用于治疗α-突触核蛋白病的抗体的制作方法

背景技术：

1、α-突触核蛋白(α-syn)是一种参与囊泡运输、脑中突触传递和dna修复的神经元蛋白。α-突触核蛋白病(也称为突触核蛋白病)是以不溶性α-syn在脑中异常积累为特征的神经变性疾病。这些α-突触核蛋白病包括帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩和杏仁体路易体阿尔茨海默病。α-突触核蛋白病很普遍，并且是人类痛苦和死亡的重要原因。例如，全世界大约有1000万人患有帕金森病。α-syn病理性积累的逐渐增加已经与疾病严重程度的进展相关(henderson等人,neurosci lett.(2019)709:134316)。治疗α-突触核蛋白病的一个治疗目标是减少α-syn在脑中的异常积累。

2、防止或减少α-syn病理性积累的一种方法是开发通常基于免疫球蛋白g(igg)的α-syn靶向性抗体。尽管已经开发出此类抗体，但它们有显著的临床局限性(vaikath等人,jneurochem.(2019)150:612-25)。一个关键问题是治疗性抗体穿过血脑屏障(bbb)(一种限制血液中分子进入脑中的内皮细胞屏障)的效率低。此外，先前开发的α-syn靶向性抗体不能区分生理性单体形式的α-syn和疾病相关的寡聚体或原纤维形式的α-syn(lashuel等人,nat rev neurosci.(2013)14(1):38-48；vaikath,同上)。事实上，单体形式的α-syn的减少已经牵涉在一些形式的神经病理中(gorbatyuk等人,mol ther.(2010)18(8):1450-7)。因此，仍然需要改进α-突触核蛋白病的治疗。

技术实现思路

1、本文描述了可用于治疗α-突触核蛋白病的重组α-syn结合蛋白，诸如抗α-syn抗体及其抗原结合片段。在一个方面，本公开文本提供了一种与人α-突触核蛋白结合的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含：重链可变区(vh)，所述重链可变区包含(i)分别在seq id no:33-35中示出的重链互补决定区(cdr)1-3，和(ii)源自人vh1-02基因的重链框架区(fr)1、2和/或3；以及轻链可变区(vl)，所述轻链可变区包含分别在seq id no:36-38中示出的轻链cdr1-3。源自所述vh1-02基因的fr1、fr2或fr3相对于由所述人vh1-02基因编码的相应fr可以含有不超过六个(例如，6、5、4、3、2、1或0个)突变(例如，取代)。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含源自人jh1、jh4或jh5基因的重链fr4。

2、在一个方面，本公开文本提供了一种与人α-突触核蛋白结合的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含：重链可变区(vh)，所述重链可变区包含分别在seq id no:64-66中示出的重链互补决定区(cdr)1-3；和/或轻链可变区(vl)，所述轻链可变区包含分别在seq id no:67-69中示出的轻链cdr1-3。

3、在一些实施方案中，本文的抗体或抗原结合片段具有包含seq id no:1至9中任一个的vh，以及包含seq id no:11至15中任一个的vl。在另外的实施方案中，所述vh和所述vl分别包含：seq id no:1和11、seq id no:2和12、seq id no:3和12、seq id no:4和12、seqid no:7和12、seq id no:5和13、seq id no:5和15、seq id no:6和13、seq id no:6和14、seq id no:5和14、seq id no:8和14或seq id no:9和14。在某些实施方案中，所述vh包含seq id no:1，或者所述vl包含seq id no:11。在某些实施方案中，所述vh包含seq id no:1，并且所述vl包含seq id no:11。

4、在一些实施方案中，本文的抗体或抗原结合片段包含人κ轻链恒定区(例如，seqid no:43)。

5、在一些实施方案中，本文的抗原结合片段是单链可变片段(scfv)。

6、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段是双特异性的。所述双特异性抗体或抗原结合片段可以包含结合胰岛素样生长因子1受体(igf1r)的部分。在一些实施方案中，所述igf1r结合部分包含vh和vl，其中所述vh包含分别在seq id no:51-53中示出的重链cdr1-3，并且所述vl包含分别在seq id no:46-48中示出的轻链cdr1-3。在另外的实施方案中，所述igf1r结合部分的vh和vl分别包含seq id no:50和45。在某些实施方案中，所述igf1r结合部分是scfv(例如，seq id no:54)。

7、在一些实施方案中，所述igf1r结合部分与所述抗体的两条重链的c末端融合。

8、在一些实施方案中，所述igf1r结合部分与所述抗体的仅一条重链的c末端融合。

9、在一些实施方案中，本公开文本的抗α-syn抗体包含人igg1恒定区。此恒定区相对于野生型人igg1序列可以任选地包含突变。例如，所述抗体的一条重链可以包含一个或多个杵(knob)突变(例如，t366w)，而所述抗体的另一条重链可以包含一个或多个臼(hole)突变(例如，t366s、l368a和y407v)(全部为eu编号)。在另外的实施方案中，所述杵重链包含seq id no:39，和/或所述臼重链包含seq id no:40。在一些实施方案中，所述抗体的重链进一步包含m428l突变(eu编号)。因此，在一些实施方案中，所述杵重链可以包含seq idno:41，并且所述臼重链可以包含seq id no:42。

10、在一些实施方案中，本文的双特异性抗体包含在所述杵重链的c末端处融合的igf1r结合部分。例如，所述igf1r结合部分位于所述臼重链的c末端处，任选地其中所述臼重链包含seq id no:55或56。

11、在某些实施方案中，本发明的双特异性抗体包含含有seq id no:57的重链和含有seq id no:58的重链；以及各自含有seq id no:59的两条轻链。

12、本公开文本的单特异性或多特异性(例如，双特异性)抗体或抗原结合片段可以任选地以不超过200pm、100pm、50pm、30pm、20pm或10pm的kd与聚集或寡聚体α-突触核蛋白结合，并且任选地不与单体α-突触核蛋白特异性结合。

13、在另一个方面，本公开文本提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文的单特异性或多特异性(例如，双特异性)抗α-syn抗体或抗原结合片段以及药学上可接受的载体。

14、在另一个方面，本公开文本提供了编码本发明的抗体或抗原结合片段的一种或多种核酸分子，诸如表达构建体。在一些实施方案中，所述一种或多种核酸分子包含选自seqid no:17-25的核苷酸序列和选自seq id no:27-31的核苷酸序列。还提供了包含这些核酸分子的宿主细胞(例如，哺乳动物宿主细胞)；以及通过在允许所述抗体或抗原结合片段表达的条件下培养所述宿主细胞以及从所述细胞培养物中分离所述抗体或抗原结合片段来产生所述抗体或抗原结合片段的方法。

15、在另一个方面，本公开文本提供了一种治疗有需要的人类受试者的α-突触核蛋白病(例如，帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩或杏仁体路易体阿尔茨海默病)的方法，所述方法包括将治疗有效量的本文的抗体或抗原结合片段施用给所述受试者。还提供了用于在这些方法中使用的抗体或抗原结合片段或药物组合物；以及所述抗体或抗原结合片段在制造用于在此类治疗方法中使用的药物中的用途。