益生菌组合物以及使用其促进儿童生长和社交功能的方法与流程

本发明的领域涉及可用于治疗患有普拉德-威利综合征(pws)的对象的方法和组合物。所述方法包括向有需要的对象施用包含益生菌(例如罗伊氏乳杆菌(l.reuteri)和动物双歧杆菌乳亚种(b.lactis))的组合物。

背景技术：

1、普拉德-威利综合征(pws)是一种罕见的遗传综合征，大约每15000人中就有一人受到影响(cassidy sb，irizarry ka)。pws被认为是危及生命的儿童肥胖的最常见遗传原因(butler mg，irizarry ka)。病态肥胖和神经精神并发症是死亡或长期残疾的主要原因。除了生长激素的疗效有一些报道(bakker ne，kuppens rj，zhu jl)外，治疗主要是行为治疗。

2、肠道微生物群与pws对象的肥胖和相关合并症的发病机制有关(olsson lm)。据报道，与pws群体无关，肠道微生物组的多样性和组成对营养代谢和能量消耗有影响(aouna)。尽管肥胖个体和瘦个体之间的肠道微生物组多样性和组成被发现存在差异(lv y)，然而pws相关肥胖和饮食相关肥胖的肠道生态失调被发现非常相似(zhang c)。

3、肠道微生物组生态失调已被证明会激活炎症过程并导致胰岛素抵抗的发展(corado gomes a)。将pws患者的生态失调肠道微生物群移植到大鼠体内，在体脂肪成分增加之前两周，影响了glp-1的表达并减少了胰岛素受体信号传导，表明肠道微生物组生态失调可能在肥胖的发展中发挥作用(deng)。最近的研究已经表明，益生菌有可能改善饮食诱导的肥胖小鼠的肠道微生物组和代谢紊乱(ke x)，并且在超重成年人体重管理的随机对照试验中也显示出这一潜力(hibberd)。微生物组生态失调不仅与肥胖有关，还与神经精神病症密切相关，包括精神分裂症(akhondzadeh s)、精神障碍(vindegaard n)和自闭症谱系障碍(asd)(navarro f)。我们实验室过去进行的研究甚至表明微生物组有可能作为生物标志物来协助asd的诊断和分型(kong xj等人)。益生菌治疗已被广泛用于帮助神经精神障碍患者(liu j，dickerson f)。

4、罗伊氏乳杆菌(lactobacillus reuteri，l.reuteri)是一种经过充分研究的益生菌，可以在大量哺乳动物中定殖。直接补充罗伊氏乳杆菌或益生元调节可能是对抗炎症和代谢疾病的有吸引力的预防性和/或治疗性途径(navarro f)。据报道，罗伊氏乳杆菌v3401在成人中减少炎症生物标志物、改变胃肠道微生物组和蠕动性并改善代谢综合征(tenorio-jimenez，west cl)。罗伊氏乳杆菌还被证明改善耐葡萄糖的人的肠促胰岛素和胰岛素分泌(simons mc)。值得注意的是，罗伊氏乳杆菌263通过促进高能量饮食饲喂大鼠的白色脂肪组织的重塑而表现出抗肥胖作用(chen lh)。尽管这些发现详细说明了罗伊氏乳杆菌对肠道微生物组和代谢的积极影响，但罗伊氏乳杆菌对人肥胖的直接影响仍然存在争议。事实上，一项研究甚至发现墨西哥儿童中罗伊氏乳杆菌内源丰度与肥胖症之间存在相关性(huerta-avila)。除了这些代谢益处之外，罗伊氏乳杆菌还被证明对大脑和行为产生有益的影响。罗伊氏乳杆菌(dsm-17938)与婴儿肠绞痛的平均哭泣时间显著减少相关(karkhaneh m)。罗伊氏乳杆菌nk33与青春双歧杆菌(b.adolescentis)nk98联合使用，可以减轻和预防小鼠因固定应激而引起的焦虑/抑郁和结肠炎的发生(jang hm)。麻省理工学院的研究小组报告说，罗伊氏乳杆菌上调小鼠的迷走神经介导途径中作为社会联系和繁殖不可或缺的因子的神经肽激素催产素(oxt)，同时防止与年龄相关的体重增加(poutahidis t[1],varian b)。该小组报告称，这些益处也适用于人类对象；与小鼠类似，在摄入罗伊氏乳杆菌裂解物后，发现下丘脑尾侧室旁核(pvn)中产生oxt的细胞增加(poutahidis t[2])。其他研究发现，在多种asd模型中，罗伊氏乳杆菌以迷走神经依赖性方式发挥作用，通过催产素信号传导调节来挽救腹侧被盖区中社交互动诱导的突触可塑性的缺陷(sgritta m)。发现了罗伊氏乳杆菌治疗可改善雄性shank3小鼠的不社交行为，并减少雄性和雌性shank3ko小鼠的重复行为(sgritta m)。

5、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp.lactis，b.lactis)是杆状厌氧细菌，存在于包括人类在内的大多数哺乳动物的胃肠道中[16]。抗肥胖作用已与施用一些动物双歧杆菌乳亚种菌株(例如a6、cect 8145、bf141、b420和bb-12)有关(alyousif等人，2018；barz等人，2019；carreras等人，2018；dimidi等人，2019；huo等人，2020；ibarra等人，2018；pedret等人，2019b；uusitupa等人，2020a)。肠道中动物双歧杆菌乳亚种丰度的增加与整体健康和抗炎益处相关。许多动物双歧杆菌乳亚种菌株被认为是促进健康的益生菌，通常被配制到发酵乳制品中。显示了局部应用动物双歧杆菌乳亚种hn019可以减缓大鼠的实验性牙周炎相关症状的发展(oliveira等人，2017)。一项研究报告称，施用动物双歧杆菌乳亚种bb-12可以降低幼儿期呼吸道感染的风险(taipale等人，2016)。另一项研究发现，动物双歧杆菌乳亚种与嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)联合使用可减少肠上皮细胞中的炎症信号传导(s.-c.li等人，2019)。

6、虽然益生菌对普通人群的积极作用已得到充分证明，但尚不清楚在具有不同遗传背景的对象(例如患有pws的对象)中是否会观察到类似的效果。

技术实现思路

1、本文公开了可用于治疗患有或疑似患有pws的对象的方法和组合物。该方法包括施用有效量的包含一种或多种益生菌的组合物。在一些实施方式中，益生菌包括乳杆菌属(lactobacillus,sp.)、酵母属(saccharomyces,sp.)、双歧杆菌属(bifidobacterium,sp.)、芽孢杆菌属(bacillus,sp.)和霍氏真杆菌(eubacterium hallii)中的一种或多种。在一些实施方式中，益生菌包括乳杆菌属(例如，罗伊氏乳杆菌(l.reuteri)和动物双歧杆菌乳亚种(b.lactis)，以及动物双歧杆菌亚种。

2、在一些实施方式中，对象患有以下症状或病症中的一种或多种：肥胖、身材矮小、社交缺陷、精细运动异常、发育迟缓和异常行为特征；其中在治疗后，对象的症状或病症与治疗前相比有所减轻。在一些实施方式中，发育迟缓包括沟通、粗大运动控制、精细运动控制、问题解决和个人社交互动中的一种或多种，通过罗伊氏乳杆菌。在一些实施方式中，异常行为特征包括限制性重复行为(rrb)、异常的社交互动(si)、异常的社交沟通(sc)、异常的情绪反应(er)、异常的认知风格(cs)和言语适应不良(maladaptive speech，ms)中的一种或多种，通过罗伊氏乳杆菌。在一些实施方式中，对象患有肥胖、身材矮小，并且其中在罗伊氏乳杆菌治疗后对象的身体质量指数(bmi)低于罗伊氏乳杆菌治疗前对象的bmi，并且其中动物双歧杆菌乳亚种治疗后对象的身高高于动物双歧杆菌乳亚种治疗前对象的身高。在一些实施方式中，对象患有通过临床总体印象改善(cgi-i)测量的不同严重程度的精神病理，在治疗后，低于对象在动物双歧杆菌乳亚种治疗前的基线cgi严重程度。在一些实施方式中，对象患有发育迟缓，并且其中罗伊氏乳杆菌治疗后对象的年龄与阶段问卷，第三版(asq-3)评分在沟通、粗大运动功能、精细运动功能、解决问题和个人社交互动中的一项或多项上与罗伊氏乳杆菌治疗前对象的asq-3评分相比得到统计学上的改善。在一些实施方式中，其中对象患有异常行为特征，并且其中罗伊氏乳杆菌治疗后对象的第三版gars-3评分(gars-3)在rrb、si、sc、er、cs和ms中的一项或多项上与罗伊氏乳杆菌治疗前对象的gars-3评分相比得到统计学上的改善。在一些实施方式中，对象患有不同严重程度的精神病理，并且其中动物双歧杆菌乳亚种治疗后对象的临床总体印象改善(cgi-i)在改善(cgi-i)和严重程度(cgi-s)的一项或多项评分上与动物双歧杆菌乳亚种治疗前对象的cgi-i和cgi-s评分相比得到统计学上的改善。

3、在一些实施方式中，治疗包括每天一次、每天两次、每天三次或每天四次施用有效剂量的益生菌。在一些实施方式中，治疗包括施用有效剂量的益生菌至少约3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或至少约12周。在一些实施方式中，有效剂量包括约1×103、约2×103、约3×103、约4×103、约5×103、约6×103、约7×103、约8×103、约9×103或约10×103个菌落形成单位(cfu)的益生菌。在一些实施方式中，向对象施用一种或多种另外的治疗剂。

4、在一些实施方式中，益生菌包含罗伊氏乳杆菌或动物双歧杆菌乳亚种，其中益生菌以约3×103个cfu的剂量每天施用两次持续12周，并且其中在治疗后，对象在以下中的一项或多项上表现出统计学相关的改善：bmi、通过asq-3测试测量的精细运动功能和解决问题能力。在一些实施方式中，治疗后对象的微生物组组成与治疗前相比有差异。在一些实施方式中，差异包括罗伊氏乳杆菌引起埃希氏菌属-志贺氏菌属(escherichia-shigella)、卟啉单胞菌属(porphyromonas)和扭链瘤胃球菌(ruminococcus torques)中的一种或多种的降低。在一些实施方式中，差异包括罗伊氏乳杆菌引起双歧杆菌属、乳杆菌属、栖粪杆菌属(faecalibacteria)、罗斯氏菌属(roseburia)和另枝菌属(alistipes)中的一种或多种的增加。在一些实施方式中，差异包括用动物双歧杆菌乳亚种治疗后罗氏菌属(rothia)与rrb显著正相关。

5、在一些实施方式中，提供了包含有效剂量的一种或多种益生菌和生长激素的组合物。在一些实施方式中，益生菌包括乳杆菌属。在一些实施方式中，益生菌包括罗伊氏乳杆菌并且生长激素包括人生长激素。