本发明涉及用于产生其中结合药物的数目和结合位点受控制的抗体-药物缀合物组合物的方法以及其中结合药物的数目和结合位点受控制的抗体-药物缀合物组合物。
背景技术：
1、可以预期，通过使具有细胞毒性的药物结合至与能够在癌细胞表面上表达的抗原结合的抗体且通过内化于细胞中而形成的抗体-药物缀合物(在下文中也称为“adc”)能够选择性地将药物递送至癌细胞，使得其引起药物在癌细胞内累积并杀死癌细胞(参见非专利文献1至3)。作为此抗体-药物缀合物，通过使作为喜树碱衍生物的依喜替康结合至抗b7-h3抗体等而形成的抗体-药物缀合物是已知的(专利文献1)。
2、抗体具有四个链间二硫化物。这些链间二硫化物比其他二硫化物更容易被溶剂接近，并且容易被还原。因此，此链间二硫化物可以用作抗体-药物缀合物中与药物(或药物接头)的结合位点。抗体中的此链间二硫化物被还原，然后使药物与因此产生的硫醇基结合，由此产生其中2至8个药物与单个抗体分子结合的抗体-药物缀合物。此外，存在已知用于选择性产生具有与重-重链间硫醇结合的四个药物接头的抗体-药物缀合物的方法，其中所述方法包括首先完全还原抗体中的链间二硫化物，将产生的链间硫醇中的一些再氧化以使其返回至二硫化物，然后使药物与剩余的链间硫醇结合(专利文献2)。然而，用于选择性产生具有与重-轻链间硫醇结合的四个药物接头的抗体-药物缀合物的方法还是未知的。
3、引文列表
4、专利文献
5、专利文献1：国际公开号wo2014/057687
6、专利文献2：国际公开号wo2005/084390
7、非专利文献
8、非专利文献1：ducry, l., 等人, bioconjugate chem. (2010) 21, 5-13。
9、非专利文献2：alley, s. c., 等人, current opinion in chemical biology(2010) 14, 529-537。
10、非专利文献3：damle n. k., expert opin. biol. ther. (2004) 4, 1445-1452。
技术实现思路
0、发明概述
1、技术问题
2、其中8个药物与单个抗体分子结合的抗体-药物缀合物在抗肿瘤效果方面是优异的，但在某些情况下在安全性诸如副作用和毒性方面可引起问题。因此，为了减少副作用或毒性，在维持治疗效力的同时，存在使用其中结合药物的平均数小于8的抗体-药物缀合物的情况。其中结合药物的平均数小于8的此抗体-药物缀合物可以通过例如使药物与抗体反应、同时控制每个抗体分子的药物量来获得。反应产物是抗体-药物缀合物组合物，其中结合药物的数目是2、4、6和8。因此，可能存在这样的情况，其中，即使抗体-药物缀合物组合物具有与彼此相同的结合药物的平均数目，如果它们各自具有不同的结合药物的数目的分布，则其疗效和毒性彼此不同。也就是说，当其中结合药物的平均数目为4的抗体-药物缀合物组合物中结合药物的数目为0和8的抗体-药物缀合物的含量高时，当与其中结合药物的数目为4的抗体-药物缀合物的含量高的情况相比，其治疗效果可能降低，并且可能表现出强烈的毒性。此外，还可能存在这样的情况，其中，即使抗体-药物缀合物具有与彼此相同的结合药物的数目，其治疗效力和毒性由于药物的结合位点的差异而彼此不同。因此，期望开发用于产生抗体-药物缀合物组合物的方法，其中在抗体-药物缀合物组合物的产生中控制结合药物的数目和结合位点。
3、问题的解决方案
4、作为针对实现上述目的而进行的深入研究的结果，本发明人已发现了操作更简单的用于产生其中结合药物的数目和结合位点受控制的抗体-药物缀合物组合物的方法。也就是说，本发明人已经发现可以通过使用还原剂在缓冲液中在-10℃至10℃的温度下还原抗体且然后使药物接头中间体与获得的具有硫醇基的抗体反应来产生抗体-药物缀合物组合物，其中抗体-药物缀合物(其中结合药物的平均数目是3.5至4.5且四个药物接头与重-轻链间硫醇结合)的含量为50％或更多。此外，本发明人也已经发现，本发明的抗体-药物缀合物组合物具有比通过常规生产方法产生的抗体-药物缀合物组合物(即抗体-药物缀合物组合物，其中抗体-药物缀合物(其中结合药物的平均数目是3.5至4.5且四个药物接接头与重-轻链间硫醇结合)的含量为35%或更少)更优异的安全性，由此完成本发明。
5、具体地，本技术的发明涉及以下(1)至(77)：
6、(1)
7、用于产生抗体-药物缀合物组合物的方法，其包括：
8、(i) 使抗体与还原剂在缓冲液中反应以还原链间二硫化物的步骤；和
9、(ii) 使药物接头中间体与步骤(i)中获得的具有硫醇基的抗体反应的步骤，其中
10、步骤(i)中的反应温度为-10℃至10℃，且
11、产生的抗体-药物缀合物组合物中的结合药物的平均数目是3.5至4.5，并且产生的抗体-药物缀合物组合物中的其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量是50％或更多。
12、(2)
13、根据上述(1)所述的生产方法，其中产生的抗体-药物缀合物组合物中的结合药物的平均数目为4.0至4.1。
14、(3)
15、根据上述(1)或(2)所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至90％的范围内。
16、(4)
17、根据上述(3)所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至80％的范围内。
18、(5)
19、根据上述(4)所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至70％的范围内。
20、(6)
21、根据上述(5)所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至60％的范围内。
22、(7)
23、根据上述(1)至(6)中任一项所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中4个药物接头与重-重链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为5％或更低。
24、(8)
25、根据上述(7)所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中4个药物接头与重-重链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为1％或更低。
26、(9)
27、根据上述(1)至(8)中任一项所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中2个药物接头与重-重链间硫醇结合且2个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为5％或更低。
28、(10)
29、根据上述(1)至(8)中任一项所述的生产方法，其中在产生的抗体-药物缀合物组合物中，其中2个药物接头与重-重链间硫醇结合且2个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为1％或更低。
30、(11)
31、根据上述(1)至(10)中任一项所述的生产方法，其中步骤(i)中的反应温度为-5℃至5℃。
32、(12)
33、根据上述(11)所述的生产方法，其中步骤(i)中的反应温度为-3℃至3℃。
34、(13)
35、根据上述(12)所述的生产方法，其中步骤(i)中的反应温度为0℃至2℃。
36、(14)
37、根据上述(13)所述的生产方法，其中步骤(i)中的反应温度为0℃至1℃。
38、(15)
39、根据上述(1)至(14)中任一项所述的生产方法，其中步骤(ii)中的反应温度为0℃至2℃。
40、(16)
41、根据上述(1)至(15)中任一项所述的生产方法，其中所述还原剂以每个抗体分子2至3摩尔当量的量使用。
42、(17)
43、根据上述(1)至(16)中任一项所述的生产方法，其中所述还原剂为三(2-羧乙基)膦或其盐。
44、(18)
45、根据上述(17)所述的生产方法，其中三(2-羧乙基)膦的盐为三(2-羧乙基)膦盐酸盐。
46、(19)
47、根据上述(1)至(18)中任一项所述的生产方法，其中所述缓冲液为组氨酸缓冲液。
48、(20)
49、根据上述(1)至(19)中任一项所述的生产方法，其中所述缓冲液包含螯合剂。
50、(21)
51、根据上述(20)所述的生产方法，其中所述螯合剂为乙二胺四乙酸。
52、(22)
53、根据上述(1)至(21)中任一项所述的生产方法，其中所述抗体为抗trop2抗体、抗cd98抗体、抗b7-h3抗体或抗her2抗体。
54、(23)
55、根据上述(22)所述的生产方法，其中所述抗体为抗trop2抗体。
56、(24)
57、根据上述(22)所述的生产方法，其中所述抗体为抗cd98抗体。
58、(25)
59、根据上述(22)所述的生产方法，其中所述抗体为抗b7-h3抗体。
60、(26)
61、根据上述(22)所述的生产方法，其中所述抗体为抗her2抗体。
62、(27)
63、根据上述(1)至(26)中任一项所述的生产方法，其中所述药物接头中间体具有n-取代的马来酰亚胺基。
64、(28)
65、根据上述(27)所述的生产方法，其中
66、所述药物接头中间体为
67、[式1]
68、
69、[式2]
70、
71、，或
72、[式3]
73、
74、其中-ggfg-代表由甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸组成的四肽残基。
75、(29)
76、根据上述(28)所述的生产方法，其中
77、所述药物接头中间体为
78、[式4]
79、
80、其中-ggfg-代表由甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸组成的四肽残基。
81、(30)
82、通过根据上述(1)至(29)中任一项所述的生产方法产生的抗体-药物缀合物组合物。
83、(31)
84、抗体-药物缀合物组合物，其中结合药物的平均数目是3.5至4.5且其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量是50％或更多。
85、(32)
86、根据上述(31)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中结合药物的平均数目为4.0至4.1。
87、(33)
88、根据上述(31)或(32)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至90％的范围内。
89、(34)
90、根据上述(33)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至80％的范围内。
91、(35)
92、根据上述(34)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至70％的范围内。
93、(36)
94、根据上述(35)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至60％的范围内。
95、(37)
96、根据上述(31)至(36)中任一项所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-重链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为5％或更低。
97、(38)
98、根据上述(37)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-重链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为1％或更低。
99、(39)
100、根据上述(31)至(38)中任一项所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中2个药物接头与重-重链间硫醇结合且2个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为5％或更低。
101、(40)
102、根据上述(39)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中，其中2个药物接头与重-重链间硫醇结合且2个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为1％或更低。
103、(41)
104、根据上述(31)至(40)中任一项所述的抗体-药物缀合物组合物，其中所述抗体为抗trop2抗体、抗cd98抗体、抗b7-h3抗体或抗her2抗体。
105、(42)
106、根据上述(41)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中所述抗体为抗trop2抗体。
107、(43)
108、根据上述(41)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中所述抗体为抗cd98抗体。
109、(44)
110、根据上述(41)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中所述抗体为抗b7-h3抗体。
111、(45)
112、根据上述(41)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中所述抗体为抗her2抗体。
113、(46)
114、根据上述(31)至(45)中任一项所述的抗体-药物缀合物组合物，其中
115、所述药物接头为
116、[式5]
117、
118、[式6]
119、
120、，或
121、[式7]
122、
123、其中a代表与所述抗体的结合位点，且-ggfg-代表由甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸组成的四肽残基。
124、(47)
125、根据上述(46)所述的抗体-药物缀合物组合物，其中
126、所述药物接头为
127、[式8]
128、
129、其中a代表与所述抗体的结合位点，且-ggfg-代表由甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸组成的四肽残基。
130、(48)
131、包含根据上述(30)至(47)中任一项所述的抗体-药物缀合物组合物的药物组合物。
132、(49)
133、根据上述(48)所述的药物组合物，其用于治疗肿瘤和/或癌症。
134、(50)
135、根据上述(49)所述的药物组合物，其用于治疗肺癌、肾癌、尿路上皮癌、结肠癌、前列腺癌、多形性成胶质细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、宫颈癌、子宫癌、头颈癌、食管癌、胆管癌、甲状腺癌、淋巴瘤、急性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和/或多发性骨髓瘤。
136、(51)
137、用于治疗肿瘤和/或癌症的方法，其包括施用根据上述(30)至(47)中任一项所述的抗体-药物缀合物组合物。
138、(52)
139、根据上述(51)所述的治疗方法，其为用于治疗肺癌、肾癌、尿路上皮癌、结肠癌、前列腺癌、多形性成胶质细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、宫颈癌、子宫癌、头颈癌、食管癌、胆管癌、甲状腺癌、淋巴瘤、急性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和/或多发性骨髓瘤的方法。
140、(53)
141、用于产生具有硫醇基的抗体的方法，其包括使抗体与还原剂在缓冲液中反应以还原链间二硫化物的步骤，其中
142、反应温度为-10℃至10℃，且
143、产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中结合药物的平均数目为3.5至4.5，且其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为50％或更多。
144、(54)
145、根据上述(53)所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中结合药物的平均数目为4.0至4.1。
146、(55)
147、根据上述(53)或(54)所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至90％的范围内。
148、(56)
149、根据上述(55)所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至80％的范围内。
150、(57)
151、根据上述(56)所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至70％的范围内。
152、(58)
153、根据上述(57)所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在50％至60％的范围内。
154、(59)
155、根据上述(53)至(58)中任一项所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-重链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在5％或更少的范围内。
156、(60)
157、根据上述(59)所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中4个药物接头与重-重链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量在1％或更少的范围内。
158、(61)
159、根据上述(53)至(60)中任一项所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中2个药物接头与重-重链间硫醇结合且2个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为5％或更低。
160、(62)
161、根据上述(61)所述的生产方法，其中产生的具有硫醇基的抗体用于产生抗体-药物缀合物组合物，其中，其中2个药物接头与重-重链间硫醇结合且2个药物接头与重-轻链间硫醇结合的抗体-药物缀合物的含量为1％或更低。
162、(63)
163、根据上述(53)至(62)中任一项所述的生产方法，其中所述反应温度为-5℃至5℃。
164、(64)
165、根据上述(63)所述的生产方法，其中所述反应温度为-3℃至3℃。
166、(65)
167、根据上述(64)所述的生产方法，其中所述反应温度为0℃至2℃。
168、(66)
169、根据上述(65)所述的生产方法，其中所述反应温度为0℃至1℃。
170、(67)
171、根据上述(53)至(66)中任一项所述的生产方法，其中所述还原剂以每个抗体分子2至3摩尔当量的量使用。
172、(68)
173、根据上述(53)至(67)中任一项所述的生产方法，其中所述还原剂为三(2-羧乙基)膦或其盐。
174、(69)
175、根据上述(68)所述的生产方法，其中三(2-羧乙基)膦的盐为三(2-羧乙基)膦盐酸盐。
176、(70)
177、根据上述(53)至(69)中任一项所述的生产方法，其中所述缓冲液为组氨酸缓冲液。
178、(71)
179、根据上述(53)至(70)中任一项所述的生产方法，其中所述缓冲液包含螯合剂。
180、(72)
181、根据上述(71)所述的生产方法，其中所述螯合剂为乙二胺四乙酸。
182、(73)
183、根据上述(53)至(72)中任一项所述的生产方法，其中所述抗体为抗trop2抗体、抗cd98抗体、抗b7-h3抗体或抗her2抗体。
184、(74)
185、根据上述(73)所述的生产方法，其中所述抗体为抗trop2抗体。
186、(75)
187、根据上述(73)所述的生产方法，其中所述抗体为抗cd98抗体。
188、(76)
189、根据上述(73)所述的生产方法，其中所述抗体为抗b7-h3抗体。
190、(77)
191、根据上述(73)所述的生产方法，其中所述抗体为抗her2抗体。
192、本发明的有利效果
193、根据本发明，提供了用于产生其中结合药物的数目和结合位点受控制的抗体-药物缀合物组合物的方法以及其中结合药物的数目和结合位点受控制的抗体-药物缀合物组合物。本发明的抗体-药物缀合物组合物在安全性方面是优异的，并且可用作用于治疗肿瘤和/或癌症的药物。另外，由于可以获得其中结合药物的数目和结合位点被控制为恒定的抗体-药物缀合物组合物，其在质量控制方面也是优异的，因此是优选的。