一种胶束纳米药物及其制备方法与应用

本发明属于生物医药技术，涉及一种胶束纳米药物及其应用，具体为amg510胶束纳米药物，可显著抑制小鼠kras突变肺癌。

背景技术：

1、肺癌是一种异质性很强的疾病，其复杂的分子表型是肺癌诊断和治疗中最主要的障碍[thai a a, solomon b j, sequist l v, gainor j f, heist r s, lung cancer.lancet 2021, 398 (10299), 535-554]，也是死亡率居高不下的主要原因之一[siegel rl, miller k d, fuchs h e, jemal a, cancer statistics, 2021. ca-a cancerjournal for clinicians 2021, 71 (1), 7-33]；但是肿瘤特异性生物标志物的研发也为肺癌的精准靶向治疗带来了希望[imyanitov e n, iyevleva a g, levchenko e v,molecular testing and targeted therapy for non-small cell lung cancer:current status and perspectives. critical reviews in oncology hematology2021, 157, 103194]。在kras突变的癌细胞中，kras的构象改变使得kras的水解活性减弱，且gap无法激活kras，kras持续处于活跃状态，使癌细胞具有无限增殖的能力。临床研究表明，该类患者对药物的敏感性差、预后差、复发和转移率高，尽管几种mapk通路蛋白的抑制剂（包括mek、braf和egfr的抑制剂）被批准用于kras突变肺癌患者的临床治疗，但使用发现疗效不佳。

技术实现思路

1、本发明公开了一种胶束纳米药物及其应用，将含双硫五元环侧基的小胶束载小分子抑制剂，可显著提高药物在肿瘤的富集，显著诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖，明显延长荷kras g12c突变的肺癌llc小鼠的生存期。实验证实，装载抑制剂的胶束纳米药物（mamg）与αpd-1的联合疗法可解除免疫抑制、激活t细胞，进一步提高小鼠生存期。mamg（20 mpk）与αpd-1的联合治疗使50%小鼠治愈，显示了强大而持久的抗肿瘤免疫反应。

2、本发明采用如下技术方案：

3、一种胶束纳米药物，包括含双硫五元环侧基的小胶束及其装载的小分子抑制剂；优选的，所述胶束纳米药物为双硫五元环侧基的小胶束及其装载的小分子抑制剂。

4、本发明公开了上述胶束纳米药物的制备方法，包括以下步骤，将包括含双硫五元环侧基的聚合物、小分子抑制剂、溶剂的混合液加入缓冲液中，得到所述胶束纳米药物。

5、本发明中，含双硫五元环侧基的聚合物为亲水段-p(疏水单体-dtc) ，或者聚合物为亲水段-p(疏水单体-dtc)、靶向分子-亲水段-p(疏水单体-dtc)。疏水单体包括环酯单体、环碳酸酯单体，优选的，环碳酸酯单体为其他环碳酸酯单体（相对于dtc），比如其他环碳酸酯单体包括三亚甲基环碳酸酯（tmc），所述环酯单体包括己内酯（ε-cl）、丙交酯（la） 或乙交酯（ga）；疏水单体聚合形成其他疏水段，比如ptmc链段、pcl链段；pdtc链段与其他疏水链段组成聚合物的疏水链段。优选的，亲水段为peg，靶向分子为多肽，比如apoe；亲水段为peg，靶向分子为多肽；dtc为双硫五元环碳酸酯单体，其聚合形成pdtc链段；都为现有产品。作为示例，亲水段-p(疏水单体-dtc)为peg-p(cl-dtc)，靶向分子-亲水段-p(疏水单体-dtc)为apoe-peg-p(cl-dtc)。

6、本发明中，含双硫五元环侧基的聚合物中，亲水段的分子量为1～6 kg/mol，疏水链段的分子量为0.6～7 kg/mol；疏水链段中，pdtc链段的分子量占比为20～70%。优选的，亲水段的分子量为1～5 kg/mol，疏水链段的分子量为1～7 kg/mol；疏水链段中pdtc链段分子量占比为30～60%。进一步优选的，亲水段的分子量为1.5～5kg/mol，疏水链段的分子量为1～3 kg/mol；疏水链段中，pdtc链段分子量占比为45～60%。

7、本发明中，小分子抑制剂为kras突变抑制剂，优选为kras g12c抑制剂，进一步优选为针对kras g12c的共价抑制剂，包括amg510、mrtx849、ars1620等。

8、本发明中，聚合物为亲水段-p(疏水单体-dtc)和靶向分子-亲水段-p(疏水单体-dtc)时，靶向分子-亲水段-p(疏水单体-dtc)的质量含量为0～20%不包括0，优选1.5～5%。

9、本发明中，将含双硫五元环侧基的聚合物、小分子抑制剂分别溶于溶剂，再混合，得到包括含双硫五元环侧基的聚合物、小分子抑制剂、溶剂的混合液。优选的，将含双硫五元环侧基的聚合物、小分子抑制剂分别溶于溶剂，再与溶剂混合，得到包括含双硫五元环侧基的聚合物、小分子抑制剂、溶剂的混合液。

10、本发明中，溶剂为寡聚乙二醇，比如数均分子量为100～800的寡聚乙二醇，优选数均分子量为200～500的寡聚乙二醇。混合液加入缓冲液，得到的溶液中，寡聚乙二醇的体积百分数为1～15%，优选为2～10%。

11、本发明还公开了一种联合药物，包括上述胶束纳米药物、免疫检查点抑制剂（比如pd-l1抗体药物），联合用于增强的肿瘤的分子靶向-免疫治疗。

12、本发明公开了一种冻干药粉，由上述胶束纳米药物冻干制备。

13、本发明公开了上述胶束纳米药物、联合药物或者冻干药粉在制备抗肿瘤药物中的应用。优选的，肿瘤为实体瘤，比如肺癌、胰腺癌、结直肠癌。肿瘤包括原位肿瘤或者转移肿瘤。所述抗肿瘤药物的剂型为常规剂型，优选为注射剂。出乎意料的，本发明胶束纳米药物无需靶向分子，可高效达到肿瘤部位，且取得显著好的治疗效果。

14、本发明公开了上述胶束纳米药物、联合药物或者冻干药粉在制备诱导细胞免疫原性死亡药物或者增强t细胞活性、产生记忆t细胞药物中的应用。

15、amg510（sotorasib）理论上可显著抑制kras g12c突变肿瘤的生长，但不影响野生型kras肿瘤的生长，但由于上皮细胞到间充质细胞转变（emt）的诱导作用，amg510治疗存在内在和获得性耐药机制的潜在影响，其口服给药也存在药物利用度低、肿瘤富集量少的缺陷，使其需要多次、高剂量给药（960 mpk，2次/天，21天为一个周期），不仅成本高，还有毒副作用。此外，肺癌晚期患者由于肿瘤大也会累及到其他脏器，经常出现头晕、呕吐等症状，不再适用于口服给药。这些因素使得kras g12c抑制剂的应用受限。针对于此，本发明研制了装载kras g12c抑制剂的胶束纳米药物（mamg），凭借显著增加的药物溶解度、肿瘤部位的富集以及降低的系统毒性等优点在药物递送方面可以得到了广泛的应用。实验表明，通过静脉给药用于荷kras g12c突变小鼠肺癌（llc）的高效分子靶向治疗，以及和pd-1抗体联合用于增强的肺癌分子靶向-免疫治疗，mamg静脉给药与口服给药相比可显著提高药物在肿瘤的富集，显著诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖，明显延长llc荷瘤小鼠的生存期。mamg与αpd-1的联合疗法通过靶向下调amg510治疗中带来的pd-l1上升来解除免疫抑制、激活t细胞，进一步提高小鼠生存期。mamg（20 mpk）与αpd-1的联合治疗使50%小鼠治愈，显示了强大而持久的抗肿瘤免疫反应。