所示。
[0032]
术后第七天，高剂量实验组皮瓣的成活面积比为(89.16
±
2.44％)，低剂量实验组皮瓣的成活面积比为(73.03
±
3.65％)，对照组皮瓣成活面积比为(49.99
±
4.87％),比较三组皮瓣的成活面积比，差异有统计学意义(p《0.01)，梓醇高剂量组和低剂量组的皮瓣成活面积明显高于对照组，结果如图3b所示，表明梓醇能够促进缺血随意皮瓣的存活面积，特别是长宽比为3cm x 9cm的缺血超长随意皮瓣的存活面积。
[0033]
实施例4：皮瓣组织病理学检测
[0034]
皮瓣术后第7天，从每个皮瓣的ii区获得1.0cm
×
1.0cm的皮瓣组织，经10％甲醛固定，将组织包埋在石蜡中，制成厚度为4μm的切片用于组织学指标的检测。切片使用苏木精和伊红(he)染色，并在光学显微镜下观察皮瓣的组织学特点。评估皮瓣中性粒细胞浸润、组织水肿、肉芽组织厚度等。观察中性粒细胞的浸润程度是在
×
100倍光镜下进行的。
[0035]
梓醇实验组大鼠皮瓣未见严重的结构和组织学异常。炎症细胞浸润较轻，新生血管和成纤维细胞较多，肉芽组织明显，组织水肿较轻。对照组成纤维细胞增生较少，组织水肿明显，炎症细胞浸润严重，结果如图4a所示。。
[0036]
7天后检测皮瓣中性粒细胞数目：高剂量梓醇组中性粒细胞数量为(100.35
±
14.73％)，低剂量梓醇组中性粒细胞数量为(134.74
±
20.72％)，对照组中性粒细胞数量为(194.04
±
13.99％)，比较三组皮瓣的中性粒细胞数量，差异有统计学意义(p《0.01)，结果如图4b所示，梓醇作用于缺血皮瓣时，能够减少缺血皮瓣的组织水肿、中性粒细胞浸润、纤维增生，降低了缺血皮瓣的炎症反应。
[0037]
实施例5：皮瓣组织皮瓣血液灌注量的检测
[0038]
激光多普勒血流仪是利用激光多普勒原理，监测动物或人体组织微循环血流灌注量的一种设备。术后第7天，每组随机选择6只大鼠麻醉后固定，使用激光多普勒流量计(ldf)测定皮瓣各个区域(i区、ii区和iii区)的血流量。以灌注单位(pu)为基本指标，代表多普勒下红细胞流动产生的位移值，间接反应皮瓣新生血管。使用moorldi review v6.1软件获取并分析皮瓣血液灌注图片，结果如图5a所示，根据激光多普勒血流成像显示，其结果统计分析如图5b所示，高剂量梓醇组中端皮瓣的血流灌注量为(196.42
±
24.09pu)，低剂量梓醇组中端皮瓣的血流灌注量为(123.13
±
38.30pu)，对照组中端皮瓣血流灌注量为(55.73
±
11.43pu),比较三组皮瓣的血流灌注量，差异有统计学意义(p《0.01)，7天后激光多普勒血流仪显示梓醇组皮瓣的血流量明显多于对照组，显着改善皮瓣的血流灌注。
[0039]
实施例6：皮瓣组织免疫组化检测炎症因子tlr4、nf-κb、il-6和tnf-α的测量
[0040]
使用已制备好的石蜡切片，采用链霉亲和素-过氧化物酶法，对石蜡切片进行he染色进行免疫组织化学处理。在200倍视野下，采用dp2-twain(olympus，东京，日本)平台获取皮瓣组织吸光度。
[0041]
采用免疫组化法检测缺血皮瓣ⅱ区细胞因子的表达水平。如图7所示，免疫组化分析结果显示，梓醇下调tlr4、nf-κb、il-6和tnf-α的表达。与对照组(2308.83
±
328.69ia)比较，梓醇高剂量组(867.00
±
158.15ia)和梓醇低剂量组(1468.00
±
284.00ia)tlr4水平明显降低。同样，与对照组(3222.17
±
286.89ia)相比，高剂量组(933.83
±
112.03ia)和低剂量组(1970.33
±
241.25ia)nf-κb水平明显下降。各组之间的差异均具有统计学意义(p《0.01)。梓醇通过降低了下调tlr4和nf-κb的表达，抑制tlr4/nf-κb通路，减少炎症因子的释放反应，降低炎症因子的级联反应。高剂量梓醇组、低剂量梓醇组、对照组的il-6表达水平分别为1253.17
±
254.20ia、2069.17
±
111.12ia和2997.83
±
249.92ia。同样，tnf-α的表达水平分别为829.67
±
96.20ia、1542.67
±
232.37ia和2101.67
±
242.78ia。各组之间的差异均具有统计学意义(p《0.01)。根据上述结果，可以看出梓醇降低了il-6和tnf-α的表达，减轻炎症反应。
[0042]
实施例7：皮瓣组织免疫组化检测nlpr3、caspase-1、il-1β、il-18含量的测量
[0043]
使用已制备好的石蜡切片，采用链霉亲和素-过氧化物酶法，对石蜡切片进行he染
色进行免疫组织化学处理。在200倍视野下，采用dp2-twain(olympus，东京，日本)平台获取皮瓣组织吸光度。
[0044]
采用免疫组化法检测缺血皮瓣ⅱ区细胞因子的表达水平。如图6所示，免疫组化分析结果显示，梓醇呈剂量依赖性下调细胞焦亡通路相关蛋白质的表达。高剂量梓醇组、低剂量梓醇组、对照组的nlrp3水平分别为419.83
±
63.90ia、909.17
±
124.84ia和1858
±
155.99ia。caspase-1水平分别为608.50
±
79.10ia、1065.17
±
174.29ia和1864.00
±
196.22ia。高剂量梓醇组、低剂量梓醇组、对照组的il-1β水平分别为1089.50
±
256.88ia、1731.00
±
493.61ia和2800.67
±
235.07ia。同样，il-18水平分别为839.67
±
69.39ia、1468.67
±
218.64ia和2118.50
±
91.86ia。各组之间的差异均具有统计学意义(p《0.01)。根据上述结果，可以看出梓醇降低了caspase(casp)-1、nlrp3、白细胞介素(il)-1β和il-18的表达，减少由细胞焦亡通路介导的细胞程序性死亡，抑制细胞焦亡。
[0045]
实施例8：皮瓣组织超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)表达的检测
[0046]
采用比色法和硫代巴比妥法分别测定sod和mda。术后2天，三组随机抽取6只，分别取皮瓣各部位组织匀浆。测定sod活性和mda含量，以反映皮瓣通过氧化应激发生缺血再灌注损伤的水平。
[0047]
比色法和硫代巴比妥法结果显示梓醇干预可剂量依赖性地提高sod活性。高剂量梓醇组、低剂量梓醇组和对照组sod水平分别为62.84
±
4.99，45.91
±
4.42，21.23
±
3.53单位
·
mg-1
·
蛋白-1
，结果如图8a所示。相反，梓醇干预可剂量依赖性地降低mda水平。高剂量梓醇组、低剂量梓醇组和对照组mda水平分别为19.36
±
2.65、39.59
±
4.17和68.50
±
2.26单位
·
mg-1
·
蛋白-1
，结果如图8b所示。梓醇以剂量依赖性方式增加sod活性并降低mda水平，梓醇减轻了氧化应激，发挥抗氧化作用，保护皮瓣对抗缺血再灌注损伤。
[0048]
最后有必要在此说明的是：以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。