一种SPACE肽修饰的脂质体及其制备方法与应用

一种space肽修饰的脂质体及其制备方法与应用
技术领域
1.本发明属于脂质体技术领域，具体涉及一种space肽修饰的脂质体及其制备方法与应用。


背景技术：

2.脂质体又称传递体，作为一种纳米药物载体能够负载水溶、水不溶药物，显著提高水不溶药物的性能，比如能抑制金黄色葡萄球菌滋生的金黄霉素a的溶解度，而通过在其表面连接特定肽、多糖、抗体等，可使被包裹药物具有靶向性。其中，使用表面活性剂改性的柔性脂质体，因易变形的特质，更加容易透过皮肤，从而加速皮肤药物吸收。
3.space肽是一种具有11个氨基酸序列的透皮肽，其序列为actgstqhqcg，该短肽能携带大分子药物通过角质层进入真皮内，起到治疗作用。如申请公布号为cn103201386a的文件公开了皮肤穿透及细胞进入（space）肽及其使用方法，其公开了几种肽的氨基酸序列，并且还公开了肽的组合物及其在与角质层接触时能够穿透角质层或与细胞接触时穿透细胞的功能。
4.本发明人在此基础上，经过长期研究发现：将金黄霉素a制成space肽修饰的抗菌脂质体可以显著提高金黄霉素a的皮肤透过性，进而提高皮肤对金黄霉素a的吸收，从而达到抑制细菌生长的目的。


技术实现要素：

5.针对上述存在的问题，本发明的目的之一是提供一种space肽修饰的抗菌脂质体，该脂质体可实现药物透皮递送的效果。
6.为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种space肽修饰的抗菌脂质体，所述抗菌脂质体为表面修饰space肽且负载有疏水抗菌剂的脂质体，所述脂质体的制备原料包括：卵磷脂、胆酸钠、space肽、疏水抗菌剂。
7.在本发明中，通过多重作用实现药物透皮递送的效果：首先，胆酸钠作为表面活性剂，可以软化脂质体表面，使其具有很强的变形能力，更容易通过皮肤；其次，表面修饰的透皮短肽space肽，可以在皮肤上打开孔道，赋予脂质体更强的皮肤渗透能力。因此，将疏水性抗菌剂负载于space肽修饰的脂质体中，既可以显著提高疏水性抗菌剂的皮肤透过性，也可以克服疏水性抗菌剂因水溶性差而生物利用率低的问题，最终使得疏水性抗菌剂发挥良好的抑菌效果。
8.本发明的另一目的在于提供space肽修饰的抗菌脂质体的应用，主要用于在皮肤局部涂抹施用。
9.本发明还提供一种space肽修饰的抗菌脂质体的制备方法，包括以下步骤：s1、将space-peg-dspe与卵磷脂、胆酸钠、疏水抗菌剂用有机溶剂溶解共混，得到脂质溶液；s2、将得到的所述脂质溶液经旋转蒸发后得到薄膜，然后用pbs水化溶解，得到脂质水化混悬液；s3、将得到的所述混悬液进行超声处理，得到space肽修饰的抗菌脂质体。
10.作为本发明的进一步优选，所述胆酸钠、卵磷脂、疏水抗菌剂、space-peg-dspe的质量比为30~50:50~70:5~20:2~8。
11.作为本发明的进一步优选，所述疏水抗菌剂为金黄霉素a，所述卵磷脂为蛋黄卵磷脂。
12.作为本发明的进一步优选，所述有机溶剂为甲醇-二氯甲烷的混合溶液，所述甲醇和二氯甲烷的体积比为1:1。
13.作为本发明的进一步优选，步骤s3中超声处理的条件为：功率100w、时间1~5min。
14.作为本发明的进一步优选，为了获取space-peg-dspe，本发明通过在nhs-peg-dspe上接枝space肽实现，具体的获取步骤包括：步骤一：向溶解的nhs-peg-dspe中加入space肽并进行搅拌，得到反应液；步骤二：将得到的所述反应液进行透析、冷冻干燥，得到space-peg-dspe。
15.作为本发明的进一步优选，为了保证space肽在所述nhs-peg-dspe上的充分接枝，确定所述nhs-peg-dspe的浓度范围为20~100mg/ml，所述nhs-peg-dspe和space肽的质量比为1:1~4。进一步优选为nhs-peg-dspe和space肽的质量比为1:2.5，反应时间为12~24h。
16.作为本发明的进一步优选，步骤二中透析采用截留分子量为1000~10000道尔顿的透析袋。进一步优选为截留分子量为3500道尔顿的透析袋，透析时间为12~48h。
17.综上所述，本发明具有以下有益效果：本发明提供的space肽修饰的抗菌脂质体具有高度柔韧性和高效皮肤渗透的性质，从而提高活性成分的透皮吸收。
18.本发明提供的space肽修饰的抗菌脂质体具有高度的亲水性，具有可以顺着水合梯度穿透皮肤的功能。
19.本发明提供的脂质体表面修饰有space肽，使脂质体能高效穿透角质层的阻隔进入真皮组织。当space肽修饰的抗菌脂质体涂于皮肤表面时，space肽使脂质体穿透角质层由皮肤表层渗透进入深层组织，并且由于其高度的变形能力可保证穿透过程的顺利进行。
20.本发明制备的脂质体具有优异的细胞相容性、制备效率高。
附图说明
21.附图1为本发明制备的space肽修饰的抗菌脂质体的示意图。
22.附图2为本发明制备的space肽修饰的抗菌脂质体和普通柔性脂质体的皮肤渗透实验。
23.附图3为本发明制备的抗菌脂质体治疗皮肤内金黄色葡萄球菌感染实验。
具体实施方式
24.一、制备抗菌脂质体实施例1本发明制备space肽修饰的抗菌脂质体的原理如附图1所示，具体制备方法包括以下步骤：（1）获取space-peg-dspe：将20mg的nhs-peg-dspe溶解于水中，再加入8mg的space肽，搅拌反应12h，得到反应液。
peg-dspe的质量比为20:80:5:5。
40.二、抗菌试验1.比较实施例1和对比例1的抗菌效果。
41.使用无毛小鼠背部区域的完整皮肤样本来进行space肽修饰的抗菌脂质体和没有修饰的普通柔性脂质体的皮肤渗透性比较：将相同药物浓度的space修饰的脂质体和普通柔性脂质体分别涂布于小鼠皮肤角质层测，于室温下保持4h，测量皮肤内药物浓度。
42.结果如附图2所示，证明实施例1制备的space肽修饰的抗菌脂质体与对比例1制备的普通柔性脂质体相比，space肽修饰的抗菌脂质体具有更好的透皮性能。
43.2.比较实施例1与现有的抗菌软膏以及空白对照组的抗菌效果。
44.用金黄色葡萄球菌评价脂质体的抗菌活性：将制备好的1
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108cfu/ml的菌悬液注射入小鼠背部皮肤内，每只小鼠10μl；感染1h后，感染部位分别涂抹pbs、space肽修饰的抗菌脂质体以及临床药物百多邦软膏，每12h给药一次。三天后收集感染部位皮肤，匀浆皮肤，稀释后接种涂布到tryptosesoyaagar培养基表面，37℃下孵育24h。
45.结果如图3所示，证明实施例1制备的space肽修饰的抗菌脂质体具有较好的抑菌性能，其疗效好于临床药物百多邦软膏。
46.本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。