一种扣囊复膜酵母发酵产物滤液及其制备方法和应用

本发明涉及化妆品，具体的说是一种扣囊复膜酵母发酵产物滤液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、牡丹全身都是宝，牡丹根、牡丹皮、牡丹叶、牡丹花、牡丹籽油均已列入《已使用化妆品原料名称目录》(2015版)，相对于牡丹其它部位，牡丹叶具有产量大，一年可多次采摘等优点。牡丹叶中含有较高的蛋白质、糖类、脂肪、维生素等营养成分，其中蛋白质含量高达15％，营养丰富很有利用价值。含有还原糖，芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、苯甲酰氧化芍药苷、没食子酸等多酚，以及黄酮、类黄酮、单宁酸、绿原酸等活性功能成分，活性成分中还原糖的含量高达12％，总酚含量8.5％，总黄酮1.6％，芍药苷1.93％，总酚含量比丹皮中还要高。

2、现有技术常采用乙醇、丙酮等有机溶剂提取牡丹中的活性成分，不仅会造成环境污染，而且提取成本高，其提取物中可能会残余有机溶剂，提取后的纯化步骤繁琐，并且实验操作具有一定的危险性，不利于应用于化妆品、食品原料中。

3、为了解决这一问题，现有技术中也有通过微生物发酵的方法，提高牡丹叶功效的技术方案，如中国专利cn114209624a公开了一种牡丹发酵原液及其制备方法与应用，采用植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌对牡丹进行发酵，减少了牡丹中活性成分的损失，制备得到的牡丹发酵液具有较好的抗氧化、美白、滋养皮肤的效果。

4、扣囊复膜酵母(saccharomycopsisfibuligera)又称扣囊拟内孢霉，扣囊复膜酵母胞外发酵产物滤液含有健康肤质不可或缺的游离氨基酸、矿物质、有机酸等自然成分，具有抗炎、抗紫外线、保湿、皮肤修复、抗氧化等多种化妆品功效，长期使用能维持肌肤稳定，改善肤质，使肌肤更加细腻，已列入《已使用化妆品原料名称目录》(2015版)，也是著名化妆品sk-ii神仙水等产品的主要成分。

5、现有技术中，扣囊复膜酵母多利用葡萄糖作为基质进行发酵，但存在抗氧化、美白功效一般的不足。利用牡丹叶与扣囊复膜酵母结合发酵的方案鲜有报道。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种扣囊复膜酵母发酵产物滤液及其制备方法和应用，通过牡丹叶发酵液与扣囊复膜酵母结合，提高发酵滤液的抗衰老、美白、保湿、皮肤修复等功效。

2、为了解决以上技术问题，本发明采用的具体方案为：一种扣囊复膜酵母发酵产物滤液的制备方法，将扣囊复膜酵母种子液加入由牡丹叶滤液制备的培养基中，发酵、过滤，即制得扣囊复膜酵母发酵产物滤液。

3、作为上述技术方案的进一步优化：包括如下步骤：

4、s1：将牡丹叶粉碎，制得牡丹叶粉末；

5、s2：将牡丹叶粉末与有机溶剂混合，超声提取，抽滤制得牡丹叶滤液；

6、s3：牡丹叶滤液浓缩后加入蛋白胨、酵母膏和葡萄糖，灭菌处理制得扣囊复膜酵母发酵培养基；

7、s4：向扣囊复膜酵母发酵培养基中加入扣囊复膜酵母种子液进行一次发酵，然后超声处理；再进行二次发酵，制得初始发酵液；

8、s5：将初始发酵液过滤、离心处理，离心后取上清液高温瞬时灭菌，冷却至室温，加入防腐剂即制得扣囊复膜酵母发酵产物滤液。

9、作为上述技术方案的进一步优化：步骤s2中牡丹叶滤液的制备方法具体为：将牡丹叶粉末与70％乙醇按照质量体积比1:10的比例混合均匀，超声波提取，抽滤得滤液和滤渣，保留滤液，滤渣与50％乙醇按照质量体积比1:8的比例混合均匀，第二次超声波提取，抽滤得滤液和滤渣，保留滤液，滤渣与20％乙醇按照质量体积比1:8的比例混合均匀，第三次超声波提取，抽滤得滤液和滤渣，合并3次滤液，即制得牡丹叶滤液。

10、作为上述技术方案的进一步优化：步骤s3中，首先在60-70℃的条件下将牡丹叶滤液浓缩至原体积的二分之一，再加入蛋白胨、酵母膏、葡萄糖。

11、作为上述技术方案的进一步优化：步骤s4中，扣囊复膜酵母种子液的制备方法为：取出扣囊复膜酵母甘油冻存管，于超净台中无菌操作划线至固体培养基平板上，放置于28～32℃培养箱中，倒置培养3天，长出菌落后，挑取单菌落，接种入液体培养基中，并置于30℃、180rpm/min摇床中培养48h得到扣囊复膜酵母种子液。

12、作为上述技术方案的进一步优化：步骤s4中，扣囊复膜酵母发酵培养基中加入扣囊复膜酵母种子液的体积比为3％-10％。

13、作为上述技术方案的进一步优化：步骤s4中超声处理的功率为50-70w，0.5-0.7w/ml，频率30-50khz，温度28-32℃，超声处理的时间为50-70min。

14、作为上述技术方案的进一步优化：步骤s4中一次发酵和二次发酵的条件均为：温度28-32℃，转速180rpm/min，发酵时间20h-30h。

15、采用上述扣囊复膜酵母发酵产物滤液的制备方法制备的扣囊复膜酵母发酵产物滤液。

16、扣囊复膜酵母发酵产物滤液在化妆品中的应用。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

18、本发明提供的扣囊复膜酵母发酵产物滤液具有良好的抗皮肤衰老功效、美白功效、保湿功效、具有良好的的皮肤修复作用，所提供的扣囊复膜酵母发酵产物滤液中总黄酮、总多酚的含量、多种活性成分含量显著提高。

19、本发明提供的扣囊复膜酵母发酵产物滤液，不仅微生物对牡丹叶中活性成分有转化作用，而且牡丹叶中成分也影响了扣囊复膜酵母的胞外代谢产物。在发酵过程中，由于牡丹叶和扣囊复膜酵母的相互作用，大大提高了扣囊复膜酵母发酵滤液的保湿、美白、抗氧化等作用。在扣囊复膜酵母发酵过程中加入牡丹叶，其抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性并不是两者成分的简单叠加，而是在发酵过程中，牡丹叶中低活性成分转化为高活性成分，且牡丹叶中的活性成分影响了扣囊复膜酵母的胞外代谢，共同提高了扣囊复膜酵母胞外发酵滤液的抗氧化活性和美白活性。

20、本发明以牡丹叶滤液作为基质供扣囊复膜酵母发酵，可以显著提高扣囊复膜酵母发酵产物滤液的抗氧化功效和美白功效。发酵过程中，扣囊复膜酵母分泌多种胞外酶，酶解牡丹叶细胞壁，促使其使活性成分溶出，且牡丹叶中大量的黄酮、多酚和酸类、糖类等相结合，以不溶性结合酚的形式固定于牡丹叶细胞壁、细胞间质中，通过扣囊复膜酵母发酵，酶解糖苷键，脂健等，结合酚转化为可溶性的游离酚，使得黄酮、多酚等含量升高，继而引起抗氧化活性和酪氨酸酶抑制率的提高。

21、本发明提供的扣囊复膜酵母发酵产物滤液，采用了低频低功率超声波辅助扣囊复膜酵母发酵的方法。可以促进扣囊复膜酵母的生长，超声波对扣囊复膜酵母具有一定的损伤作用，这种损伤是可逆的，扣囊复膜酵母损伤后，细胞膜的通透性增加，胞内各位酶类、胞内物质的溶出也增加，胞内酶作用于牡丹叶的各个成分，增加了扣囊复膜酵母环境营养物质的浓度。另外，扣囊复膜酵母在牡丹叶悬液中快速生长，形成树枝状的假菌丝，超声具有分散所用，使假菌丝分开为单个酵母细胞，增加了和外界物质的交换面积，更便于获得营养成分，促进了扣囊复膜酵母的生长。另一方面，扣囊复膜酵母的快速生长，加速了牡丹叶中活性成分的转化，两者相互作用，共同提高了扣囊复膜酵母牡丹叶发酵原液的抗氧化和美白功效。