一种凝血酶修饰的止血膜及其制备方法

本发明涉及止血，尤其涉及一种凝血酶修饰的止血膜及其制备方法。

背景技术：

1、不仅战场上会发生出血事件，在日常生活中，出血事件更是不可避免的，不可控的出血是导致死亡的一大因素，因不及时止血导致的死亡占创伤死亡的30％～40％。在现阶段的医疗技术中，通常会用止血纱布来止血，但是，传统的止血纱布仍停留在无纺纱布阶段，表面质地、韧性和强度都较差，微观尺寸较大，不利于血液的迅速吸收，凝血速度较慢，通常需要在2～8分钟内才能止血，止血效果不理想，还容易因纱布质地粗糙对创面造成二次出血，导致失血量变多，另外，对创面的愈合作用极小，无法在止血的同时，加快创面愈合。因此研究开发复合型的止血产品，对挽救生命是具有重要的意义的。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种凝血酶修饰的止血膜及其制备方法，旨在解决传统止血纱布表面质地、韧性和强度较差，微观尺寸较大，不利于血液吸收，凝血速度较慢，容易对创面造成二次出血导致失血量变多，且无法在止血的同时，加快创面愈合的技术问题。

2、为实现上述目的，本发明提供一种凝血酶修饰的止血膜。

3、此外，为实现上述目的，本发明还提供一种凝血酶修饰的止血膜的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

4、s10，制备pan纳米纤维膜：将pan溶解到有机溶剂中，得到纺丝液，然后通过静电纺丝法，制备得到pan纤维膜，干燥备用；

5、s20，表面改性处理：

6、s21，羧基化：将干燥后的pan纤维膜浸泡在碱性溶液中，在50～60℃恒温条件下进行反应，然后于酸性溶液中浸泡酸洗，再用去离子水冲洗至中性，得到表面羧基化的pan纤维膜；

7、s22，胺化：将表面羟基化的pan纤维膜浸泡在乙二胺和乙醇的混合溶液中，于30～45℃恒温条件下反应，然后用去离子水冲洗至中性，得到表面胺化的pan纤维膜；

8、s23，衣康酸交联及活化：将表面胺化的pan纤维膜浸泡在衣康酸水溶液中，于50～65℃恒温条件下反应，得到交联pan纤维膜，将所述交联pan纤维膜移入edc/nhs的80％乙醇混合液中浸泡活化，得到表面改性pan纤维膜；

9、s30，负载凝血酶：将表面改性pan纤维膜转移到凝血酶溶液中，在30～50℃恒温条件下培养，然后用去离子水冲洗，即得凝血酶修饰的止血膜。

10、可选地，在s10制备pan纳米纤维膜的步骤中，所述有机溶剂为n,n-二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中的至少一种。

11、可选地，在在s10制备pan纳米纤维膜的步骤中，所述纺丝液的质量浓度为8％～10％。

12、可选地，在s21羧基化步骤中，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、氢氧化钾的氨水混合液以及氢氧化钠的氨水混合液中的至少一种。

13、可选地，在s21羧基化步骤中，所述酸性溶液为盐酸溶液、硝酸溶液或硫酸溶液中的至少一种。

14、可选地，在s21羧基化步骤中，所述浸泡酸洗的时间为3～5h。

15、进一步可选地，所述氢氧化钠的体积摩尔浓度为1～3mol/l；所述盐酸溶液的体积摩尔浓度为0.5～2mol/l。

16、可选地，在s22胺化步骤中，所述乙二胺和乙醇的体积比为4:5～8。

17、可选地，在s23衣康酸交联及活化步骤中，所述衣康酸溶液的质量分数为8％～10％。

18、可选地，在s23衣康酸交联及活化步骤中，浸泡活化2～4次，每次浸泡活化6～8h。

19、可选地，在s23衣康酸交联及活化步骤中，所述edc与nhs的质量比为5:1～3。

20、可选地，在s30负载凝血酶的步骤中，所述凝血酶溶液的浓度为10～30nih units/ml，所述培养时间为4～8h。

21、本发明所能实现的有益效果：

22、本发明的凝血酶修饰的止血膜是以pan纤维膜为基础，所述pan纤维膜是一种高强高模型纤维，表面质地较佳，具有优异的拉伸强度、耐磨性。

23、对所述pan纤维膜依次进行羧基化、胺化、衣康酸交联及活化一系列表面改性得到的表面改性pan纤维膜，结构稳定，暴露出更多能与凝血酶结合的活性位点，可以负载更多的凝血酶，显著提高止血膜的止血效果。

24、在表面改性pan纤维膜上负载凝血酶，制备得到的凝血酶修饰的止血膜，具有良好的生物相容性，既能在短时间内吸收血液或渗液，快速粘附创面，促进血小板粘附形成血栓，从而实现快速止血的效果，又能促进脂肪干细胞和人皮肤成纤维细胞的生长繁殖，加速创面的愈合。与现有的止血纱布相比，本发明的止血膜具有更佳的肤感和显著的止血效果，且能促进伤口愈合，防止二次出血，有效减少失血量。

技术特征：

1.一种凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在制备pan纳米纤维膜的步骤中，所述有机溶剂为n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜中的至少一种；和/或，所述纺丝液的质量浓度为8％～10％。

3.如权利要求1所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在羧基化步骤中，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、氢氧化钾的氨水混合液以及氢氧化钠的氨水混合液中的至少一种；

4.如权利要求3所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在羧基化步骤中，所述氢氧化钠的体积摩尔浓度为1～3mol/l；和/或，所述盐酸溶液的体积摩尔浓度为0.5～2mol/l。

5.如权利要求1所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在胺化步骤中，所述乙二胺和乙醇的体积比为4:5～8。

6.如权利要求1所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在衣康酸交联及活化步骤中，所述衣康酸溶液的质量分数为8％～10％。

7.如权利要求1所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在衣康酸交联及活化步骤中，浸泡活化2～4次，每次浸泡活化6～8h。

8.如权利要求1所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在衣康酸交联及活化步骤中，所述edc与nhs的质量比为5:1～3。

9.如权利要求1所述凝血酶修饰的止血膜的制备方法，其特征在于，在负载凝血酶的步骤中，所述凝血酶溶液的浓度为10～30nih units/ml；和/或，所述培养时间为4～8h。

10.一种如权利要求1至9任意一项所述制备方法得到的凝血酶修饰的止血膜。

技术总结
本发明公开了一种凝血酶修饰的止血膜及其制备方法，属于止血技术领域。本发明通过制备PAN基的PAN纤维膜，再在所述PAN纤维膜上进行羧基化、胺化和衣康酸交联、活化，得到结构稳定的表面改性PAN纤维膜，所述表面改性PAN纤维膜能暴露更多的活性位点，与更多的凝血酶结合。在所述表面改性纤维膜上负载凝血酶，得到凝血酶修饰的止血膜，所述凝血酶修饰的止血膜，具有良好的生物相容性，既能在短时间内吸收血液或渗液，实现快速长效止血的效果，又能促进脂肪干细胞和人皮肤成纤维细胞的生长繁殖，促进细胞再生，加速创面的愈合，防止二次出血，减少出血量。

技术研发人员：朱艳霞,杜冰
受保护的技术使用者：深圳大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13