一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法与流程

本发明涉及动物模型建立方法的，具体为一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法。

背景技术：

1、骨关节炎是目前老年人中最常见的致残原因，这种疾病以关节软骨退行性改变引起的疼痛和继发性的行动限制而致残为特征，各种关节部位的创伤、炎症、异常代谢产物沉着、反复出血后大量铁质沉积，以及在关节内注射肾上腺皮质类固醇及烷化剂等，均可使关节软骨细胞或基质直接遭到破坏，或是因破坏软骨的营养而使之退化，逐渐被磨损，产生继发性骨关节病，其中继发于创伤后者，称为创伤性关节炎，此外，某些内分泌异常，如糖尿病，可使软骨细胞异常，容易发生继发性骨关节病；关节结构异常，尤其是对线不良，使相对应的两关节面密合不好，接触不均匀，以致因压力不平衡而失去唧筒作用，使正常有序的软骨营养交换程序受到破坏，久而久之，则发生继发性骨关节病，不幸的是，目前以oa机制为目标的药物治疗相对无效，很大程度上是由于对oa的病因和发病机制仍然了解的不够清楚，在人类oa中发生的复杂的病理生物学改变可能受到了多种遗传和环境因素的影响，为了阐明oa发病和发展过程中发生的分子事件，使用体内模型变得非常必要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，所述双联合混合溶液由胶原蛋白酶和弗氏完全佐剂按比例混合配制而成；

3、双联合混合溶液的使用方法包括以下步骤：

4、s1、选择周龄和体重合适的实验小鼠，先对实验小鼠进行灌胃，灌胃前将1ml量程的注射器的针头取下，装上小鼠灌胃针头，吸取100μg胶原蛋白酶和100μl弗氏完全佐剂的混合溶剂进行灌胃；

5、s2、灌胃成功后立即配置浓度为35mg/100g的三溴乙醇，使用2-甲基-2-丁醇溶解，最后再使用生理盐水稀释成溶液并混匀，制成麻醉剂；

6、s3、对小鼠腹腔注射麻醉剂，待小鼠进入麻醉状态后，将左后肢或者右后肢各关节处的毛发清理干净，接着用碘伏消毒3次，做注射前准备；

7、s4、使用1ml注射器行右膝关节穿刺，回抽未见血液回流后将50μl配置好的胶原蛋白酶和弗氏完全佐剂混匀的溶液，注入踝关节或膝关节的关节腔内，退针后予碘伏棉签按压擦洗伤口，注射用敷帖覆盖伤口，且术后不给予其他特殊处理；

8、s5、造模后每天照观察小鼠关节处的炎症反应，1-2周后取小鼠注射处关节通过关节软骨he染色评估损伤情况。

9、作为优选，所述胶原蛋白酶选用ii型胶原酶，且其≥125u/mg solid。

10、作为优选，所述胶原蛋白酶与弗氏完全佐剂的配制比例控制为1:1。

11、作为优选，所述实验小鼠的品系为c57bl/6，且其周龄为5-6周，体重为18-24克。

12、作为优选，所述步骤s2中的溶解量为2ml/g，且稀释后溶液的比例为1.2％。

13、作为优选，所述步骤s1中对小鼠灌胃时需使其头、颈和身体呈一直线。

14、作为优选，所述步骤s4中对小鼠进行注射时优先注射踝关节，待踝关节注射饱和后，再进行膝关节腔的注射，直至50μl剂量的溶液全部分散于关节软骨周围。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果是：本专利中使用的灌胃和注射不仅在缩短造模时间的同时还能提高造模的速度；同时使用两种促炎药物，能够短时间内促进炎症的形成，增加成模的成功率，此方法操作简单、可重复性强，周期短，可以提升骨关节炎造模的速度和成功率，适用于骨关节炎病理及抗骨关节炎药物研究，能够为日常实验和临床研究提供稳定的动物模型。

技术特征：

1.一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，其特征在于，所述双联合混合溶液由胶原蛋白酶和弗氏完全佐剂按比例混合配制而成；

2.根据权利要求1所述的一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，其特征在于：所述胶原蛋白酶选用ii型胶原酶，且其≥125u/mg solid。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，其特征在于：所述胶原蛋白酶与弗氏完全佐剂的配制比例控制为1:1。

4.根据权利要求1所述的一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，其特征在于：所述实验小鼠的品系为c57bl/6，且其周龄为5-6周，体重为18-24克。

5.根据权利要求1所述的一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，其特征在于：所述步骤s2中的溶解量为2ml/g，且稀释后溶液的比例为1.2％。

6.根据权利要求1所述的一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，其特征在于：所述步骤s1中对小鼠灌胃时需使其头、颈和身体呈一直线。

7.根据权利要求1所述的一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，其特征在于：所述步骤s4中对小鼠进行注射时优先注射踝关节，待踝关节注射饱和后，再进行膝关节腔的注射，直至50μl剂量的溶液全部分散于关节软骨周围。

技术总结
本发明公开了一种小鼠骨关节炎治疗用双联合混合溶液及其使用方法，双联合混合溶液由胶原蛋白酶和弗氏完全佐剂按比例混合配制而成；双联合混合溶液的使用方法包括以下步骤：S1、选择周龄和体重合适的实验小鼠，先对实验小鼠进行灌胃，灌胃前将1mL量程的注射器的针头取下，装上小鼠灌胃针头，吸取100μg胶原蛋白酶和100μL弗氏完全佐剂的混合溶剂进行灌胃，本专利中使用的灌胃和注射不仅在缩短造模时间的同时还能提高造模的速度；同时使用两种促炎药物，能够短时间内促进炎症的形成，增加成模的成功率，此方法操作简单、可重复性强，周期短，可以提升骨关节炎造模的速度和成功率，适用于骨关节炎病理及抗骨关节炎药物研究。

技术研发人员：江箫扬,张龙,刘婕妤,李泳
受保护的技术使用者：河清（深圳）医学研究有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25