组合物、化合物、枸杞亚精胺富集部位及其用途

本发明涉及中药提取领域，具体而言，本发明涉及一种组合物、一种化合物、一种枸杞亚精胺富集部位，本发明还涉及其在神经细胞保护以及预防和治疗帕金森氏病等疾病中的用途。

背景技术：

1、神经退行性疾病是由遗传、年龄或氧化应激等因素导致的慢性进行性中枢神经退行性变性而产生的疾病的总称，包括阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,ad)、帕金森氏病(parkinson’s disease,pd)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,als)等。神经退行性疾病是慢性高发疾病，严重威胁人类健康和生活质量。

2、pd是一种常见的神经系统退行性疾病，全球pd患者为610万人，我国65岁以上人群患病率为1.7％。pd主要临床症状为肌肉震颤、僵直、运动困难、身体姿势和运动平衡失调，进一步发展还会出现识别、知觉、记忆障碍及明显痴呆。pd的主要病理特征是患者黑质致密体部位多巴胺能神经元变性，纹状体内多巴胺能神经递质含量显著减少。pd运动和非运动症状不仅影响患者的生活质量，也带来巨大的社会和医疗负担。导致多巴胺能神经元变性的原因迄今不明，遗传、感染、免疫功能异常、衰老、体内外的神经毒素等因素对pd发病均起一定的作用。

3、目前pd的治疗主要包括药物治疗、手术治疗和基因治疗。其中药物治疗在临床仍占主要地位。治疗pd的药物主要分为两大类：影响多巴胺能神经的药物和抗胆碱药物。其中影响多巴胺能神经的代表药物为左旋多巴(l-dopa)，该药主要通过补充脑内多巴胺的不足而产生治疗作用，但长期应用l-dopa也可产生运动障碍、精神状态改变等不良反应，因此，临床多以选择性单胺氧化酶b的抑制剂如selegiline与l-dopa合用来增加纹状体局部多巴胺浓度而达到提高l-dopa疗效的目的。抗胆碱药主要用于轻度震颤麻痹，该类药能够阻断纹状体胆碱能受体，同时阻断多巴胺能突触前胆碱能受体，降低胆碱功能而发挥疗效。但由于pd的基本病理改变是多巴胺能神经元的变性，因此，抗胆碱类药物只能作为一种辅助用药。以上这些治疗pd的药物只起到改善症状的作用，对于延缓疾病的进程作用有限，更谈不上根治pd。新作用机制的药物研发迫在眉睫。

4、应用具有潜在神经保护作用的药物来挽救变性的神经元，即神经元保护治疗，是目前国际上最新的治疗神经退行性疾病的策略。该策略指在疾病早期采用适当药物，针对神经退行性疾病的病理生理过程，干扰导致各种病因引起的脑组织一系列的病理及生化反应，延缓或阻断神经元变性的进程，保护神经元以及恢复其功能。若在疾病早期尽早应用神经元保护疗法，可以从根本上逆转或阻断疾病的进程。因而神经元保护是较为理想的治疗神经退行性疾病的策略。国内外研究者开始致力于研发新型有效的神经保护剂。

技术实现思路

1、针对上述现有技术存在的问题，本发明提供了一种组合物、一种化合物以及一种枸杞亚精胺富集部位，其具有优异的神经细胞保护作用，以及良好的帕金森氏病预防和治疗效果。

2、在一个方面，本发明提供了一种组合物，所述组合物包括以下化合物中的至少两种：

3、枸杞亚精胺l(11)

4、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)

5、枸杞亚精胺m(21)

6、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(23)

7、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(26)

8、枸杞亚精胺h/i(28/29)

9、枸杞亚精胺d(30)

10、枸杞亚精胺e(31)

11、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1,n10-二反式咖啡酰基亚精胺(32)

12、枸杞亚精胺f(33)

13、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(34)

14、枸杞亚精胺a(38)

15、n1,n10-二(二氢咖啡酰基)亚精胺(39)

16、n1-顺式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(41)

17、n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)

18、n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(46)

19、n1,n10-二反式咖啡酰基亚精胺(48)。

20、优选的，所述组合物包括：

21、选自以下组a中的至少一种和以下组b中的至少一种，

22、组a：

23、枸杞亚精胺l(11)

24、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)

25、枸杞亚精胺m(21)

26、枸杞亚精胺h/i(28/29)

27、枸杞亚精胺d(30)

28、枸杞亚精胺e(31)

29、枸杞亚精胺f(33)

30、枸杞亚精胺a(38)

31、n1,n10-二(二氢咖啡酰基)亚精胺(39)

32、n1-顺式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(41)

33、n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)

34、n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(46)

35、n1,n10-二反式咖啡酰基亚精胺(48)；

36、组b：

37、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(23)

38、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(26)

39、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1,n10-二反式咖啡酰基亚精胺(32)

40、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(34)。

41、优选的，所述组合物包括以下化合物中的至少两种：

42、枸杞亚精胺l(11)

43、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)

44、枸杞亚精胺m(21)

45、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(23)

46、枸杞亚精胺h/i(28/29)

47、枸杞亚精胺e(31)

48、枸杞亚精胺f(33)

49、枸杞亚精胺a(38)

50、n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)。

51、优选的，所述组合物包括以下化合物中的至少两种：

52、枸杞亚精胺l(11)

53、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)

54、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(23)

55、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(26)

56、枸杞亚精胺e(31)

57、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1,n10-二反式咖啡酰基亚精胺(32)

58、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(34)

59、n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)。

60、优选的，所述组合物包括以下化合物中的至少两种：

61、枸杞亚精胺l(11)

62、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)

63、枸杞亚精胺e(31)

64、n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)。

65、更优选的，所述组合物包括以下组合中的至少一种：

66、枸杞亚精胺l(11)和4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)；

67、枸杞亚精胺l(11)和枸杞亚精胺e(31)；

68、枸杞亚精胺l(11)和n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)；

69、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)和枸杞亚精胺e(31)；

70、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)和n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)；

71、枸杞亚精胺e(31)和n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)。

72、优选的，在所述组合物中，各组分的含量独立地为：

73、

74、本发明的另一个方面，本发明还提供了一种枸杞亚精胺类化合物，其选自：

75、4'-o-β-d-吡喃葡萄糖基-4”-o-(4-o-β-d-吡喃葡萄糖基-β-d-吡喃葡萄糖基)-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(20)

76、4'-o-(4-o-β-d-吡喃葡萄糖基-β-d-吡喃葡萄糖基)-4”-o-β-d-吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(22)

77、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(23)

78、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(26)

79、4'-o-(3-o-β-d-吡喃葡萄糖基-β-d-吡喃葡萄糖基)-4”-o-β-d-吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(27)

80、4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1,n10-二反式咖啡酰基亚精胺(32)

81、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-二氢咖啡酰基-n10-反式咖啡酰基亚精胺(34)

82、3'-o-(3-o-β-d-吡喃葡萄糖基-β-d-吡喃葡萄糖基)-4”-o-β-d-吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(35)

83、4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1,n10-二反式咖啡酰基亚精胺(40)。

84、本发明还提供由上述枸杞亚精胺类化合物中的至少两种组成的组合物。

85、本发明中，所述至少两种包括两种、三种、四种、五种、六种以及更多种。

86、本发明的另一个方面，本发明还提供了一种枸杞亚精胺富集部位。

87、在一个实施方案中，所述枸杞亚精胺富集部位包括本发明所述组合物或包括所述枸杞亚精胺化合物中的任意一种。

88、在一个实施方案中，所述枸杞亚精胺富集部位可以从枸杞子提取得到。

89、优选的，所述枸杞亚精胺富集部位的hplc特征图谱主要包含9个色谱峰，将4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)的保留时间设为1，分别求出主要色谱峰的相对保留时间，枸杞亚精胺l(11)的相对保留时间为0.96，4',4”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(14)的相对保留时间为1.00，枸杞亚精胺m(21)的相对保留时间为1.04，4',3”-o-β-d-二吡喃葡萄糖基-n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(23)的相对保留时间为1.08，枸杞亚精胺h/i(28/29)的相对保留时间为1.12，枸杞亚精胺e(31)的相对保留时间为1.17，枸杞亚精胺f(33)的相对保留时间为1.29，枸杞亚精胺a(38)的相对保留时间为1.32，n1-反式咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰基亚精胺(45)的相对保留时间为1.54。

90、所述枸杞亚精胺富集部位的hplc特征图谱是采用反相高效液相色谱法建立的，色谱条件是：以十八烷基硅烷键和硅胶为固定相，以乙腈-含有0.2％甲酸的水溶液为流动相，进行梯度洗脱，其中，流速为1ml/min，检测波长为280nm，色谱柱温度为30℃。

91、优选的，所述枸杞亚精胺富集部位通过下述方法进行制备：将枸杞子干燥果实用乙醇、甲醇或水提取，减压浓缩提取液得浓缩液；将浓缩液离心，上清液通过大孔吸附树脂柱色谱，用水和/或10％～95％的乙醇-水洗脱适量的柱床体积，收集洗脱液，减压浓缩20-40％乙醇-水洗脱液，得到所述的枸杞亚精胺富集部位。

92、优选的，提取的方法包括热提或超声提取。

93、优选的，提取的次数为1-3次。

94、优选的，乙醇、甲醇或水的量为枸杞子干燥果实质量的5-15倍。

95、优选的，减压浓缩30％乙醇-水洗脱液，得到所述的枸杞亚精胺富集部位。

96、优选的，洗脱步骤包括依次用2-5倍柱床体积的水、2-5倍柱床体积的5-15％乙醇-水、3-6倍柱床体积的20-40％乙醇-水、3-6倍柱床体积的90-98％乙醇-水进行洗脱。更优选的，用3-4倍柱床体积的水、3-4倍柱床体积的10％乙醇-水、4-5倍柱床体积的30％乙醇-水、4-5倍柱床体积的95％乙醇-水进行洗脱。

97、本发明的另一个方面，本发明还提供了所述一种枸杞亚精胺类化合物的分离方法，包括：

98、将枸杞亚精胺富集部位进行中低压液相ods柱层析、制备级hplc色谱分离，得到所述一种枸杞亚精胺类化合物。

99、在一个实施方案中，所述分离方法包括：

100、将枸杞亚精胺富集部位进行中低压液相ods柱层析，依次用体积比为5:95:0.2、10:90:0.2、15:85:0.2、20:80:0.2、30:70:0.2、50:50:0.2和100:0:0.2的甲醇-水-甲酸洗脱，得到f3.1、f3.2、f3.3、f3.4、f3.5和f3.6共6个馏分；将馏分f3.3经反相制备级hplc制备(cosmosil c18 column)，使用流速为8ml/min的体积比为18:82:0.1的甲醇-水-三氟乙酸进行洗脱，得到f3.3.1、f3.3.2、f3.3.3、f3.3.4和f3.3.5共5个馏分；将馏分f3.3.5经反相半制备级hplc制备(phenomenex c18 column)，使用流速为3ml/min的体积比为20:80:0.1的甲醇-水-三氟乙酸进行洗脱，得到f3.3.5.1、f3.3.5.2、f3.3.5.3、f3.3.5.4、f3.3.5.5、f3.3.5.6和f3.3.5.7共7个馏分；

101、将馏分f3.3.5.1经反相半制备级hplc制备(phenomenex c18 column)，使用流速为3ml/min的体积比为8:92:0.1的乙腈-水-三氟乙酸进行洗脱，得到化合物20和22的三氟乙酸盐；将馏分f3.3.5.2经反相半制备级hplc制备(ymc c18 column)，使用流速为3ml/min的体积比为15:85:0.1的甲醇-水-三氟乙酸进行洗脱，得到化合物23、26和27的三氟乙酸盐；将馏分f3.3.5.3经反相半制备级hplc制备(phenomenex c18 column)，使用流速为3ml/min的体积比为17:83:0.1的甲醇-水-三氟乙酸进行洗脱，得到化合物32的三氟乙酸盐；将馏分f3.3.5.4经反相半制备级hplc制备(ymc c18 column)，使用流速为3ml/min的体积比为11:89:0.1的乙腈-水-三氟乙酸进行洗脱，得到化合物34和35的三氟乙酸盐；将馏分f3.3.5.5和f3.3.5.6经反相半制备级hplc制备(ymc c18 column)，使用流速为3ml/min的体积比为12:88:0.1的乙腈-水-三氟乙酸进行洗脱，得到化合物40的三氟乙酸盐。

102、任选的，所述分离方法还包括由目标产物的三氟乙酸盐得到所述目标产物的过程。所述过程的所需要的原料、试剂以及操作为本领域所公知。

103、本发明的另一个方面在于提供一种药物组合物，其包含本发明所述组合物、枸杞亚精胺类化合物或者枸杞亚精胺富集部位。所述药物组合物还可以包含药学上可接受的载体。

104、本发明的另一个方面在于提供一种保健品，其包含本发明所述组合物、枸杞亚精胺类化合物或者枸杞亚精胺富集部位。

105、本发明的另一个方面在于提供一种食品或食品添加剂，其包含本发明所述组合物、枸杞亚精胺类化合物或者枸杞亚精胺富集部位。

106、本发明的另一个方面在于提供所述组合物、枸杞亚精胺类化合物或者所述枸杞亚精胺富集部位在制备药物或保健品中的应用，所述药物用于保护神经细胞。

107、本发明的另一个方面在于提供所述组合物、枸杞亚精胺类化合物或者所述枸杞亚精胺富集部位在制备食品或食品添加剂中的应用，所述食品或食品添加剂用于保护神经细胞。

108、本发明的另一个方面在于提供所述组合物、枸杞亚精胺类化合物或者所述枸杞亚精胺富集部位在制备药物或保健品中的应用，所述药物用于预防或治疗神经退行性疾病。

109、本发明的另一个方面在于提供所述组合物、枸杞亚精胺类化合物或者所述枸杞亚精胺富集部位在制备食品或食品添加剂中的应用，所述食品或食品添加剂用于预防或治疗神经退行性疾病。

110、优选的，所述神经退行性疾病包括帕金森氏病、阿尔茨海默病、路易体痴呆、额颞叶痴呆、肌萎缩性脊髓侧索硬化、亨廷顿病、朊病毒疾病、hiv-相关痴呆和与神经退行性相关的任何形式的认知障碍组成的组中的疾病，优选帕金森氏病。

111、有益效果

112、本发明提供了一种组合物、化合物、枸杞亚精胺富集部位及其用途。本发明的组合物由若干从枸杞子中提取得到的化合物组成，所述化合物尤其来自于枸杞亚精胺富集部位，其中部分为新的枸杞亚精胺化合物。所述组合物、化合物以及枸杞亚精胺富集部位具有优异的神经细胞保护作用以及帕金森氏病等的预防和治疗作用。所述枸杞亚精胺富集部位提取工艺简单，效果优异，其神经保护效果不仅优于枸杞子水提取物和枸杞多糖富集部位，也优于各枸杞亚精胺单体。