自组装病毒刺突-EABR纳米颗粒

本公开总体涉及免疫医学领域，具体涉及作为疫苗平台的自组装纳米颗粒。相关背景正在进行的covid-19大流行已在全球造成5亿多人感染和600万人死亡，是过去二十年来第三次由β-冠状病毒(β-cov)人畜共患传播引发的疫情。covid-19的病原体是严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(sars-cov-2)，与分别在2002年和2012年爆发的冠状病毒(cov)sars-cov和中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)相关。虽然sars-cov-2的起源仍在调查中，但蝙蝠已被确定为sars-cov和mers-cov的天然宿主，人传播需要灵猫和骆驼等中间宿主。已知多种cov毒株会在其他动物物种中引起疾病，并且少量突变可能足以开启人传播，从而对未来cov爆发构成风险。例如，最近的两份报告记录了通常感染狗的α-cov和已知感染猪的δ-cov的人传播。一旦人畜共患cov毒株蔓延到人，并拥有足够的人宿主(这正是sars-cov-2的情况)，该病毒将继续演变，导致可能对疫苗和治疗产生抗药性的新变体的出现，这是最近发现的一些令人关注的sars-cov-2变体(voc)的主要关注点。需要两种类型的疫苗技术来帮助预防未来的cov大流行并防范新出现的sars-cov-2voc：i)快速反应疫苗，以及ii)通用cov疫苗。一旦检测到特定cov的人传播，就可以立即开发出针对新发现的cov毒株或变体的快速反应疫苗。此类疫苗需要一种能够实现快速、可扩展且适应性强的生产的技术，以确保快速全球分销。在covid-19大流行期间，mrna疫苗已成为开发快速反应疫苗的理想平台。pfizer和moderna生产的mrna疫苗编码sars-cov-2刺突(s)蛋白，其是自然感染期间抗体反应的主要靶标。临床研究表明，mrna疫苗非常有效，其预防了＞90％的有症状的和严重的sars-cov-2感染。然而，临床前研究和临床研究表明，mrna疫苗引发的中和抗体滴度是基于蛋白质纳米颗粒(np)的疫苗引发的滴度的约1/10。这与德尔塔(delta)、奥密克戎(omicron)及其ba.2亚变体等voc的出现有关，其对mrna疫苗引发的抗体的敏感性降低了高达90％。因此，需要开发实现强力的中和抗体反应的快速反应疫苗技术，以防止病毒逃逸，并确保在当前和未来的cov大流行期间提供持久保护。与快速反应疫苗相比，通用cov疫苗的目的是在人传播发生之前就赋予对多种cov毒株及其潜在变体的广泛免疫力。通过引导对cov及其潜在变体中保守的病毒部分的免疫反应，可以实现广泛的免疫。即使通用cov疫苗引发的免疫反应较弱，也可能足以预防未来人畜共患传播事件和/或新变体出现后的严重感染和快速传播。来自八种不同的sars样β-cov毒株的呈现受体结合结构域(rbd)(与宿主受体相互作用进入细胞的s蛋白的部分)的嵌合蛋白np已显示出引发了针对未显示在嵌合np上的β-cov毒株的异源抗体反应。然而，这种策略可能仅限于密切相关的毒株，因为rbd在cov家族中并不是广泛保守的。需要呈现各种cov毒株的完整s蛋白并且更加有效的通用疫苗，因为s蛋白的其他部分(包括n端结构域和s2结构域)比rbd更加保守。因此，需要在无需进行广泛的蛋白质工程的情况下针对广泛的cov s蛋白生产致密包被的纳米颗粒的通用疫苗技术。

背景技术：

技术实现思路

1、本文的公开包括组合物(例如，疫苗组合物)。在一些实施方式中，该组合物包含：包含编码融合蛋白的多核苷酸的核酸组合物，其中融合蛋白包含抗原多肽(antigenicpolypeptide，ap)和转运必需内吞体分选复合物(endosomal sorting complex requiredfor transport，escrt)-募集结构域(erd)，并且其中多个融合蛋白能够自组装成包膜纳米颗粒(enp)，enp从表达融合蛋白的细胞分泌，从而产生enp群。

2、本文的公开包括组合物(例如，疫苗组合物)。在一些实施方式中，该组合物包含：包含n个多核苷酸的核酸组合物，n个多核苷酸各自编码第n融合蛋白，其中n是2至500的整数，其中每个融合蛋白包含ap和转运必需内吞体分选复合物(escrt)-募集结构域(erd)，其中至少两个融合蛋白在ap方面不同，并且其中多个融合蛋白能够自组装成enp，enp从表达融合蛋白的细胞分泌，从而产生enp群。

3、在一些实施方式中，融合蛋白能够呈递在表达融合蛋白的细胞的表面上。在一些实施方式中，enp的自组装：不需要除了核酸组合物之外的外源核酸，不需要除了多个融合蛋白之外的任何外源组分；和/或仅需要单个组分(例如，融合蛋白)。在一些实施方式中，细胞是：对象的细胞；体内细胞、离体细胞或原位细胞；和/或贴壁细胞或悬浮细胞。

4、在一些实施方式中，在从对象的细胞中分泌后，enp能够分布在对象的一种或多种组织(例如，肾上腺组织、阑尾组织、膀胱组织、骨、肠组织、脑组织、乳腺组织、支气管、冠状组织、耳组织、食道组织、眼组织、胆囊组织、生殖器组织、心脏组织、下丘脑组织、肾组织、大肠组织、肠组织、喉组织、肝组织、肺组织、淋巴结、口腔组织、鼻组织、胰腺组织、甲状旁腺组织、垂体组织、前列腺组织、直肠组织、唾液腺组织、骨骼肌组织、皮肤组织、小肠组织、脊髓、脾组织、胃组织、胸腺组织、气管组织、甲状腺组织、输尿管组织、尿道组织、软及结缔组织、腹膜组织、血管组织、脂肪组织或其任何组合)内。在一些实施方式中，所述enp接合所述一种或多种组织中的多个免疫细胞，从而模拟自然感染。

5、本文的公开包括组合物(例如，疫苗组合物)。在一些实施方式中，组合物包含：enp群，其中每个enp包含多个融合蛋白，每个融合蛋白包含抗原多肽(ap)和转运必需内吞体分选复合物(escrt)-募集结构域(erd)。

6、在一些实施方式中，enp衍生自本文提供的核酸组合物的表达。在一些实施方式中，enp包含脂质双层(例如，衍生自分泌enp的细胞的脂质双层)。在一些实施方式中，erd将一种或多种escrt蛋白募集至融合蛋白的胞质尾区。在一些实施方式中，escrt蛋白经由erd的募集诱导enp的自组装和出芽(budding)。在一些实施方式中，融合蛋白的胞质部分包含erd。在一些实施方式中，融合蛋白的胞质尾区包含erd。在一些实施方式中，erd与escrt蛋白tsg101、nedd4和/或alix相互作用。

7、在一些实施方式中，erd包含或衍生自：非人蛋白，可选地非哺乳动物蛋白，还可选地，鸡蛋白、小鼠蛋白、蜥蜴蛋白、爬行动物蛋白、仓鼠蛋白或金鱼蛋白。在一些实施方式中，erd包含或衍生自：人cep55蛋白的escrt和alix结合区(eabr)，可选地残基170-213。在一些实施方式中，erd包含或衍生自：syntenin-1、大鼠半乳糖凝集素-3(rgalectin-3)、hrs和/或cd2ap。在一些实施方式中，erd包含或衍生自：病毒蛋白，可选地病毒蛋白的片段，还可选地逆转录病毒蛋白、单纯疱疹病毒蛋白、痘苗病毒蛋白、嗜肝病毒蛋白、披膜病毒蛋白、黄病毒蛋白、沙粒病毒蛋白、冠状病毒蛋白、正粘病毒蛋白、副粘病毒蛋白、布尼亚病毒蛋白、博纳病毒蛋白、弹状病毒蛋白或丝状病毒蛋白，可选地gag蛋白，还可选地衍生自eiav、htlv-1、mlv或mpmv，可选地eiav p9和/或hiv-1p6。在一些实施方式中，erd包含或衍生自：埃博拉病毒蛋白，可选地ebov vp40。在一些实施方式中，erd包含与选自由seq id no：1-20和23组成的组的氨基酸序列具有至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

8、在一些实施方式中，融合蛋白包含能够阻止融合蛋白的内吞作用的内吞作用阻止基序(epm)。在一些实施方式中，epm：将融合蛋白束缚在细胞骨架上，从而阻止定位到包被小窝并阻止内吞作用；增强enp组装、enp产生和/或enp分泌；和/或阻止融合蛋白的内吞作用，从而延长融合蛋白保持在质膜上而与escrt蛋白相互作用的时间。在一些实施方式中，epm：使enp上和/或enp中的融合蛋白的丰度和/或密度是包含不含epm的融合蛋白的enp的至少约2倍；和/或使细胞分泌的enp数量是表达不含epm的融合蛋白的细胞的至少约2倍。在一些实施方式中，epm包含或衍生自鼠低亲和力γfc区受体ii同种型fcrii-b1的部分。在一些实施方式中，epm包含fcrii-b1的胞质尾区的全部或部分。在一些实施方式中，erd包含与seq id no：21的氨基酸序列具有至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

9、在一些实施方式中，ap或其部分展示在enp中和/或enp的表面上。在一些实施方式中，ap的长度为约1个氨基酸至约10000个氨基酸。在一些实施方式中，ap包含或衍生自与疾病或病症相关的抗原蛋白，可选地所述抗原蛋白的免疫原性变体和/或免疫原性片段。在一些实施方式中，ap包含或衍生自所述抗原蛋白的保守部分。在一些实施方式中，ap以其天然膜相关构象存在于enp上和/或enp中。

10、在一些实施方式中，ap包含或衍生自所述抗原蛋白全长的至少约5％，可选地，ap包含或衍生自感染原的全长表面蛋白。

11、在一些实施方式中，疾病或病症是由感染原引起的感染性疾病或病症，其中ap包含或衍生自所述感染原的抗原蛋白，并且其中所述感染原的抗原蛋白是致病性抗原。在一些实施方式中，疾病或病症是与肿瘤相关抗原的表达相关的疾病，并且抗原蛋白是肿瘤相关抗原。在一些实施方式中，疾病或病症是自身免疫疾病或病症，并且抗原蛋白是自身免疫抗原。在一些实施方式中，疾病或病症是变应性疾病或病症，并且抗原蛋白是变应原性抗原。

12、感染原可以是细菌、真菌、病毒或原生生物。在一些实施方式中，感染原是冠状病毒(cov)(例如，α冠状病毒、β冠状病毒、γ冠状病毒或δ冠状病毒)。在一些实施方式中，感染原选自包含以下的组：鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumannii)、无形体属(anaplasmagenus)、嗜吞噬细胞无形体(anaplasma phagocytophilum)、巴西钩口线虫(ancylostomabraziliense)、十二指肠钩口线虫(ancylostoma duodenale)、溶血隐秘杆菌(arcanobacterium haemolyticum)、人蛔虫(ascaris lumbricoides)、曲霉属(aspergillus genus)、星状病毒科(astroviridae)、巴贝虫属(babesia genus)、炭疽芽孢杆菌(bacillus anthracis)、蜡样芽胞杆菌(bacillus cereus)、汉赛巴尔通体(bartonella henselae)、bk病毒、人酵母菌(blastocystis hominis)、皮炎芽生菌(blastomyces dermatitidis)、百日咳博德特氏菌(bordetella pertussis)、博氏疏螺旋体(borrelia burgdorferi)、疏螺旋体属(borreliagenus)、疏螺旋体属某些种(borreliaspp)、布鲁氏菌属(brucella genus)、马来丝虫(brugia malayi)、布尼亚病毒科(bunyaviridae family)、洋葱伯克霍尔德菌(burkholderia cepacia)和其它伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌(burkholderiamallei)、假鼻疽伯克霍尔德菌(burkholderiapseudomallei)、杯状病毒科(caliciviridae family)、弯曲菌属(campylobacter genus)、白念珠菌(candida albicans)、念珠菌属某些种(candida spp)、沙眼衣原体(chlamydiatrachomatis)、肺炎嗜衣原体(chlamydophila pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(chlamydophila psittaci)、cjd朊病毒、华枝睾吸虫(clonorchis sinensis)、肉毒梭菌(clostridium botulinum)、艰难梭菌(clostridium difficile)、产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)、产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)、梭菌属某些种(clostridium spp)、破伤风梭菌(clostridium tetani)、球孢子菌属某些种(coccidioides spp)、冠状病毒(coronaviruses)、白喉棒状杆菌(corynebacteriumdiphtheriae)、贝纳特氏立克次体(coxiella burnetii)、克里米亚-刚果出血热病毒(crimean-congo hemorrhagic fever virus)、新型隐球菌(cryptococcus neoformans)、隐孢子虫属(cryptosporidium genus)、巨细胞病毒(cytomegalovirus)(cmv)、登革热病毒(dengue viruse)(den-1、den-2、den-3和den-4)、脆弱双核阿米巴(dientamoebafragilis)、埃博拉病毒(ebolavirus)(ebov)、棘球绦虫属(echinococcusgenus)、恰菲埃里希氏体(ehrlichia chaffeensis)、埃翁氏埃里希氏体(ehrlichiaewingii)、埃里希氏体属(ehrlichia genus)、溶组织内阿米巴(entamoeba histolytica)、肠球菌属(enterococcus genus)、肠道病毒属(enterovirus genus)、肠道病毒(enteroviruses)(主要为柯萨奇a病毒(coxsackie a virus)和肠道病毒71(ev71))、表皮癣菌属某些种(epidermophyton spp)、爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein-barr virus)(ebv)、大肠埃希氏菌(o157:h7、o111和o104:h4)、肝片吸虫(fasciola hepatica)和大片吸虫(fasciola gigantica)、ffi朊病毒、丝虫目(filarioidea)超家族、丝状病毒(filoviruses)、黄病毒属(flaviviruses)、土拉热弗朗西斯氏菌(francisellatularensis)、梭杆菌属(fusobacterium genus)、白地霉(geotrichum candidum)、肠贾第虫(giardia intestinalis)、颚口虫属某些种(gnathostoma spp)、gss朊病毒、瓜纳瑞托病毒(guanarito virus)、杜克雷氏嗜血杆菌(haemophilus ducreyi)、流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae)、幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori)、亨尼帕病毒(henipavirus)(亨德拉病毒(hendra virus)、尼帕病毒(nipah virus))、甲型肝炎病毒(hepatitis a virus)、乙型肝炎病毒(hbv)、丙型肝炎病毒(hcv)、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1和2(hsv-1和hsv-2)、夹膜组织胞浆菌(histoplasma capsulatum)、hiv(人类免疫缺陷病毒)、威尼克外瓶霉(hortaeawerneckii)、人博卡病毒(humanbocavirus)(hbov)、人疱疹病毒6(hhv-6)和人疱疹病毒7(hhv-7)、人偏肺病毒(humanmetapneumovirus)(hmpv)、人乳头瘤病毒(human papillomavirus)(hpv)、人副流感病毒(hpiv)、日本脑炎病毒(japanese encephalitisvirus)、jc病毒、胡宁病毒(junin virus)、金氏金氏菌(kingella kingae)、肉芽肿杆菌(klebsiella granulomatis)、库鲁朊病毒(kuru prion)、拉沙病毒(lassa virus)、嗜肺性军团病杆菌(legionella pneumophila)、利什曼原虫属(leishmania genus)、钩端螺旋体属(leptospira genus)、单核细胞增多性李斯特菌(listeria monocytogenes)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lymphocyticchoriomeningitis virus)(lcmv)、马丘坡病毒(machupo virus)、马拉色霉菌属某些种(malassezia spp)、马尔堡病毒(marburg virus)、麻疹病毒(measles virus)、横川后殖吸虫(metagonimus yokagawai)、微孢子虫门(microsporidia phylum)、接触传染性软疣病毒(molluscum contagiosum virus)(mcv)、腮腺炎病毒(mumps virus)、麻风分枝杆菌(mycobacterium leprae)和弥漫型麻风分枝杆菌(mycobacterium lepromatosis)、结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)、溃疡分枝杆菌(mycobacterium ulcerans)、肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae)、福氏耐格里阿米巴(naegleria fowleri)、美洲板口线虫(necator americanus)、淋病奈瑟氏菌(neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟氏菌(neisseria meningitidis)、星形诺卡氏菌(nocardia asteroides)、诺卡氏菌属某些种(nocardia spp)、旋盘尾丝虫(onchocercavolvulus)、恙虫病东方体(orientiatsutsugamushi)、正粘病毒科(orthomyxoviridaefamily)(流感病毒)、巴西副球孢子菌(paracoccidioides brasiliensis)、并殖吸虫属某些种(paragonimus spp)、卫氏并殖吸虫(paragonimus westermani)、细小病毒b19(parvovirus b19)、巴斯德菌属(pasteurellagenus)、疟原虫属(plasmodium genus)、耶氏肺孢子虫(pneumocystis jirovecii)、脊髓灰质炎病毒(poliovirus)、狂犬病病毒(rabies virus)、呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytial virus)(rsv)、鼻病毒(rhinovirus)、鼻病毒(rhinoviruses)、小蛛立克次体(rickettsia akari)、立克次体属(rickettsia genus)、普氏立克次体(rickettsiaprowazekii)、立氏立克次体(rickettsia rickettsii)、伤寒立克次体(rickettsiatyphi)、裂谷热病毒(rift valleyfever virus)、轮状病毒(rotavirus)、风疹病毒(rubella virus)、萨比亚病毒(sabiavirus)、沙门氏菌属(salmonella genus)、疥螨(sarcoptes scabiei)、sars冠状病毒、血吸虫属(schistosoma genus)、志贺氏菌属(shigella genus)、辛诺柏病毒(sin nombrevirus)、汉坦病毒(hantavirus)、申克孢子丝菌(sporothrix schenckii)、葡萄球菌属(staphylococcus genus)、葡萄球菌属(staphylococcus genus)、无乳链球菌(streptococcus agalactiae)、肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)、酿脓链球菌(streptococcus pyogenes)、粪类圆线虫(strongyloides stercoralis)、绦虫属(taeniagenus)、有钩绦虫(taenia solium)、蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus)(tbev)、犬弓蛔虫(toxocara canis)或猫弓蛔虫(toxocara cati)、刚地弓形虫(toxoplasma gondii)、苍白密螺旋体(treponemapallidum)、旋毛虫(trichinella spiralis)、阴道滴虫(trichomonas vaginalis)、毛癣菌属某些种(trichophyton spp)、毛首鞭虫(trichuris trichiura)、布氏锥虫(trypanosomabrucei)、克氏锥虫(trypanosoma cruzi)、解脲脲原体(ureaplasma urealyticum)、水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus)(vzv)、重型天花(variola major)或轻型天花(variola minor)、vcjd朊病毒、委内瑞拉马脑炎病毒(venezuelanequine encephalitisvirus)、霍乱弧菌(vibrio cholerae)、西尼罗病毒(west nilevirus)、西方马脑炎病毒(western equine encephalitis virus)、班氏吴策线虫(wuchereria bancrofti)、黄热病病毒(yellow fever virus)、结肠炎耶尔森菌(yersinia enterocolitica)、鼠疫耶尔森菌(yersinia pestis)和假结核耶尔森菌(yersinia pseudotuberculosis)。

13、在一些实施方式中，ap包含膜蛋白(例如，多跨膜蛋白)。在一些实施方式中，ap不构造为可溶性蛋白质。在一些实施方式中，ap不包含构造为增强其溶解性和/或稳定性的一种或多种突变。在一些实施方式中，ap不包含跨膜结构域和/或ap是可溶性蛋白，并且其中融合蛋白包含跨膜结构域(td)。在一些实施方式中，跨膜结构域包含或衍生自非人跨膜蛋白(例如，非哺乳动物跨膜蛋白)。在一些实施方式中，td包含或衍生自天然蛋白、重组蛋白和/或合成蛋白(例如，主要包含疏水性残基的合成蛋白)。

14、融合蛋白可以包含一个或多个接头。在一些实施方式中，一个或多个接头包含一个或多个柔性氨基酸残基，可选地约1个至约18个柔性氨基酸残基，还可选地柔性氨基酸残基包含甘氨酸、丝氨酸或其组合。在一些实施方式中，一个或多个接头是甘氨酸-丝氨酸(gs)接头，可选地长度为1-15个氨基酸。在一些实施方式中，一个或多个接头位于erd和ap之间、erd和epm之间、erd和td之间、epm和td之间、ap和epm之间、和/或ap和td之间。

15、在一些实施方式中，多个融合蛋白中的至少两个融合蛋白在ap方面彼此不同，并且其中enp群由此展示出多个不同的ap。

16、在一些实施方式中，enp群包含一种或多种同型enp，其中同型enp的多个融合蛋白在ap方面彼此相同，并且其中同型enp由此不展示出多个不同的ap。在一些实施方式中，enp群包含一种或多种异型enp，其中异型enp的融合蛋白中的至少两个在ap方面彼此不同，并且其中异型enp由此展示出多个不同的ap。在一些实施方式中，enp群包含两种或更多种同型enp的混合物，所述两种或更多种同型enp中存在的多个融合蛋白在ap方面彼此不同，并且其中enp群由此展示出多个不同的ap。在一些实施方式中，enp群包含两种或更多种异型enp的混合物，所述两种或更多种异型enp的多个融合蛋白在ap方面彼此不同。在一些实施方式中，异型enp能够引发对另外的感染原的异源抗体反应，并且其中所述异型enp不展示出衍生自所述另外的感染原的ap。

17、在一些实施方式中，多个不同的ap可以包含：约2至约500种彼此不同的抗原多肽；相同蛋白质类型的ap；和/或不同蛋白质类型的ap。在一些实施方式中，相同的enp包含衍生自感染原的相同科、相同属和/或相同种的两种或更多种株系的ap。在一些实施方式中，多个不同的ap彼此具有约、至少或至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同一性。

18、多个不同的ap可以包括多种冠状病毒(cov)抗原，其中多种cov抗原包括第一cov的第一cov抗原和与所述第一cov不同的第二cov的第二cov抗原。在一些实施方式中，多种cov抗原包括：cov刺突蛋白(s蛋白)或其部分、cov包膜蛋白(e蛋白)或其部分、cov核衣壳蛋白(n蛋白)或其部分、cov血凝素酯酶蛋白(he蛋白)或其部分、cov类木瓜蛋白酶或其部分、cov 3cl蛋白酶或其部分、cov膜蛋白(m蛋白)或其部分，或其组合。在一些实施方式中，多种cov抗原包括cov s蛋白或其部分。在一些实施方式中，第一cov抗原、第二cov抗原或两者包括cov s蛋白或其部分。在一些实施方式中，第一cov抗原分子的数量和第二cov抗原分子的数量的比例为1:100至100:1。在一些实施方式中，多种cov抗原包含三种、四种、五种、七种或八种cov抗原，每种cov彼此不同。多种cov抗原可以至少包含第三cov的第三cov抗原和第四cov的第四cov抗原，并且其中第一、第二、第三和第四cov彼此不同。

19、多个不同的ap可以至少包含第m感染原的第m致病性抗原，其中m是大于2的整数，并且其中各第m致病性抗原彼此不同，可选地m是大于50的整数。在一些实施方式中，多个不同的ap包含以下中的两种或更多种：第一感染原(ia)的第一致病性抗原(pa)、第二ia的第二pa、第三ia的第三pa、第四ia的第四pa、第五ia的第五pa、第六ia的第六pa、第七ia的第七pa、第八ia的第八pa、第九ia的第九pa、第十ia的第十pa、第十一ia的第十一pa、第十二ia的第十二pa、第十三ia的第十三pa、第十四ia的第十四pa、第十五ia的第十五pa、第十六ia的第十六pa、第十七ia的第十七pa、第十八ia的第十八pa、第十九ia的第十九pa、第二十ia的第二十pa、第二十一ia的第二十一pa、第二十二ia的第二十二pa、第二十三ia的第二十三pa、第二十四ia的第二十pa、第二十五ia的第二十五pa、第二十六ia的第二十六pa、第二十七ia的第二十七pa、第二十八ia的第二十八pa、第二十九ia的第二十九pa、第三十ia的第三十pa、第三十一ia的第三十一pa、第三十二ia的第三十二pa、第三十三ia的第三十三pa、第三十四ia的第三十四pa、第三十五ia的第三十五pa、第三十六ia的第三十六pa、第三十七ia的第三十七pa、第三十八ia的第三十八pa、第三十九ia的第三十九pa、第四十ia的第四十pa、第四十一ia的第四十一pa、第四十二ia的第四十二pa、第四十三ia的第四十三pa、第四十四ia的第四十四pa、第四十五ia的第四十五pa、第四十六ia的第四十六pa、第四十七ia的第四十七pa、第四十八ia的第四十八pa、第四十九ia的第四十九pa、以及第五十ia的第五十pa，其中第一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、十三五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七、四十八、四十九和第五十致病性抗原彼此不同。在一些实施方式中，第一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、十三五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七、四十八、四十九和第五十感染原彼此不同。在一些实施方式中，多个不同的ap包括多种cov抗原、多种流感抗原和/或多种hiv抗原。

20、在一些实施方式中，多种cov抗原中的一种或多种是α-cov和/或β-cov属中的cov的抗原，并且可选地其中多种cov抗原中的每一种是β-cov属的cov的抗原。在一些实施方式中，多种cov抗原是sarbecovirus亚属的cov的抗原。在一些实施方式中，第一cov和第二cov属于β-cov属，可选地属于sarbecovirus亚属。在一些实施方式中，多种cov抗原是选自由以下组成的组中的cov的抗原：sars-cov、sars-cov-2、wiv1、shc014、rf1、rmyn02、pang17、ratg13、rs4081、lyra11、hku3、yunnan2011、btky72、bm48-31、wiv16、khosta-1和khosta-2。在一些实施方式中，第一cov、第二cov或两者选自由以下组成的组：sars-cov、sars-cov-2、wiv1、shc014、rf1、rmyn02、pang17、ratg13、rs4081、lyra11、hku3、yunnan2011、btky72、bm48-31、wiv16、khosta-1和khosta-2。在一些实施方式中，cov选自sars-cov、sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov、sl-cov-wivl、hku4、hku5、hcov-oc43、hcov-hkul、hku9、hku3、hku8、hku24、nl63、shc014、229e和/或sars-cov-2变体b.1.351、b.1.1.7、p.1、b.1.617.2、b.1.1.529、ba.1、ba.1.1、ba.2、ba.3、ba.4、ba.5和其他后代谱系的种或亚种。在一些实施方式中，cov选自embecovirus、sarbecovirus、merbecovirus、nobevovirus、hibecovirus、sarsr-cov、mers-cov或其任何组合的的种或亚种。在一些实施方式中，cov选自来自sarbevirus、embecovirus、merbecovirus和/或nobecovirus谱系的β-cov。在一些实施方式中，cov选自sarbecovirus毒株，可选地，sars、lyra11、rf1、rs4081、btky72、和/或bm48-31；在一些实施方式中，cov选自merbecovirus毒株，可选地，hku4、hku5、hku25、btcov-vs-cov1、mers相关的nl13845、mers相关的nl140422。在一些实施方式中，cov选自embecovirus毒株，可选地，hku1、大鼠cov parker、phev、马cov、啮齿动物cov、龙泉大鼠(longquan rat)cov。

21、在一些实施方式中，与多组分纳米颗粒方法相比、可选地与基于spycatcher的纳米颗粒方法或基于慢病毒gag的方法相比，enp包含至少约2倍的ap和/或具有至少相同的免疫原性，进一步可选地，多组分纳米颗粒方法包含两种或更多种单独的多肽。在一些实施方式中，与不包含erd的纳米颗粒方法相比、可选地与基于spycatcher或基于gag的纳米颗粒方法相比，enp包含至少约2倍的ap、至少约2倍的ap密度，和/或具有至少相同的免疫原性。

22、在一些实施方式中，核酸组合物不包含编码spytag或慢病毒gag的多核苷酸。在一些实施方式中，enp不包含spytag或慢病毒gag。

23、在一些实施方式中，enp具有一种或多种尺寸的真核病毒。在一些实施方式中，enp群中小于约10％的enp的粒度小于约10nm。在一些实施方式中，enp群中小于约10％的enp的粒度超过约80nm。在一些实施方式中，enp群的enp的平均直径范围为约5nm至约80nm、约15nm至约50nm、或约20nm至约40nm。在一些实施方式中，enp群的enp的平均直径为约10nm、约12nm、约14nm、约16nm、约18nm、约20nm、约22nm、约24nm、约26nm、约28nm、约30nm、约32nm、约34nm、约36nm、约38nm、约40nm、约42nm、约44nm、约46nm、约48nm或约50nm，可选地该平均是平均数、中位数或众数，可选地，平均数是算术平均数、几何平均数和/或调和平均数。在一些实施方式中，enp具有约10nm、约12nm、约14nm、约16nm、约18nm、约20nm、约22nm、约24nm、约26nm、约28nm、约30nm、约32nm、约34nm、约36nm、约38nm、约40nm、约42nm、约44nm、约46nm、约48nm或约50nm的最小直径。在一些实施方式中，enp具有约10nm、约12nm、约14nm、约16nm、约18nm、约20nm、约22nm、约24nm、约26nm、约28nm、约30nm、约32nm、约34nm、约36nm、约38nm、约40nm、约42nm、约44nm、约46nm、约48nm、约50nm、约52nm、约54nm、约56nm、约58nm、约60nm、约62nm、约64nm、约66nm、约68nm、约70nm、约72nm、约74nm、约76nm、约78nm或约80nm的最大直径。

24、在一些实施方式中，enp衍生自用核酸组合物瞬时转染的细胞培养物，衍生可选地通过超速离心和/或尺寸排阻层析，进一步可选地在20％蔗糖垫上超速离心，转染可选地通过磷酸钙转染、deae-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质转染、电穿孔、电核转运、化学转导、电转导、脂质体介导的转染、effectene介导的转染、脂质纳米颗粒(lnp)介导的转染或其任何组合。在一些实施方式中，enp在4℃下储存至少三个月免疫原性的降低小于约50％。在一些实施方式中，组合物在约4℃的温度下作为液体储存后，在至少约2周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月或约1年内是稳定的。在一些实施方式中，作为液体储存至少1个月后，至少约70％、75％、80％、85％、90％或95％的enp在约5℃的温度下具有免疫原性。

25、在一些实施方式中，核酸组合物与一种或多种脂质或基于脂质的载体复合或缔合，从而形成脂质体、脂质纳米颗粒(lnp)、脂质复合物和/或纳米脂质体，该脂质体、脂质纳米颗粒(lnp)、脂质复合物和/或纳米脂质体可选地包封该核酸组合物。在一些实施方式中，核酸组合物是、包含或进一步包含一种或多种运载体。在一些实施方式中，一种或多种运载体中的至少一种是病毒运载体、质粒、转座元件、裸dna运载体、脂质纳米颗粒(lnp)或其任何组合。在一些实施方式中，病毒运载体是aav运载体、慢病毒运载体、逆转录病毒运载体、腺病毒运载体、疱疹病毒运载体、单纯疱疹病毒运载体、巨细胞病毒运载体、痘苗病毒运载体、mva运载体、杆状病毒运载体、泡疹性口炎病毒运载体、人乳头瘤病毒运载体、禽痘病毒运载体、辛德毕斯病毒运载体、vee运载体、麻疹病毒运载体、流感病毒运载体、乙型肝炎病毒运载体、整合缺陷型慢病毒(idlv)运载体，或其任何组合。在一些实施方式中，转座元件是piggybac转座子或睡美人转座子(sleeping beauty transposon)。

26、在一些实施方式中，编码融合蛋白的多核苷酸包含在一种或多种运载体中。在一些实施方式中，编码融合蛋白的多核苷酸包含在相同运载体和/或不同运载体中。在一些实施方式中，编码融合蛋白的多核苷酸位于相同核酸和/或不同核酸上。

27、在一些实施方式中，一种或多种运载体是dna疫苗。在一些实施方式中，编码融合蛋白的多核苷酸与能够诱导所述多核苷酸转录的一个或多个启动子可操作地连接。在一些实施方式中，dna疫苗是基于质粒的dna疫苗、基于微环的dna疫苗、基于杆粒的dna疫苗、基于小基因的dna疫苗、小串dna(线性共价闭合dna运载体)疫苗、闭端线性双链dna(celid或cedna)疫苗、doggybonetmdna疫苗、哑铃形dna疫苗或微量免疫原定义的基因表达(midge)-运载体dna疫苗。在一些实施方式中，与编码ap但不编码erd的dna疫苗相比，该dna疫苗引发至少2倍的针对感染原的中和抗体反应。

28、在一些实施方式中，启动子包括遍在启动子、诱导型启动子、组织特异性启动子和/或谱系特异性启动子。在一些实施方式中，遍在启动子选自包含以下的组：巨细胞病毒(cmv)立即早期启动子、cmv启动子、病毒性猿猴病毒40(sv40)(例如早期或晚期)、莫洛尼鼠白血病病毒(momlv)ltr启动子、劳斯肉瘤病毒(rsv)ltr、rsv启动子、单纯疱疹病毒(hsv)(胸苷激酶)启动子、来自痘苗病毒的h5、p7.5和p11启动子、延伸因子1-α(ef1a)启动子、早期生长反应1(egr1)、铁蛋白h(ferh)、铁蛋白l(ferl)、甘油醛3-磷酸脱氢酶(gapdh)、真核翻译起始因子4a1(eif4a1)、热休克70kda蛋白5(hspa5)、热休克蛋白90kdaβ成员1(hsp90b1)、热休克蛋白70kda(hsp70)、β-驱动蛋白(β-kin)、人rosa 26基因座、泛素c启动子(ubc)、磷酸甘油酸激酶1(pgk)启动子、3-磷酸甘油酸激酶启动子、巨细胞病毒增强子、人β-肌动蛋白(hba)启动子、鸡β-肌动蛋白(cba)启动子、cag启动子、casi启动子、cbh启动子或其任何组合。

29、在一些实施方式中，编码融合蛋白的多核苷酸与串联基因表达元件(例如，内部核糖体进入位点(ires)、口蹄疫病毒2a肽(f2a)、马鼻炎a病毒2a肽(e2a)、猪捷申病毒2a肽(p2a)或明脉扁刺蛾病毒2a肽(t2a)，或其任何组合)可操作地连接。在一些实施方式中，编码融合蛋白的所述多核苷酸包含转录物稳定元件(例如，土拨鼠肝炎翻译后调节元件(wpre)、牛生长激素聚腺苷酸化(bgh-polya)信号序列、人生长激素聚腺苷酸化(hgh-polya)信号序列或其任何组合)。

30、在一些实施方式中，核酸组合物是mrna或包含mrna。在一些实施方式中，mrna制备在脂质纳米颗粒(lnp)中。在一些实施方式中，mrna包含：5'非翻译区(utr)、3'utr和/或帽。在一些实施方式中，mrna包含一种或多种选自以下的经修饰的核苷酸：假尿苷、n-1-甲基-假尿苷、2-氨基腺苷、2-硫胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、c-5丙炔基-胞苷、c-5丙炔基尿苷、2-氨基腺苷、c5-溴尿苷、c5-氟尿苷、c5-碘尿苷、c5-丙炔基尿苷、c5-丙炔基胞苷、c5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、0(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫胞苷。在一些实施方式中，mrna包含代替一个或多个尿苷的经修饰的核苷酸。在一些实施方式中，经修饰的核苷酸选自假尿苷(ψ)、n 1-甲基-假尿苷(m 1ψ)和5-甲基-尿苷(m5u)。

31、在一些实施方式中，lnp包含可电离阳离子脂质、非阳离子脂质、甾醇和peg修饰的脂质中的一种或多种，可选地，非阳离子脂质是中性脂质。在一些实施方式中，lnp包含0.5-15mol％peg修饰的脂质、5-25mol％非阳离子脂质、25-55mol％甾醇和20-60mol％可电离阳离子脂质。在一些实施方式中，lnp包含40-55mol％可电离阳离子脂质、5-15mol％中性脂质、35-45mol％甾醇和1-5mol％peg修饰的脂质。

32、在一些实施方式中，lnp包含：47mol％可电离阳离子脂质、11.5mol％中性脂质、38.5mol％甾醇和3.0mol％peg修饰的脂质；48mol％可电离阳离子脂质、11mol％中性脂质、38.5mol％甾醇和2.5mol％peg修饰的脂质；49mol％可电离阳离子脂质、10.5mol％中性脂质、38.5mol％甾醇和2.0mol％peg修饰的脂质；50mol％可电离阳离子脂质、10mol％中性脂质、38.5mol％甾醇和1.5mol％peg修饰的脂质；或51mol％可电离阳离子脂质、9.5mol％中性脂质、38.5mol％甾醇和1.0mol％peg修饰的脂质。

33、在一些实施方式中，可电离阳离子脂质为十七烷-9-基8(2羟乙基)(6氧代6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸酯；中性脂质为1,2二硬脂酰基sn甘油-3磷酸胆碱(dspc)；甾醇是胆固醇；和/或peg修饰的脂质是平均分子量为2000的聚乙二醇修饰的1-单甲氧基聚乙二醇-2,3-二肉豆蔻基甘油(peg2000 dmg)。在一些实施方式中，脂质与mrna的wt/wt比为约1:100至约100:1。

34、在一些实施方式中，(i)核酸组合物包含一种或多种编码免疫刺激剂的多核苷酸；和/或(ii)enp群包含一种或多种免疫刺激剂(例如，toll样受体(tlr)激动剂、细胞因子受体激动剂、cd40激动剂、fc受体激动剂、含cpg的核酸、补体受体激动剂或其任何组合)。在一些实施方式中，tlr激动剂是tlr-1激动剂、tlr-2激动剂、tlr-3激动剂、tlr-4激动剂、tlr-5激动剂、tlr-6激动剂、tlr-7激动剂、tlr-8激动剂、tlr-9激动剂和/或tlr-10激动剂；fc受体激动剂是fc-γ受体激动剂；补体受体激动剂与cd21或cd35结合；补体受体激动剂诱导enp的内源补体调理作用；细胞因子受体激动剂是细胞因子；和/或细胞因子受体激动剂是小分子、抗体、融合蛋白或适体。

35、在一些实施方式中，组合物包含tris缓冲液、蔗糖和/或乙酸钠。在一些实施方式中，组合物还包含佐剂(例如，氢氧化铝、水凝胶、addavax、mf59、as03、弗氏佐剂、montanideisa51、cpg、polyi:c、吡喃葡萄糖基脂质a、鞭毛蛋白、瑞西莫德或其任何组合)。在一些实施方式中，组合物是冻干组合物。在一些实施方式中，冻干组合物的含水量小于约10％。

36、在一些实施方式中，组合物被配制或将被配制：为液体、固体或其组合；用于注射；用于肌内施用、鼻内施用、透皮施用、气雾剂施用、鼻腔递送、阴道递送、直肠递送、口腔递送、眼部递送、局部递送(local delivery)、外用递送(topical delivery)、脑池内递送、腹膜内递送、口服递送、肌内注射、静脉注射、皮下注射、结内注射、瘤内注射、腹膜内注射、皮内注射；和/或为颗粒(例如，氧化铁颗粒、脂质体、胶束、聚合物复合物、阳离子肽纳米乳、病毒样颗粒(vlp)、脂质纳米颗粒(lnp)和/或脂质复合物(lipoplex，lpx)颗粒)。在一些实施方式中，核酸组合物和lnp形成组分在单独的小瓶中。

37、在一些实施方式中，组合物是药物组合物，其中该药物组合物包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。在一些实施方式中，组合物包含该组合物用于以下用途的使用说明：刺激有需要的对象的免疫反应；治疗或预防有需要的对象的由感染原引起的疾病或病症；和/或治疗或预防有需要的对象的cov感染。

38、本文的公开包括试剂盒。在一些实施方式中，试剂盒包括：本文公开的组合物(例如，核酸组合物、enp群)。本文的公开包括细胞。在一些实施方式中，细胞包含：本文公开的核酸组合物。

39、本文的公开包括刺激有需要的对象的免疫反应的方法。在一些实施方式中，该方法包括：向对象施用药学有效量的本文公开的组合物(例如，核酸组合物、enp群)，从而刺激对象的免疫反应。

40、本文的公开包括治疗或预防有需要的对象的疾病或病症的方法。在一些实施方式中，该方法包括：向对象施用药学有效量的本文公开的组合物(例如，核酸组合物、enp群)，从而治疗或预防对象的疾病或病症。在一些实施方式中，疾病或病症是由感染原引起的疾病或病症。在一些实施方式中，由感染原引起的疾病或病症是由冠状病毒(cov)感染引起的疾病或病症。

41、本文的公开包括治疗或预防有需要的对象的冠状病毒(cov)感染的方法。在一些实施方式中，该方法包括：向对象施用药学有效量的本文公开的组合物(例如，核酸组合物、enp群)，从而治疗或预防对象的cov感染。

42、在一些实施方式中，在施用组合物后约1小时至约6个月时，在对象的血清中产生免疫原性水平的融合蛋白和/或enp。在一些实施方式中，施用组合物后约1小时至约6个月时，在对象的血清中产生约50至约100000半最大抑制稀释度(id50值)的中和抗体滴度。在一些实施方式中，与基于无包膜np的组合物相比，该组合物引发针对不期望的表位的脱靶免疫反应少至少约1/2。在一些实施方式中，所述不期望的表位包含所述基于无包膜np的组合物的np支架。在一些实施方式中，该方法包括向对象施用至少两剂该组合物。在一些实施方式中，在向对象施用第一剂组合物之后至少14天，再向该对象施用第二剂组合物。

43、在一些实施方式中，施用该组合物诱导针对以下的中和反应：衍生出该抗原多肽的感染原；和/或不衍生出该抗原多肽的另外的感染原，该另外的感染原可选地不同于第一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、十三五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七、四十八、四十九和/或第五十感染原。

44、在一些实施方式中，施用该组合物诱导针对以下的中和反应：具有多种冠状病毒抗原的冠状病毒；不同于第一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、十三五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七、四十八、四十九和/或第五十cov的冠状病毒；和/或不同于具有多种冠状病毒抗原的冠状病毒的其他冠状病毒。

45、在一些实施方式中，施用该组合物导致治疗或预防：由不同于第一冠状病毒和第二冠状病毒的冠状病毒引起的感染；由不同于具有多种冠状病毒抗原的冠状病毒的其他冠状病毒引起的感染；由具有多种冠状病毒抗原的冠状病毒引起的感染；由不同于第一冠状病毒和第二冠状病毒的冠状病毒引起的疾病或病症；由不同于具有多种冠状病毒抗原的冠状病毒的其他冠状病毒引起的疾病或病症；和/或由具有多种冠状病毒抗原的冠状病毒引起的疾病或病症。在一些实施方式中，与包括施用(i)可溶形式的ap和/或(ii)编码ap但不编码erd的mrna疫苗的方法相比，该组合物引发至少2倍的中和抗体滴度。在一些实施方式中，与包括施用呈递ap的基于蛋白质的纳米颗粒的方法相比，该组合物引发至少一样高的中和抗体滴度。在一些实施方式中，施用该组合物引发针对感染原及其变体的保护性且长效的免疫力。

46、在一些实施方式中，与包括施用呈递ap的基于蛋白质的纳米颗粒的方法相比，需要至少同样低剂量的该组合物来产生相当的免疫反应。在一些实施方式中，与包括施用(i)可溶形式的ap和/或(ii)编码ap但不编码erd的mrna疫苗的方法相比，需要至少低约1/2剂量的该组合物来产生相当的免疫反应。

47、在一些实施方式中，在施用第一剂或第二剂该组合物之后，该组合物诱导了：(i)针对感染原或其变体的血清中和滴度，与包括施用呈递ap的基于蛋白质的纳米颗粒的方法相比，该血清中和滴度至少一样有效，可选地，该组合物包含enp群；(ii)针对感染原或其变体的血清中和滴度，与施用可溶形式的ap的方法相比，该血清中和滴度至少2倍有效，可选地，组合物包含enp群；和/或(iii)针对感染原或其变体的血清中和滴度，与包括施用编码ap且不编码erd的mrna疫苗的方法相比，该血清中和滴度至少2倍有效，可选地，组合物包含编码融合蛋白的mrna疫苗，融合蛋白包含ap。在一些实施方式中，血清中和滴度效力是通过针对感染原或其变体的血清半最大抑制稀释度(id50值)的几何平均数测量的，可选地在施用第一剂组合物后约1天至约6个月时或在施用第二剂组合物后约1天至约6个月时测量。

48、在一些实施方式中，对象：是人对象；是年龄不超过3岁、不超过2岁、不超过1.5岁、不超过1岁(12个月)、不超过9个月、6个月或3个月，或在6个月至2岁之间的新生儿或婴儿；免疫功能低下、患有肺部疾病，和/或年满65岁；患有慢性肺部疾病，可选地慢性阻塞性肺病(copd)或哮喘；和/或具有潜在并发症，可选地选自心脏病、糖尿病和肺病。

49、在一些实施方式中，组合物以有效量施用以：(i)在对象中诱导针对ap的强力抗体反应，可选地，强力抗体反应包括中和抗体反应，进一步可选地，强力抗体反应包括将免疫细胞募集至感染细胞的fc结构域效应子功能，可选地，免疫细胞是巨噬细胞、中性粒细胞和/或自然杀伤细胞，进一步可选地，募集诱导抗体依赖性细胞毒性(adcc)和/或抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)；(ii)在对象中引发针对ap的强力cd4和/或cd8t细胞反应；和/或(iii)在对象中引发针对ap的平衡th1/th2反应。在一些实施方式中，组合物：(i)与佐剂共同施用；或(ii)不与佐剂共同施用。

50、在一些实施方式中，疾病或病症是血液疾病、免疫疾病、神经疾病或病症、癌症、传染病、遗传病、由异常mtdna引起的病症、代谢性疾病、由异常细胞周期引起的病症、由异常血管生成引起的病症、实体瘤、由异常dna损伤修复引起的病症、或其任何组合。

51、在一些实施方式中，疾病或病症是选自以下的传染病：急性无力脊髓炎(afm)、无形体病、炭疽热、巴贝西虫病、肉毒中毒、普鲁氏菌病、弯曲菌病、耐碳青霉烯感染、软下疳、基孔肯雅病毒感染、衣原体、鱼肉毒、艰难梭菌感染、产气荚膜梭菌、球孢子菌病真菌感染、冠状病毒感染、covid-19(sars-cov-2)，克罗伊茨费尔特-雅各布病/传染性海绵状脑病、隐孢子虫病(crypto)、环孢子虫病、登革热1、2、3或4、白喉、大肠埃希氏菌感染/产志贺毒素(stec)、东部马脑炎、出血热(埃博拉)、埃立克体病、脑炎(虫媒病毒或副感染性)、非脊髓灰质炎肠道病毒、d68肠道病毒(ev-d68)、贾第鞭毛虫病、鼻疽病、淋球菌感染、腹股沟肉芽肿、b型流感嗜血杆菌病(hib或h-流感)、汉坦病毒肺综合征(hps)、溶血性尿毒综合征(hus)、甲型肝炎(hep a)、乙型肝炎(hep b)、丙型肝炎c(hep c)、丁型肝炎(hep d)、戊型肝炎(hepe)、疱疹、带状疱疹(带状性疱疹)、组织胞浆菌病感染、人类免疫缺陷病毒/艾滋病(hiv/aids)、人类乳头瘤病毒(hpv)、流感(flu)、军团杆菌病(军团病)、麻风病(汉森氏病)、钩端螺旋体病、李斯特菌病(李斯特菌)、莱姆病、性病性淋巴肉芽肿感染(lgv)、疟疾、麻疹、类鼻疽、脑膜炎(病毒性)、脑膜炎球菌病(脑膜炎(细菌性))、中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)、腮腺炎、诺如病毒、虱病、盆腔炎(pid)、百日咳(哮咳)、鼠疫(腹股沟腺炎性、败血病性、肺炎性)、肺炎球菌病(肺炎)、脊髓灰质炎(小儿麻痹症)、波瓦生(powassan)、鹦鹉热、阴虱病、脓疱疹病(天花、猴痘、牛痘)、q热病、狂犬病、立克次体病(落基山斑疹热)、风疹(德国麻疹)、沙门氏菌肠胃炎(沙门氏菌)、疥疮、鲭鱼毒素、败血症、严重急性呼吸系统综合征(sars)、志贺氏菌肠胃炎(志贺氏菌)、天花、耐甲氧西林葡萄球菌感染(mrsa)、葡萄球菌食物中毒肠毒素b中毒(葡萄球菌食物中毒)、万古霉素中度耐药性葡萄球菌感染(visa)、万古霉素耐药性葡萄球菌感染(vrsa)、a组链球菌病(侵袭性)(a族链球菌(侵袭性))、b组链球菌病(b族链球菌)、链球菌中毒性休克综合征stss中毒性休克、梅毒(原发性、继发性、早期潜伏性、晚期潜伏性、先天性)、破伤风感染、滴虫病、毛滴虫感染、结核病(tb)、潜伏性结核病(ltbi)、兔热病、d组伤寒症、阴道病、水痘病毒(水痘)、霍乱弧菌(霍乱)、弧菌病(弧菌)、埃博拉病毒出血热、拉沙病毒出血热、马尔堡病毒出血热、西尼罗病毒、黄热病、耶尔森氏菌和寨卡病毒感染。

52、在一些实施方式中，疾病与肿瘤相关抗原的表达相关(例如，增殖性疾病、癌前期病症、癌症和与肿瘤抗原的表达相关的非癌症相关适应症)。在一些实施方式中，癌症选自由以下组成的组：结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌、食道癌、黑色素瘤、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(cns)肿瘤、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、环境诱发癌、所述癌症的组合、以及所述癌症的转移性病变。在一些实施方式中，癌症是选自以下中的一种或多种的血液癌：慢性淋巴细胞白血病(cll)、急性白血病、急性淋巴细胞白血病(all)、b细胞急性淋巴细胞白血病(b-all)、t细胞急性淋巴细胞白血病(t-all)、慢性粒细胞白血病(cml)、b细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴增殖性疾病、malt淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树突细胞瘤、华氏巨球蛋白血症或白血病前期。

53、在一些实施方式中，施用包括气雾剂递送、鼻递送、阴道递送、直肠递送、颊递送、眼部递送、局部递送、外用递送、脑池内递送、腹膜内递送、口服递送、肌内注射、静脉内注射、皮下注射、结内注射、瘤内注射、腹膜内注射、皮内注射或其任何组合。在一些实施方式中，肌内施用该组合物(例如，施用到手臂的三角肌区域中)。