异二聚体FC融合蛋白的配制品、剂量方案和制造工艺的制作方法

本披露涉及异二聚体fc融合蛋白的药物配制品和剂量方案，以及使用此类蛋白治疗癌症的方法。

背景技术：

1、生理活性蛋白大多具有体内半衰期短的缺点。为了解决这个缺点，已经尝试将它们与peg(聚乙二醇)等缀合，或者将它们融合到抗体fc(可结晶片段)区。由两个或更多个不同亚基构成的蛋白(其中该两个或更多个不同亚基形成蛋白复合物以表现出生理活性)可以与野生型fc结构域融合制备fc融合蛋白形式，从而由于fc的同二聚体性质形成同二聚体。由两个或更多个不同亚基构成的蛋白(其中该两个或更多个不同亚基形成蛋白复合物以表现出生理活性)还可以融合到不仅衍生自igg1，而且衍生自其他同种型抗体(如igg2、igg3和igg4)的异二聚体fc区，形成异二聚体fc融合蛋白。因此，由两个或更多个不同亚基构成并且其中两个或更多个亚基通过形成蛋白复合物以表现出生理活性的蛋白的一个或多个亚基可以融合到异二聚体fc变体区的末端以形成改进的fc融合蛋白形式。

2、fc异二聚化是一种技术，其通过基因工程改造在fc的两个不同ch3结构域中诱导突变，使得两个fc片段形成具有最小序列变异的异二聚体，同时它们具有与天然存在的抗体非常相似的三级结构(参见，例如，美国专利号7,695,936)。

3、本披露中描述的发明提供了用于改进fc融合蛋白形式的设计，其中通过在fc的ch2和ch3结构域中引入不同长度的接头或突变，异二聚体蛋白的两个亚基连接到具有不同异二聚化结构域的两个fc结构域。此外，本披露中描述的发明提供了此类蛋白的药物配制品、制备此类蛋白和配制品的方法、以及使用此类蛋白治疗癌症的方法。

技术实现思路

1、本发明总体上涉及包含某些含有一个或多个il12亚基的异二聚体fc融合蛋白的药物配制品、制备此类蛋白和药物配制品的工艺。还提供了使用此类异二聚体fc融合蛋白和药物配制品治疗癌症如局部晚期或转移性实体瘤的剂量方案。

2、因此，在一个方面，本文提供了包含异二聚体fc融合蛋白、柠檬酸盐、糖、糖醇和非离子表面活性剂且ph 6.0至7.0的药物配制品，该异二聚体fc融合蛋白包含含有第一抗体fc结构域多肽和多亚基细胞因子的第一亚基的第一多肽以及含有第二抗体fc结构域多肽和该多亚基细胞因子的第二不同亚基的第二多肽，其中该第一和第二抗体fc结构域多肽各自包含促进异二聚化的不同突变，并且其中该多亚基细胞因子的该第一亚基和第二不同亚基相互结合。在一些实施例中，第一和/或第二抗体fc结构域多肽包含一个或多个降低fc效应子功能的突变。

3、在一些实施例中，药物配制品中柠檬酸盐的浓度为约10mm至约30mm。在某些实施例中，药物配制品中柠檬酸盐的浓度为约20mm。在一些实施例中，药物配制品中糖的浓度为约3％至约12％(w/v)。在某些实施例中，药物配制品中糖的浓度为约6％(w/v)。在某些实施例中，糖是二糖。在某些实施例中，二糖是蔗糖。在一些实施例中，药物配制品中糖醇的浓度在约0.5％至约6％(w/v)之间。在某些实施例中，药物配制品中糖醇的浓度为约1％(w/v)。在某些实施例中，糖醇衍生自单糖。在某些实施例中，糖醇是甘露醇。

4、在一些实施例中，药物配制品中非离子表面活性剂的浓度在约0.005％至约0.02％(w/v)之间。在某些实施例中，药物配制品中聚山梨醇酯80的浓度为约0.01％(w/v)。在某些实施例中，非离子表面活性剂是聚山梨醇酯。在某些实施例中，聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80。

5、在一些实施例中，ph在约6.1和约6.9之间。在某些实施例中，ph在约6.2和约6.8之间。在某些实施例中，ph在约6.3和约6.7之间。在一些实施例中，ph在约6.4和约6.6之间。在某些实施例中，ph为约6.5。

6、在一些实施例中，药物配制品还包含水。在某些实施例中，水是注射用水，usp。

7、在一些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约1g/l至约10g/l的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约2g/l至约8g/l的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约4g/l至约6g/l的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约5g/l的异二聚体fc融合蛋白。

8、在一些实施例中，药物配制品包含用于施用的浓度为约0.5g/l至约1.5g/l的蛋白。在某些实施例中，药物配制品包含用于施用的浓度为约0.75g/l至约1.25g/l的蛋白。在某些实施例中，药物配制品包含用于施用的浓度为约1g/l的蛋白。

9、在一些实施例中，配制品被设计为在2℃和8℃之间的温度下储存。在一些实施例中，药物配制品是澄清、无色溶液并且不含可见颗粒。

10、在一些实施例中，配制品具有由以下定义的热稳定性谱：大于约60℃、大于约61℃、大于约62℃、大于约63℃、大于约64℃、大于约65℃、或大于约66℃的tm1；和/或大于约70℃、大于约71℃、大于约72℃、大于约73℃、大于约74℃、大于约75℃、大于约76℃、或大于约77℃的tm2，如通过差示扫描荧光法测量。在某些实施例中，配制品具有由约67.0℃的tm1和约77.3℃的tm2定义的热稳定性谱。在某些实施例中，由tm1和/或tm2定义的药物配制品的热稳定性谱当药物配制品在50℃孵育1周时与在5℃孵育1周的相同药物配制品相比变化小于约2℃或小于约1℃，如通过差示扫描荧光法测量。

11、在一些实施例中，配制品具有由大于约60℃、大于约61℃、大于约62℃、大于约63℃、大于约64℃、大于约65℃、大于约66℃、或大于约67℃的tagg定义的热稳定性谱，如通过差示扫描荧光法测量。在某些实施例中，由tagg定义的药物配制品的热稳定性谱当药物配制品在50℃孵育1周时与在5℃孵育1周的相同药物配制品相比变化小于约2℃或小于约1℃，如通过差示扫描荧光法测量。

12、在一些实施例中，在将药物配制品在5℃孵育1周后，药物配制品的ph在ph值方面变化不超过约0.2或约0.1。在一些实施例中，在将药物配制品在50℃孵育1周后，药物配制品的ph在ph值方面变化不超过约0.2或约0.1。

13、在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有小于约15nm、小于约14nm、小于约13nm或小于约12nm的z-平均流体动力学直径，如在25℃通过动态光散射测量。在某些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有约11.6nm的z-平均流体动力学直径。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白在药物配制品在50℃孵育2周后具有小于约20nm、小于约19nm、小于约18nm、小于约17nm、小于约16nm或小于约15nm的z-平均流体动力学直径，如在25℃通过动态光散射测量。在某些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有约14.4nm的z-平均流体动力学直径。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白在药物配制品经受五个冻融循环后具有小于约20nm、小于约19nm、小于约18nm、小于约17nm或小于约16nm的z-平均流体动力学直径，如在25℃通过动态光散射测量。在某些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有约15.3nm的z-平均流体动力学直径。

14、在一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数小于约0.30、小于约0.29、小于约0.28或小于约0.27，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数为约0.26。在一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数在药物配制品在50℃孵育2周后小于约0.30、小于约0.29、小于约0.28、小于约0.27或小于约0.26，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数为约0.25。在一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数在药物配制品经受五个冻融循环后小于约0.40、小于约0.35、或小于约0.34，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数为约0.33。

15、在一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱大于约90％、大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％、大于约98％或大于约99％。在某些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱为约99.0％。

16、在一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱在药物配制品在50℃孵育2周后大于约75％、大于约80％、大于约81％、大于约82％、大于约83％、大于约84％或大于约85％。在某些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱为约85.2％。

17、在一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱在药物配制品经受五个冻融循环后大于约90％、大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％或大于约98％。在某些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱为约98.9％。

18、在另一个方面，本披露提供了一种方法，该方法包括将药物配制品作为单剂量疗法施用给有需要的受试者。

19、在另一个方面，本披露提供了一种方法，该方法包括将药物配制品以多剂量疗法以这些剂量之间至少三周或这些剂量之间至少四周的间隔施用给有需要的受试者。在一些实施例中，药物配制品每三周一次施用给受试者。在一些实施例中，药物配制品每四周一次施用给受试者。在某些实施例中，药物配制品每六周一次施用给受试者。

20、在一些实施例中，该方法进一步包括如果受试者发展为疾病进展、不可接受的毒性或满足退出标准，则停止多剂量疗法。在一些实施例中，如果受试者在多剂量疗法期间经历完全缓解(cr)，则在确认完全缓解后进一步施用多剂量疗法至少12个月。在某些实施例中，多剂量疗法的总持续时间等于或小于24个月。在某些实施例中，总治疗持续时间大于24个月。

21、在一些实施例中，通过皮下注射施用药物配制品。

22、在一些实施例中，将药物配制品施用给受试者，其量足以提供基于受试者的体重在约0.05μg/kg至约1.75μg/kg之间的剂量的异二聚体fc融合蛋白。在一些实施例中，将药物配制品施用给受试者，其量足以提供基于受试者的体重约0.05μg/kg、约0.10μg/kg、约0.20μg/kg、约0.40μg/kg、约0.60μg/kg、约0.80μg/kg、约1.00μg/kg、约1.20μg/kg、约1.40μg/kg、或约1.75μg/kg的剂量的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，将药物配制品施用给受试者，其量足以提供基于受试者的体重大于0.00μg/kg且小于约0.05μg/kg的剂量的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，将药物配制品施用给受试者，其量足以提供基于受试者的体重大于约1.75μg/kg的剂量的异二聚体fc融合蛋白。

23、在一些实施例中，受试者患有癌症。在某些实施例中，受试者患有局部晚期或转移性实体瘤。在某些实施例中，使用实体瘤缓解评估标准(recist)1.1版确认受试者中癌症的存在。在某些实施例中，癌症选自由以下组成的组：黑色素瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、小细胞肺癌(sclc)、头颈部鳞状细胞癌(hnscc)、经典型霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、微卫星高度不稳定性癌症、结直肠癌、胃癌、食管癌、宫颈癌、肝细胞癌、梅克尔细胞癌(merkel cell carcinoma)、肾细胞癌(rcc)、子宫内膜癌、皮肤t细胞淋巴瘤、和三阴性乳腺癌。在某些实施例中，癌症选自由以下组成的组：黑色素瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、小细胞肺癌(sclc)、头颈部鳞状细胞癌(hnscc)、经典型霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、微卫星高度不稳定性癌症、结直肠癌、胃癌、食管癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、梅克尔细胞癌、肾细胞癌(rcc)、子宫内膜癌、皮肤t细胞淋巴瘤、和三阴性乳腺癌。在某些实施例中，受试者是抗pd-1难治性的。

24、在一些实施例中，受试者患有黑色素瘤。在某些实施例中，受试者先前已经用抗pd-1抗体治疗至少6周。在某些实施例中，受试者在疾病进展的最初诊断后至少4周在接受抗pd-1抗体的同时被确认具有疾病进展。在某些实施例中，通过放射学或临床观察来确认疾病的进展。在某些实施例中，如果受试者具有包含braf激活性突变的肿瘤，则受试者先前已用braf抑制剂治疗。

25、在一些实施例中，受试者患有rcc。在某些实施例中，rcc具有透明细胞组织学。在某些实施例中，患者先前已经用抗pd-1/pd-l1抗体和/或抗血管内皮生长因子疗法治疗。在某些实施例中，受试者先前已接受三个或更少的疗法线。

26、在一些实施例中，受试者患有尿路上皮癌。在某些实施例中，受试者患有局部晚期或转移性尿路上皮移行细胞癌。在某些实施例中，受试者先前已经用包含含铂方案的单一治疗进行了治疗，并且在最后一次施用含铂方案后6个月内显示放射学进展复发。在某些实施例中，受试者先前已经接受了两个或更少的疗法线。在某些实施例中，受试者先前没有接受过作为单一疗法或与基于铂的化学疗法的组合的检查点抑制剂(例如，抗pd-1或抗pd-l1抗体)疗法。

27、在一些实施例中，将药物配制品作为单一疗法施用给受试者。

28、在一些实施例中，将药物配制品作为组合疗法施用给受试者。

29、在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用抗pd-1抗体。在某些实施例中，抗pd-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)。在某些实施例中，静脉内施用派姆单抗。在某些实施例中，以200mg的剂量施用派姆单抗。在某些实施例中，派姆单抗的施用在药物配制品的每次施用之前。在某些实施例中，在完成派姆单抗施用后1小时内施用药物配制品。

30、在某些实施例中，抗pd-1抗体是纳武单抗。在某些实施例中，静脉内施用纳武单抗。在某些实施例中，以约480mg的剂量施用纳武单抗。在某些实施例中，纳武单抗的施用在药物配制品的每次施用之前。在某些实施例中，在完成纳武单抗施用后1小时内施用药物配制品。

31、在一些实施例中，组合疗法用于治疗选自由以下组成的组的癌症：黑色素瘤、nsclc、sclc、rcc、经典型霍奇金淋巴瘤、hnscc、尿路上皮癌、结直肠癌、肝细胞癌、和食管癌。在一些实施例中，组合疗法用于治疗选自由以下组成的组的癌症：黑色素瘤、nsclc、sclc、rcc、经典型霍奇金淋巴瘤、hnscc、尿路上皮癌、结直肠癌、肝细胞癌、食管癌、胃癌、卵巢癌、和前列腺癌。在一些实施例中，癌症是黑色素瘤。在一些实施例中，黑色素瘤是不可切除的。在一些实施例中，癌症是结直肠癌。在一些实施例中，结直肠癌是微卫星高度不稳定性(msi-h)或错配修复缺陷转移性(dmmr)结直肠癌。

32、在一些实施例中，该方法进一步包括进行手术干预以在受试者中裂解癌细胞、去除肿瘤或减积肿瘤。在某些实施例中，手术干预包括冷冻疗法。在某些实施例中，手术干预包括超热疗法。在某些实施例中，手术干预包括向受试者施用放射疗法。在某些实施例中，放射疗法是立体定向体部放射疗法(sbrt)。

33、在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用nk细胞靶向疗法。在某些实施例中，向受试者施用多特异性结合蛋白。在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用嵌合抗原受体疗法。在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用细胞因子疗法。在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用先天免疫系统激动剂疗法。在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用化学疗法。在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用靶向抗原疗法。在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用溶瘤病毒疗法。

34、在另一个方面，本披露提供了一种在接受药物配制品的受试者中检测毒性的方法，该方法包括测量该受试者血液中c反应蛋白(crp)的浓度，其中该药物配制品包含异二聚体fc融合蛋白和药学上可接受的载剂，并且其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在一些实施例中，如果受试者血液中的crp浓度高于阈值crp浓度，则受试者被鉴定为处于发生药物不良反应的风险中；以及如果受试者血液中的crp浓度大约等于或低于阈值c反应蛋白浓度，则受试者不被鉴定为处于发生药物不良反应的风险中。在某些实施例中，如果受试者血液中的crp浓度高于阈值crp浓度，则暂停药物配制品的施用，以较低剂量施用异二聚体fc融合蛋白，或采取补救措施以减少或减轻该配制品在该受试者中的毒性作用。

35、在本文所述的药物配制品或方法的一些实施例中，第一和第二抗体fc结构域多肽是人igg1 fc结构域多肽。在某些实施例中，多亚基细胞因子是人il12。在某些实施例中，人igg1 fc结构域多肽包含一个或多个降低fc效应子功能的突变。在某些实施例中，第一和第二抗体fc结构域多肽包含选自根据eu编号系统编号的l234a、l235a或l235e、g237a、p329a、a330s、和p331s的突变。在某些实施例中，第一和第二抗体fc结构域多肽各自包含突变l234a、l235a和p329a。在某些实施例中，多亚基细胞因子的第一亚基是il12的p40亚基并且多亚基细胞因子的第二亚基是il12的p35亚基。在药物配制品或方法的某些实施例中，多亚基细胞因子的第一亚基包含seq id no:127的氨基酸序列并且多亚基细胞因子的第二亚基包含seq id no:128的氨基酸序列。在药物配制品或方法的某些实施例中，多亚基细胞因子的第二亚基通过包含seq id no:108的氨基酸序列的接头与第二抗体fc结构域融合。在药物配制品或方法的某些实施例中，第一抗体fc结构域包含突变l234a、l235a、p329a、y349c、k360e、和k409w，并且第二抗体fc结构域包含突变l234a、l235a、p329a、q347r、s354c、d399v、和f405t。在药物配制品或方法的某些实施例中，第一抗体fc结构域包含seq id no:215的氨基酸序列，第二抗体fc结构域包含seq id no:216的氨基酸序列。在药物配制品或方法的某些实施例中，第一抗体fc结构域肽包含seq id no:290的氨基酸序列并且第二抗体fc结构域肽包含seq id no:291的氨基酸序列。

36、在另一个方面，本文提供了一种试剂盒，其包括一个或多个包含药物配制品的容器，并且其中该药物配制品包含异二聚体fc融合蛋白，该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变；和药学上可接受的载剂，并且该一个或多个容器共同包含约0.1mg-约2mg的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，一个或多个容器共同包含约0.5mg至约2mg的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，一个或多个容器共同包含约1mg的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，试剂盒包含一个容器，该容器包含约1mg的异二聚体fc融合蛋白。在一些实施例中，药物配制品是冻干配制品或液体配制品。在某些实施例中，药物配制品是以1ml的体积供应的液体配制品。

37、在另一个方面，本披露提供了异二聚体fc融合蛋白在制造用于治疗癌症的药物中的用途，其中该药物被制造成包含含在一个或多个容器中的约0.5g/l至约1.5g/l的异二聚体fc融合蛋白的液体药物配制品，并且其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在一些实施例中，液体药物配制品包含约1.0g/l的异二聚体fc融合蛋白。

38、在另一个方面，本文提供了异二聚体fc融合蛋白在制造用于治疗癌症的药物中的用途，其中该药物被制造成包含含在一个或多个容器中的约0.1mg至约2mg的异二聚体fc融合蛋白的液体药物配制品，其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在一些实施例中，液体药物配制品包含1mg的异二聚体fc融合蛋白。在一些实施例中，药物包含在一个容器中。在一些实施例中，其中每个容器含有1mg的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，在每3周第1天将药物施用给受试者。在一些实施例中，在每4周第1天将药物施用给受试者。在一些实施例中，皮下施用药物。在一些实施例中，药物以约0.1ml至约1ml的体积施用。在某些实施例中，药物以约1ml的体积施用。在一些实施例中，将药物施用至最多两个注射部位。在某些实施例中，在第一注射后10分钟内完成第二注射。在一些实施例中，以约0.05mg/kg至约1.75mg/kg的剂量施用药物。在某些实施例中，以约1mg/kg的剂量施用药物。在一些实施例中，在施用之前将药物稀释在0.9％盐水(注射用氯化钠)和0.01％聚山梨醇酯80的溶液中。

39、在另一个方面，本文提供了一种制造异二聚体fc融合蛋白以制备其药物配制品的方法，该方法包括向含有异二聚体fc融合蛋白(得自表达该异二聚体fc融合蛋白的中国仓鼠卵巢(cho)细胞培养物)的溶液中加入乙酸保持30分钟至90分钟，其中乙酸盐将该溶液的ph调节并维持在ph 3.55至3.75，并且其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在某些实施例中，将乙酸加入到包含异二聚体fc融合蛋白的溶液中保持约60分钟。在某些实施例中，乙酸将溶液的ph调节并维持在约3.65。在某些实施例中，表达异二聚体fc融合蛋白的cho细胞培养物维持在悬浮液中。在某些实施例中，表达异二聚体fc融合蛋白的cho细胞培养物在生物反应器中培养7-21天。在某些实施例中，表达异二聚体fc融合蛋白的cho细胞培养物在生物反应器中培养14天。在一些实施例中，通过深度过滤收获表达异二聚体fc融合蛋白的cho细胞培养物以产生cho收获培养基。在某些实施例中，深度过滤是由dohc和xohc过滤器组成的两级一次性深度过滤。在某些实施例中，使用蛋白a捕获色谱、混合模式色谱和阳离子交换色谱从cho收获培养基中纯化异二聚体fc融合蛋白以产生包含异二聚体fc融合蛋白的溶液。

40、在一些实施例中，蛋白a捕获色谱包括用20mm tris、150mm nacl在ph 7.5平衡蛋白a树脂，将cho收获培养基加载到蛋白a树脂上；用20mm tris、150mm nacl在ph 7.5洗涤加载的蛋白a树脂；用ph 5.4的50mm乙酸盐洗涤加载的蛋白a树脂；并用50mm乙酸盐、100mm精氨酸在ph 3.7从蛋白a树脂中洗脱异二聚体fc融合蛋白，并通过280nm uv(从1.25au/cm上升开始并在1.25au/cm下降结束)进行收集。在某些实施例中，将乙酸以0.5m的浓度添加到包含从蛋白a树脂洗脱的异二聚体fc融合蛋白的溶液中，其中乙酸将溶液的ph酸化至ph3.65保持60分钟，然后通过添加2m tris将溶液中和至ph 5.2。在某些实施例中，在酸化和中和溶液之后，使包含异二聚体fc融合蛋白的溶液通过0.2μm过滤器。在某些实施例中，使包含从蛋白a树脂洗脱的异二聚体fc融合蛋白的过滤溶液通过x0sp深度过滤。

41、在一些实施例中，混合模式色谱包括用ph 5.2的50mm乙酸盐平衡混合模式色谱柱；将通过x0sp过滤的溶液加载到混合模式色谱柱上；用ph 5.2的50mm乙酸盐洗涤加载的混合模式色谱柱；并用50mm乙酸盐、250mm nacl在ph 5.2从混合模式色谱柱中洗脱异二聚体fc融合蛋白，并通过280nm uv(从0.625au/cm上升开始并在1.50au/cm下降结束)进行收集。在某些实施例中，使包含从混合模式色谱柱洗脱的异二聚体fc融合蛋白的溶液通过0.2μm过滤器。

42、在一些实施例中，阳离子交换色谱包括用ph 7.4的50mm tris平衡阳离子交换色谱树脂；将从混合模式色谱柱洗脱的过滤溶液加载到阳离子交换色谱树脂上；用ph 7.4的50mm tris洗涤加载的阳离子交换色谱树脂；用50mm tris(ph 7.4)和50mm tris、0.5mnacl(在ph 7.4)的梯度从阳离子交换色谱树脂中洗脱异二聚体fc融合蛋白，并通过280nmuv(从2.5au/cm上升开始并在4.5au/cm下降结束)进行收集。在某些实施例中，使包含从阳离子交换色谱树脂洗脱的异二聚体fc融合蛋白的溶液通过0.2μm过滤器。在某些实施例中，使包含从阳离子交换色谱树脂洗脱的异二聚体fc融合蛋白的过滤溶液通过预过滤器、20nm标称过滤器和0.2μm膜进行纳米过滤。

43、在一些实施例中，对包含异二聚体fc融合蛋白的纳米过滤溶液进行超滤和渗滤，其中超滤和渗滤包括用50mm tris、265mm nacl在ph 7.4平衡超滤系统；将包含异二聚体fc融合蛋白的纳米过滤溶液浓缩至约5.0g/l的浓度；使用20mm柠檬酸盐(ph 6.5)的7个渗滤体积交换缓冲液；将包含异二聚体fc融合蛋白的渗滤溶液浓缩至约11.0g/l的浓度；用ph6.5的20mm柠檬酸盐将包含异二聚体fc融合蛋白的浓缩溶液稀释至约5g/l至约10g/l的浓度；并且添加20mm柠檬酸盐、18％(w/v)蔗糖、3％(w/v)甘露醇、0.03％(w/v)聚山梨醇酯80(ph 6.5)以实现超滤/渗滤截留物溶液的最终浓度，该溶液包含20mm柠檬酸盐、6％(w/v)蔗糖、1％(w/v)甘露醇、0.01％(w/v)聚山梨醇酯-80的异二聚体fc融合蛋白。在某些实施例中，使包含异二聚体fc融合蛋白的超滤/渗滤溶液通过0.2μm膜以产生批量原料药。

44、在一些实施例中，将批量原料药在包含20mm柠檬酸盐、6％(w/v)蔗糖、1％(w/v)甘露醇和0.01％(w/v)聚山梨醇酯-80(ph 6.5)的0.2μm过滤缓冲液中稀释至80％药物产品溶液。在某些实施例中，将批量原料药或80％药物产品在包含20mm柠檬酸盐、6％(w/v)蔗糖、1％(w/v)甘露醇和0.01％(w/v)聚山梨醇酯-80(ph 6.5)的0.2μm过滤缓冲液中稀释至用以施用1mg/ml的异二聚体fc融合蛋白的浓度。

45、一种在已接受检查点抑制剂抗体治疗至少6周的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向该受试者施用包含异二聚体fc融合蛋白和药学上可接受的载剂的药物配制品，其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在某些实施例中，检查点抑制剂抗体是抗程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)抗体。在某些实施例中，癌症是黑色素瘤。在某些实施例中，黑色素瘤是不可切除的或转移性的。在某些实施例中，受试者在疾病进展的最初诊断后至少4周在接受抗pd-1抗体的同时被确认具有疾病进展。在某些实施例中，受试者在疾病进展的最初诊断后至少4周在接受抗pd-1抗体的同时被确认具有疾病进展。在某些实施例中，通过放射学或临床观察来确认疾病进展。

46、在另一个方面，本文提供了一种在已接受检查点抑制剂抗体或抗血管内皮生长因子疗法作为单一疗法或组合疗法治疗的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向该受试者施用包含异二聚体fc融合蛋白和药学上可接受的载剂的药物配制品，其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在某些实施例中，检查点抑制剂抗体是抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。

47、在某些实施例中，癌症是晚期肾细胞癌(rcc)。在某些实施例中，rcc是不可切除的或转移性的。在某些实施例中，rcc具有透明细胞组分。在某些实施例中，受试者接受不超过3个先前的疗法线。在某些实施例中，受试者尚未接受过检查点抑制剂的治疗。在某些实施例中，检查点抑制剂包含作为单一疗法或与基于铂的化学疗法组合的抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。

48、在另一个方面，本文提供了一种在已接受仅一种含铂方案治疗的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向该受试者施用包含异二聚体fc融合蛋白和药学上可接受的载剂的药物配制品，其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在某些实施例中，含铂方案是铂与选自吉西他滨、甲氨蝶呤、长春碱和多柔比星的药剂组合。在某些实施例中，癌症是局部晚期或转移性移行细胞尿路上皮癌。在某些实施例中，尿路上皮癌包括由肾盂、输尿管、尿路上皮和尿道组成的组中的一种或多种。在某些实施例中，尿路上皮癌是不能手术的。在某些实施例中，尿路上皮癌的特征是在最后一次施用作为辅佐的含铂方案后6个月内放射学进展或复发。

49、在一些实施例中，尿路上皮癌被认为是一线含铂方案的失败。在某些实施例中，受试者在施用药物配制品之前已接受不超过2个疗法线(包括含铂方案)用于治疗尿路上皮癌。在某些实施例中，受试者尚未接受过用检查点抑制剂(cpi)作为一线疗法的治疗。在某些实施例中，检查点抑制剂是抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。在某些实施例中，检查点抑制剂是单一疗法或与基于铂的化学疗法组合。

50、在一些实施例中，药物配制品与派姆单抗组合施用。在某些实施例中，每3周施用一次派姆单抗。在某些实施例中，在药物配制品施用之前施用派姆单抗。在某些实施例中，在完成派姆单抗施用后一小时内施用药物配制品。在一些实施例中，以200mg的剂量施用派姆单抗。在一些实施例中，静脉内施用派姆单抗。在一些实施例中，组合用于治疗选自由以下组成的组的癌症：黑色素瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、小细胞肺癌(sclc)、头颈部鳞状细胞癌(hnscc)、经典型霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、尿路上皮癌、微卫星高度不稳定癌症、胃癌、食管癌、宫颈癌、肝细胞癌、梅克尔细胞癌、肾细胞癌、和子宫内膜癌。在一些实施例中，组合用于治疗选自由以下组成的组的癌症：黑色素瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、小细胞肺癌(sclc)、头颈部鳞状细胞癌(hnscc)、经典型霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、尿路上皮癌、微卫星高度不稳定癌症、胃癌、食管癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、梅克尔细胞癌、肾细胞癌、和子宫内膜癌。

51、在一些实施例中，药物配制品与纳武单抗组合施用。在某些实施例中，每4周施用一次纳武单抗。在一些实施例中，在药物配制品施用之前施用纳武单抗。在一些实施例中，在完成纳武单抗施用后一小时内施用药物配制品。在一些实施例中，以约480mg的剂量施用纳武单抗。在一些实施例中，静脉内施用纳武单抗。在一些实施例中，组合用于治疗选自由以下组成的组的癌症：黑色素瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、小细胞肺癌(sclc)、肾细胞癌、经典型霍奇金淋巴瘤、头颈部鳞状细胞癌(hnscc)、结直肠癌、肝细胞癌、膀胱癌、和食管癌。在一些实施例中，组合用于治疗选自由以下组成的组的癌症：黑色素瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、小细胞肺癌(sclc)、肾细胞癌、经典型霍奇金淋巴瘤、头颈部鳞状细胞癌(hnscc)、结直肠癌、肝细胞癌、膀胱癌、食管癌、胃癌、卵巢癌、和前列腺癌。在一些实施例中，癌症是黑色素瘤。在某些实施例中，黑色素瘤是不可切除的或转移性的。在一些实施例中，癌症是结直肠癌。在某些实施例中，结直肠癌是微卫星高度不稳定性(msi-h)或错配修复缺陷(dmmr)转移性结直肠癌。

52、在一些实施例中，在每3周第1天将药物配制品施用给受试者。在一些实施例中，在每4周第1天将药物配制品施用给受试者。在一些实施例中，皮下施用药物配制品。在一些实施例中，药物配制品以约0.1ml至约1ml的体积施用。在一些实施例中，药物配制品以约1ml的体积施用。在一些实施例中，将药物配制品施用至最多两个注射部位。在某些实施例中，在第一注射后10分钟内完成第二注射。

53、在一些实施方案中，以约0.05mg/kg至约1.75mg/kg的剂量施用药物配制品。在某些实施例中，以约1mg/kg的剂量施用药物配制品。在一些实施例中，在施用之前将药物配制品稀释在0.9％盐水(注射用氯化钠)和0.01％聚山梨醇酯80的溶液中。

54、在一些实施例中，使用实体瘤缓解评估标准(recist)1.1版确定癌症的存在。在一些实施例中，除非满足中止标准，否则在确认后用药物配制品治疗具有确认的完全缓解的受试者至少12个月。

55、在另一个方面，本文提供了治疗其血液c反应蛋白(crp)浓度被监测的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用包含异二聚体fc融合蛋白和药学上可接受的载剂的药物配制品，其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变。在一些实施例中，如果受试者血液中的crp浓度高于阈值crp浓度，则受试者被鉴定为处于发生药物不良反应的风险中；以及如果受试者血液中的crp浓度大约等于或低于阈值c反应蛋白浓度，则受试者不被鉴定为处于发生药物不良反应的风险中。在一些实施例中，如果受试者血液中的crp浓度高于阈值crp浓度，则(1)暂停药物配制品的施用；(2)以较低剂量施用异二聚体fc融合蛋白；或(3)采取补救措施以减少或减轻该配制品在该受试者中的毒性作用。

56、在另一个方面，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向该受试者皮下施用包含异二聚体fc融合蛋白和药学上可接受的载剂的药物配制品，其中该异二聚体fc融合蛋白包含免疫球蛋白fc(可结晶片段)对的第一fc区和第二fc区以及il-12的p40和p35亚基，其中il-12的该p40和p35亚基分别单独地与该第一fc区和该第二fc区，或该第二fc区和该第一fc区连接，其中该p40和p35亚基各自连接到这些fc区的n末端或c末端，并且其中该第一fc区和该第二fc区的ch3结构域各自包含一个或多个促进异二聚化的突变；并且该药物配制品包含柠檬酸盐；糖；糖醇；和非离子表面活性剂，并且该配制品的ph值在5.5和7.0之间。

57、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，异二聚体fc融合蛋白的第一fc区和第二fc区是人igg1 fc区。在一些实施例中，人igg1 fc区包含一个或多个降低fc效应子功能的突变。在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，第一fc区和第二fc区包含一个或多个选自根据eu编号系统编号的l234a、l235a或l235e、g237a、p329a、a330s和p331s的突变。在一些实施例中，第一fc区和第二fc区各自包含突变l234a、l235a和p329a。

58、在本文提供的试剂盒、用途或方法的某些实施例中，il12的p40亚基包含seq idno:127的氨基酸序列并且il-12的p35亚基包含seq id no:128的氨基酸序列。在本文提供的试剂盒、用途或方法的某些实施例中，il-12的p35亚基通过包含seq id no:108的氨基酸序列的接头融合至第二fc区。在一些实施例中，第一fc区包含突变l234a、l235a、p329a、y349c、k360e,和k409w，并且第二fc区包含突变l234a、l235a、p329a、q347r、s354c、d399v、和f405t。在某些实施例中，第一fc区包含seq id no:215的氨基酸序列，并且第二fc区包含seq id no:216的氨基酸序列。在一些实施例中，与il12的p40亚基连接的第一fc区包含seqid no:290的氨基酸序列，并且与il-12的p35亚基连接的第二fc区包含seq id no:291的氨基酸序列。

59、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品包含：(a)柠檬酸盐；(b)糖；(c)糖醇；和(d)非离子表面活性剂，进一步其中配制品的ph在约6.0和约7.0之间。在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中柠檬酸盐的浓度为约10mm至约30mm。在一些实施例中，药物配制品中柠檬酸盐的浓度为约20mm。在一些实施例中，药物配制品中糖的浓度为约3％至约12％(w/v)。在一些实施例中，药物配制品中糖的浓度为约6％(w/v)。在一些实施例中，糖是二糖。在一些实施例中，二糖是蔗糖。在一些实施例中，药物配制品中糖醇的浓度在约0.5％至约6％(w/v)之间。在一些实施例中，药物配制品中糖醇的浓度为约1％(w/v)。在一些实施例中，糖醇衍生自单糖。在一些实施例中，糖醇是甘露醇。

60、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中非离子表面活性剂的浓度在约0.005％至约0.02％(w/v)之间。在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中聚山梨醇酯80的浓度为约0.01％(w/v)。在一些实施例中，非离子表面活性剂是聚山梨醇酯。在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80。在一些实施例中，ph在约6.1和约6.9之间。在一些实施例中，ph在约6.2和约6.8之间。在一些实施例中，ph在约6.3和约6.7之间。在一些实施例中，ph在约6.4和约6.6之间。在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，ph为约6.5。

61、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品进一步包含水。在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，水是注射用水，usp。

62、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约1g/l至约10g/l的异二聚体fc融合蛋白。在一些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约2g/l至约8g/l的异二聚体fc融合蛋白。在一些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约4g/l至约6g/l的异二聚体fc融合蛋白。在一些实施例中，药物配制品包含体积浓度为约5g/l的异二聚体fc融合蛋白。在一些实施例中，药物配制品包含用于施用的浓度为约0.5g/l至约1.5g/l的蛋白。在一些实施例中，药物配制品包含用于施用的浓度为约0.75g/l至约1.25g/l的蛋白。在一些实施例中，药物配制品包含用于施用的浓度为约1g/l的蛋白。

63、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品被设计为在2℃和8℃之间的温度下储存。在一些实施例中，药物配制品是澄清、无色溶液并且不含可见颗粒。

64、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品具有由以下定义的热稳定性谱：大于约60℃、大于约61℃、大于约62℃、大于约63℃、大于约64℃、大于约65℃、或大于约66℃的tm1；和/或大于约70℃、大于约71℃、大于约72℃、大于约73℃、大于约74℃、大于约75℃、大于约76℃、或大于约77℃的tm2，如通过差示扫描荧光法测量。在一些实施例中，配制品具有由约67.0℃的tm1和约77.3℃的tm2定义的热稳定性谱。

65、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，由tm1和/或tm2定义的药物配制品的热稳定性谱当药物配制品在50℃孵育1周时与在5℃孵育1周的相同药物配制品相比变化小于约2℃或小于约1℃，如通过差示扫描荧光法测量。在一些实施例中，配制品具有由大于60℃、大于约61℃、大于约62℃、大于约63℃、大于约64℃、大于约65℃、大于约66℃、或大于约67℃的tagg定义的热稳定性谱，如通过差示扫描荧光法测量。在一些实施例中，由tagg定义的药物配制品的热稳定性谱当药物配制品在50℃孵育1周时与在5℃孵育1周的相同药物配制品相比变化小于约2℃或小于约1℃，如通过差示扫描荧光法测量。

66、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，在将药物配制品在5℃孵育1周后，药物配制品的ph在ph值方面变化不超过约0.2或约0.1。在一些实施例中，在将药物配制品在50℃孵育1周后，药物配制品的ph在ph值方面变化不超过约0.2或约0.1。

67、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有小于约15nm、小于约14nm、小于约13nm或小于约12nm的z-平均流体动力学直径，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有约11.6nm的z-平均流体动力学直径。

68、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白在药物配制品在50℃孵育2周后具有小于约20nm、小于约19nm、小于约18nm、小于约17nm、小于约16nm或小于约15nm的z-平均流体动力学直径，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有约14.4nm的z-平均流体动力学直径。

69、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白在药物配制品经受五次冻融循环后具有小于约20nm、小于约19nm、小于约18nm、小于约17nm或小于约16nm的z-平均流体动力学直径，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白具有约15.3nm的z-平均流体动力学直径。

70、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数小于约0.30、小于约0.29、小于约0.28或小于约0.27，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数为约0.26。

71、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数在药物配制品在50℃孵育2周后小于约0.30、小于约0.29、小于约0.28、小于约0.27或小于约0.26，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中的异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数为约0.25。

72、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数在药物配制品经受五个冻融循环后小于约0.40、小于约0.35、或小于约0.34，如在25℃通过动态光散射测量。在一些实施例中，药物配制品中异二聚体fc融合蛋白的多分散性指数为约0.33。

73、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱大于约90％、大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％、大于约98％或大于约99％。在一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱为约99.0％。在一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱在药物配制品在50℃孵育2周后大于约75％、大于约80％、大于约81％、大于约82％、大于约83％、大于约84％或大于约85％。在一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱为约85.2％。

74、在本文提供的试剂盒、用途或方法的一些实施例中，如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱在药物配制品经受五个冻融循环后大于约90％、大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％或大于约98％。在一些实施例中，其中如在sec-hplc分析中通过主峰面积占总检测面积的百分比测量，药物配制品的纯度谱为约98.9％。

75、总之，本发明提供了多亚基蛋白的异二聚体fc融合蛋白构建体。这些融合蛋白构建体可以表现出与天然/自然多亚基蛋白相比更高的血清半衰期，在生产过程中提高的产量，在储存过程中提高的稳定性，和/或在用作治疗剂时提高的功效。