一种胶原面膜纸的制备方法与流程

1.本发明涉及化妆品技术领域，尤其是涉及一种胶原面膜纸的制备方法。


背景技术：

2.胶原与人体皮肤胶原的结构相似，生物相容性好，可以快速进入皮肤深层，对皮肤具有良好的营养作用。且胶原中存在具有大量羧基和羟基的羟脯氨酸和羟赖氨酸等氨基酸，及大量的甘氨酸等天然保湿因子，能提高组织细胞的贮水能力，对皮肤细胞的生长、分裂、增殖、迁移及分化具有良好的促进作用。胶原能够给皮肤提供养分，延缓皮肤衰老，促进皮肤的创面修复。
3.目前，市面上常见的胶原面膜形式，主要以湿性面膜和冻干面膜为主。湿性面膜是将面膜基材(无纺布、生物纤维、海藻酸钠凝胶、蚕丝等)浸泡在含有胶原、透明质酸钠等活性物质的精华液中，装入铝塑复合袋中密封成一片包装，使用时直接取出沾满精华液的面膜敷于面部即可。冻干面膜是将胶原、透明质酸等活性物质直接喷涂于面膜基材上，然后干燥成干膜，使用时用纯化水浸润后直接敷于面部。湿性面膜中由于使用的胶原、透明质酸钠等精华液均为具有活性的营养成分，高水活度的湿润环境下易促进细菌或霉菌滋生，其保存期限较短，所以为了延长其保存周期，往往需要添加如羟基苯甲酸酯类、醇类的防腐剂。但防腐剂往往具有一定的刺激性，长期使用含有防腐剂的护肤品，可能使皮肤容易老化、抗氧化能力降低等，甚至可能导致过敏。冻干胶原面膜以干膜的形式提供，避免了防腐剂的添加，但是其基材上添加的胶原、透明质酸钠含量很少，一般达不到有效浓度，多以概念性添加为主，支撑面膜的骨架还是以无纺布、生物纤维、藻酸盐基材为主。


技术实现要素：

4.针对现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种胶原面膜纸的制备方法。本发明以动物组织(牛跟腱、牛皮或猪皮)中提取的高纯度胶原为面膜骨架，再辅以其他活性物质、乳化剂成分，制成胶原面膜。此面膜可以促进细胞再生，改善肌肤纹理，延缓皮肤衰老，促进皮肤损伤修复。
5.本发明的技术方案如下：
6.本发明的第一个目的是提供一种胶原面膜纸的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
7.(1)将动物组织表面剔除毛发或者剥去筋膜，去掉脂肪层后切成组织碎片、冷冻；
8.(2)将步骤(1)制得的组织碎片浸泡在氢氧化钠溶液中，置于10℃以下环境中，浸泡完后用纯化水清洗数次；
9.(3)将经过步骤(2)处理所得物料置于盐酸溶液中，置于10℃以下环境中，浸泡完后用纯化水清洗数次，制得胶原纤维丝；
10.(4)将步骤(3)制得的胶原纤维丝，用纯化水分散成一定浓度的胶原混悬液，在胶原混悬液中加入一定量的活性物质、乳化剂，混合均匀后倒入冻干模具中，冷冻干燥，制得
胶原冻干海绵；
11.(5)将步骤(4)制得的胶原冻干海绵切割成薄片，即得胶原面膜纸。
12.在本发明的一个实施例中，步骤(1)中，动物组织为牛跟腱、牛皮、猪皮中的一种或多种。
13.在本发明的一个实施例中，步骤(2)中，氢氧化钠溶液的质量浓度为0.5％～2％，优选1.0％～1.5％；
14.组织碎片与氢氧化钠溶液的质量比为1:4～1:8，优选1:5；
15.浸泡时间为3～7d，优选5～6d；用纯化水清洗至料液ph至中性。
16.在本发明的一个实施例中，步骤(3)中，盐酸溶液的质量浓度为2％～5％，优选3％～4％；
17.经过步骤(2)处理所得物料与盐酸溶液的质量比为1:2～1:4，优选1:3；
18.料液ph为0.7-1.0，优选0.8；
19.浸泡时间为12～24h，优选18～20h；用纯化水清洗至料液ph至4.5～4.8。
20.在本发明的一个实施例中，步骤(3)中，以干品计，胶原纤维丝的酰胺氮含量为0.2～0.4mmol/g。
21.在本发明的一个实施例中，步骤(4)中，胶原混悬液的质量浓度为1.5～2.5％，优选2％。
22.在本发明的一个实施例中，步骤(4)中，活性物质为透明质酸钠、银耳提取物、海藻糖、普鲁兰多糖中的一种或多种；活性物质的添加浓度为0.03～0.2％，优选0.08-0.1％。
23.在本发明的一个实施例中，步骤(4)中，乳化剂为ppg-26-丁醇聚醚-26、ppg-15硬脂醇醚、peg-40氢化蓖麻油、peg-40失水山梨醇全油酸酯、甘油三(乙基己酸)酯中的一种或多种；
24.乳化剂添加浓度为0.5～1％，优选0.8％；
25.在本发明的一个实施例中，步骤(4)中，混合料液的ph为4～5，优选4.5；
26.冷冻干燥的具体方法为：将冻干模具密封好后置于-25℃盐水浴中冷冻2-3小时，而后取出模具，置于-5℃冰箱中储存12～24小时；
27.然后将冷冻好的物料在1.5mbar的真空下冷冻干燥，温度程序如下：0℃，4～6小时；10℃，20～25小时；20℃，30～35小时；40℃，4～6小时；100℃，35～40小时；
28.胶原冻干海绵的厚度为1.5～3cm，优选2cm。
29.在本发明的一个实施例中，步骤(5)中，胶原面膜纸的厚度为0.6～1mm，优选0.8mm。
30.本发明有益的技术效果在于：
31.本发明胶原面膜纸干的时候是一张薄的、表面细腻、有一定弹性的海绵纸，敷在脸上后滴上纯净水或精华水，里面的胶原及其他活性精华便会被激活，面膜纸变成半透明弹性的膜布紧贴在脸上，胶原精华能迅速渗透至皮肤深层，供给营养，使真皮层细胞结构更为紧密，改善肌肤纹理，平滑肌肤，并保持丰润；
32.本发明面膜纸可使衰竭细胞达到最佳含水量，抵抗自由基，并增加活力和再生的状态；给肌肤提供养分，延缓皮肤衰老，促进皮肤的损伤修复。可广泛应用于医学美容、化妆品行业。
附图说明
33.图1为本发明工艺流程示意图；
34.图2为实施例1制得胶原面膜纸外表面的扫描电镜图；
35.图3为实施例1制得胶原面膜纸内部的扫描电镜图；
36.图4为实施例1制得胶原纤维丝对成纤维细胞内抗衰基因表达量的检测结果；
37.图5为实施例1制得胶原纤维丝对模型的组织形态改善检测结果；
38.图6为实施例1制得胶原纤维丝对模型的组织活力改善检测结果。
具体实施方式
39.下面结合附图和实施例，对本发明进行具体描述。
40.实施例1
41.一种胶原面膜纸的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
42.(1)将牛跟腱用剖层机剖去外层筋膜和脂肪，清洗干净后用粉碎机切成碎片，冷冻备用；
43.(2)取预处理完成的牛跟腱碎片1000g，浸泡在5000g naoh溶液(质量浓度1.0％)中，置于10℃环境下浸泡6d，然后用纯化水清洗数遍，清洗至物料ph为7；
44.(3)将经过步骤(2)处理所得物料(物料重量为1500g)，浸泡在4500g盐酸溶液(质量浓度4％)中，调节料液ph至0.8，置于10℃环境下浸泡20h，然后用纯化水清洗数遍，至料液ph为4.5，制得胶原纤维丝；经检测制得的胶原纤维丝的酰胺氮含量为0.32mmol/g(以干品计)；
45.(4)取步骤(3)制得的胶原纤维丝(干物质含量为13％)200g，加入1100g纯化水配成浓度为2％的胶原混悬液，在混悬液中分别加入0.52g透明质酸钠、0.52g银耳提取物，用粉碎机混合均匀，再加入5.2g ppg-26-丁醇聚醚-26、2.6g peg-40氢化蓖麻油、2.6g甘油三(乙基己酸)酯，混合均匀后，调节料液ph为4.5，之后倒入冻干模具中，密封好后置于-25℃盐水浴中冷冻3小时，而后取出模具，置于-5℃冰箱中储存18小时；然后将冷冻好的物料在1.5mbar的真空下冷冻干燥，温度程序如下：0℃，5小时；10℃，20小时；20℃，32小时；40℃，5小时；100℃，36小时；制得胶原冻干海绵，厚度为2cm；
46.(5)最后，用剖层机将胶原冻干海绵切割成0.8mm厚度的薄片，即得胶原面膜纸。
47.实施例2
48.一种胶原面膜纸的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
49.(1)将牛跟腱用剖层机剖去外层筋膜和脂肪，清洗干净后用粉碎机切成碎片，冷冻备用；
50.(2)取预处理完成的牛跟腱碎片1000g，浸泡在5000g naoh溶液(质量浓度1.5％)中，置于8℃环境下浸泡5d，然后用纯化水清洗数遍，清洗至物料ph为7；
51.(3)将经过步骤(2)处理所得物料(物料重量为1700g)，浸泡在3400g盐酸溶液(质量浓度5％)中，调节料液ph至1.0，置于8℃环境下浸泡24h，然后用纯化水清洗数遍，至料液
ph为4.6，制得胶原纤维丝；经检测制得的胶原纤维丝的酰胺氮含量为0.28mmol/g(以干品计)；
52.(4)取步骤(3)制得的胶原纤维丝(干物质含量为12％)200g，加入1400g纯化水配成浓度为1.5％的胶原混悬液，在混悬液中分别加入0.48g透明质酸钠，用粉碎机混合均匀，再加入10g ppg-26-丁醇聚醚-26、5g甘油三(乙基己酸)酯，混合均匀后，调节料液ph为4.6，之后倒入冻干模具中，密封好后置于-25℃盐水浴中冷冻3小时，而后取出模具，置于-5℃冰箱中储存16小时；然后将冷冻好的物料在1.5mbar的真空下冷冻干燥，温度程序如下：0℃，5小时；10℃，20小时；20℃，32小时；40℃，5小时；100℃，36小时；制得胶原冻干海绵，厚度为3cm；
53.(5)最后，用剖层机将胶原冻干海绵切割成1.0mm厚度的薄片，即得胶原面膜纸。
54.实施例3
55.一种胶原面膜纸的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
56.(1)将湿牛皮用剖层机剖去皮毛层和脂肪层，清洗干净后用粉碎机切成碎片，冷冻备用；
57.(2)取预处理完成的牛皮碎片1000g，浸泡在4000g naoh溶液(质量浓度0.8％)中，置于6℃环境下浸泡4d，然后用纯化水清洗数遍，清洗至物料ph为7；
58.(3)将经过步骤(2)处理所得物料(物料重量为1300g)，浸泡在5200g盐酸溶液(质量浓度3％)中，调节料液ph至0.9，置于6℃环境下浸泡18h，然后用纯化水清洗数遍，至料液ph为4.7，制得胶原纤维丝；经检测制得的胶原纤维丝的酰胺氮含量为0.38mmol/g(以干品计)；
59.(4)取步骤(3)制得的胶原丝状物(干物质含量为15％)200g，加入1000g纯化水配成浓度为2.5％的胶原混悬液，在混悬液中分别加入0.48g银耳提取物，用粉碎机混合均匀，再加入6.4g ppg-26-丁醇聚醚-26、3.2g peg-40氢化蓖麻油，混合均匀后，调节料液ph为4.8，之后倒入冻干模具中，密封好后置于-25℃盐水浴中冷冻3小时，而后取出模具，置于-5℃冰箱中储存18小时；然后将冷冻好的物料在1.5mbar的真空下冷冻干燥，温度程序如下：0℃，5小时；10℃，20小时；20℃，32小时；40℃，5小时；100℃，36小时；制得胶原冻干海绵，厚度为2.5cm；
60.(5)最后，用剖层机将胶原冻干海绵切割成0.7mm厚度的薄片，即得胶原面膜纸。
61.实施例4
62.一种胶原面膜纸的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
63.(1)将湿猪皮用剖层机剖去皮毛层和脂肪层，清洗干净后用粉碎机切成碎片，冷冻备用；
64.(2)取预处理完成的猪皮碎片1000g，浸泡在5000g naoh溶液(质量浓度2％)中，置于4℃环境下浸泡7d，然后用纯化水清洗数遍，清洗至物料ph为7；
65.(3)将经过步骤(2)处理所得物料(物料重量为1200g)，浸泡在3600g盐酸溶液(质量浓度4％)中，调节料液ph至0.7，置于4℃环境下浸泡24h，然后用纯化水清洗数遍，至料液ph为4.8，制得胶原纤维丝；经检测制得的胶原纤维丝的酰胺氮含量为0.32mmol/g(以干品计)；
66.(4)取步骤(3)制得的胶原纤维丝(干物质含量为12.6％)200g，加入1200g纯化水
配成浓度为1.8％的胶原混悬液，在混悬液中分别加入0.7g透明质酸钠、0.7g银耳提取物，用粉碎机混合均匀，再加入14g ppg-26-丁醇聚醚-26，混合均匀后，调节料液ph为4.7，之后倒入冻干模具中，密封好后置于-25℃盐水浴中冷冻3小时，而后取出模具，置于-5℃冰箱中储存20小时；然后将冷冻好的物料在1.5mbar的真空下冷冻干燥，温度程序如下：0℃，5小时；10℃，20小时；20℃，32小时；40℃，5小时；100℃，36小时；制得胶原冻干海绵，厚度为1.5cm；
67.(5)最后，用剖层机将胶原冻干海绵切割成0.9mm厚度的薄片，即得胶原面膜纸。
68.测试例：
69.一、实施例1制得胶原纤维丝对抗衰、屏障损伤修复功效评价
70.1.1抗衰功效
71.方法：(1)细胞接种：按1.8e5个/孔的接种密度接种成纤维细胞至6孔板，培养箱37、5％co2中孵育过夜。
72.(2)配液：以无血清培养基作为空白对照，配制0.5mg/ml胶原混悬液，作为受试物工作液。
73.(3)给药：待6孔板中细胞铺板率达到40％～50％时，进行分组给药，每孔给药量为2ml，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％co2)中孵育培养24h。
74.(4)收样：2ml/孔pbs清洗两次，每孔加入1ml rnaiso plus，吹打裂解细胞后收样。
75.(5)基因检测：依据试剂盒说明书，开展rna提取、反转录及荧光定量pcr检测，采用2
‑△△
ct
方法进行结果计算。
76.结果显示：与空白对照组(bc)相比，实施例1条件下制备得到的胶原纤维丝在0.5mg/ml的浓度下，对成纤维细胞内基因collagen i、collagen iv和collagenⅶ的表达量具有明显的提升作用(p《0.01)。说明实施例1条件下制备得到的胶原纤维丝具有一定的抗衰功效。
77.1.2屏障损伤修复功效
78.方法：(1)、样品制备：
79.i.0.4％sls母液配置：称取0.0080sls溶于2ml pbs溶液中，0.22μm过滤，配制成0.4％sls母液，备用。
80.ii.0.2％sls工作液配置：吸取0.5ml 0.4％sls溶液，加入0.5ml pbs配制成0.2％sls工作液。
81.iii.阳性对照组(wy14643)工作液配置：称取10mg wy14643粉末溶于1ml dmso中，配制成30mm wy14643母液；将8.3μl的wy14643母液(30mm)加入到5ml模型培养液中，配制成50μm的工作液，备用。
82.iv.样品配置：称取25mg的胶原纤维丝，放入5ml的pbs中，配成5mg/ml的胶原混悬液，备用。吸取样品母液500μl加入500μl 0.4％sls母液，混匀备用。
83.(2)、给药操作：
84.i.将模型转移到6孔板中(提前添加0.9ml模型培养液)，在6孔板上标注测试组编号。
85.ii.取配置好的不同组工作液25μl加于模型表面，阴性对照组和阳性对照组表面添加0.2％的sls溶液，样品组添加相应浓度的工作液，用镊子夹取尼龙膜覆盖在每个模型
表面，使样品均匀分布于模型表面，置于co2培养箱(37℃、5％co2、95％rh)中孵育24h。
86.iii.孵育结束后，用装有无菌pbs溶液的洗瓶清洗模型表面残留的受试物，用无菌棉签轻轻拭去模型内、外残留液体。
87.(3)、组织形态检测：取用于组织形态检测的模型用4％的多聚甲醛进行固定处理，固定24h后，将模型环切取下，进行h&e染色，显微镜下拍照观察，采集图片并分析。
88.(4)、组织活力检测：
89.i.根据实验分组，取用于组织活力检测的模型开展组织活力检测。
90.ii.mtt孵育：模型清洗结束后，根据模型数量准备24孔板，并做相应标记。每孔加入0.3ml的mtt工作液(1mg/ml)。将装有模型的24孔板放置于培养箱(37℃、5％co2、95％rh)中，孵育3h
±
5min。
91.iii.异丙醇浸提：mtt孵育结束后，pbs清洗模型外表面，并用无菌棉签擦干，转移到新的24孔板中，并标记。在模型内加入2ml异丙醇，用封口膜密封24孔板，在孔板振摇器上震荡2h。
92.iv.酶标仪读数：用200μl移液器枪头刺穿模型，使异丙醇浸提液从模型内流出到24孔板中。丢弃被刺穿的模型，吹打每孔内的异丙醇浸提液3次使其充分混匀。混匀后，从每孔中吸取2份200μl异丙醇浸提液，分别加入96孔板的对应孔中，做好标记。采用异丙醇作为调零孔。酶标仪570nm波长读取吸光度(od)值。
93.v.计算：按以下公式计算各试验分组的相对组织活力：
94.tissue viability(％)＝(给药孔od—调零孔od)/(对照孔od—调零孔od)
95.图5为实施例1制得胶原纤维丝对模型的组织形态改善检测结果，图6为实施例1制得胶原纤维丝对模型的组织活力改善检测结果；
96.结果显示：在皮肤刺激损伤中，实施例1条件下制备得到的胶原纤维丝可明显提升组织活力，改善组织形态，说明实施例1条件下制备得到的胶原纤维丝具有一定的屏障损伤修复功效。
97.二、面膜纸性能测试
98.2.1实施例1-4所得的胶原面膜纸的部分性能如表1所示。
99.表1
[0100][0101]
2.2使用前后皮肤水分测试(实施例1条件下制备得到的胶原面膜纸)
[0102]
采用皮肤水分测试仪(mdd4-corneometer cm825)进行皮肤水分含量测试。皮肤水分的测试原理是基于水(81)和其它物质的介电常数(《7)变化相当大，按照含水量的不同，适当形状的测量用电容器会随着皮肤的电容量的变化而变化，而皮肤的电容量又是在测量的范围内，这样就可以测量出皮肤的水分含量。
[0103]
受试人数：33人，男9名，女24名，年龄20-46岁(34.6
±
8.2)岁。
[0104]
试用部位：面部。
[0105]
使用方法：洁面后，取出胶原面膜纸，敷于面部，喷涂20-25ml纯净水使面膜纸完全浸润，静享15～20分钟后取下即可。每周使用3次。
[0106]
观察时间点：使用产品前(d0)、使用产品后2天(d2)、使用产品后4天(d4)、使用产品后7天(d7)、使用产品后14天(d14)、使用产品后21天(d21)、使用产品后28天(d28)。
[0107]
测试条件：受试者处于20℃、40％相对湿度环境下，进行皮肤水分含量(％)测试。检测结果如下表2所示：
[0108]
表2
[0109][0110]
从水分测量数据来看，实施例1条件下制备得到的胶原面膜纸，对试用者皮肤水分含量的提升具有显著的作用，说明产品具有良好的补水保湿的功效。
[0111]
2.3皮肤状态测试(实施例1条件下制备得到的胶原面膜纸)
[0112]
通过消费者问卷调查方式，跟踪受试者在日常情况下使用产品28天后产品在提升
皮肤水润度、皮肤平滑度、皮肤紧致度、改善皮肤泛红等方面的功效。
[0113]
受试人数：33人，男9名，女24名，年龄20-46岁(34.6
±
8.2)岁。
[0114]
试用部位：面部。
[0115]
使用方法：洁面后，取出胶原面膜纸，敷于面部，喷涂20-25ml纯净水使面膜纸完全浸润，静享15～20分钟后取下即可。每周使用3次。
[0116]
观察时间点：使用产品后7天(d7)、使用产品后14天(d14)、使用产品后28天(d28)。结果如下表3、4、5所示：
[0117]
表3受试者自评结果统计表(使用产品后7天)
[0118][0119][0120]
注：1、评分标准：“非常满意”为5分；“满意”为4分；“一般”为3分；“不满意”为2分；“非常不满意”为1分。2、评分≥4分的受试者占比即为受试者满意度(有效率)。
[0121]
使用产品7天后，94％的受试者感觉产品可以提升皮肤水润度；91％的受试者感觉产品可以提升皮肤平滑度；91％的受试者感觉产品保湿效果良好；88％的受试者感觉产品可以提升皮肤紧致度；91％的受试者感觉产品可以改善皮肤泛红；94％的受试者感觉产品温和无刺激；100％的受试者感觉产品使用期间无不良反应。
[0122]
表4受试者自评结果统计表(使用产品后14天)
[0123][0124]
注：1、评分标准：“非常满意”为5分；“满意”为4分；“一般”为3分；“不满意”为2分；“非常不满意”为1分。2、评分≥4分的受试者占比即为受试者满意度(有效率)。
[0125]
使用产品14天后，94％的受试者感觉产品可以提升皮肤水润度；94％的受试者感觉产品可以提升皮肤平滑度；91％的受试者感觉产品保湿效果良好；91％的受试者感觉产品可以提升皮肤紧致度；94％的受试者感觉产品可以改善皮肤泛红；97％的受试者感觉产
品温和无刺激；100％的受试者感觉产品使用期间无不良反应。
[0126]
表5受试者自评结果统计表(使用产品后28天)
[0127][0128][0129]
注：1、评分标准：“非常满意”为5分；“满意”为4分；“一般”为3分；“不满意”为2分；“非常不满意”为1分。2、评分≥4分的受试者占比即为受试者满意度(有效率)。
[0130]
使用产品28天后，94％的受试者感觉产品可以提升皮肤水润度；94％的受试者感觉产品可以提升皮肤平滑度；94％的受试者感觉产品保湿效果良好；94％的受试者感觉产品可以提升皮肤紧致度；97％的受试者感觉产品可以改善皮肤泛红；100％的受试者感觉产品温和无刺激；100％的受试者感觉产品使用期间无不良反应。
[0131]
从上述数据可以看出，实施例1条件下制备得到的胶原面膜纸具有良好的保湿功效，对提升皮肤的水润度、平滑度、紧致度，改善皮肤泛红均有很好的效果，且产品温和无刺激，使用过程中没有发生不良反应。