RNAI缀合物及其用途的制作方法

本公开涉及可用于抑制、缓解和/或控制患者癌症的寡核苷酸或与靶向部分连接的寡核苷酸。在某些实施方案中，本公开涉及向有需要的受试者施用治疗有效量的一种或多种rnai寡核苷酸或一种或多种rnai分子的方法，所述rnai寡核苷酸或rnai分子抑制受试者中信号转导与转录激活因子3(“stat3”)的表达。

背景技术：

1、癌症的生长和进展受到许多因素的影响，包括肿瘤微环境(“tme”)，tme含有可以控制、影响或增强肿瘤发展的组分，包括血管、免疫细胞、成纤维细胞、骨髓来源的炎性细胞、信号分子和细胞外基质(yin等人,int j.cancer(2019)144(5):933-46)。尽管各种肿瘤存在异质性，但肿瘤的发展高度依赖于tme的生理状态。尽管肿瘤可能来自多个解剖位置和/或细胞群体，但肿瘤本身将具有许多共同特征，可使用这些共同特征导出针对该肿瘤的治疗方案。对于上皮来源的肿瘤的tme成熟尤其如此。肿瘤细胞的基因改变导致增生、生长失控、对凋亡的抗性以及代谢转向无氧糖酵解(所谓的“warburg效应”)。这些事件在tme内产生低氧、氧化应激和酸中毒，从而触发被改变的细胞或癌细胞周围的细胞外基质(ecm)的调整、来自邻近基质细胞(例如，成纤维细胞)和免疫细胞(淋巴细胞和巨噬细胞)的响应，诱导血管生成，并最终导致转移。tme概况本身还直接影响抗癌疗法的疗效(giraldo等人,br.j.cancer(2019)120:45-53)。

2、目前，化学疗法是全球最主要的癌症疗法，通常联合手术或者联合手术和放射疗法，这取决于肿瘤类型和阶段(abbas等人,an overview of cancer treatmentmodalities/intechopen,2018)。自从发现了几个导致癌变的重要突变(例如，表皮细胞改变(yamaoka等人,int.j.mol.sci.(2017)18(11):2420))以来，这些突变及其代表的蛋白质已经被广泛用作开发更具选择性的药物和药物组合来治疗癌症患者的靶标。尽管这些药物是有效的，但在患者中经常会观察到多药耐药性(mdr)，这常常导致肿瘤复发、治疗选择受限和患者生活质量低下。另外，癌症研究常常集中在肿瘤细胞上，尽管已经证明tme及其中的“正常”或非癌细胞的作用在肿瘤进展、发展和mdr中发挥关键作用(klemm等人,trendscell biol(2015)25(4):198-213)。

3、在实体瘤发展的晚期，肿瘤微环境高度复杂且异质(runa等人,curr mol biolrep(2017)3(4):218-29)。癌细胞与邻近细胞(包括基质细胞和免疫系统细胞(经常因肿瘤位置的炎症而出现))之间的相互作用导致tme以及细胞组分、细胞外基质和血管化系统的形成发生额外的改变，所有这些都有助于肿瘤的转移(runa等人,curr mol biol rep(2017)3(4):218-29)。在肿瘤生长过程中，癌细胞和tme成分不断适应环境条件，影响肿瘤的整体生长。因此，需要针对促进肿瘤生长的tme不同方面的新疗法。

技术实现思路

1、tme是由血管、免疫细胞、成纤维细胞、信号分子和与肿瘤组织相互作用的细胞外基质组成的复杂系统。肿瘤进展受到癌细胞与其环境的相互作用的影响，最终决定原发肿瘤是被根除、转移还是建立休眠的微转移。tme还可影响治疗反应以及药物或治疗抗性。癌细胞削弱抗肿瘤免疫应答并创建免疫抑制性环境。因此，持续需要开发能够克服这种免疫抑制性环境和/或使癌细胞对抗癌治疗剂敏感的治疗剂，以改善患者的结局。

2、本公开提供了新型核酸、寡核苷酸或其类似物，其包含靶向配体，如疏水性配体，包括但不限于金刚烷基和脂质缀合物，其可用于靶向tme中的免疫细胞以供治疗干预。本公开涉及核酸-配体缀合物和寡核苷酸-配体缀合物及其制备方法和用途，其功能是调节细胞(例如，肿瘤微环境中的免疫细胞)中靶基因的表达。不希望受理论的束缚，亲脂性/疏水性部分如脂肪酸和金刚烷基与这些高度亲水性的核酸/寡核苷酸的附接显著增强血浆蛋白质结合，并因此延长循环半衰期。如本文所证明的，疏水性部分如脂质的并入促进了新型核酸、寡核苷酸或其类似物向肿瘤微环境中的免疫细胞群体中的系统递送。

3、合适的核酸-配体缀合物和寡核苷酸-配体缀合物包括核酸抑制剂分子，如dsrna抑制剂分子、dsrnai抑制剂分子、反义寡核苷酸、mirna、核酶、antagomir、适体和单链rnai抑制剂分子。在一些方面，本公开提供了核酸-脂质缀合物、寡核苷酸-脂质缀合物及其类似物，其可用作细胞内rna水平的调节剂。本公开的核酸抑制剂分子通过多样化的一套机制，例如通过rna干扰(rnai)来调节rna表达。本文提供的核酸-配体缀合物、寡核苷酸-配体缀合物及其类似物的优点是可能具有广泛的药理学活性，与细胞内rna水平的调节一致。另外，本公开提供了使用有效量的本文所述的缀合物通过调节细胞内rna水平来治疗或改善疾病状况的方法。

4、在一些方面，本公开涉及包含一个或多个核酸-配体缀合物单元的寡核苷酸-配体缀合物，其通过rna干扰(rnai)调节肿瘤微环境中的免疫细胞中的靶基因表达。在一些方面，本公开涉及包含一个或多个疏水性部分配体(包括但不限于脂质部分)的寡核苷酸-配体缀合物、所述寡核苷酸-配体缀合物的组合物，及其制备方法和用途，所述寡核苷酸-配体缀合物调节(例如，降低或抑制)肿瘤微环境中的免疫细胞中的靶基因表达。在一些方面，所述寡核苷酸-配体缀合物靶向编码免疫抑制调节物的基因，使得降低或抑制该调节物的表达克服免疫抑制性肿瘤微环境。在一些实施方案中，降低或抑制该调节物的表达诱导或增强抗肿瘤免疫应答。

5、本公开至少部分地基于寡核苷酸-配体缀合物的发现，所述缀合物有效地降低肿瘤微环境内存在的免疫细胞中的靶基因表达。不受理论的束缚，如本文所述，疏水性部分(例如，脂质)促进rnai寡核苷酸-脂质缀合物向肿瘤微环境的免疫细胞如表达脂质运输受体的细胞中的递送和分布，从而提高基因敲减的功效和持久性。因此，本公开提供了通过施用如本文所述的本公开的寡核苷酸配体缀合物及其药学上可接受的组合物来调节肿瘤微环境内免疫细胞中的靶基因(例如，编码免疫抑制调节物的基因)表达从而治疗癌症和/或降低肿瘤生长的方法。本公开进一步提供了使用寡核苷酸配体缀合物制备用于通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞中的靶基因表达来治疗癌症和/或降低肿瘤生长的药物的方法。

6、在一些方面，本公开提供了在有需要的受试者中治疗、改善或预防癌症和/或预防癌症转移的方法。本公开进一步提供了可以限制、控制或消除与癌症和/或免疫抑制性肿瘤微环境相关的关键基因的表达的rnai寡核苷酸分子。此类rnai寡核苷酸分子是多种靶向信号转导与转录激活因子3(stat3)的双链rnai寡核苷酸。在某些实施方案中，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的抑制受试者中的stat3表达或活性的组合物。此类rnai寡核苷酸分子用于治疗患有癌症和相关病状的受试者，并因此可以在治疗上有益于罹患癌症、肉瘤、黑素瘤、淋巴瘤和白血病、前列腺癌、乳腺癌、肝细胞癌(hcc)、结直肠癌和胶质母细胞瘤的受试者。

7、stat3是一种重要的转录因子，对于癌发生的维持和抗癌药物的化学抗性至关重要。stat3存在于细胞质中，并响应于来自细胞因子的刺激而被激活。激活的stat3调节控制细胞存活和增殖的基因的转录，并调节抗凋亡和免疫应答基因的表达。stat3的组成型激活对于不同癌症的增殖和存活是必需的(groner,b.等人,seminars in cell&developmentalbiology,vol.19(4):341-50(2008))。stat-3的激活为癌细胞的存活提供了有利条件。与nf-κb一样，在不同癌症类型中抑制stat-3已被证明可诱导细胞的凋亡和化学增敏(dahora,c.c.等人.cell death discov,vol.5(72)https://doi.org/10.1038/s41420-019-0155-9(2019))。人stat3(nm_001369512.1)的mrna序列如seq id no:85或seq id no:1217(nm_139276.3)所示。

8、因此，在一方面，本公开提供了寡核苷酸-配体缀合物，其包含降低与肿瘤微环境相关的免疫细胞中靶mrna的表达的核苷酸序列和一个或多个靶向配体，其中与一个或多个靶向配体缀合的所述核苷酸序列的一个或多个核苷由式i-a表示：

9、

10、或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文所定义和描述。

11、在另一方面，本公开提供了寡核苷酸-配体缀合物，其包含降低与肿瘤微环境相关的免疫细胞中靶mrna的表达的核苷酸序列和一个或多个靶向配体，其中与一个或多个靶向配体缀合的所述核苷酸序列的一个或多个核苷由式ii-a表示：

12、

13、或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文所定义和描述。

14、在某些实施方案中，所述寡核苷酸-配体缀合物由式ii-b、ii-c、ii-ib或ii-ic表示：

15、

16、

17、或其药学上可接受的盐。

18、在任何前述或相关方面中，r5为饱和或不饱和的直链或支链c1-c50烃链。在一些方面，r5为饱和或不饱和的直链或支链c8-c30烃链。在一些方面，r5为饱和或不饱和的直链或支链c16烃链。在一些方面，r5为饱和或不饱和的直链或支链c18烃链。

19、在任何前述或相关方面中，所述寡核苷酸-配体缀合物包含15至30个核苷酸的反义链和15至40个核苷酸的有义链，其中所述有义链和反义链形成双链体区域，其中所述反义链包含与在肿瘤微环境相关免疫细胞中表达的靶序列互补的互补区域，其中所述有义链在其3’端包含茎-环，该茎-环包含含有4个核苷的四环(tetraloop)，其中与所述靶向配体缀合的所述4个核苷中的一个或多个由式ii-ib表示：

20、

21、其中b选自腺嘌呤和鸟嘌呤核碱基，并且其中r5为烃链。在一些方面，其中所述四环的4个核苷从5’至3’被编号为1-4，并且其中位置1由式ii-ib表示。在其他方面，位置2由式ii-ib表示。在另外其他方面，位置3由式ii-ib表示。在进一步的方面，位置4由式ii-ib表示。

22、在任何前述或相关方面中，所述靶mrna编码免疫抑制的调节物。在一些方面，所述免疫抑制的调节物是检查点抑制剂多肽。在一些方面，所述免疫抑制的调节物是转录因子。

23、在任何前述或相关方面中，所述与肿瘤微环境相关的免疫细胞是髓系细胞。在一些方面，所述与肿瘤微环境相关的免疫细胞是t细胞。在一些方面，所述核苷酸序列降低超过一种与肿瘤微环境相关的免疫细胞中靶mrna的表达。在一些方面，所述免疫细胞是髓系细胞或t细胞。在一些方面，所述髓系细胞是髓系来源的抑制细胞(mdsc)。在一些方面，所述mdsc是粒细胞mdsc(g-mdsc)或单核细胞mdsc(m-mdsc)。在一些方面，所述核苷酸序列降低g-mdsc和m-mdsc中的靶mrna的表达。在一些方面，所述t细胞是cd8+t细胞或treg细胞。

24、在一些方面，所述寡核苷酸-配体缀合物包含单链寡核苷酸。在一些方面，所述寡核苷酸-配体缀合物包含双链寡核苷酸。在一些方面，所述双链寡核苷酸包含形成双链体区域的有义链和反义链，其中所述反义链包含与肿瘤微环境相关免疫细胞中的靶mrna互补的互补区域。

25、在另一方面，本公开提供了能够抑制stat3的表达的rnai寡核苷酸分子。此类分子可以单独使用或与第二治疗剂联合使用，并且可以在剂量上不同。在一些实施方案中，此类rnai寡核苷酸分子由形成双链区域的有义链和反义链组成。

26、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含长度为15至30个核苷酸的反义链和长度为15至40个核苷酸的有义链，其中所述有义链和反义链形成双链体区域，其中所述反义链具有与seq id no:85或seq id no:1217所示的stat3的靶mrna序列互补的互补区域，并且其中所述互补区域的长度为至少15个连续核苷酸，与所述靶序列相差不超过3个核苷酸。在一些方面，所述互补区域与stat3的靶序列完全互补。

27、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含与选自seq id no:89-280的靶序列互补的、长度为至少15个连续核苷酸的互补区域。在一些方面，所述互补区域选自seqid no:89-280。

28、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含：

29、(i)长度为19-30个核苷酸的反义链，其中所述反义链包含含有与stat3 mrna靶序列互补的互补区域的核苷酸序列，其中所述互补区域选自seq id no:89-280，以及

30、(ii)长度为19-50个核苷酸的有义链，其包含与所述反义链互补的互补区域，其中所述反义链和有义链是单独的链，它们形成在所述反义链的3’末端具有1-4个核苷酸的突出端的不对称双链体区域。

31、在一些方面，所述有义链包含至少15个连续核苷酸，其与seq id no:9、37、65或69的核苷酸序列中的任一个相差不超过3个核苷酸，并且所述反义链包含至少15个连续核苷酸，其与seq id no:10、38、66或70的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸。在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

32、(a)分别为seq id no:9和10；

33、(b)分别为seq id no:37和38；

34、(c)分别为seq id no:65和66；以及，

35、(d)分别为seq id no:69或70。

36、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链，该有义链包含选自seqid no:857-946的核苷酸序列。

37、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含反义链，该反义链包含选自seqid no:947-1036的核苷酸序列。

38、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

39、(a)分别为seq id no:861和951；

40、(b)分别为seq id no:857和947；

41、(c)分别为seq id no:858和948；

42、(d)分别为seq id no:859和949；

43、(e)分别为seq id no:860和950；

44、(f)分别为seq id no:862和952；

45、(g)分别为seq id no:863和953；

46、(h)分别为seq id no:864和954；

47、(i)分别为seq id no:865和955；

48、(j)分别为seq id no:866和956；

49、(k)分别为seq id no:867和957；

50、(l)分别为seq id no:868和958；

51、(m)分别为seq id no:869和959；

52、(n)分别为seq id no:870和960；

53、(o)分别为seq id no:871和961；

54、(p)分别为seq id no:872和962；

55、(q)分别为seq id no:873和963；

56、(r)分别为seq id no:874和964；

57、(s)分别为seq id no:875和965；

58、(t)分别为seq id no:876和966；

59、(u)分别为seq id no:877和967；

60、(v)分别为seq id no:878和968；

61、(w)分别为seq id no:879和969；

62、(x)分别为seq id no:880和970；

63、(y)分别为seq id no:881和971；

64、(z)分别为seq id no:882和972；

65、(aa)分别为seq id no:883和973；

66、(bb)分别为seq id no:884和974；

67、(cc)分别为seq id no:885和975；

68、(dd)分别为seq id no:886和976；

69、(ee)分别为seq id no:887和977；

70、(ff)分别为seq id no:888和978；

71、(gg)分别为seq id no:940和1030；

72、(hh)分别为seq id no:896和986；以及

73、(ii)分别为seq id no:920和1010。

74、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

75、(a)分别为seq id no:901和991；

76、(b)分别为seq id no:910和1000；

77、(c)分别为seq id no:899和989；

78、(d)分别为seq id no:896和986；

79、(e)分别为seq id no:892和982；

80、(f)分别为seq id no:890和980；以及

81、(g)分别为seq id no:889和979。

82、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

83、(a)分别为seq id no:940和1030；

84、(b)分别为seq id no:937和1027；以及

85、(c)分别为seq id no:939和1029。

86、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

87、(a)分别为seq id no:915和1005；

88、(b)分别为seq id no:924和1014；

89、(c)分别为seq id no:913和1003；以及

90、(d)分别为seq id no:920和1010。

91、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:862的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:952的核苷酸序列。

92、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:875的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:965的核苷酸序列。

93、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:876的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:966的核苷酸序列。

94、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:920的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:966的核苷酸序列。

95、在任何前述或相关方面中，所述反义链的长度为19至27个核苷酸或者长度为21至27个核苷酸。在一些实施方案中，所述反义链的长度为22个核苷酸。

96、在任何前述或相关方面中，所述有义链的长度为19至40个核苷酸。在一些实施方案中，所述有义链的长度为36个核苷酸。

97、在任何前述或相关方面中，所述寡核苷酸具有长度为至少19个核苷酸的双链体区域。在任何前述或相关方面中，所述寡核苷酸具有长度为至少21个核苷酸的双链体区域。在一些实施方案中，所述双链体区域的长度为20个核苷酸。

98、在一些实施方案中，所述与stat3互补的互补区域的长度为至少19个连续核苷酸。在一些实施方案中，所述与stat3互补的互补区域的长度为至少21个连续核苷酸。

99、在任何前述或相关方面中，所述寡核苷酸在有义链上在其3’端包含如下所示的茎-环：s1-环-s2，其中s1与s2互补，并且其中环在s1与s2之间形成长度为3至5个核苷酸的环。

100、在一些实施方案中，用于降低stat3表达以供治疗或预防癌症和/或预防癌症转移的的寡核苷酸包含反义链和有义链，其中所述反义链的长度为21至27个核苷酸，并且具有与seq id no:85或seq id no:1217所示的stat3的靶mrna序列互补的互补区域，其中所述有义链在其3’端包含如下所示的茎-环：s1-环-s2，其中s1与s2互补，并且其中环在s1与s2之间形成长度为3至5个核苷酸的环，并且其中所述反义链和所述有义链形成长度为至少19个核苷酸的双链体结构。

101、在一些实施方案中，环为四环。在一些实施方案中，环的长度为4个核苷酸。在一些实施方案中，环包含序列gaaa。

102、在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含长度为27个核苷酸的反义链和长度为25个核苷酸的有义链。在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含长度为22个核苷酸的反义链和长度为36个核苷酸的有义链。

103、在任何前述或相关方面中，本公开的寡核苷酸的双链体区域在反义链上包含3’-突出端序列。在一些实施方案中，所述反义链上的3’-突出端序列的长度为2个核苷酸。在一些实施方案中，所述3’-突出端序列是gg。

104、在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含长度各自在21至23个核苷酸范围内的反义链和有义链。在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含长度在19至21个核苷酸范围内的双链体结构。在一些这样的实施方案中，所述寡核苷酸包含长度为一个或多个核苷酸的3’-突出端序列，其中所述3’-突出端序列存在于所述反义链上，所述有义链上，或所述反义链和有义链上。在一些实施方案中，所述3’-突出端序列的长度为2个核苷酸，其中所述3’-突出端序列位于所述反义链上，并且其中所述有义链的长度为21个核苷酸并且所述反义链的长度为23个核苷酸，使得所述有义链和反义链形成长度为21个核苷酸的双链体。

105、在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含至少一个经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述经修饰的核苷酸包含2’-修饰。在一些实施方案中，所述寡核苷酸的所有核苷酸均被修饰，例如2’-修饰。在一些实施方案中，所述有义链的约10-15％、10％、11％、12％、13％、14％或15％的核苷酸包含2’-氟代修饰。在一些实施方案中，所述反义链的约25-35％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的核苷酸包含2’-氟代修饰。在一些实施方案中，所述寡核苷酸的约25-35％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的核苷酸包含2’-氟代修饰。在一些实施方案中，所述有义链包含从5’至3’为位置1-36的36个核苷酸，其中位置8-11包含2’-氟代修饰。在一些实施方案中，所述反义链包含从5’至3’为位置1-22的22个核苷酸，并且其中位置2、3、4、5、7、10和14包含2’-氟代修饰。在一些实施方案中，剩余的核苷酸包含2’-o-甲基修饰。

106、在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含至少一个经修饰的核苷酸间键合，优选硫代磷酸酯键。

107、在一些实施方案中，所述反义链的5’-核苷酸的糖的4’-碳包含磷酸酯类似物，例如氧基甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二酰基膦酸酯。

108、在一些实施方案中，所述寡核苷酸的至少一个核苷酸缀合至一个或多个靶向配体，如碳水化合物、氨基糖、胆固醇、多肽或脂质。

109、在一些实施方案中，所述靶向配体是饱和脂肪酸部分。在一些实施方案中，所述饱和脂肪酸部分的长度从c10至c24不等。在一些实施方案中，所述饱和脂肪酸部分具有c16的长度。在一些实施方案中，所述饱和脂肪酸部分具有c18的长度。在一些实施方案中，所述饱和脂肪酸部分具有c22的长度。

110、在一些实施方案中，所述靶向配体包含n-乙酰基半乳糖胺(galnac)部分。在一些实施方案中，所述(galnac)部分包含单价galnac部分、二价galnac部分、三价galnac部分或四价galnac部分。

111、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

112、(a)分别为seq id no:1041和1131；

113、(b)分别为seq id no:1037和1127；

114、(c)分别为seq id no:1038和1128；

115、(d)分别为seq id no:1039和1129；

116、(e)分别为seq id no:1040和1130；

117、(f)分别为seq id no:1042和1132；

118、(g)分别为seq id no:1043和1133；

119、(h)分别为seq id no:1044和1134；

120、(i)分别为seq id no:1045和1135；

121、(j)分别为seq id no:1046和1136；

122、(k)分别为seq id no:1047和1137；

123、(l)分别为seq id no:1048和1138；

124、(m)分别为seq id no:1049和1139；

125、(n)分别为seq id no:1050和1140；

126、(o)分别为seq id no:1051和1141；

127、(p)分别为seq id no:1052和1142；

128、(q)分别为seq id no:1053和1143；

129、(r)分别为seq id no:1054和1144；

130、(s)分别为seq id no:1055和1145；

131、(t)分别为seq id no:1056和1146；

132、(u)分别为seq id no:1057和1147；

133、(v)分别为seq id no:1058和1148；

134、(w)分别为seq id no:1059和1149；

135、(x)分别为seq id no:1060和1150；

136、(y)分别为seq id no:1061和1151；

137、(z)分别为seq id no:1062和1152；

138、(aa)分别为seq id no:1063和1153；

139、(bb)分别为seq id no:1064和1154；

140、(cc)分别为seq id no:1065和1155；

141、(dd)分别为seq id no:1066和1156；

142、(ee)分别为seq id no:1067和1157；

143、(ff)分别为seq id no:1068和1158；

144、(gg)分别为seq id no:1120和1210；

145、(hh)分别为seq id no:1076和1166；以及

146、(ii)分别为seq id no:1100和1190。

147、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

148、(a)分别为seq id no:1081和1171；

149、(b)分别为seq id no:1090和1180；

150、(c)分别为seq id no:1079和1169；

151、(d)分别为seq id no:1076和1166；

152、(e)分别为seq id no:1072和1162；

153、(f)分别为seq id no:1070和1160；以及

154、(g)分别为seq id no:1069和1159。

155、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

156、(a)分别为seq id no:1120和1210；

157、(b)分别为seq id no:1117和1207；以及

158、(c)分别为seq id no:1119和1209。

159、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链和反义链包含选自以下的核苷酸序列：

160、(a)分别为seq id no:1095和1185；

161、(b)分别为seq id no:1104和1194；

162、(c)分别为seq id no:1093和1183；以及

163、(d)分别为seq id no:1100和1190。

164、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:1042的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:1132的核苷酸序列。

165、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:1055的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:1145的核苷酸序列。

166、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:1056的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:1146的核苷酸序列。

167、在一些方面，用于降低stat3表达的寡核苷酸包含有义链和反义链，该有义链包含seq id no:1100的核苷酸序列并且该反义链包含seq id no:1190的核苷酸序列。

168、在一些实施方案中，所述靶向配体与所述茎环的环的一个或多个核苷酸缀合。在一些实施方案中，所述茎-环的环的至多4个核苷酸各自与单价galnac部分缀合。

169、在一些实施方案中，本公开的寡核苷酸是rnai寡核苷酸。

170、在一些实施方案中，本公开的公开内容是包含一种或多种寡核苷酸和药学上可接受的载体、递送剂或辅料的药物组合物。

171、在一些方面，本公开的寡核苷酸以用于治疗癌症的试剂盒的形式提供。在另一方面，本公开的寡核苷酸以用于治疗与stat3表达相关的疾病、病症或状况的试剂盒的形式提供。在一些实施方案中，所述试剂盒包含本文所述的寡核苷酸，和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括包装插页，该包装插页包含用于向患有癌症的受试者施用所述寡核苷酸的说明书。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括包装插页，该包装插页包含用于向患有与stat3表达相关的疾病、病症或状况的受试者施用所述寡核苷酸的说明书。

172、在一些实施方案中，本公开提供了将寡核苷酸递送至受试者的方法，该方法包括向受试者施用药物组合物。在一些实施方案中，本公开提供了将寡核苷酸递送至与肿瘤微环境相关的免疫细胞的方法，该方法包括施用本文所述的寡核苷酸-配体缀合物。

173、在一些实施方案中，将所述寡核苷酸-配体缀合物递送至肿瘤相关细胞。在一些实施方案中，将所述寡核苷酸-配体缀合物递送至免疫细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是髓系来源的抑制细胞(mdsc)。在一些实施方案中，所述免疫细胞是t细胞。

174、在一些实施方案中，本文所述的寡核苷酸靶向stat3。在一些实施方案中，所述寡核苷酸靶向stat3并且所述sirna还调节pd-li mrna表达。

175、在一些方面，本公开提供了通过施用本公开的寡核苷酸来降低受试者中与肿瘤微环境相关的细胞、细胞群体中靶mrna的表达的方法。在另一方面，本公开提供了通过施用本公开的寡核苷酸来降低细胞、细胞群体或受试者中的stat3表达的方法。在一些实施方案中，降低细胞、细胞群体或受试者中的stat3表达的方法包括以下步骤：使所述细胞或细胞群体接触或向所述受试者施用有效量的本文所述的一种或多种寡核苷酸，或其药物组合物。在一些实施方案中，用于降低stat3表达的方法包括降低stat3和pd-l1mrna的量或水平，stat3和pd-l1蛋白的量或水平，或以上两者。

176、在一些实施方案中，本公开提供了用作治疗剂的药物产品。在一些实施方案中，治疗剂作为单一疗法施用并且是stat3表达的抑制剂。

177、在一些实施方案中，提供了治疗对于抗pd1或抗pd-l1疗法具有抗性的人类受试者的方法，其包括施用本文所述的stat3靶向寡核苷酸中的任一种。对于抗pd1或抗pd-l1具有抗性的受试者包括与非抗性对照相比，从抗pd1或抗pd-l1疗法获得的益处保持减少至少一个标准差超过3个月的受试者。

178、在一些实施方案中，治疗剂作为单一疗法施用并且是stat3和pd-l1表达的抑制剂。在一些实施方案中，本公开提供了包含至少第一治疗剂和第二治疗剂的药物产品，其中第一治疗剂是stat3的抑制剂。在一些实施方案中，在施用第二治疗剂之前或间歇地施用治疗剂。在一些实施方案中，第一治疗剂与第二治疗剂并行施用或同时施用。在一些实施方案中，本公开提供了包含超过两种治疗剂的药物产品，其中第一治疗剂是stat3的抑制剂。

179、在一些方面，本公开提供了治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本公开提供的靶向免疫抑制调节物的本文所述寡核苷酸-配体缀合物，联合一种或多种附加治疗剂或程序。在一些实施方案中，本公开提供了治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本公开提供的靶向stat3的寡核苷酸，联合一种或多种附加治疗剂或程序。在一些方面，所述第二治疗剂或程序选自：化学疗法、靶向抗癌疗法、溶瘤药物、细胞毒性剂、基于免疫的疗法、细胞因子、外科手术、放射程序、共刺激分子的激活剂、抑制性分子的抑制剂、疫苗或细胞免疫疗法、基因疗法，或其组合。

180、在一些实施方案中，本公开提供了治疗患有与stat3表达相关的疾病、病症或状况的受试者的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的寡核苷酸或寡核苷酸-配体缀合物。在一些实施方案中，该寡核苷酸或寡核苷酸-配体缀合物与第二组合物或治疗剂联合施用。在一些实施方案中，该第二组合物或治疗剂靶向tgfb、cxcr2、ccr2、arg1、ptgs2、socs1或pd-l1。

181、在一些实施方案中，所述一种或多种附加治疗剂是pd-1拮抗剂、ctla-4抑制剂、tgfb抑制剂、cxcr2抑制剂、ccr2拮抗剂、arg1抑制剂、ptgs2抑制剂、socs1调节剂或其组合。

182、在一些实施方案中，所述一种或多种附加治疗剂是pd-1拮抗剂。

183、在一些实施方案中，所述pd-1拮抗剂选自：pdr001、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、pidilizumab、medi0680、regn2810、tsr-042、pf-06801591和amp-224。在一些实施方案中，所述pd-1拮抗剂选自：faz053、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)和bms-936559。

184、在一些实施方案中，所述一种或多种附加治疗剂是ctla-4抑制剂。在一些实施方案中，该ctla-4抑制剂是伊匹木单抗(ipilimumab)或曲美木单抗(tremelimumab)。

185、在一些实施方案中，所述一种或多种附加治疗剂是tgfb抑制剂。在一些实施方案中，该tgfb抑制剂是frisolimumab、ly3022859或pf-03446962。

186、在一些实施方案中，所述一种或多种附加治疗剂是arg1抑制剂。在一些实施方案中，该arg1抑制剂是cb-1158。