千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途

1.本发明涉及医药技术领域。更具体地说，本发明涉及一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途。


背景技术：

2.社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,cap)指终末气道、肺泡和肺间质的炎症，是在院外由病原微生物、理化因素、免疫损伤、过敏及药物所致。支原体和细菌性肺炎是最常见的肺炎，也是最常见的感染性疾病。近年来，随着大气污染pm2.5增加，肺炎发病率有增长的趋势。有学者对肺炎病死率进行了统计，其中门诊患者小于1％～5％，住院患者约为12％，入住重症监护病房者则高达40％。严重的脓毒症和脓毒症休克病因中，肺炎约占一半。呼吸系统疾病是导致我国人口死亡的主要原因之一，占农村人口死亡原因第一位，城市人口第四位，其主要死亡原因是慢性阻塞性肺疾病和肺炎。显然，肺炎严重影响人类的生活质量和生命健康。因此加强治疗肺炎的相关研究，探索治疗肺炎的新方法，具有十分重要的意义。与肺癌症状不同，肺炎一般会出现咳嗽，且咳嗽时间比较短，经过抗感染治疗之后得到好转，而且可以痊愈；而肺癌症状表现为慢性咳嗽、咳血、胸痛等症状，经过治疗症状不能好转。影响学观察不同，肺炎是肺部一些纹理增粗等情况，而肺癌主要会有阴影，根据肿瘤大小情况决定。治疗方法不同，肺炎主要使用抗生素或者对症治疗；而肺癌使用手术、放疗、化疗、靶向治疗来进行对症处理。预后不同，肺炎经过治疗之后可以好转，而肺癌是不能好转且影响人的生命。因此，治疗肺炎的药物与方法对肺癌的治疗具有差异性。


技术实现要素：

3.本发明的目的是解决至少上述问题，提供一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途，其对肺炎模型小鼠具有一定的保护作用。
4.为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途，千斤拔素的结构式为式(i)：
[0005][0006]
优选的是，所述急性炎为由上呼吸道感染、慢性支气管炎、肺水肿、肺炎、肺脓肿以及由心脑缺血和器官移植引起的肺组织损伤、炎症和感染。
[0007]
优选的是，所述急性肺炎由流感病毒感染、细菌感染和/或真菌感染导致。
[0008]
优选的是，所述药物含有治疗有效量的千斤拔素和药学上可接受的载体。
[0009]
优选的是，所述药物被制成药学上允许的剂型。
[0010]
优选的是，所述药物下调急性肺炎受试者中炎症因子的水平。
[0011]
优选的是，千斤拔素的给药剂量为不低于10mg/kg
·
d。
[0012]
本发明至少包括以下有益效果：
[0013]
本发明千斤拔素对急性肺炎具有治疗作用，能够改善肺损伤，降低白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数、对il-6、il-1β、tnf-α炎症因子均具有抑制作用，并且能够提高致死剂量lps诱导小鼠急性肺炎的存活率。说明千斤拔素通过以上作用机制而发挥对肺炎的治疗作用。
[0014]
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
[0015]
图1为本发明的千斤拔素对雌性小鼠存活率的影响；
[0016]
图2为本发明的千斤拔素对雌性小鼠体重的影响；
[0017]
图3为本发明的千斤拔素对肺系数的影响；
[0018]
图4为本发明的千斤拔素对肺组织损伤的作用(10
×
20倍)；
[0019]
图5为本发明的千斤拔素对血常规指标的影响；
[0020]
图6为本发明的千斤拔素对肺组织中炎症因子的影响。
具体实施方式
[0021]
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0022]
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0023]
试验1：千斤拔素对致死剂量脂多糖(lps)诱导急性肺炎作用研究
[0024]
1材料和方法
[0025]
1.1药物与试剂
[0026]
千斤拔素(实验室提取)；lps(sigma公司，批号088m4067v)；地塞米松(河南润弘制药股份有限公司，批号：190321)；注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司，批号：l219012211)。
[0027]
1.2实验动物
[0028]
健康balb/c小鼠，雄性60只，spf级，体重20
±
2g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：scxk京2016-0006。
[0029]
1.3仪器
[0030]
1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：me204e)。
[0031]
1.4实验方法
[0032]
动物分组、造模及给药：健康balb/c小鼠，雄性60只，适应性喂养3天，实验室室温为(25
±
5)℃，相对湿度(40～70)％。常规饲料喂养，自由饮水。于造模前称小鼠体重并随机
分为空白对照组、lps模型对照组(12mg/kg)、lps+千斤拔素低剂量组(10mg/kg)、lps+千斤拔素中剂量组(20mg/kg)、lps+千斤拔素高剂量组(40mg/kg)、lps+地塞米松阳性对照组(5mg/kg)，每组10只，图1-2中为了简述，分别用空白对照组、模型组、千斤拔素低剂量组、千斤拔素中剂量组、千斤拔素高剂量组、地塞米松组表示。
[0033]
除空白对照组以外，其余五组均按照lps剂量为12mg/kg，气管滴注(i.t)给药1次复制急性肺炎小鼠模型。造模前各组小鼠腹腔注射0.4％戊巴比妥钠，0.12ml/10g麻醉后，取小鼠仰卧位，于手术台上，用小鼠开口器打开小鼠口腔，用微量注射器加18g注射滞留针软管，从会厌软骨开口处将lps溶液(6mg/ml)(空白组注入等量无菌生理盐水)注入肺脏50μl，模型即建立完成，待其苏醒后给予水和饲料。千斤拔素组于造模后0h、3h、24h、48h、72h灌胃(i.g)给千斤拔素(10、20、40mg/kg)，地塞米松组于造模后0h腹腔(i.p)注射地塞米松(5mg/kg)，lps模型对照组i.g注射等量生理盐水。
[0034]
2检测指标
[0035]
2.1小鼠体重及存活率
[0036]
每天称量并记录每组小鼠体重，计录并统计各组的死亡数以及存活率的动态变化。
[0037]
2.2统计学分析
[0038]
多个样本间均数比较。方差齐性数据采用单因素方差分析lsd检验，以p＜0.05为差异具有统计学意义。采用spss13.0统计软件包，各项指标结果用均数
±
标准差(x
±
s)表示，两组间均数比较采用t检验，多组间计量资料比较采用单因素方差分析(one-way anova)和两两比较(lsd法)。p《0.05为差异具有统计学意义。
[0039]
3实验结果
[0040]
3.1千斤拔素对小鼠存活率和体重的影响
[0041]
lps造模后小鼠开始死亡，lps模型对照组小鼠在第四天全部死亡，lps+地塞米松组和lps+千斤拔素各剂量组存活率高于lps模型对照组，lps+地塞米松组存活率约为85％，lps+千斤拔素低中高剂量组存活率分别为58％、80％、80％，结果说明地塞米松和千斤拔素对致死剂量lps诱导小鼠肺炎具有治疗和保护作用。
[0042]
与空白对照组比较，lps模型对照组体重均显著降低，与lps模型对照组比较，lps+地塞米松组和lps+千斤拔素各剂量组小鼠给药后体重均高于lps模型对照组。结果显示，lps(12mg/kg)可导致balb/c小鼠体重减轻和死亡，而地塞米松和千斤拔素改善lps所致体重减轻并且提高小鼠存活率的作用，详见图1、图2。
[0043]
试验2：千斤拔素对脂多糖(lps)诱导急性肺炎作用研究
[0044]
1药物与试剂
[0045]
千斤拔素(实验室提取)；地塞米松(河南润弘制药股份有限公司，批号：190321)；注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司，批号：l219012211)；il-6、il-1β、tnf-αelisa测定试剂盒(欣博盛生物科技有限公司，批号：m190530-102a)。
[0046]
1.1实验动物
[0047]
健康雄性balb/c小鼠，60只，spf级，体重20
±
2g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：scxk京2016-0006。
[0048]
1.2仪器
[0049]
mindray血常规检测仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：bc-5000vet)；1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：me204e)；低温高速离心机(eppendorf公司，型号：5425r)；酶联免疫检测仪(美国biotek公司，型号：synergyh1)；病理图像分析仪(日本olympus，型号：bx-60)；组织研磨机(杰灵仪器制造天津有限公司，型号：tp-24)。
[0050]
1.3实验方法
[0051]
动物分组、造模及给药：健康雄性balb/c小鼠，60只，适应性喂养3天，实验室室温为(25
±
5)℃，相对湿度(40～70)％。常规饲料喂养，自由饮水。于造模前称小鼠体重并随机分为空白对照组、lps模型对照组(4mg/kg)、lps+千斤拔素低剂量组(10mg/kg)、lps+千斤拔素中剂量组(20mg/kg)、lps+千斤拔素高剂量组(40mg/kg)、lps+地塞米松阳性对照组(5mg/kg)，每组10只，图3-6中为了简述，分别用空白对照组、模型对照组、千斤拔素10mg/kg、千斤拔素20mg/kg、千斤拔素40mg/kg、地塞米松5mg/kg表示。
[0052]
除空白对照组以外，其余五组均按照lps剂量为4mg/kg，气管滴注(i.t)给药1次复制急性肺炎小鼠模型。造模前各组小鼠腹腔注射0.4％戊巴比妥钠，0.12ml/10g麻醉后，取小鼠仰卧位，于手术台上，用小鼠开口器打开小鼠口腔，用微量注射器加18g注射滞留针软管，从会厌软骨开口处将lps溶液(2mg/ml)(空白组注入等量无菌生理盐水)注入肺脏50μl，模型即建立完成，待其苏醒后给予水和饲料。千斤拔素组于造模后0h、3h、24h、48h、72h灌胃(i.g)给千斤拔素(10、20、40mg/kg)，地塞米松组于造模后0h腹腔(i.p)注射地塞米松(5mg/kg)，lps模型对照组i.g注射等量生理盐水。
[0053]
2检测指标
[0054]
2.1肺组织指标测定
[0055]
每组小鼠于造模后72h处死，摘除肺脏，各组进行以下指标观察和测定。
[0056]
(1)取右肺中叶，称重并记录湿重后，计算肺系数＝湿重/体重。
[0057]
(2)取右肺下叶，用多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，进行he染色，显微镜下观察肺组织病理学改变；
[0058]
(3)余肺用冰冷生理盐水漂洗后，滤纸吸干表面水分，精密称取重量，用组织研磨机匀浆后，于-80℃冰箱保存，进行检测il-6、il-1β、tnf-α含量。
[0059]
2.2血常规指标测定
[0060]
小鼠处死前，摘眼球取血于ep管中，吸取25μl血溶于5μl edta-k2抗凝剂中，立即用血常规仪器检测小鼠血液中白细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板等常规指标。
[0061]
2.3统计学分析
[0062]
多个样本间均数比较。方差齐性数据采用单因素方差分析lsd检验，以p＜0.05为差异具有统计学意义。采用spss13.0统计软件包，各项指标结果用均数
±
标准差(x
±
s)表示，两组间均数比较采用t检验，多组间计量资料比较采用单因素方差分析(one-wayanova)和两两比较(lsd法)。p《0.05为差异具有统计学意义。
[0063]
3结果与讨论
[0064]
3.1千斤拔素对肺组织湿重、肺组织损伤的影响
[0065]
与空白对照组比较，lps模型对照组小鼠肺湿重显著升高；与lps模型对照组比较，lps+地塞米松组小鼠肺湿重显著降低，lps+千斤拔素各剂量组小鼠肺湿重显著降低。结果
显示，lps可导致balb/c小鼠肺湿重升高，而地塞米松和千斤拔素降低lps所致肺湿重升高的作用，详见图3(与空白对照组比较
###
p＜0.001；与lps模型对照组比较，
**
p＜0.01，
***
p＜0.001)。
[0066]
肺组织he染色结果显示，空白对照组小鼠肺组织气管黏膜平滑，假复层纤毛柱状上皮杯状细胞和纤毛细胞清晰可见，肺泡未见增厚、充血或水肿等改变，肺泡壁薄，分布整齐，边界清晰；lps模型对照组小鼠肺组织出现明显实变，肺泡损坏萎陷挤压明显，边界不清晰，有明显的炎性细胞浸润；lps+地塞米松组和lps+千斤拔素各剂量组肺组织损伤明显改善，肺泡萎陷明显改善，实变明显缓解，边界较清晰，挤压和炎性改变明显减轻，其中以高剂量改善最为明显，详见图4。
[0067]
3.2千斤拔素对血常规的影响
[0068]
与空白对照组比较，lps模型对照组小鼠血液wbc、lymph和neu水平均显著升高；与lps模型对照组比较，lps+地塞米松组和lps+千斤拔素各剂量组小鼠血液wbc、lymph和neu水平均降低。结果显示，lps可导致balb/c小鼠血液白细胞指标wbc、lymph和neu水平升高，而地塞米松和千斤拔素降低lps所致wbc、lymph和neu水平升高的作用，详见图5(与空白对照组比较
###
p＜0.001；与lps模型对照组比较，
***
p＜0.001)。
[0069]
3.3千斤拔素对肺组织中炎症因子的影响
[0070]
与空白对照组比较，lps模型对照组小鼠肺泡灌洗液il-6、tnf-α和il-1β水平显著升高；与lps模型对照组比较，lps+地塞米松组和lps+千斤拔素各剂量组小鼠肺组织中il-6、tnf-α和il-1β水平均降低。结果显示，lps可导致balb/c小鼠肺组织中炎症因子il-6、tnf-α和il-1β水平升高，而地塞米松和千斤拔素降低lps所致肺组织炎症因子水平升高的作用，详见图6(与空白对照组比较
###
p＜0.001；与lps模型对照组比较，
***
p＜0.001)。
[0071]
4结论
[0072]
实验结果表明，千斤拔素对lps诱导的急性肺炎具有治疗作用，其作用机制可能通过降低肺组织炎症因子如il-6、il-1β、tnf-α水平、改善lps诱导的急性肺组织损伤而发挥治疗肺炎的作用。
[0073]
总结
[0074]
本技术利用lps气管滴注制备小鼠急性肺炎动物模型，探讨千斤拔素对肺炎的保护作用及可能的作用机制，为防治肺炎提供理论依据。
[0075]
致死实验：将60只健康雄性balb/c小鼠随机分为6组：空白对照组、模型组、千斤拔素(10，20，40mg/kg)灌胃给药组和阳性对照药(地塞米松，5mg/kg)腹腔注射组，每组10只。将lps(12mg/kg)气管滴注造致死模型。造模后于0h，3h，24h，48h，72h给药后观察小鼠死亡情况并记录。
[0076]
肺炎实验：将60只健康雄性balb/c小鼠随机分为6组：空白对照组、模型组、千斤拔素(10，20，40mg/kg)灌胃给药组和阳性对照药(地塞米松，5mg/kg)腹腔注射组，每组10只。将lps(4mg/kg)气管滴注造模，每只50μl。造模后于0h，3h，24h，48h，72h给药，在72h给药后，处死小鼠，取血检测血常规指标(白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞)，取肺组织称重计算肺系数，一部分肺组织研磨后利用elisa检测炎症因子(il-6、tnf-α和il-1β)，其余肺组用于织病理切片检测。
[0077]
实验结果提示，(1)lps(12mg/ml)致死剂量诱导小鼠急性肺炎，小鼠体重下降、在
第四天全部死亡。千斤拔素能够改善小鼠体重下降，并且提高小鼠存活率。(2)lps(4mg/kg)气管滴注给药能够显著诱导小鼠急性肺炎，小鼠呼吸急促、肺组织均将中il-6、il-1β、tnf-α含量升高、肺湿重增加、血液中白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数增加，肺组织中炎性细胞浸润、支气管肺泡壁增厚和肺充血。千斤拔素能显著降低肺组织中il-6、il-1β、tnf-α的含量，降低小鼠肺湿重、减少白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数、改善肺损伤情况。在本实验条件下，千斤拔素具有治疗肺炎的作用。
[0078]
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
[0079]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。