靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒及其制备方法及应用

本发明属于抗氧化药物的，具体涉及一种靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒，还涉及该靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒制备方法，以及在抗氧化药物的应用。

背景技术：

1、活性氧(ros)，是指含氧的化学活性分子、离子或自由基，其生化特性是生物有机体生长、健康或衰老所必需的机制的基础，在细胞正常生理功能和组织稳态中起着重要作用。ros主要包括过氧化氢(h2o2)，单线态氧(1o2)，超氧阴离子(·o2-)、羟基自由基(·oh)。ros的稳态，是指ros产生和消除之间的一种平衡状态。该平衡的破坏会导致ros过剩或缺乏，从而诱导疾病的发生发展，包括癌症、自身免疫性疾病、心/脑血管和神经退行性疾病等。在近十年来，通过ros的产生或消除来实现ros调节的策略被广泛应用于疾病治疗的治疗，并取得巨大进展。其中，ros产生策略主要被用于肿瘤治疗，而ros清除策略则主要应用于过量ros引起的相关疾病。然而，由于ros的短暂性和反应性，以及相关生物过程的不可预测性，基于ros治疗的一个主要问题是我们如何在预期的阈值内精确地调节ros浓度，从而启动疾病治疗。

2、随着生物医学的飞速发展，科学家们对疾病的发病机制研究取得了巨大成就。特别地，ros的产生与诸多疾病的发病或进展或预后等存在明显相关性，例如脑卒中、帕金森、骨关节炎、骨质疏松、心脏缺血再灌注以及辐射损伤等大脑、骨、心脏和炎症性肠病等相关的疾病。一般来说，ros的异常积累诱导ros稳态的破坏，随后对各种生物分子(如dna、脂质和蛋白质)等造成损害，以及快速募集大量炎症因子，这些炎症介质能够随着时间的推移在体内引发一系列继发性生理事件。本发明就腹腔放疗导致的生物体氧化还原平衡失调，活性氧增多引起的肠炎为例，探究含硒纳米药物在其中的抗氧化作用机制。

3、基于此，本发明提供一种靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒制备方法，通过对普鲁士蓝进行结构设计，并将纳米硒原位生长在普鲁士蓝表面，经过修饰制备了具有良好抗氧化活性和稳定性的靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒制备方法，解决的技术问题是的现有硒在抗氧化药物中稳定性差的不足。

2、本发明目的还在于提供上述方法制备的靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒。

3、本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

4、一种靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒制备方法，包括以下步骤：

5、(1)微波法合成多孔普鲁士蓝纳米粒子；

6、(2)多孔普鲁士蓝纳米粒子原位生长法合成负载纳米硒的多孔普鲁士蓝；

7、(3)制备靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒：将可活化细胞穿膜肽溶解于超纯水中，加入催化剂n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edc)后搅拌，然后进行透析，向透析液中加入负载纳米硒的多孔普鲁士蓝，离心，超纯水重悬沉淀，在冰浴条件下将沉淀分散至超纯水中，保存，得到靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒。

8、本发明，步骤(3)中所述可活化细胞穿膜肽与超纯水的质量体积比为0.1～1:1mg/ml。

9、进一步地，所述可活化细胞穿膜肽与超纯水的质量体积比为0.25:1mg/ml。

10、步骤(3)中n-羟基琥珀酰亚胺的浓度为0.6mg/ml；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的的浓度为0.2mg/ml计算。

11、本发明，步骤(3)中负载纳米硒的多孔普鲁士蓝与透析液的质量体积比为0.01～4:1mg/ml。

12、优选的，步骤(3)中负载纳米硒的多孔普鲁士蓝与透析液的质量体积比为4:1/ml。

13、本发明，步骤(3)中透析截留分子量为5000da。

14、步骤(3)中保存为在4℃下保存时间不超过一个月。

15、本发明可以做以下改进，步骤(1)中，微波法合成多孔普鲁士蓝纳米粒子，具体过程如下：称取三水合六氰铁(ⅱ)酸钾和聚乙烯吡咯烷酮，加入稀盐酸溶液，搅拌至获得澄清溶液，再加入浓盐酸，搅拌均匀，在微波反应器中进行反应，合成得到多孔普鲁士蓝纳米粒子。

16、进一步地，稀盐酸浓度为0.01～0.05mol/l。更优选为0.02mol/l。

17、浓盐酸浓度为质量分数36％。

18、进一步地，浓盐酸的体积与原溶液体积比在0.0075-0.01之间。

19、进一步地，在微波反应器中，反应温度在70-90℃，反应时间在10-40min。

20、优选地，在微波反应器中，反应温度为80℃，反应时间在40min。

21、本发明还可以做以下改进，步骤(2)中，原位生长法合成负载纳米硒的多孔普鲁士蓝具体过程如下：配置多孔普鲁士蓝溶液，向其中逐渐滴加硒源反应，然后再逐滴加入抗坏血酸溶液，反应至溶液颜色由普鲁士蓝色慢慢变成墨绿色，离心，沉淀重悬，即为负载纳米硒的多孔普鲁士蓝。

22、进一步地，所述硒源为亚硒酸钠、硒粉、硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸中的一种或多种。

23、优选地，硒源为亚硒酸钠。

24、进一步地，加入硒源反应时间为10-30min，加入抗坏血酸反应时间为90-160min。

25、本发明中，离心采用低温高速离心，离心机转速为9000-12000rpm，温度为10-20℃下离心10-20分钟。

26、进一步地，离心采用低温高速离心，离心机转速为12000rpm，温度为10℃下离心15分钟。

27、一种靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒，通过上述方法制备得到。

28、进一步地，所述靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒中普鲁士蓝为亚铁氰化铁，化学式为fe4[fe(cn)6]3。

29、上述靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒在抗氧化药物的应用。

30、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

31、(1)本发明靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒制备方法，基于普鲁士蓝纳米粒子具有良好的抗氧化活性，通过对普鲁士蓝纳米粒子结构进行改造，构建多孔的结构，将纳米硒原位生长在多孔普鲁士蓝表面，并对普鲁士蓝进行修饰，制得了靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒，具有良好的抗氧化活性，解决了纳米硒不稳定，易降解的问题。

32、(2)本发明使用具有催化能力的mof纳米材料(如pb)与硒相结合，充分发挥金属有机框架材料大比表面积、高孔隙率等优点，以此来实现对硒负载量的优化。

33、(3)本发明靶向修饰的多孔普鲁士蓝负载纳米硒将普鲁士蓝和硒两个抗氧化剂强强联合，通过体外的抗氧化试验，如abts和dpph等方法，验证了通过对多孔普鲁士蓝的纳米硒的引入，其抗氧化能力大大提高，有“1+1>2”的效果。通过炎症性肠炎模型，对结肠上皮细胞(ncm460)进行了一系列细胞实验，验证了其低毒性高生物安全性，并为后面的含硒纳米药物在抗氧化中应用打下坚实基础。