嵌合TIM4受体及其用途的制作方法

背景技术：

1、在暴露于抗原时，初始抗原特异性t细胞经历激活，这促进其克隆扩增、分化，并发育成可以杀死表达同源抗原的细胞(例如，肿瘤细胞)的功能性效应t细胞。在抗原清除后，大多数效应t细胞经历凋亡，并且存活的效应t细胞的子集分化为记忆t细胞，这些记忆t细胞可以提供针对抗原再暴露的长期保护。然而，延长的抗原暴露可能导致t细胞耗竭，能够实现肿瘤细胞的存活。t细胞耗竭是指t细胞经历持续性tcr刺激获得的功能障碍状态，其特征为免疫检查点分子(例如，pd-1、ctla-4、tim-3)表达上调、效应子功能受损、增殖不良和代谢缺陷。表达嵌合抗原受体(car)的工程改造t细胞也可能出现耗竭。

技术实现思路

1、在一方面，本公开提供了一种包括单链嵌合蛋白的嵌合tim4受体，所述单链嵌合蛋白包括：(a)包含tim4结合结构域的胞外结构域；(b)包含cd28信号传导结构域、cd3ζ信号传导结构域和tlr2信号传导结构域的胞内信号传导结构域；和(c)位于胞外结构域和胞内信号传导结构域之间并连接胞外结构域和胞内信号传导结构域的cd28跨膜结构域。在一些实施例中，本文所述的嵌合tim4受体的胞外结构域任选地包含位于结合结构域和跨膜结构域之间并连接结合结构域和跨膜结构域的胞外间隔区结构域。在一些实施例中，tlr2信号传导结构域是tlr2 tir信号传导结构域，其包含seq id no:17中所示的氨基酸序列或由其组成。

2、在一些实施例中，嵌合tim4受体包括：(a)包含tim4结合结构域的胞外结构域，所述tim 4结合结构域包含seq id no:6的氨基酸序列；(b)胞内信号传导结构域，其中所述胞内信号传导结构域包括：(i)包含seq id no:12的氨基酸序列的初级cd28胞内信号传导结构域、包含seq id no:17的氨基酸序列的次级tlr2 tir胞内信号传导结构域和包含seq idno:14的氨基酸序列的三级cd3ζ胞内信号传导结构域；或者(ii)包含seq id no:12的氨基酸序列的初级cd28胞内信号传导结构域、包含seq id no:14的氨基酸序列的次级cd3ζ胞内信号传导结构域和包含seq id no:17的氨基酸序列的三级tlr2tir胞内信号传导结构域；和(c)包含seq id no:11的氨基酸序列的cd28跨膜结构域，其位于胞外结构域和cd28胞内信号传导结构域之间并连接所述胞外结构域和所述cd28胞内信号传导结构域。

3、在一些实施例中，嵌合tim4受体包含seq id no:18或缺乏氨基酸1-24的seq idno:18的氨基酸序列。

4、在一些实施例中，嵌合tim4受体包含seq id no:19或缺乏氨基酸1-24的seq idno:19的氨基酸序列。

5、本文还提供了编码本公开的嵌合tim4受体的多核苷酸、包括编码嵌合tim4受体的多核苷酸的载体以及表达嵌合tim4受体的宿主细胞。

6、本文还提供了编码嵌合tim4受体的多核苷酸、嵌合tim4受体载体或表达嵌合tim4受体的宿主细胞在治疗受试者的方法中的用途的方法，任选地与额外的治疗剂组合。在一些实施例中，所述方法用于治疗癌症。

1.一种包含单链嵌合蛋白的嵌合t细胞免疫球蛋白和粘蛋白4(tim4)受体，所述单链嵌合蛋白包括：

2.根据权利要求1所述的嵌合tim4受体，其中所述嵌合tim4受体进一步在n末端包含信号肽，任选地其中所述信号肽是tim4信号肽，进一步任选地其中所述tim4信号肽包含seqid no:7的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的嵌合tim4受体，其中所述嵌合tim4受体包含seq id no:18或缺乏氨基酸1-24的seq id no:18的氨基酸序列。

4.根据权利要求1或2所述的嵌合tim4受体，其中所述嵌合tim4受体包含seq id no:19或缺乏氨基酸1-24的seq id no:19的氨基酸序列。

5.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合tim4受体。

6.一种表达载体，其包含根据权利要求5所述的多核苷酸。

7.根据权利要求6所述的表达载体，其中所述表达载体是病毒载体，其中任选地所述病毒载体是慢病毒载体。

8.一种工程改造细胞，其包含根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合tim4受体、根据权利要求5所述的多核苷酸或根据权利要求6或7所述的表达载体。

9.根据权利要求8所述的工程改造细胞，其中所述细胞为免疫细胞。

10.根据权利要求9所述的工程改造细胞，其中所述细胞为t细胞。

11.根据权利要求10所述的工程改造细胞，其中所述细胞为cd4+t细胞、cd8+t细胞或cd4+/cd8+t细胞。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的工程改造细胞，其中所述细胞为人类细胞。

13.一种组合物，其包含根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合tim4受体、根据权利要求5所述的多核苷酸、根据权利要求6或7所述的载体或根据权利要求8至12中任一项所述的工程改造细胞。

14.根据权利要求13所述的组合物，其进一步包含药学上可接受的赋形剂。

15.一种在受试者中治疗疾病的方法，其包括施用根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合tim4受体、根据权利要求5所述的多核苷酸、根据权利要求6或7所述的载体、或根据权利要求8至12中任一项所述的工程改造细胞、或根据权利要求13或14所述的组合物。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述疾病为癌症。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肾癌、肝癌、脑癌、淋巴瘤、白血病或肺癌；乳腺、前列腺和结肠的腺癌；所有形式的肺支气管癌；髓样白血病；黑色素瘤；肝癌；神经母细胞瘤；乳头状瘤；胺前体摄取与脱羧细胞瘤；迷芽瘤；鳃原瘤；恶性类癌综合征；类癌心脏病；和癌(例如，walker癌、基底细胞癌、基底鳞状细胞癌、brown-pearce癌、导管癌、ehrlich肿瘤、krebs 2癌、merkel细胞癌、粘液性癌、非小细胞肺癌、燕麦细胞癌、乳头状癌、硬癌、细支气管癌、支气管癌、鳞状细胞癌和过渡细胞癌)；组织细胞病症；恶性组织细胞病；白血病；霍奇金氏病；免疫增生性小肠病；非霍奇金氏淋巴瘤；浆细胞瘤；多发性骨髓瘤；慢性髓性白血病(cml)；浆细胞瘤；网状内皮组织增殖；黑色素瘤；软骨母细胞瘤；软骨瘤；软骨肉瘤；纤维瘤；纤维肉瘤；巨细胞瘤；组织细胞瘤；脂肪瘤；脂肪肉瘤；间皮瘤；粘液瘤；粘液肉瘤；骨瘤；骨肉瘤；脊索瘤；颅咽管瘤；无性细胞瘤；错构瘤；间质瘤；中肾瘤；肌肉瘤；成釉细胞瘤；牙骨质瘤；牙瘤；畸胎瘤；胸腺瘤；滋养细胞肿瘤；腺瘤；胆管瘤；胆脂瘤；圆柱瘤；囊腺癌；囊腺瘤；粒层细胞瘤；两性胚胎细胞瘤；肝癌；汗腺瘤；胰岛细胞瘤；莱迪希细胞瘤；乳头状瘤；支持细胞瘤；卵泡膜细胞瘤；平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；成肌细胞瘤；肌瘤；肌肉瘤；横纹肌瘤；横纹肌肉瘤；室管膜瘤；神经节细胞瘤；神经胶质瘤；髓母细胞瘤；脑膜瘤；神经鞘瘤；神经母细胞瘤；神经上皮瘤；神经纤维瘤；神经瘤；副神经节瘤；非嗜铬性副神经节瘤；血管角化瘤；血管淋巴样增生伴嗜酸性粒细胞增多；硬化性血管瘤；血管瘤病；血管球瘤；血管内皮瘤；血管瘤；血管外皮细胞瘤；血管肉瘤；淋巴管瘤；淋巴管肌瘤；淋巴管肉瘤；松果体瘤；癌肉瘤；软骨肉瘤；叶状囊肉瘤；纤维肉瘤；血管肉瘤；平滑肌肉瘤；白血病性肉瘤；脂肪肉瘤；淋巴管肉瘤；肌肉瘤；粘液肉瘤；卵巢癌；横纹肌肉瘤；肉瘤；赘生物；神经纤维瘤病；宫颈非典型增生和腹膜癌；b细胞癌，包含b细胞淋巴瘤(如各种形式的霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(nhl)或中枢神经系统淋巴瘤)、白血病(如急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、毛细胞白血病、慢性髓性白血病的b母细胞转化)和骨髓瘤(如多发性骨髓瘤)；小淋巴细胞性淋巴瘤、小淋巴细胞白血病、华氏巨球蛋白血症、b细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、骨孤立性浆细胞瘤、骨外浆细胞瘤、粘膜相关(malt)淋巴组织的结外边缘区b细胞淋巴瘤、结边缘区b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大b细胞淋巴瘤、血管内大b细胞淋巴瘤、原发性积液淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤/白血病、不确定恶性潜能的b细胞增殖、淋巴瘤样肉芽肿病和移植后淋巴组织增生性病症。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述癌症为b细胞癌，任选地其中所述b细胞癌为b细胞淋巴瘤，进一步任选地其中所述b细胞淋巴瘤为套细胞淋巴瘤。

19.根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其进一步包括施用额外的治疗剂。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述额外的治疗剂包括放射疗法、细胞免疫疗法、抗体、免疫检查点分子抑制剂、化学疗法、激素疗法、肽、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、抗炎剂、uv光疗法、电脉冲疗法、高强度聚焦超声疗法、溶瘤病毒疗法、小分子疗法或其任何组合。

21.根据权利要求19或20所述的方法，其中所述细胞免疫疗法是嵌合抗原受体。

22.根据权利要求19或20所述的方法，其中所述额外的治疗剂包括血管生成抑制剂(例如，vegf通路抑制剂)、酪氨酸激酶抑制剂(例如，egf通路抑制剂)、受体酪氨酸激酶抑制剂、生长因子抑制剂、gtpase抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、转录因子抑制剂、b-raf抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、mtor抑制剂、egfr抑制剂、alk抑制剂、parp抑制剂、ros1抑制剂、bcl-2抑制剂、pi3k抑制剂、vegfr抑制剂、bcr-abl抑制剂、met抑制剂、myc抑制剂、abl抑制剂、her2抑制剂、btk抑制剂、h-ras抑制剂、k-ras抑制剂、pdgfr抑制剂、trk抑制剂、c-kit抑制剂、c-met抑制剂、cdk4/6抑制剂、fak抑制剂、fgfr抑制剂、flt3抑制剂、idh1抑制剂、idh2抑制剂、pdgfra抑制剂或ret抑制剂。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述抑制剂为btk抑制剂。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述btk抑制剂为依鲁替尼(ibrutinib)、吡妥布鲁替尼(pirtobrutinib)(loxo-305)、替拉鲁替尼(tirabrutinib)、托布鲁替尼(tolebrutinib)、埃沃布鲁替尼(evobrutinib)、非尼布鲁替尼(fenebrutinib)(gdc-0853)、阿卡替尼(acalabrutinib)、ono-4059、司培替尼(spebrutinib)、泽布替尼(zanubrutinib)(bgb-3111)、hm71224或m7583。

25.根据权利要求23或24所述的方法，其中所述癌症为套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、小淋巴细胞性淋巴瘤、小淋巴细胞白血病、华氏巨球蛋白血症和边缘区淋巴瘤。

26.根据权利要求22所述的方法，其中所述抑制剂是egfr抑制剂。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述egfr抑制剂为奥希替尼(osimertinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitnib)、阿法替尼(afatinib)或达克替尼(dacomitinib)。

28.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述癌症为非小细胞肺癌。

29.根据权利要求22所述的方法，其中所述抑制剂是聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述parp抑制剂是他拉唑帕利(talazoparib)、尼拉帕尼(niraparib)、卢卡帕尼(rucaparib)、奥拉帕尼(olaparib)、维利帕尼(veliparib)、cep 9722、e7016、ag014699、mk4827、bmn-673或帕米帕利(pamiparib)。

31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、输卵管癌、腹膜癌、前列腺癌、肺癌或黑色素瘤。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。

33.根据权利要求31所述的方法，其中所述卵巢癌为晚期卵巢癌。

34.根据权利要求31所述的方法，其中所述前列腺癌为晚期前列腺癌。

35.根据权利要求31所述的方法，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。

36.根据权利要求29至35中任一项所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌基因(brca)突变癌症。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述癌症为brca1突变癌症、brca2突变癌症或两者。

38.根据权利要求21所述的方法，其中所述嵌合抗原受体是抗cd72嵌合抗原受体。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述抗cd72嵌合抗原受体具有结合结构域，所述结合结构域包含表3中提供的重链互补决定区1(hcdr1)、重链互补决定区2(hcdr2)、重链互补决定区3(hcdr3)、轻链互补决定区1(lcdr1)、轻链互补决定区2(lcdr2)和轻链互补决定区3(lcdr3)。

40.根据权利要求38或39所述的方法，其中所述抗cd72嵌合抗原受体具有结合结构域，所述结合结构域包含seq id no:131-164中任一者的氨基酸序列。

41.根据权利要求38至40中任一项所述的方法，其中所述抗cd72嵌合抗原受体包含seqid no:182-234中任一者的氨基酸序列。

42.根据权利要求38至41中任一项所述的方法，其中所述癌症为b细胞恶性肿瘤。

43.根据权利要求42所述的方法，其中所述b细胞恶性肿瘤选自由以下组成的组：b细胞慢性淋巴细胞性白血病(cll)、急性淋巴细胞性白血病(all)、急性髓性白血病、慢性髓性白血病(cml)、前淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、普通急性淋巴细胞性白血病、非急性成淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、多发性骨髓瘤、滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、惰性b细胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。

44.根据权利要求42或43所述的方法，其中所述受试者患有难治性b细胞恶性肿瘤。

45.根据权利要求42至44中任一项所述的方法，其中所述受试者先前被施用靶向cd19或cd22的嵌合抗原受体。

46.根据权利要求15至45中任一项所述的方法，其中所述额外的治疗剂以亚治疗剂量施用。

47.根据权利要求15至46中任一项所述的方法，其中所述额外的治疗剂与所述嵌合tim4受体依次或同时施用于所述受试者。

48.一种在受试者中增强效应子应答或抗肿瘤功效的方法，其包括施用根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合tim4受体、根据权利要求5所述的多核苷酸、根据权利要求6或7所述的表达载体、或根据权利要求8至12中任一项所述的工程改造细胞、或根据权利要求13或14所述的组合物。

49.一种用于增强患有癌症的受试者中表达ccr7+的t细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合tim4受体、根据权利要求5所述的多核苷酸、根据权利要求6或7所述的表达载体、或根据权利要求8至12中任一项所述的工程改造细胞、或根据权利要求13或14所述的组合物；和任选地聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、输卵管癌、腹膜癌、前列腺癌、肺癌或黑色素瘤。

51.根据权利要求50所述的方法，其中所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。

52.根据权利要求50所述的方法，其中所述卵巢癌为晚期卵巢癌。

53.根据权利要求50所述的方法，其中所述前列腺癌为晚期前列腺癌。

54.根据权利要求50所述的方法，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。

55.根据权利要求49至54中任一项所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌基因(brca)突变癌症。

56.根据权利要求55所述的方法，其中所述癌症为brca1突变癌症、brca2突变癌症或两者。

57.根据权利要求49至56中任一项所述的方法，其中所述parp抑制剂是他拉唑帕利、尼拉帕尼、卢卡帕尼、奥拉帕尼、维利帕尼、cep 9722、e7016、ag014699、mk4827、bmn-673、帕米帕利或其组合。

58.根据权利要求49至57中任一项所述的方法，其进一步包括施用额外的治疗剂。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述额外的治疗剂包括放射疗法、细胞免疫疗法、抗体、免疫检查点分子抑制剂、化学疗法、激素疗法、肽、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、抗炎剂、uv光疗法、电脉冲疗法、高强度聚焦超声疗法、溶瘤病毒疗法、小分子疗法或其组合。

60.根据权利要求59所述的方法，其中所述细胞免疫疗法是嵌合抗原受体或t细胞受体。

61.根据权利要求58或59所述的方法，其中所述额外的治疗剂包括血管生成抑制剂(例如，vegf通路抑制剂)、酪氨酸激酶抑制剂(例如，egf通路抑制剂)、受体酪氨酸激酶抑制剂、生长因子抑制剂、gtpase抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、转录因子抑制剂、b-raf抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、mtor抑制剂、egfr抑制剂、alk抑制剂、ros1抑制剂、bcl-2抑制剂、pi3k抑制剂、vegfr抑制剂、bcr-abl抑制剂、met抑制剂、myc抑制剂、abl抑制剂、her2抑制剂、btk抑制剂、h-ras抑制剂、k-ras抑制剂、pdgfr抑制剂、trk抑制剂、c-kit抑制剂、c-met抑制剂、cdk4/6抑制剂、fak抑制剂、fgfr抑制剂、flt3抑制剂、idh1抑制剂、idh2抑制剂、pdgfra抑制剂或ret抑制剂。

62.根据权利要求49至61中任一项所述的方法，其中所述增强的表达ccr7+的t细胞表达所述嵌合tim4受体。

63.一种用于增强患有癌症的受试者中cd4/cd8 t细胞比率的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合tim4受体、根据权利要求5所述的多核苷酸、根据权利要求6或7所述的表达载体、或根据权利要求8至12中任一项所述的工程改造细胞、或根据权利要求13或14所述的组合物；和任选地聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂。

64.根据权利要求63所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、输卵管癌、腹膜癌、前列腺癌、肺癌或黑色素瘤。

65.根据权利要求64所述的方法，其中所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。

66.根据权利要求64所述的方法，其中所述卵巢癌为晚期卵巢癌。

67.根据权利要求64所述的方法，其中所述前列腺癌为晚期前列腺癌。

68.根据权利要求64所述的方法，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。

69.根据权利要求63至68中任一项所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌基因(brca)突变癌症。

70.根据权利要求55所述的方法，其中所述癌症为brca1突变癌症、brca2突变癌症或两者。

71.根据权利要求63至70中任一项所述的方法，其中所述parp抑制剂是他拉唑帕利、尼拉帕尼、卢卡帕尼、奥拉帕尼、维利帕尼、cep 9722、e7016、ag014699、mk4827、bmn-673、帕米帕利或其组合。

72.根据权利要求63至71中任一项所述的方法，其进一步包括施用额外的治疗剂。

73.根据权利要求72所述的方法，其中所述额外的治疗剂包括放射疗法、细胞免疫疗法、抗体、免疫检查点分子抑制剂、化学疗法、激素疗法、肽、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、抗炎剂、uv光疗法、电脉冲疗法、高强度聚焦超声疗法、溶瘤病毒疗法、小分子疗法或其组合。

74.根据权利要求73所述的方法，其中所述细胞免疫疗法是嵌合抗原受体或t细胞受体。

75.根据权利要求72或73所述的方法，其中所述额外的治疗剂包括血管生成抑制剂(例如，vegf通路抑制剂)、酪氨酸激酶抑制剂(例如，egf通路抑制剂)、受体酪氨酸激酶抑制剂、生长因子抑制剂、gtpase抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、转录因子抑制剂、b-raf抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、mtor抑制剂、egfr抑制剂、alk抑制剂、ros1抑制剂、bcl-2抑制剂、pi3k抑制剂、vegfr抑制剂、bcr-abl抑制剂、met抑制剂、myc抑制剂、abl抑制剂、her2抑制剂、btk抑制剂、h-ras抑制剂、k-ras抑制剂、pdgfr抑制剂、trk抑制剂、c-kit抑制剂、c-met抑制剂、cdk4/6抑制剂、fak抑制剂、fgfr抑制剂、flt3抑制剂、idh1抑制剂、idh2抑制剂、pdgfra抑制剂或ret抑制剂。

76.根据权利要求63至75中任一项所述的方法，其中所述增强的cd4 t细胞表达所述嵌合tim4受体。