抗TIGIT抗体、抗CD96抗体和其使用方法与流程

本公开涉及特异性结合至cd96(例如人cd96)和/或tigit(例如人tigit)的多特异性分子、抗tigit抗体和其使用方法。

背景技术：

1、cd96(分化簇96)，也称为tactile(t细胞活化，晚期表达增加)，是免疫球蛋白(ig)超家族中的i型跨膜蛋白。它具有单个ig结构域、i型跨膜结构域、单个胞内免疫受体酪氨酸抑制基序(itim)和单个yxxm磷酸化基序，并且在t细胞和自然杀伤(nk)细胞的表面上表达。

2、cd96被认为在调节免疫细胞(例如nk细胞和t细胞)和肿瘤转移中发挥作用。尤其是，已经表明，cd96功能的阻断以cd8+t细胞依赖性方式抑制若干小鼠肿瘤模型中的原发性肿瘤生长。

3、具有ig和itim结构域的蛋白质t细胞免疫受体(tigit)，又称为vsig9或vstm3，是免疫球蛋白(ig)超家族中的i型跨膜蛋白。它具有单一ig结构域、i型跨膜结构域、单一细胞内免疫受体酪氨酸抑制基序(itim)和单一免疫球蛋白尾酪氨酸(itt)样磷酸化基序并且在活化的cd4阳性/cd25阳性调节性t细胞(treg)、记忆cd45ro阳性t细胞和自然杀手(nk)细胞上表达，但不在初始t细胞上表达。

4、cd155(又称为脊髓灰质炎病毒受体(pvr))在单核细胞和树突状细胞上高水平表达，并且能够通过结合其两种受体cd226和cd96活化效应t细胞和nk细胞，以及削弱treg的活性。tigit结合至cd155，并且经显示，它拮抗cd155与cd226和cd96的相互作用，由此抑制t细胞和nk细胞介导的免疫活性。

5、鉴于人cd96和人tigit在调节免疫反应方面的作用，因此设计成阻断cd96配体相互作用和/或tigit配体相互作用的治疗剂在治疗涉及免疫抑制的疾病方面拥有巨大的前景。

技术实现思路

1、本公开提供了特异性结合至cd96(例如人cd96)和/或tigit(例如人tigit)的多特异性分子以及特异性结合至tigit(例如人tigit)的抗体。还提供了包含这些多特异性分子和抗体的药物组合物、编码这些多特异性分子和抗体的核酸、产生这些多特异性分子和抗体的表达载体和宿主细胞，以及使用这些多特异性分子和抗体治疗受试者的方法。

2、在一个方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含：

3、(a)特异性结合至人cd96的第一抗原结合区，所述第一抗原结合区包含含有cdrcdrh1、cdrh2和cdrh3的第一vh以及含有cdr cdrl1、cdrl2和cdrl3的第一vl，其中

4、(i)所述第一vh包含seq id no:34的vh氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3氨基酸序列；且所述第一vl包含seq id no:35的vl氨基酸序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列，

5、(ii)所述第一vh包含seq id no:36的vh氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3氨基酸序列；且所述第一vl包含seq id no:37的vl氨基酸序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列，或

6、(iii)所述第一vh包含seq id no:38的vh氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3氨基酸序列；且所述第一vl包含seq id no:39的vl氨基酸序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列；以及

7、(b)特异性结合至除人cd96之外的抗原的第二抗原结合区，所述第二抗原结合区包含含有cdr cdrh1、cdrh2和cdrh3的第二vh以及含有cdr cdrl1、cdrl2和cdrl3的第二vl。

8、在某些实施例中，第一抗原结合区的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq id no:10、11、12、13、14和15；16、17、18、19、20和21；或22、23、24、25、26和27的氨基酸序列。

9、在某些实施例中，第二抗原结合区特异性结合至人tigit。在一个具体实施例中，第二vh包含seq id no:40的vh氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3氨基酸序列；且第二vl包含seq id no:41的vl氨基酸序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列。在另一实施例中，第二抗原结合区的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq id no:28、29、30、31、32和33的氨基酸序列。

10、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含：

11、(a)特异性结合至除人tigit之外的抗原的第一抗原结合区，所述第一抗原结合区包含含有cdr cdrh1、cdrh2和cdrh3的第一vh以及含有cdrcdrl1、cdrl2和cdrl3的第一vl；以及

12、(b)特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，所述第二抗原结合区包含第二vh，所述第二vh包含seq id no:40的vh氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3氨基酸序列；以及第二vl，所述第二vl包含seq id no:41的vl氨基酸序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列。

13、在某些实施例中，第二抗原结合区的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq id no:28、29、30、31、32和33的氨基酸序列。

14、在某些实施例中，第一抗原结合区特异性结合至人cd96。在一个具体实施例中，第一vh包含与seq id no:34、36或38的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％一致的氨基酸序列。在另一实施例中，第一vh的氨基酸序列由seq id no:34、36或38的氨基酸序列组成。在另一实施例中，第一vl包含与seq id no:35、37或39的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％一致的氨基酸序列。在另一实施例中，第一vl的氨基酸序列由seq id no:35、37或39的氨基酸序列组成。

15、在某些实施例中，第二vh包含与seq id no:40的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％一致的氨基酸序列。在一个具体实施例中，第二vh的氨基酸序列由seq id no:40的氨基酸序列组成。

16、在某些实施例中，第二vl包含与seq id no:41的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％一致的氨基酸序列。在一个具体实施例中，第二vl的氨基酸序列由seq id no:41的氨基酸序列组成。

17、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含：

18、(a)特异性结合至人cd96的第一抗原结合区，所述抗原结合区包含第一vh和第一vl，其中所述第一vh包含seq id no:34、36或38的氨基酸序列；且/或所述第一vl包含seqid no:35、37或39的氨基酸序列；以及

19、(b)特异性结合至除人cd96之外的抗原的第二抗原结合区，所述第二抗原结合区包含第二vh和第二vl。

20、在某些实施例中，第二抗原结合区特异性结合至人tigit。

21、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含：

22、(a)特异性结合至除人tigit之外的抗原的第一抗原结合区，所述第一抗原结合区包含第一vh和第一vl；以及

23、(b)特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，所述抗原结合区包含第二vh和第二vl，其中所述第二vh包含seq id no:40的氨基酸序列；且/或所述第二vl包含seq id no:41的氨基酸序列。

24、在某些实施例中，第一抗原结合区特异性结合至人cd96。在一个具体实施例中，第一vh包含seq id no:34、36或38的氨基酸序列，并且第一vl包含seq id no:35、37或39的氨基酸序列。在另一个实施例中，第一vh的氨基酸序列由seq id no:34、36或38组成并且第一vl的氨基酸序列由seq id no:35、37或39组成。在另一个实施例中，第一vh和第一vl分别包含seq id no:34和35；36和37；或38和39的氨基酸序列。在另一个实施例中，第一vh和第一vl的氨基酸序列分别由seq id no:34和35；36和37；或38和39的氨基酸序列组成。在另一个实施例中，第二vh包含seq id no:40的氨基酸序列，并且第二vl包含seq id no:41的氨基酸序列。在另一个实施例中，第二vh和第二vl的氨基酸序列分别由seq id no:40和41的氨基酸序列组成。在另一个实施例中，第一vh和第一vl分别包含seq id no:34和35；36和37；或38和39的氨基酸序列；并且第二vh和第二vl分别包含seq id no:40和41的氨基酸序列。在另一个实施例中，第一vh和第一vl的氨基酸序列分别由seq id no:34和35；36和37；或38和39的氨基酸序列组成；并且第二vh和第二vl的氨基酸序列分别由seq id no:40和41的氨基酸序列组成。

25、在某些实施例中，第一和/或第二抗原结合区包含重链恒定区，所述重链恒定区选自由以下组成的组：igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。在一个具体实施例中，重链恒定区是igg1重链恒定区。在另一个实施例中，重链恒定区包含seq id no:49-60中的任一种的氨基酸序列。

26、在某些实施例中，igg1重链恒定区的氨基酸序列包含根据eu编号系统编号的n297a突变。

27、在某些实施例中，第一和/或第二抗原结合区包含重链恒定区，所述重链恒定区是野生型重链恒定区的变体，其中所述变体重链恒定区结合至fcγr的亲和力比野生型重链恒定区结合至fcγr的亲和力高。在一个具体实施例中，fcγr是fcγriib或fcγriiia。

28、在某些实施例中，igg1重链恒定区的氨基酸序列包含根据eu编号系统编号的s267e和l328f突变。

29、在某些实施例中，igg1重链恒定区的氨基酸序列包含根据eu编号系统编号的至少一个选自由s239d、a330l和i332e组成的组的突变。

30、在某些实施例中，第一抗原结合区包含第一重链恒定区，所述第一重链恒定区包含氨基酸位置239处的天冬氨酸；分别位于氨基酸位置239和332处的天冬氨酸和谷氨酸；或分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸；并且

31、第二抗原结合区包含第二重链恒定区，所述第二重链恒定区不包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸，

32、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

33、在一个具体实施例中，第一重链恒定区和第二重链恒定区分别包含seq id no:58和57；59和57；或60和57。

34、在某些实施例中，第一抗原结合区包含第一重链恒定区，所述第一重链恒定区包含分别位于氨基酸位置239和332处的天冬氨酸和谷氨酸；或分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸；并且

35、第二抗原结合区包含含有位于氨基酸位置239处的天冬氨酸的第二重链恒定区，

36、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

37、在一个具体实施例中，第一重链恒定区和第二重链恒定区分别包含seq id no:59和58；或60和58。

38、在某些实施例中，第一重链恒定区包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸；并且

39、第二重链恒定区还包含氨基酸位置332处的谷氨酸，

40、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

41、在一个具体实施例中，第一重链恒定区和第二重链恒定区分别包含seq id no:60和59。

42、在某些实施例中，第一抗原结合区包含第一重链恒定区，所述第一重链恒定区不包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸；并且

43、第二抗原结合区包含第二重链恒定区，所述第二重链恒定区包含氨基酸位置239处的天冬氨酸；分别位于氨基酸位置239和332处的天冬氨酸和谷氨酸；或分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸，

44、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

45、在一个具体实施例中，第一重链恒定区和第二重链恒定区分别包含seq id no:57和60；57和59；或57和58。

46、在某些实施例中，第一抗原结合区包含含有位于氨基酸位置239处的天冬氨酸的第一重链恒定区；并且

47、第二抗原结合区包含第二重链恒定区，所述第二重链恒定区包含分别位于氨基酸位置239和332处的天冬氨酸和谷氨酸；或分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸，

48、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

49、在一个具体实施例中，第一重链恒定区和第二重链恒定区分别包含seq id no:58和60；或58和59。

50、在某些实施例中，第一重链恒定区还包含氨基酸位置332处的谷氨酸；并且

51、第二重链恒定区包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸，

52、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

53、在一个具体实施例中，第一重链恒定区和第二重链恒定区分别包含seq id no:59和60。

54、在某些实施例中，第一抗原结合区包含含有氨基酸位置366处的色氨酸的第一重链恒定区；并且

55、第二抗原结合区包含第二重链恒定区，所述第二重链恒定区包含分别位于氨基酸位置366、368和407处的丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，

56、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

57、在一个具体实施例中，第一重链恒定区包含seq id no:53、54、55或56；并且第二重链恒定区包含seq id no:49、50、51或52。

58、在某些实施例中，第一抗原结合区包含第一重链恒定区，所述第一重链恒定区包含分别位于氨基酸位置366、368和407处的丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸；并且

59、第二抗原结合区包含含有氨基酸位置366处的色氨酸的第二重链恒定区，

60、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

61、在一个具体实施例中，第一重链恒定区包含seq id no:49、50、51或52；并且第二重链恒定区包含seq id no:53、54、55或56。

62、在某些实施例中，第一抗原结合区包含含有seq id no:1、3、5或67-99的氨基酸序列的第一重链。在一个具体实施例中，第一重链由seq id no:1、3、5或67-99的氨基酸序列组成。在某些实施例中，第二抗原结合区包含含有seq id no:7或100-110的氨基酸序列的第二重链。在一个具体实施例中，第二重链的氨基酸序列由seq id no:7或100-110的氨基酸序列组成。

63、在某些实施例中，多特异性分子包含含有seq id no:42、43或44的氨基酸序列的轻链恒定区。在一个具体实施例中，第一抗原结合区包含含有seq id no:2、4或6的氨基酸序列的第一轻链。在另一个实施例中，第一轻链由seq id no:2、4或6的氨基酸序列组成。在一个具体实施例中，第二抗原结合区包含含有seq id no:8或9的氨基酸序列的第二轻链。在另一个实施例中，第二轻链的氨基酸序列由seq id no:8或9的氨基酸序列组成。

64、在另一方面中，本公开提供了一种多特异性分子，其包含：

65、(a)特异性结合至人cd96的第一抗原结合区，所述第一抗原结合区包含含有seqid no:1、3、5或67-99的氨基酸序列的第一重链；和/或含有seq id no:2、4或6的氨基酸序列的第一轻链；以及

66、(b)特异性结合至除人cd96之外的抗原的第二抗原结合区，所述第二抗原结合区包含第二重链和第二轻链。

67、在某些实施例中，第二抗原结合区特异性结合至人tigit。

68、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含：

69、(a)特异性结合至除人tigit之外的抗原的第一抗原结合区，所述第一抗原结合区包含第一重链和第一轻链；以及

70、(b)特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，所述第二抗原结合区包含含有seqid no:7或100-110的氨基酸序列的第二重链；和/或含有seq id no:8或9的氨基酸序列的第二轻链。

71、在某些实施例中，第一抗原结合区特异性结合至人cd96。在一个具体实施例中，第一重链包含seq id no:1、3、5或67-99的氨基酸序列；且/或第一轻链包含seq id no:2、4或6的氨基酸序列。在另一个实施例中，第一重链包含seq id no:1、3、5或67-99的氨基酸序列；并且第一轻链包含seq id no:2、4或6的氨基酸序列。在另一个实施例中，第一重链的氨基酸序列由seq id no:1、3、5或67-99组成；且第一轻链的氨基酸序列由seq id no:2、4或6的氨基酸序列组成。

72、在某些实施例中，第二重链包含seq id no:7或100-110的氨基酸序列；且/或第二轻链包含seq id no:8或9的氨基酸序列。在一个具体实施例中，第二重链包含seq id no:7或100-110的氨基酸序列；并且第二轻链包含seq id no:8或9的氨基酸序列。在另一个实施例中，第二重链的氨基酸序列由seq id no:7组成；且第二轻链的氨基酸序列由seq id no:8或9的氨基酸序列组成。

73、在某些实施例中，第一重链和第一轻链分别包含seq id no:1和2；3和4；或5和6的氨基酸序列；且/或第二重链和第二轻链分别包含seq id no:7和8；或7和9的氨基酸序列。在一个具体实施例中，第一重链和第一轻链分别包含seq id no:1和2；3和4；或5和6的氨基酸序列；并且第二重链和第二轻链分别包含seq id no:7和8；或7和9的氨基酸序列。在另一个实施例中，第一重链和第一轻链的氨基酸序列分别由seq id no:1和2；3和4；或5和6组成；并且第二重链和第二轻链的氨基酸序列分别由seq id no:7和8；或7和9的氨基酸序列组成。

74、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含特异性结合至人cd96的第一抗原结合区和特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，其中：

75、(a)所述第一抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、330、332和366处的天冬氨酸、亮氨酸、谷氨酸和色氨酸；并且

76、(b)所述第二抗原结合区包含分别位于氨基酸位置366、368和407处的丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，但不包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸，

77、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

78、在一些实施例中，第一抗原结合区包含seq id no:73、84、95或56；并且第二抗原结合区包含seq id no:103或49。

79、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含特异性结合至人cd96的第一抗原结合区和特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，其中：

80、(a)所述第一抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、330、332和366处的天冬氨酸、亮氨酸、谷氨酸和色氨酸；并且

81、(b)所述第二抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、366、368和407处的天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，

82、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

83、在某些实施例中，第一抗原结合区包含seq id no:73、84、95或56；并且第二抗原结合区包含seq id no:104或50。

84、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含特异性结合至人cd96的第一抗原结合区和特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，其中：

85、(a)所述第一抗原结合区包含分别位于氨基酸位置366、368和407处的丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，但不包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸；并且

86、(b)所述第二抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、330、332和366处的天冬氨酸、亮氨酸、谷氨酸和色氨酸，

87、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

88、在某些实施例中，第一抗原结合区包含seq id no:67、78、89或49；并且第二抗原结合区包含seq id no:7或56。

89、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含特异性结合至人cd96的第一抗原结合区和特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，其中：

90、(a)所述第一抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、366、368和407处的天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸；并且

91、(b)所述第二抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、330、332和366处的天冬氨酸、亮氨酸、谷氨酸和色氨酸，

92、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

93、在某些实施例中，第一抗原结合区包含seq id no:1、3、5或50；并且第二抗原结合区包含seq id no:7或56。

94、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含特异性结合至人cd96的第一抗原结合区和特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，其中：

95、(a)所述第一抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、332和366处的天冬氨酸、谷氨酸和色氨酸；并且

96、(b)所述第二抗原结合区包含分别位于氨基酸位置366、368和407处的丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，但不包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸，

97、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

98、在某些实施例中，第一抗原结合区包含seq id no:72、83、94或55；并且第二抗原结合区包含seq id no:103或49。

99、在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其包含特异性结合至人cd96的第一抗原结合区和特异性结合至人tigit的第二抗原结合区，其中：

100、(a)所述第一抗原结合区包含分别位于氨基酸位置366、368和407处的丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，但不包含分别位于氨基酸位置239、330和332处的天冬氨酸、亮氨酸和谷氨酸；并且

101、(b)所述第二抗原结合区包含分别位于氨基酸位置239、332和366处的天冬氨酸、谷氨酸和色氨酸，

102、其中所述氨基酸位置根据eu编号系统编号。

103、在某些实施例中，第一抗原结合区包含seq id no:67、78、89或49；并且第二抗原结合区包含seq id no:102或55。

104、在另一方面，本公开提供了一种特异性结合至人tigit的经分离的抗体，所述抗体包含：vh，其包含seq id no:40的vh氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3氨基酸序列；以及vl，其包含seq id no:41的vl氨基酸序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列。在某些实施例中，抗体包含的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3氨基酸序列分别为seq id no:28、29、30、31、32和33。在一个具体实施例中，抗体包含seq id no:40的vh氨基酸序列。在另一个实施例中，vh由seq id no:40的氨基酸序列组成。在另一个实施例中，抗体包含seq idno:41的vl氨基酸序列。在另一实施例中，vl的氨基酸序列由seq id no:41的氨基酸序列组成。

105、在另一方面，本公开提供了特异性结合至人tigit的经分离的抗体，所述抗体包含分别含有seq id no:40和41的氨基酸序列的vh和vl。在某些实施例中，vh和vl分别由seqid no:40和41的氨基酸序列组成。

106、在一些实施例中，抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区选自由igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2组成的组。在一个具体实施例中，抗体包含igg1重链恒定区。在另一个实施例中，抗体包含含有seq id no:57、58、59或60的氨基酸序列的重链恒定区。

107、在某些实施例中，igg1重链恒定区的氨基酸序列包含根据eu编号系统编号的n297a突变。

108、在某些实施例中，所述抗体包含作为野生型重链恒定区的变体的重链恒定区，其中所述变体重链恒定区结合至fcγr的亲和力比所述野生型重链恒定区结合至fcγr的亲和力高。在一个具体实施例中，fcγr是fcγriib或fcγriiia。

109、在某些实施例中，igg1重链恒定区的氨基酸序列包含根据eu编号系统编号的s267e和l328f突变。

110、在某些实施例中，igg1重链恒定区包含至少一个根据eu编号系统编号的选自由s239d、a330l、和i332e突变组成的组的突变。

111、在某些实施例中，抗体包含含有seq id no:7的氨基酸序列的重链。在一个具体实施例中，重链的氨基酸序列由seq id no:7的氨基酸序列组成。

112、在某些实施例中，抗体包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包含seq id no:43或44的氨基酸序列。在某些实施例中，抗体包含轻链，所述轻链包含seq id no:8或9的氨基酸序列。在另一个实施例中，轻链的氨基酸序列由seq id no:8或9的氨基酸序列组成。

113、在另一方面，本公开提供了一种特异性结合至人tigit的经分离的抗体，所述抗体包含含有seq id no:107、108、109或110的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:8或9的氨基酸序列的轻链。在一个具体实施例中，重链的氨基酸序列由seq id no:107、108、109或110的氨基酸序列组成；并且轻链的氨基酸序列由seq id no:8或9的氨基酸序列组成。在另一个实施例中，重链和轻链包含的氨基酸序列分别为seq id no:107和8；107和9；108和8；108和9；109和8；109和9；110和8；或110和9。在另一个实施例中，重链和轻链的氨基酸序列分别由seq id no:107和8；107和9；108和8；108和9；109和8；109和9；110和8；或110和9的氨基酸序列组成。

114、在某些实施例中，所述抗体是多特异性抗体。

115、在某些实施例中，多特异性分子或经分离的抗体与细胞毒性剂、细胞生长抑制剂、毒素、放射性核素或可检测标记缀合。在某些实施例中，多特异性分子或经分离的抗体与抗体缀合。

116、在另一方面，本公开提供了一种经分离的多核苷酸，其编码：

117、(a)本文公开的多特异性分子的vh、vl、重链和/或轻链；

118、(b)本文公开的多特异性分子的第一vh和第一vl；

119、(c)本文公开的多特异性分子的第二vh和第二vl；

120、(d)本文公开的多特异性分子的第一重链和第一轻链；或

121、(e)本文公开的多特异性分子的第二重链和第二轻链。

122、在另一方面，本公开提供了一种经分离的多核苷酸，其编码本文所公开的经分离抗体的vh和/或vl，或重链和/或轻链。

123、在另一方面，本公开提供了一种载体，其包含本文中所公开的多核苷酸。

124、另一方面，本公开提供一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含：

125、(a)本文所公开的多核苷酸；

126、(b)本文所公开的载体；

127、(c)编码本文所公开的第一抗原结合区的vh和vl的第一多核苷酸，和编码本文所公开的第二抗原结合区的vh和vl的第二多核苷酸；

128、(d)第一载体，其包含编码本文公开的第一抗原结合区的vh和vl的第一多核苷酸；和第二载体，其包含编码本文公开的第二抗原结合区的vh和vl的第二多核苷酸；

129、(e)编码本文公开的第一抗原结合区的vh的第一多核苷酸、编码本文公开的第一抗原结合区的vl的第二多核苷酸、编码本文公开的第二抗原结合区的vh的第三多核苷酸和编码本文公开的第二抗原结合区的vl的第四多核苷酸；

130、(f)第一载体，其包含编码本文公开的第一抗原结合区的vh的第一多核苷酸；第二载体，其包含编码本文公开的第一抗原结合区的vl的第二多核苷酸；第三载体，其包含编码本文公开的第二抗原结合区的vh的第三多核苷酸；和第四载体，其包含编码本文公开的第二抗原结合区的vl的第四多核苷酸；

131、(g)编码本文公开的第一抗原结合区的重链和轻链的第一多核苷酸，和编码本文公开的第二抗原结合区的重链和轻链的第二多核苷酸；

132、(d)第一载体，其包含编码本文公开的第一抗原结合区的重链和轻链的第一多核苷酸；和第二载体，其包含编码本文公开的第二抗原结合区的重链和轻链的第二多核苷酸；

133、(i)编码本文公开的第一抗原结合区的重链的第一多核苷酸、编码本文公开的第一抗原结合区的轻链的第二多核苷酸、编码本文公开的第二抗原结合区的重链的第三多核苷酸和编码本文公开的第二抗原结合区的vl的第四多核苷酸；或

134、(j)第一载体，其包含编码本文公开的第一抗原结合区的重链的第一多核苷酸；第二载体，其包含编码本文公开的第一抗原结合区的轻链的第二多核苷酸；第三载体，其包含编码本文公开的第二抗原结合区的重链的第三多核苷酸；和第四载体，其包含编码本文公开的第二抗原结合区的轻链的第四多核苷酸。

135、另一方面，本公开提供一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含：

136、(a)本文所公开的多核苷酸；

137、(b)本文所公开的载体；

138、(c)编码本文公开的经分离的抗体的vh和vl的多核苷酸；

139、(d)第一载体，其包含编码本文公开的经分离抗体的vh和vl的多核苷酸；

140、(e)编码本文公开的经分离抗体的vh的第一多核苷酸，和编码本文公开的经分离抗体的vl的第二多核苷酸；或

141、(f)第一载体，其包含编码本文公开的经分离抗体的vh的第一多核苷酸；和第二载体，其包含编码本文公开的经分离抗体的vl的第二多核苷酸。

142、在另一方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含本文公开的多特异性分子、本文公开的经分离抗体、本文公开的多核苷酸、本文公开的载体或本文公开的宿主细胞；和药学上可接受的载剂或赋形剂。

143、在另一方面，本公开提供了一种产生多特异性分子或经分离抗体的方法，所述方法包括在表达多核苷酸且产生多特异性分子或经分离的抗体的适合条件下培养本文公开的宿主细胞。

144、在另一方面，本公开提供了一种产生多特异性分子的方法，所述方法包括在细胞中表达：

145、(a)编码本文所公开的第一抗原结合区的vh和vl的第一多核苷酸，和编码本文所公开的第二抗原结合区的vh和vl的第二多核苷酸；或

146、(b)编码本文公开的第一抗原结合区的重链和轻链的第一多核苷酸，和编码本文公开的第二抗原结合区的重链和轻链的第二多核苷酸，

147、所述方法在表达所述多核苷酸且产生所述多特异性分子的适合条件下进行。

148、在另一方面，本公开提供了一种产生多特异性分子的方法，所述方法包括在细胞中表达：

149、(a)编码本文公开的第一抗原结合区的vh的第一多核苷酸、编码本文公开的第一抗原结合区的vl的第二多核苷酸、编码本文公开的第二抗原结合的vh的第三多核苷酸和编码本文公开的第二抗原结合区的vl的第四多核苷酸；或

150、(b)编码本文公开的第一抗原结合区的重链的第一多核苷酸、编码本文公开的第一抗原结合区的轻链的第二多核苷酸、编码本文公开的第二抗原结合区的重链的第三多核苷酸和编码本文公开的第二抗原结合区的轻链的第四多核苷酸，

151、所述方法是在表达所述多核苷酸和产生所述多特异性分子的适合条件下进行。

152、在另一方面，本公开提供了一种产生多特异性分子的方法，所述方法包括：

153、(a)在借以产生第一抗原结合区的条件下，在第一细胞中表达编码本文所公开的第一抗原结合区的vh和vl的第一多核苷酸；

154、(b)在借以产生第二抗原结合区的条件下，在第二细胞中表达编码本文所公开的第二抗原结合区的vh和vl的第二多核苷酸；以及

155、(c)使步骤(a)和(b)所产生的所述第一与第二抗原结合区在产生所述多特异性分子的适合条件下接触。

156、在另一方面，本公开提供了一种产生多特异性分子的方法，所述方法包括：

157、(a)在借以产生第一抗原结合区的条件下，在第一细胞中表达编码本文所公开的第一抗原结合区的vh的第一多核苷酸和编码本文所公开的第一抗原结合区的vl的第二多核苷酸；

158、(b)在借以产生第二抗原结合区的条件下，在第二细胞中表达编码本文所公开的第二抗原结合区的vh的第三多核苷酸和编码本文所公开的第二抗原结合区的vl的第四多核苷酸；以及

159、(c)使步骤(a)和(b)所产生的所述第一与第二抗原结合区在产生所述多特异性分子的条件下接触。

160、在另一方面，本公开提供了一种产生多特异性分子的方法，所述方法包括使本文所公开的第一抗原结合区与第二抗原结合区在产生多特异性分子的条件下接触。

161、在另一方面，本公开提供了一种产生经分离的抗体的方法，所述方法包括在细胞中表达：

162、(a)编码本文公开的抗体的vh和vl的多核苷酸；或

163、(b)编码本文所公开的抗体重链和轻链的多核苷酸，

164、所述方法是在表达所述多核苷酸和产生所述抗体的适合条件下进行。

165、在另一方面，本公开提供了一种产生经分离的抗体的方法，所述方法包括在细胞中表达：

166、(a)编码本文所公开的抗体的vh的第一多核苷酸，和编码本文所公开的抗体的vl的第二多核苷酸；或

167、(b)编码本文所公开的抗体的重链的第一多核苷酸，和编码本文所公开的抗体的轻链的第二多核苷酸，

168、所述方法是在表达所述多核苷酸和产生所述抗体的适合条件下进行。

169、在另一方面，本公开提供了一种增强受试者的免疫反应的方法，所述方法包括将有效量的本文所公开的多特异性分子、本文所公开的经分离抗体、本文所公开的多核苷酸、本文所公开的载体、本文所公开的宿主细胞或本文所公开的药物组合物施予所述受试者。

170、在另一方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括将有效量的本文所公开的多特异性分子、本文所公开的经分离抗体、本文所公开的多核苷酸、本文所公开的载体、本文所公开的宿主细胞或本文所公开的药物组合物施予所述受试者。

171、在某些实施例中，多特异性分子、经分离的抗体、多核苷酸、载体、宿主细胞或药物组合物是通过全身、静脉内、皮下、肿瘤内施用，或者递送至肿瘤引流淋巴结。

172、在某些实施例中，所述方法还包括将另外的治疗剂施用给受试者。在一个具体实施例中，所述另外的治疗剂是化疗剂。在一个具体实施例中，所述另外的治疗剂是检查点靶向剂。在另一个实施例中，所述检查点靶向剂选自由以下组成的组：拮抗性抗pd-1抗体、拮抗性抗pd-l1抗体、拮抗性抗pd-l2抗体、拮抗性抗ctla-4抗体、拮抗性抗tim-3抗体、拮抗性抗lag-3抗体、拮抗性抗vista抗体、拮抗性抗tigit抗体、拮抗性抗ceacam1抗体、拮抗性抗cd96抗体、激动性抗gitr抗体和激动性抗ox40抗体。在另一个实施例中，所述另外的治疗剂是抗pd-1抗体，任选地其中所述抗pd-1抗体是帕博利珠单抗(pembrolizumab)或纳武单抗(nivolumab)。在一个具体实施例中，所述另外的治疗剂是吲哚胺-2,3-双加氧酶(ido)抑制剂。在另一个实施例中，所述抑制剂选自由以下组成的组：艾卡哚司他(epacadostat)、f001287、吲哚莫德(indoximod)和nlg919。在某些实施例中，所述另外的治疗剂是疫苗。在另一个实施例中，所述疫苗包含热休克蛋白肽复合物(hsppc)，所述hsppc包含与抗原肽复合的热休克蛋白。在另一个实施例中，所述热休克蛋白是hsc70并且与肿瘤相关抗原肽复合。在另一个实施例中，所述热休克蛋白是gp96蛋白并且与肿瘤相关抗原肽复合，任选地其中所述hsppc来源于从受试者获得的肿瘤。

173、在另一方面，本公开提供一种治疗受试者的感染性疾病的方法，所述方法包括将有效量的本文所公开的多特异性分子、本文所公开的经分离的抗体、本文所公开的多核苷酸、本文所公开的载体、本文所公开的宿主细胞或本文所公开的药物组合物施予所述受试者。