一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物及应用的制作方法

1.本发明属于日用化学品技术领域，涉及一种组合物及其应用，具体涉及一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物及应用。


背景技术：

2.在如今这个快节奏的生活下，人们压力大、熬夜已是一种常态，在生活与工作中，作息不规律、睡眠不足会导致眼部皮肤血管血流速度过于缓慢形成滞流；组织供氧不足，血管中代谢废物积累过多，造成眼部色素沉着形成黑眼圈，长期熬夜还会造成下眼睑的皮肤松弛，形成眼袋。
3.黑眼圈主要分为两种：一种是青色黑眼圈，主要是由熬夜、衰老、眼部疲劳等造成眼部皮肤红细胞供氧不足，静脉中代谢废物代谢缓慢，低氧含量的静脉血液滞留眼部造成的。另一种是茶色黑眼圈，主要是由于黑色素生成及代谢不全造成的眼部色素沉着。眼袋的临床表现为下睑皮肤松弛、堆积，眶内脂肪脱出垂挂呈袋状，外眦位置下移，下睑缘与眼球贴合不紧密，下睑缘弧度增加，下泪点外移溢泪，面部骨骼的老化吸收导致下睑支持结构继发松弛。眼睛周围的皮肤很薄，只有面部皮肤厚度的四分之一，容易受到各种损伤因素的影响造成脂肪堆积形成眼袋。
4.改善黑眼圈的一个主要措施是减少黑色素的生成和转移，黑色素是一种氨基酸衍生物，是酪氨酸或3,4-二羟苯丙氨酸经过一连串化学反应所形成的，其常以聚合的方式存在。黑色素由人表皮基底层中的黑色素细胞合成，当紫外线照射到皮肤上，肌肤就会处于“自我防护”的状态，激活酪氨酸酶的活性，催化酪氨酸或3,4-二羟苯丙氨酸氧化生成黑色素，来保护我们的皮肤细胞。黑色素又经由细胞代谢的层层移动，显现于皮肤表层。黑色素合成过程主要参与的酶有酪氨酸酶、多巴色素互变酶、二羟基吲哚羧酸氧化酶，其中酪氨酸酶属于氧化还原酶，是黑色素合成的主要限速酶，其活性大小决定黑色素形成的数量。酪氨酸酶同时有着单酚酶和二酚酶的特性，即具有加氧酶和氧化酶的功能。在黑色素合成过程中，它能够催化l-酪氨酸羟基化为左旋多巴(单酚酶活性)；第二步氧化左旋多巴生成多巴醌(二酚酶活性)，多巴醌性质不稳定，经过各种复杂的非酶促反应之后，最终产生黑色素。
5.黑色素的转移又与驱动蛋白kinesin有关，驱动蛋白是1985年从鱿鱼的轴质中分离的一种发动机蛋白。驱动蛋白是一个大的复合蛋白，由几个不同的结构域组成，包括两条重链和两条轻链，总分子量为380kda。它有一对球形的头，是产生动力的“电机”；还有一个扇形的尾，是携带蛋白的结合部位。抑制驱动蛋白kinesin可以减少黑色素细胞内转移，起到缓解黑色素堆积的作用。
6.专利文件cn113730330a公开了一种具有祛黑眼圈功效的眼霜组合物及其制备方法。该祛黑眼圈功效眼霜组合物包含的原料组分有：0.5-35.0％的眼部祛黑眼圈功效成分、5.0-30.0％的润肤剂、0.5-30.0％的乳化剂、0.5-20.0％的填充剂、0.1-10.0％的增稠剂、0.3-5.0％的防腐剂、0.01-1.0％的日用香精及去离子水余量。所述眼部祛黑眼圈功效成分
是由浮游生物提取物、蜗牛分泌物滤液、酵母菌溶胞物提取物和齿缘墨角藻提取物混合而成。本发明的祛黑眼圈功效成分能作用到眼部皮肤第二和三层，有效抑制黑色素的生成，并淡化积累色素，具有好的黑眼圈祛除效果，同时也可有效补充营养，维持皮肤弹性和紧致，改善眼周皮肤如肤色暗沉、色斑、眼袋皱纹等不被期望的外观现象。
7.专利文件cn110179715a公开了一种祛黑眼圈组合物、祛黑眼圈眼膜及其制备方法，其中，该祛黑眼圈组合物包括以下组分：野菊花提取物、黄花九轮草提取物、夏枯草提取物和决明籽提取物。上述祛黑眼圈组合物能够有效地祛除黑眼圈，恢复肌肤活力，且其还具有缓解眼部细纹的作用。
8.现有技术中选用多种植物提取物缓解黑眼圈、眼袋问题，但是大多效果单一，因此探索组合物的组成配方，以达到舒缓、润白眼部肌肤、紧致肌肤、恢复肌肤弹性的同时实现安全性高、使用温和、保湿性强的多重效果是非常有意义的。


技术实现要素：

9.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物及应用。
10.为达此目的，本发明采用以下技术方案：
11.第一方面，本发明提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，所述组合物包括欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶。
12.欧百里香提取物气味芬芳，是一种常见的香料，同时因其能够有效抑制驱动蛋白的表达，可以阻断黑色素细胞内的黑色素搬运至细胞外，从而实现美白皮肤的功效。牡丹根提取物含有丹皮酚成分，丹皮酚具有抗炎、抗变态反应、镇静、抑菌的作用，可以作为抗菌剂、抗炎剂添加到化妆品。叶黄素，别名植物黄体素，是一种类胡萝卜素，化学式为c
40h56
o2，在蔬菜、水果、花卉等植物中广泛存在，其化学式中含有两个酮环，是存在于人眼视网膜黄斑区的主要色素，叶黄素安全无害，具有抗氧化，抑制自由基的作用，是重要的天然保健品和食品原料。超氧化物歧化酶是生物体内存在的一种抗氧化金属酶，该酶能够催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢，在维持氧化与抗氧化的平衡中起到至关重要的作用。
13.本发明创造性地将欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶四种成分组合应用于黑眼圈、眼袋的治疗中，主要从3个方面改善黑眼圈和眼袋问题：1、欧百里香发酵提取物抑制驱动蛋白的表达，减少黑色素的细胞转移，进而缓解黑眼圈症状；2、牡丹根提取物具有增强免疫的作用，能够起到细胞损伤修复的功效，进而改善外界不利因素带来的皮肤细胞损伤，促进眼周血管供氧恢复和细胞损伤修复，缓解黑眼圈和眼袋问题；3、叶黄素和超氧化物歧化酶具有消除自由基和抗氧化的作用，能够快速清除细胞代谢产生的损伤性自由基，促进眼周细胞损伤的恢复。欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶四者相辅相成，协同增效，具有更强的抗氧化、淡化黑眼圈、紧致肌肤、改善眼袋问题的功效。
14.优选地，所述组合物以质量份数计包括欧百里香发酵提取物1-10份、牡丹根提取物0.5-3份、叶黄素0.01-0.5份和超氧化物歧化酶0.001-0.05份。
15.所述欧百里香发酵提取物的质量份数可以为1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份或10份等。
16.所述牡丹根提取物的质量份数可以为0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、或3份等。
17.所述叶黄素的质量份数可以为0.01份、0.05份、0.1份、0.2份、0.3份、0.4份或0.5份等。
18.所述超氧化物歧化酶的质量份数可以为0.001份、0.01份、0.02份、0.03份、0.04份或0.05份等。
19.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述
20.优选地，所述组合物还包括小分子活性物质。
21.优选地，所述小分子活性物质包括3-邻-乙基抗坏血酸、腺苷、肌肽、四肽-1或咖啡因中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合包括例如3-邻-乙基抗坏血酸和腺苷的组合、腺苷和肌肽的组合或肌肽和四肽-1的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
22.优选地，所述小分子活性物质以质量份数计包括3-邻-乙基抗坏血酸1-5份、腺苷0.5-5份、肌肽0.5-5份、四肽-1 0.001-0.05份或咖啡因0.1-1份中的任意一种或至少两种的组合。
23.所述3-邻-乙基抗坏血酸的质量份数可以为1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份或5份等。
24.所述腺苷的质量份数可以为0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份或5份等。
25.所述肌肽的质量份数可以为0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份或5份等。
26.所述四肽-1的质量份数可以为0.001份、0.01份、0.02份、0.03份、0.04份或0.05份等。
27.所述咖啡因的质量份数可以为0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份或1份等。
28.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
29.3-邻-乙基抗坏血酸能够抑制酪氨酸酶的活性，抑制黑色素的产生，达到祛斑美白的功效。且3-邻-乙基抗坏血酸的渗透性好，稳定性高，其既有亲水性，又具亲油性，易通过角质层进入真皮层被皮肤吸收。
30.腺苷是由腺嘌呤的n-9与d-核糖的c-1通过β糖苷键连接而成的化合物，化学式为c
10h13
n5o4，其磷酸酯为腺苷酸。腺苷是一种具有良好的抗皱功效的化妆品材料。
31.肌肽又称β-丙氨酰-l-组氨酸，是由β-丙氨酸和l-组氨酸两种氨基酸组成的二肽，结晶状固体。肌肉和脑部的组织含有很高浓度的肌肽。肌肽具有很强的抗氧化能力，能够清除氧化应激过程中细胞膜的脂肪酸过度氧化形成的活性氧自由基(ros)和α-β不饱和醛。
32.四肽-1是一种小分子寡肽，其与皮肤的相容性好，易吸收，具有抗炎、抗氧化的作用、可去除由于肌肉收缩而产生的皱纹，还具有抑制皮肤老化，改善皮肤的弹性和紧实度，滋润和光滑皮肤的功效。
33.咖啡因的分子式为c8h
10
o2n4，是一种具有三个甲基的白色结晶型黄嘌呤生物碱，难溶于冷水，易溶于热水。咖啡因具有作为中枢神经系统兴奋剂、强心剂、利尿剂等的药理活性，而且对分解脂肪，特别是对分解脂肪团有效。具体地，咖啡因可以通过抑制核苷酸磷酸
二酯酶的活性来提高camp量，从而可以通过增强三酰甘油脂肪酶的活性来促进脂肪分解，用于眼周皮肤，可以减少眼袋脂肪的堆积，改善眼袋问题。
34.本发明所述组合物中添加小分子活性物质，可以进一步地，在促进欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶四种活性成分吸收、增强组合物抗氧化性、增强脂肪分解等多个方面增强改善黑眼圈和眼袋问题的效果。
35.优选地，所述组合物还包括小球藻提取物、金缕梅提取物或二裂酵母发酵产物溶胞物中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合包括例如小球藻提取物和金缕梅提取物的组合、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物的组合或小球藻提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
36.进一步优选地，所述组合物还包括小球藻提取物、金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物的组合。
37.小球藻提取物含有多种细胞活性物质，构成了其特有的细胞再生因子，在小球藻中的活性成分被皮肤吸收后，受损细胞及dna损伤修复能力显著提升。
38.金缕梅提取物含有鞣质及挥发性油脂。鞣质又称丹宁或鞣酸，是植物中一类分子量较大的复杂多酚类化合物，鞣质具有较强的收敛性，具有抗菌、调节毛孔皮脂分泌、促进血液循环并舒缓肌肤的作用。
39.二裂酵母发酵产物溶胞物中含有丰富的氨基酸、多肽、矿物质以及各种维生素，具有维持皮肤的水油平衡，修复皮肤损伤的作用。
40.本发明所述组合物中进一步地添加小球藻提取物、金缕梅提取物或二裂酵母发酵产物溶胞物中的任意一种或至少两种的组合，可以提高组合物的皮肤损伤修复和抗菌等方面的功效，进而提高淡化黑眼圈、紧致皮肤、收敛眼袋的效果。当进一步选择向组合物中添加小球藻提取物、金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物的组合时，所述组合物对黑眼圈、眼袋问题的改善效果更强。
41.优选地，所述组合物以质量份数计还包括小球藻提取物0.5-5份、金缕梅提取物0.5-5份、二裂酵母发酵产物溶胞物0.5-10份。
42.所述小球藻提取物的质量份数可以为0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份或5份等。
43.所述金缕梅提取物的质量份数可以为0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份或5份等。
44.所述二裂酵母发酵产物溶胞物的质量份数可以为0.5份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份或10份等。
45.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
46.第二方面，本发明提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂，所述制剂的制备原料包括变形囊泡和变形囊泡中包裹的如第一方面所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物。
47.优选地，所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂的剂型包括乳液、精华、乳膏剂、膏霜剂、凝胶、喷剂或液体敷料。
48.本发明所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂含有如第一方面所述的组合物，具有抗氧化、淡化黑眼圈、紧致肌肤、改善眼袋问题的功效，且可以根据实际
需求，添加不同的辅料更换不同的剂型。
49.优选地，所述制剂的制备原料还包括牛油果油、棕榈酸乙基己酯或环五聚二甲基硅氧烷中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合包括例如牛油果油和棕榈酸乙基己酯的组合、棕榈酸乙基己酯和环五聚二甲基硅氧烷的组合或牛油果油和环五聚二甲基硅氧烷的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
50.优选地，所述变形囊泡的制备原料包括聚甘油酯类表面活性剂、山梨坦酯类表面活性剂、鲸蜡醇磷酸酯、和厚朴酚和木兰醇。
51.本发明通过甘油和天然油脂经化学合成法形成双分子层，得到聚甘油酯类；山梨坦酯类表面活性剂会影响双分子层的通透性、包封率和刚性；鲸蜡醇磷酸酯有利于提高双分子层的稳定性；和厚朴酚和木兰醇具有调节双分子层的稳定性、形状、尺寸的性质。在变形囊泡中，双分子层不含磷脂类，仅含有单链表面活性剂，具有最大限度的弹性和可变形性，进而具有最大化的透皮能力。因为变形囊泡是高度亲水性囊泡，将含有囊泡的制剂涂抹于皮肤上时，囊泡包裹活性成分会倾向于穿透皮肤屏障，移动至富含水分的深层，达到良好的渗透效果。
52.优选地，所述变形囊泡的制备原料按重量份数计包括聚甘油酯类表面活性剂4-10份、山梨坦酯类表面活性剂2-5份、鲸蜡醇磷酸酯1-3份、和厚朴酚0.1-2份和木兰醇1-3份。
53.所述聚甘油酯类表面活性剂的质量份数可以为4份、5份、6份、7份、8份、9份或10份等。
54.所述山梨坦酯类表面活性剂的质量份数可以为2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份或5份等。
55.所述鲸蜡醇磷酸酯的质量份数可以为1份、1.5份、2份、2.5份或3份等。
56.所述和厚朴酚的质量份数可以为0.1份、0.5份、1份、1.2份、1.4份、1.6份、1.8份或2份等。
57.所述木兰醇的质量份数可以为1份、1.2份、1.4份、1.6份、1.8份、2份、2.2份、2.4份、2.6份、2.8份或3份等。
58.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
59.第三方面，本发明提供如第二方面所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂的制备方法，所述制备方法包括：
60.(1)变形囊泡的制备原料混合，纳米化处理，制得变形囊泡；
61.(2)步骤(1)制得的变形囊泡与如第一方面所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物混合，纳米化处理，制得包裹有如第一方面所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物的变形囊泡。
62.本发明提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂的制备方法，所述制备方法操作简便，适宜工业放大。
63.优选地，步骤(1)中所述纳米化处理包括高压高速微射流处理。
64.优选地，步骤(2)中所述纳米化处理包括高压高速微射流处理。
65.优选地，所述制备方法还包括步骤(2)中所述如第一方面所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物的制备方法；
66.优选地，所述步骤(2)中所述如第一方面所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈
和眼袋功效的组合物的制备方法包括欧百里香发酵提取物的制备方法；
67.优选地，所述欧百里香发酵提取物的制备方法包括欧百里香粉碎与培养基混匀，接种嗜热菌，发酵培养30-60h，收集发酵液，超声破壁处理，离心，取下层溶胞液，灭菌，得欧百里香发酵提取物；
68.所述30-60h中的数值可以选择30h、35h、40h、45h、50h、55h或60h等，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
69.优选地，所述的嗜热菌包括嗜热栖热菌、嗜热链球菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜热乳酸链球菌、嗜热侧孢霉或嗜热链霉菌中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合包括嗜热栖热菌和嗜热链球菌的组合、嗜热链球菌和嗜热脂肪芽孢杆菌的组合、嗜热乳酸链球菌和嗜热侧孢霉的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
70.本领域技术人员公知嗜热栖热菌、嗜热链球菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜热乳酸链球菌、嗜热侧孢霉或嗜热链霉菌属于嗜热菌，其中嗜热栖热菌是一种耐热菌株，细胞内含高耐热taqdna聚合酶，能够耐受110℃以上高温，其蛋白组分具有很强的稳定性和自我修复能力。且该菌株含有丰富的营养物质，如蛋白质、核苷酸、维生素、及具有抗氧化和解毒修复成分的谷胱甘肽，具有显著的消炎、美白、抗衰老、修复肌肤、锁水保湿的作用，此外嗜热栖热菌还含有分子马达，分子马达是一种atp合酶分子，在生理条件下的主要功能是合成atp。当皮肤缺少atp时，分子马达逆向旋转生成atp给细胞供能。在细胞出现损伤的情况下，分子马达可作为皮肤能量因子，促进皮肤atp能量的合成，双向调节皮肤机能状态。
71.第四方面，本发明提供如第一方面项所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物或如第二方面所述的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂在制备化妆品中的应用。
72.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
73.1、本发明创造性地将欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶四种成分组合应用于黑眼圈、眼袋问题中，主要从3个方面改善黑眼圈和眼袋问题：欧百里香发酵提取物抑制驱动蛋白的表达，减少黑色素的细胞转移，进而缓解黑眼圈症状；牡丹根提取物具有增强免疫的作用，能够起到细胞损伤修复的功效，进而改善外界不利因素带来的皮肤细胞损伤，促进眼周血管供氧恢复和细胞损伤修复，缓解黑眼圈和眼袋问题；叶黄素和超氧化物歧化酶具有消除自由基和抗氧化的作用，能够快速清除细胞代谢产生的损伤性自由基，促进眼周细胞损伤的恢复。欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶四者相辅相成，协同增效，具有更强的抗氧化、淡化黑眼圈、紧致肌肤、改善眼袋问题的功效。
74.2、本发明所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂含有如第一方面所述的组合物，具有抗氧化、淡化黑眼圈、紧致肌肤、改善眼袋问题的功效，且可以根据实际需求，添加不同的辅料更换不同的剂型。
75.3、本发明还提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂的制备方法，所述制备方法操作简便，适宜工业放大。
具体实施方式
76.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明
了，所述实施例仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
77.下述实施例、对比例、测试例所涉及的牡丹根提取物为购自广州中广生物科技有限公司的型号为20的产品；小球藻提取物为购自陕西亿昊川生物科技有限公司的产品；实施例10中欧百里香提取物为购自广州优科生物科技有限公司的型号为aj-01-22的产品；金缕梅提取物为购自american distilling inc公司的型号为phenoxyethanol的产品；二裂酵母发酵产物溶胞物为购自chemisches laboratorium dr.kurt richter gmbh公司的型号为repair complex clr pf的产品。
78.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
79.制备例1
80.本制备例提供一种欧百里香发酵提取物，其制备方法如下：将欧百里香全株洗净去根，干燥，粉碎，使用120目筛网过筛。按1％的质量比加入嗜热栖热菌培养基(0.4％酵母粉、0.8％聚蛋白胨、0.2％氯化钠、2％琼脂，其余加水补齐，灭菌备用)中，随后将嗜热栖热菌(atcc 27634)按照0.1％接种量至2l嗜热栖热菌培养基中，75℃，150rpm培养12h，制得嗜热栖热菌活化液；
81.将嗜热栖热菌活化液按1％的接菌量接入嗜热栖热菌培养基中，75℃，150rpm培养20h，终止发酵后，收集发酵液，使用昆山小美品牌的型号为cb-26a的超声波破碎仪进行超声破壁处理(工作电压1800w)，3000rpm离心15min，取下层溶胞液，紫外灭菌30min，制得欧百里香发酵提取物。
82.实施例1
83.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，所述组合物按质量份数计包括以下组分：制备例1制得的欧百里香发酵提取物1份、牡丹根提取物1份、叶黄素0.03份和超氧化物歧化酶0.01份、3-邻-乙基抗坏血酸2份、腺苷1份、肌肽1份、四肽-1 0.01份、咖啡因0.2份、小球藻提取物0.8份、金缕梅提取物0.5份、二裂酵母发酵产物溶胞物1份、加水补齐40份，将上述成分搅拌，混匀，制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物。
84.实施例2
85.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，所述组合物按质量份数计包括以下组分：制备例1制得的欧百里香发酵提取物6份、牡丹根提取物0.5份、叶黄素0.2份和超氧化物歧化酶0.05份、3-邻-乙基抗坏血酸1份、腺苷2份、肌肽0.5份、四肽-1 0.001份、咖啡因0.1份、小球藻提取物5份、金缕梅提取物0.8份、二裂酵母发酵产物溶胞物7份、加水补齐40份，将上述成分搅拌，混匀，制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物。
86.实施例3
87.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，所述组合物按质量份数计包括以下组分：制备例1制得的欧百里香发酵提取物3份、牡丹根提取物2份、叶黄素0.01份和超氧化物歧化酶0.04份、3-邻-乙基抗坏血酸1.5份、腺苷0.6份、肌肽2份、四肽-1 0.05份、咖啡因1份、小球藻提取物0.5份、金缕梅提取物1份、二裂酵母发酵
产物溶胞物10份、加水补齐40份，将上述成分搅拌，混匀，制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物。
88.实施例4
89.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物，并将小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物的质量份数按比例分配至欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶，其他均与实施例1相同。
90.实施例5
91.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有小球藻提取物，并将小球藻提取物的质量份数按比例分配至金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物，其他均与实施例1相同。
92.实施例6
93.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有金缕梅提取物，并将金缕梅提取物的质量份数按比例分配至小球藻提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物，其他均与实施例1相同。
94.实施例7
95.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有二裂酵母发酵产物溶胞物，并将二裂酵母发酵产物溶胞物的质量份数按比例分配至小球藻提取物、金缕梅提取物，其他均与实施例1相同。
96.实施例8
97.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物，并将金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物的质量份数全部分配至小球藻提取物，其他均与实施例1相同。
98.实施例9
99.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含小球藻提取物、金缕梅提取物，并将小球藻提取物、金缕梅提取物的质量份数全部分配至二裂酵母发酵产物溶胞物，其他均与实施例1相同。
100.实施例10
101.本实施例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于将制备原料中的制备例1制得的欧百里香发酵提取物替换为购自广州优科生物科技有限公司型号为aj-01-22的欧百里香提取物，其他均与实施例1相同。
102.对比例1
103.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有欧百里香发酵提取物，并将欧百里香发酵提取物的质量份数按比例分配至牡丹根提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶，其他均与实施例1相同。
104.对比例2
105.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实
施例1的区别仅在于制备原料中不含有牡丹根提取物，并将牡丹根提取物的质量份数按比例分配至欧百里香发酵提取物、叶黄素和超氧化物歧化酶，其他均与实施例1相同。
106.对比例3
107.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有叶黄素，并将叶黄素的质量份数按比例分配至欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物和超氧化物歧化酶，其他均与实施例1相同。
108.对比例4
109.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有超氧化物歧化酶，并将超氧化物歧化酶的质量份数按比例分配至欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物和叶黄素，其他均与实施例1相同。
110.对比例5
111.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于将制备原料中欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶替换为欧百里香发酵提取物，并将牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶的质量份数全部分配至欧百里香发酵提取物，其他均与实施例1相同。
112.对比例6
113.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于将制备原料中欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶替换为牡丹根提取物，并将欧百里香发酵提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶的质量份数全部分配至牡丹根提取物，其他均与实施例1相同。
114.对比例7
115.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于将制备原料中欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶替换为叶黄素，并将欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、超氧化物歧化酶的质量份数全部分配至叶黄素，其他均与实施例1相同。
116.对比例8
117.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于将制备原料中欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶替换为超氧化物歧化酶，并将欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素的质量份数全部分配至超氧化物歧化酶，其他均与实施例1相同。
118.对比例9
119.本对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，与实施例1的区别仅在于制备原料中不含有欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶，并将欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶的质量份数按比例分配至小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物，其他均与实施例1相同。
120.应用例1
121.本应用例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂，所述制备方法包括如下步骤：
122.(1)将聚甘油酯类表面活性剂6份(野杏仁油聚甘油-6酯类3份、聚甘油-10油酸酯3份)、山梨坦酯类表面活性剂3.8份(山梨坦棕榈酸酯3.8份)、鲸蜡醇磷酸酯2份、和厚朴酚0.2份和木兰醇1份混匀，放入高压纳米微流化器中，设置参数：线性剪切，剪切速度为500m/s，连续剪切5min后加入40份实施例1制备的具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，继续均质3min，制得包裹所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物的变形囊泡。
123.(2)将步骤(1)制得包裹有所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物的变形囊泡20份、牛油果油70份、棕榈酸乙基己酯10份混合均匀，制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂。
124.应用例2-8
125.应用例2-8提供7种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂，其制备方法与应用例1的区别仅在于将实施例1制备的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物替换为实施例4-10制备的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，其余均与应用例1相同。
126.应用对比例1-9
127.应用对比例1-9提供9种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂，其制备方法与应用例1的区别仅在于将实施例1制备的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物替换为对比例1-9制备的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物，其余均与应用例1相同。
128.应用对比例10
129.本应用对比例提供一种具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂，其制备方法与应用例1的区别仅在于不含变形囊泡的制备过程，具体的制备方法替换为：将实施例1制备的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物15.1份、牛油果油70份、棕榈酸乙基己酯10份混合均匀，其余均与应用例1相同。
130.测试例1
131.通过测试dpph的清除效率来评估实施例1-10和对比例1-9制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物的抗氧化性能。具体评价方法包括：使用研钵将组合物研磨均匀，0.5g组合物分别加入4ml dpph(100μm，在99wt％乙醇中)溶液中，混合均匀，在暗处孵育60min。然后使用紫外-可见分光光度计测量混合溶液在517nm处的吸光度值(使用仅含dpph的溶液作为对照组)。使用以下等式计算：dpph清除率＝(对照组吸光度-各实施例或对比例组吸光度)/对照组吸光度
×
100％。
132.表1
[0133] dpph清除率(％)实施例175实施例268实施例371实施例454实施例561实施例665
实施例758实施例855实施例948实施例1047对比例133对比例246对比例337对比例443对比例534对比例631对比例737对比例826对比例919
[0134]
由表1数据可知，实施例4、对比例9与实施例1相比不含小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分或不含欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分，其dpph清除率均较实施例1低，表明欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分可以与小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分组合，协同增效，同时含有两部分成分的组合物具有更强的抗氧化作用；
[0135]
对比例1-8的制备原料与实施例1相比分别不含欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分的一种成分或仅含其中的一种成分，其dpph清除率均较实施例1低，表明四种成分相互配合，协同增效，具有优异的清除自由基、抗氧化的作用。
[0136]
测试例2
[0137]
对实施例1和实施例10制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物的atp的含量进行检测，具体检测方式如下：取各实施例制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物1g，加生理盐水10ml溶解；(2)使用atp检测试剂盒(碧云天，型号为s0026)的试剂盒检测atp，在荧光化学发光分析仪上测定5min和10min时的荧光值，根据荧光值的大小比较实施例1和实施例10中的atp含量的高低。
[0138]
表2
[0139] 5min荧光值10min荧光值实施例1484833763766实施例10113242107861
[0140]
由表2可知，荧光值越高，atp含量越高，实施例10使用的欧百里香提取物是使用市售的欧百里香提取物，与实施例1相比，其5min和10min时atp含量均较低，且实施例1 10min时的atp含量高于5min时的atp含量，表明使用嗜热菌发酵提取制得的欧百里香发酵提取物具有更多的分子马达和atp，进一步地，更多的分子马达可作为皮肤能量因子，促进皮肤atp能量的合成，双向调节皮肤机能状态。
[0141]
测试例3
[0142]
对应用例和应用对比例制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的
制剂的祛除黑色素的性能进行评价，具体方法为：(1)将340条斑马鱼随机分配至17组，每组对应一个应用例或应用对比例，每组20条。(2)将1g制剂溶于10ml生理盐水中，将斑马鱼放入含有制剂的生理盐水，孵育15min后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件lightroom分析斑马鱼头部的黑色素信号强度。(3)将斑马鱼加入5倍体积的pbs溶液，使用匀浆器匀浆处理，随后检测酪氨酸酶活性。(4)酪氨酸活性检测方法：取0.5g匀浆，4℃，12000rpm离心15min，取上清液待用。以牛血清白蛋白为标准蛋白，用考马斯亮蓝法测定上清液蛋白质含量。以每孔含有100μg蛋白质的上清液转移到96孔板，每孔再加入100μl 1mm l多巴胺溶液和100μl pbs溶液，37℃水浴避光反应1h，490nm测吸光值a490，应用例1的黑色素信号强度与酪氨酸酶活性设定为100％，其它组黑色素信号强度、酪氨酸酶活性以应用例1的黑色素信号强度、酪氨酸酶的相对百分率来表示。通过皮肤黑色素信号强度、酪氨酸酶活性的相对百分率反映供试品的祛除黑色素的效果。
[0143]
表3
[0144][0145][0146]
由表3数据可知，应用例2和应用对比例9中使用的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物分别来源于实施例4和对比例9，实施例4、对比例9与实施例1相比不含小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分或不含欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分，其黑色素信号强度相对百
分率均较应用例1高，酪氨酸酶活性相对百分率高于100％，其祛除黑色素，抑制黑色素生成的效果差，表明欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分可以与小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分进行组合，协同增效，同时含有两部分成分的制剂具有更强的祛除机体黑色素的效果。
[0147]
应用例3-7的制备原料中应用的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物分别来源于实施例5-9，实施例5-9的制备原料与实施例1相比分别缺少小球藻提取物、金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物中的一种或仅含三种成分中的一种，制得的制剂产品与应用例1相比黑色素信号强度相对百分率均较应用例1高，酪氨酸酶活性相对百分率高于100％，其降低黑色素含量的效果差，表明小球藻提取物、金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分在减少黑色素的生成方面协同增效，具有更好的改善效果。
[0148]
应用对比例1-8中使用的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物来源于对比例1-8，对比例1-8中使用的制备原料与实施例1相比分别缺少欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分的一种成分或仅含其中的一种成分，黑色素信号强度相对百分率均高于100％，酪氨酸酶活性相对百分率高于100％，其祛除黑色素，抑制黑色素生成的效果差，表明欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分组合使用，协同增效，具有更强的减少斑马鱼体内黑色素的效果。
[0149]
应用对比例10制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂与应用例1相比不含变形囊泡，，其黑色素信号强度相对百分率均较应用例1高，酪氨酸酶活性相对百分率高于100％，其祛除黑色素，抑制黑色素生成的效果差，表明变形囊泡可以促进组合物渗透进入皮肤，促进组合物抑制黑色素生成、加快黑色素降解的作用。
[0150]
测试例4
[0151]
对应用例和应用对比例制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂进行黑眼圈、眼袋治疗效果的评价，具体评价方法为：(1)选择180名志愿者，志愿者选择20-45岁的健康女性，分为18组，每组各为10人，组内使用同种配方产品，一组对应一个应用例或应用对比例；(2)通过皮肤颜色测定仪cl400检测皮肤黑色素值，通过primos面部图像采集，对眼袋体积进行分析。(3)志愿者每日使用产品两次，将2ml产品涂抹至眼周皮肤，涂抹后按揉30s，涂抹均匀，涂抹范围为直径4ml的圆形区域，使用10天，分别记录每位志愿者第0天和第10天的眼周皮肤黑色素值和眼袋体积，计算各应用例或应用对比例使用情况的比值的平均值，其中比值为第10天对应的眼周皮肤黑色素值、眼袋体积除以第0天对应的眼周皮肤黑色素值、眼袋体积。
[0152]
表4
[0153] 皮肤黑色素值比值眼袋体积比值应用例10.210.36应用例20.400.54应用例30.290.32应用例40.370.36应用例50.300.38应用例60.350.41应用例70.460.59
应用例80.490.53应用对比例10.720.63应用对比例20.630.62应用对比例30.520.59应用对比例40.590.63应用对比例50.750.71应用对比例60.830.74应用对比例70.780.72应用对比例80.870.91应用对比例90.940.89应用对比例100.820.81
[0154]
由表4数据可知，应用例2和应用对比例9中使用的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物分别来源于实施例4和对比例9，实施例4、对比例9与实施例1相比不含小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分或不含欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分，其皮肤黑色素值比值、眼袋体积比值均较应用例1高，其改善黑眼圈、眼袋问题的效果差，表明欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分可以与小球藻提取物、金缕梅提取物和二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分进行组合，协同增效，同时含有两部分成分的制剂具有更强的淡化黑眼圈，改善眼袋的效果。
[0155]
应用例3-7的制备原料中应用的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物分别来源于实施例5-9，实施例5-9的制备原料与实施例1相比分别缺少小球藻提取物、金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物中的一种或仅含三种成分中的一种，制得的制剂产品与应用例1相比皮肤黑色素值比值、眼袋体积比值高，表明小球藻提取物、金缕梅提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物三种成分在淡化黑眼圈、减轻眼袋问题等方面协同增效，具有更好的改善效果。
[0156]
应用例8制备原料中使用市售的欧百里香提取物，其皮肤黑色素值比值、眼袋体积比值均较应用例1高，表明欧百里香经过嗜热菌发酵后具有更好的祛除黑色素、缓解眼袋的作用。
[0157]
应用对比例1-8中使用的所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的组合物来源于对比例1-8，对比例1-8中使用的制备原料与实施例1相比分别缺少欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分的一种成分或仅含其中的一种成分，其皮肤黑色素值比值、眼袋体积比值均较应用例1高，表明使用10天后，应用对比例1-8的改善黑眼圈，修复眼袋问题的效果较应用例1差，表明欧百里香发酵提取物、牡丹根提取物、叶黄素、超氧化物歧化酶四种成分组合使用，协同增效，具有更强的修复黑眼圈、眼袋问题的效果。
[0158]
应用对比例10制得所述制得具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂与应用例1相比不含变形囊泡，其皮肤黑色素值比值、眼袋体积比值高于应用例1，表明变形囊泡可以促进组合物渗透进入皮肤，起到更强的黑眼圈、眼袋修复作用。
[0159]
测试例5
[0160]
对应用例和应用对比例制得所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂进行安全性评价，具体评价方法为化妆品-眼刺激性测试鸡胚绒毛尿囊膜试验(t/shrh 011-2018)，具体评价过程：(1)选取白莱杭鸡等品种的受精鸡胚，孵化至第8日用照蛋器照蛋检查，弃未受精、无活性的鸡胚，选取血管发育良好的鸡胚，在蛋壳表面标记气室位置。第9日开始试验。用牙科弯摄小心剥去气室蛋壳部分，在蛋壳膜表面滴几滴生理盐水使充分润湿，倾出后，用摄子小心除去蛋壳膜，保证暴露的尿囊膜(chorioallantoic membrane，cam)完整不受任何损伤。取0.3ml/0.3g受试物直接作用于cam。尽量涂布开，确保覆盖面积达到至少50％。作用3min后，用生理盐水轻轻冲洗cam表面，在30s内冲洗完成，倾出液体，立即在体视显微镜下观察每种毒性效应变化程度，根据表3所述的评价标准给予评分(es)。判定依据：根据评分(es)判定。es≤4为无刺激，4《es≤12为轻度刺激，12《es《16为中度刺激，es≥16为严重刺激。
[0161]
具体评定依据如下表5所示：
[0162]
表5
[0163][0164][0165]
每组样本对应6只鸡胚，测试结果表明，在受试物浓度为100％下，所有测试样品(应用例1-8和应用对比例1-10提供的肌肤修复组合物)es均≤4，表明本发明所述具有抑制黑色素蛋白、改善黑眼圈和眼袋功效的制剂安全无刺激，具有更高的使用价值。
[0166]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。