杆状病毒表达载体的制作方法

背景技术：

技术实现思路

1、在本发明中，已经令人惊讶地发现，通过优化编码fmdv衣壳前体蛋白的开放阅读框(orf)起始密码子之前的核酸起始序列可以增强fmdv衣壳前体蛋白经由杆状病毒表达系统的表达。令人惊讶地显示，如果起始序列在-4至-1位具有核酸序列5’-aaat-3’，与本领域中使用的杆状病毒表达系统相比，表达产量可以得到提高。

2、因此，在第一方面本发明提供了能够在启动子控制下重组表达口蹄疫病毒(fmdv)衣壳前体蛋白的杆状病毒表达载体，所述表达载体包含编码fmdv衣壳前体蛋白的核酸序列，其中核酸序列5’-aaat-3’在编码fmdv衣壳前体蛋白的开放阅读框的atg起始密码子之前的-4至-1位。

3、在本发明的第二个方面，提供了包含本发明杆状病毒表达载体的宿主细胞。这种宿主细胞可用于体外组织培养中，所述宿主细胞通常是永生化细胞。

4、在第三方面，本发明提供了一种产生fmdv衣壳前体蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：用本文所述的杆状病毒表达载体感染宿主细胞，和收获由宿主细胞产生的fmdv衣壳前体蛋白。

5、本发明进一步提供了一种产生fmdv vlp的方法，所述方法包括以下步骤：用本文所述的杆状病毒表达载体感染宿主细胞，其中所述表达载体进一步包含编码能够将衣壳前体蛋白切割成一种或多种衣壳蛋白以组装成vlp的蛋白酶的核酸序列，和收获由宿主细胞产生的vlp。

6、本发明进一步涉及杆状病毒表达载体用于重组表达fmdv衣壳前体蛋白的用途。

7、本发明进一步涉及一种通过产生fmdv vlp和通过添加药学上可接受的载体将fmdv vlp掺入疫苗来产生疫苗的方法。

8、本发明进一步涉及一种通过以下来保护受试者免受fmdv感染的方法：通过在宿主细胞中从本发明所述的杆状病毒表达载体表达的fmdv衣壳前体蛋白以产生vlp，通过添加药学上可接受的载体将vlp掺入疫苗中，和将vlp施用于受试者。

9、本发明进一步涉及根据本发明第一方面的杆状病毒表达载体在保护受试者免受fmdv感染中的用途。

10、本发明进一步涉及本文所述的杆状病毒表达载体在制备用于保护受试者免受fmdv感染的药物中的用途。

技术特征：

1.一种用于在启动子控制下重组表达口蹄疫病毒(fmdv)衣壳前体蛋白的杆状病毒表达载体，所述表达载体包含编码所述fmdv衣壳前体蛋白的核酸序列，其中核酸序列5’-aaat-3’在编码所述fmdv衣壳前体蛋白的开放阅读框的atg起始密码子之前的-4至-1位。

2.根据权利要求1所述的杆状病毒表达载体，所述载体进一步在-4至-1位的所述核酸序列5’-aaat-3’和所述启动子之间包含一个或多个用于多种限制酶的切割的限制性位点。

3.根据前述权利要求中任一项所述的杆状病毒表达载体，其在-11至-1位具有核酸序列5’-ggtaaccaaat-3’(seq id no.1)。

4.根据前述权利要求中任一项所述的杆状病毒表达载体，其中在杆状病毒多角体蛋白启动子(polh)或p10启动子的控制下实现所述fmdv衣壳前体蛋白的表达。

5.根据前述权利要求中任一项所述的杆状病毒表达载体，其中所述fmdv是asia1血清型的。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的杆状病毒表达载体，其中所述fmdv是sat2血清型的。

7.根据前述权利要求中任一项所述的杆状病毒表达载体，其中所述衣壳前体蛋白包含衣壳前体p1。

8.根据前述权利要求中任一项所述的杆状病毒表达载体，所述载体进一步包含编码能够将所述衣壳前体蛋白切割成一种或多种衣壳蛋白的蛋白酶的核酸序列。

9.根据权利要求8所述的杆状病毒表达载体，其中所述衣壳前体蛋白包含衣壳前体p1和肽2a，且所述蛋白酶是3c。

10.一种宿主细胞，其包含根据权利要求1-9中任一项所述的杆状病毒表达载体。

11.根据权利要求10所述的宿主细胞，其是昆虫细胞。

12.一种产生fmdv衣壳前体蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

13.一种产生fmdv病毒样颗粒(vlp)的方法，所述方法包括以下步骤：

14.根据权利要求1-7中任一项所述的杆状病毒表达载体用于重组表达fmdv衣壳前体蛋白的用途，或根据权利要求8或9所述的杆状病毒表达载体用于重组表达fmdv vlp的用途。

15.根据权利要求14所述的杆状病毒表达载体的用途，其中表达在昆虫细胞中实现。

16.一种产生疫苗的方法，其包括以下步骤：

17.一种保护受试者免受fmdv感染的方法，其包括以下步骤：在宿主细胞中从根据权利要求1-9中任一项所述的杆状病毒表达载体表达fmdv衣壳前体蛋白以产生vlp，通过添加药学上可接受的载体将所述vlp掺入疫苗中，和将所述疫苗施用于所述受试者。

18.根据权利要求1-9中任一项所述的杆状病毒表达载体，其用于制备保护受试者免受fmdv感染的药物。

技术总结
本发明涉及用于在启动子控制下重组表达口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体蛋白的杆状病毒表达载体，所述表达载体包含编码所述FMDV衣壳前体蛋白的核酸序列，其中核酸序列5’‑AAAT‑3’在编码所述FMDV衣壳前体蛋白的开放阅读框的ATG起始密码子之前的‑4至‑1位。本发明进一步涉及一种包含所述杆状病毒表达载体的宿主细胞，一种产生FMDV病毒样颗粒(VLP)的方法，和一种产生疫苗的方法。

技术研发人员：E·范登博恩
受保护的技术使用者：英特维特国际股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13