一种治疗风湿骨病的中药组合物及其制备工艺的制作方法

本发明涉及中药，具体涉及一种治疗风湿骨病的中药组合物及其制备工艺。

背景技术：

1、风湿骨病主要是由于风寒引起的血液循环不通畅，致使包括肌、韧带、滑囊、筋膜的营养供给不良导致的疾病。关节病变除有疼痛外尚伴有肿胀和活动障碍，呈发作与缓解交替的慢性病程，部分患者且可出现关节致残和内脏功能衰竭。风湿骨病是缠绵难愈的慢性全身性疾病，初发时起病缓慢，患者先是几周内到几个月的疲倦乏力，体重减轻、胃纳不佳、低热和手足麻木刺痛等前驱症状。随后发生关节疼痛、僵硬、肿大周围皮肤温热、潮红自动和被动运动都引起疼痛。开始一、二个关节受累，往往是游走性。以后发展为对称性多关节炎从四肢远端的小关节开始再累及其它关节。其次为掌指、趾、腕、膝、肘、踝、肩和髋关节等，晨间关节僵硬，肌肉酸痛。随着风湿、类风湿关节炎病变的发展，患者不规则发热，脉搏加快，显著贫血，关节成僵硬而畸形，导致残疾。膝、肘、手指、腕部成固定屈位，手指向外侧成半脱位，患者失去生活自理能力，终日不离床褥，不能动弹而极度痛苦。

2、目前，治疗风湿骨病、关节疼痛的药物和方法很多，西药制剂主要用以缓解疼痛，消除炎症，毒副作用较大，不宜长期服用，且只能缓解疼痛，不能彻底治愈；中医对此类病症的治疗方法较多，现有技术中，用于风湿痹证的止痛类中药搽剂种类也较多，虽然具有一定的治疗作用，但见效慢、时间长，对顽固性病痛患者不能起到预期的治疗效果。

3、中国专利申请cn1850192a公开了一种治疗脑血栓后遗症、风湿性关节炎的药物组合物及制备方法，采用夏天无、夏天无总碱、麝香、稀莶草、鸡血藤、威灵仙、制草乌、当归、粉防己、苍术、牛膝、独活、制乳香、制没药、防风、骨碎补、马钱子、僵蚕、全蝎等组成，虽然可舒筋活络、行血止痛，但疗程长。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提出一种治疗风湿骨病的中药组合物及其制备工艺，具有很好的抗氧化、抗炎、调节免疫力，改善风湿寒、热痹，减轻关节损伤和关节肿胀，有效的减轻风湿骨病的症状，预防和治疗病情发展。

2、本发明的技术方案是这样实现的：

3、本发明提供一种治疗风湿骨病的中药组合物的制备工艺，将由苦参、制草乌提取得到的生物碱组分，厚藤提取得到的苯丙素类组分，肉桂、薏苡仁提取得到的挥发油组分，秦艽提取得到的秦艽提取物，三七和人参发酵提取得到的皂苷组分，以及将上述药渣发酵后与叶绿素铜钠反应得到的发酵-叶绿素铜钠产物，益生元和益生菌包埋得到的包埋颗粒和柳氮磺吡啶混合均匀，制得治疗风湿骨病的中药组合物。

4、作为本发明的进一步改进，包括以下步骤：

5、s1.生物碱组分的制备：将苦参、制草乌分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，加入混合溶剂中，加热提取，过滤，固渣留用，滤液浓缩，用强酸型阳离子交换树脂柱精制，收集12-20wt％盐酸溶液的洗脱液，氯仿萃取，萃取液减压除去溶剂，获得生物碱组分；

6、所述混合溶剂为氯仿、乙醇和氨水的混合液；

7、s2.苯丙素类组分的制备：将厚藤经过粉碎，加入乙醇水溶液中，加入酶酶解，过滤，滤渣留用，滤液回收乙醇，干燥，产物溶于水中，调节溶液ph至为2.5-3.5，用nka-9大孔树脂精制，收集50％的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，获得苯丙素类组分；

8、s3.挥发油组分的制备：将肉桂、薏苡仁分别洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，获得挥发油组分，固体留用；

9、s4.秦艽提取物的制备：将秦艽洗净，粉碎，加水沸腾提取，过滤，固渣留用，滤液滴加氨水调节溶液ph值为9-10，加热反应，浓缩后经d101大孔吸附树脂精制，收集30％和60％的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，获得秦艽提取物；

10、s5.皂苷组分的制备：将三七和人参分别洗净，干燥，粉碎，加入水中，加入碳源、氮源，灭菌，接种干酪乳杆菌和瑞士乳杆菌菌种种子液，发酵培养，过滤，固渣用无菌水洗涤收集洗脱的菌液，菌液浓缩，得到浓缩菌液，滤液浓缩，经d101大孔吸附树脂精制，收集45-50％的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，获得皂苷组分；

11、s6.酶促发酵：将步骤s1、步骤s2、步骤s3、步骤s4、步骤s5中的固渣混合均匀，加入水中，加入复合酶酶解，灭菌，接种步骤s6中获得的浓缩菌液，酶促发酵，过滤，固体用无菌水洗涤收集洗脱的菌液，冷冻干燥，得到益生菌；滤液中加入叶绿素铜钠，搅拌反应，透析，透析液冷冻干燥，获得发酵-叶绿素铜钠产物；

12、s7.益生元的制备：将菊粉、羧甲基茯苓多糖混合均匀，制得益生元；

13、s8.包埋颗粒的制备：将步骤s6制得的益生菌、s7制得的益生元混合均匀，加入水中，加入海藻酸钠和卵磷脂，搅拌混合均匀，得到水相；将水相加入鱼油中，乳化，滴加氯化钙溶液，常温固化，制得包埋颗粒；

14、s9.复合物的制备：将步骤s8制得的包埋颗粒与柳氮磺吡啶混合均匀，制得复合物；

15、s10.治疗风湿骨病的中药组合物的制备：将步骤s1制得的生物碱组分、步骤s2制得的苯丙素类组分、步骤s3制得的挥发油组分、步骤s4制得的秦艽提取物、步骤s5制得的皂苷组分、步骤s6制得的发酵-叶绿素铜钠产物、步骤s9制得的复合物混合均匀，制得治疗风湿骨病的中药组合物。

16、作为本发明的进一步改进，步骤s1中所述苦参、制草乌的质量比为7-10:12-15，所述混合粉和混合溶剂的固液比为1：4-7g/ml，所述混合溶剂氯仿、乙醇和氨水按照体积比为3-5:2-3:1-1.2的混合液，所述氨水的浓度为20-22wt％，所述加热提取的温度为40-50℃，时间为2-4h，所述强酸型阳离子交换树脂柱选自d001、cd350、cd450、cd550、cd650中的至少一种，所述浓缩为浓缩至相对密度为1.1-1.15；步骤s2中所述厚藤和乙醇水溶液的固液比为1:5-10g/ml，所述乙醇水溶液的浓度为50-60wt％，所述酶为纤维素酶，添加量为体系总质量的1-2wt％，所述酶解的温度为50-55℃，时间为0.5-1h。

17、作为本发明的进一步改进，步骤s3中所述肉桂、薏苡仁的质量比为2-4：7-10，所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25-30mpa，萃取温度：35-45℃，co2流量：7-10l/h，萃取时间：1-3h，所述夹带剂为乙醇，添加量为1-2wt％；步骤s4中所述秦艽和水的固液比为1:6-8g/ml，所述沸腾提取的时间为2-4h，所述加热反应的温度为40-45℃，时间为0.5-1h，所述浓缩为浓缩至相对密度为1.1-1.15。

18、作为本发明的进一步改进，步骤s5中所述三七、人参、碳源、氮源、水的质量比为5-7:1-2:2-3:1-2:100，所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、果糖、低聚木糖中的至少一种，所述氮源选自鱼骨粉、蛋白胨、氯化铵、硝酸钠、硝酸铵、硝酸钾中的至少一种，所述干酪乳杆菌和瑞士乳杆菌菌种种子液的含菌量为108-109cfu/ml，所述干酪乳杆菌和瑞士乳杆菌菌种种子液的接种量分别为2-3v/v％和1-2v/v％，所述发酵培养的条件为36-38℃，150-200r/min，发酵培养36-48h，所述浓缩菌液的含菌量为1010-1011cfu/ml，所述浓缩为浓缩至相对密度为1.1-1.15；步骤s6中所述步骤s1中的固渣、步骤s2中的固渣、步骤s3中的固渣、步骤s4中的固渣、步骤s5中的固渣的质量比为5-7:2-4:2-3:3-5:3-5，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶的混合物，质量比为7-10:2-4，所述复合酶的添加量为体系总质量的2-4wt％，所述酶解的温度为40-45℃，时间为1-3h，所述浓缩菌液的接种量为0.5-1v/v％，所述酶促发酵的条件为37-40℃，150-200r/min，酶促发酵培养36-48h，所述滤液和叶绿素铜钠的质量比为1000:7-12，所述搅拌反应的时间为0.5-1h，所述透析的透析袋的孔径为1k-2kd。

19、作为本发明的进一步改进，步骤s7中所述菊粉、羧甲基茯苓多糖的质量比为10-12:7-10；步骤s8中所述益生菌、益生元、水、海藻酸钠、卵磷脂、鱼油的质量比为5-7:3-5:150-200:12-15:0.5-1:300-350。

20、作为本发明的进一步改进，步骤s9中所述包埋颗粒与柳氮磺吡啶的质量比为20-30:0.5-1；步骤s10中所述生物碱组分、苯丙素类组分、挥发油组分、秦艽提取物、皂苷组分、发酵-叶绿素铜钠产物、复合物的质量比为5-7：3-5：1-2:3-5：4-6:7-10：12-15。

21、作为本发明的进一步改进，具体包括以下步骤：

22、s1.生物碱组分的制备：将7-10重量份苦参、12-15重量份制草乌分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，加入混合溶剂中，所述混合粉和混合溶剂的固液比为1：4-7g/ml，加热至40-50℃，提取2-4h，过滤，固渣留用，滤液浓缩至相对密度为1.1-1.15，用强酸型阳离子交换树脂柱精制，收集12-20wt％盐酸溶液的洗脱液，氯仿萃取，萃取液减压除去溶剂，获得生物碱组分；

23、所述混合溶剂氯仿、乙醇和氨水按照体积比为3-5:2-3:1-1.2的混合液，所述氨水的浓度为20-22wt％；

24、s2.苯丙素类组分的制备：将厚藤经过粉碎，加入50-60wt％的乙醇水溶液中，所述厚藤和50-60wt％的乙醇水溶液的固液比为1:5-10g/ml，加入纤维素酶，添加量为体系总质量的1-2wt％，50-55℃酶解0.5-1h，过滤，滤渣留用，滤液回收乙醇，干燥，将10重量份产物溶于100重量份水中，调节溶液ph至为2.5-3.5，用nka-9大孔树脂精制，收集50％的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，获得苯丙素类组分；

25、s3.挥发油组分的制备：将2-4重量份肉桂、7-10重量份薏苡仁分别洗净，干燥，粉碎，经过超临界流体萃取，产物回收乙醇，获得挥发油组分，固体留用；

26、所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25-30mpa，萃取温度：35-45℃，co2流量：7-10l/h，萃取时间：1-3h，所述夹带剂为乙醇，添加量为1-2wt％；

27、s4.秦艽提取物的制备：将秦艽洗净，粉碎，加水混合，所述秦艽和水的固液比为1:6-8g/ml，沸腾提取2-4h，过滤，固渣留用，滤液滴加氨水调节溶液ph值为9-10，加热至40-45℃，搅拌反应0.5-1h，浓缩至相对密度为1.1-1.15，经d101大孔吸附树脂精制，收集30％和60％的乙醇洗脱液，合并洗脱液，回收乙醇，干燥，获得秦艽提取物；

28、s5.皂苷组分的制备：将5-7重量份三七和1-2重量份人参分别洗净，干燥，粉碎，加入100重量份水中，加入2-3重量份碳源、1-2重量份氮源，灭菌，接种干酪乳杆菌和瑞士乳杆菌菌种种子液，接种量分别为2-3v/v％和1-2v/v％，36-38℃，150-200r/min，发酵培养36-48h，过滤，固渣用无菌水洗涤收集洗脱的菌液，菌液浓缩，得到浓缩菌液，滤液浓缩至相对密度为1.1-1.15，经d101大孔吸附树脂精制，收集45-50％的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，获得皂苷组分；

29、所述干酪乳杆菌和瑞士乳杆菌菌种种子液的含菌量为108-109cfu/ml；

30、s6.酶促发酵：将5-7重量份步骤s1中的固渣、2-4重量份步骤s2中的固渣、2-3重量份步骤s3中的固渣、3-5重量份步骤s4中的固渣、3-5重量份步骤s5中的固渣混合均匀，加入1000重量份水中，加入复合酶，所述复合酶的添加量为体系总质量的2-4wt％，40-45℃酶解1-3h，灭菌，接种步骤s6中获得的浓缩菌液，接种量为0.5-1v/v％，37-40℃，150-200r/min，酶促发酵培养36-48h，过滤，固体用无菌水洗涤收集洗脱的菌液，冷冻干燥，得到益生菌；向1000重量份滤液中加入7-12重量份叶绿素铜钠，搅拌反应0.5-1h，用孔径为1k-2kd透析3-5h，透析液冷冻干燥，获得发酵-叶绿素铜钠产物；

31、所述复合酶为纤维素酶和果胶酶的混合物，质量比为7-10:2-4；

32、s7.益生元的制备：将10-12重量份菊粉、7-10重量份羧甲基茯苓多糖混合均匀，制得益生元；

33、s8.包埋颗粒的制备：将5-7重量份步骤s6制得的益生菌、3-5重量份s7制得的益生元混合均匀，加入150-200重量份水中，加入12-15重量份海藻酸钠和0.5-1重量份卵磷脂，搅拌混合均匀，得到水相；将水相加入300-350重量份鱼油中，乳化，滴加50重量份3-5wt％氯化钙溶液，常温固化20-30min，制得包埋颗粒；

34、s9.复合物的制备：将20-30重量份步骤s8制得的包埋颗粒与0.5-1重量份柳氮磺吡啶混合均匀，制得复合物；

35、s10.治疗风湿骨病的中药组合物的制备：将5-7重量份步骤s1制得的生物碱组分、3-5重量份步骤s2制得的苯丙素类组分、1-2重量份步骤s3制得的挥发油组分、3-5重量份步骤s4制得的秦艽提取物、4-6重量份步骤s5制得的皂苷组分、7-10重量份步骤s6制得的发酵-叶绿素铜钠产物、12-15重量份步骤s9制得的复合物混合均匀，制得治疗风湿骨病的中药组合物。

36、本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的治疗风湿骨病的中药组合物。

37、本发明进一步保护一种上述治疗风湿骨病的中药组合物在制备治疗或辅助治疗风湿骨病的药物中的应用。

38、本发明具有如下有益效果：

39、本发明治疗风湿骨病的中药组合物包括由苦参、制草乌提取得到的生物碱组分，厚藤提取得到的苯丙素类组分，肉桂、薏苡仁提取得到的挥发油组分，秦艽提取得到的秦艽提取物，三七和人参发酵提取得到的皂苷组分，以及将上述药渣发酵后与叶绿素铜钠反应得到的发酵-叶绿素铜钠产物，益生元和益生菌包埋得到的包埋颗粒和柳氮磺吡啶，制得的治疗风湿骨病的中药组合物具有很好的抗氧化、抗炎、调节免疫力，改善风湿寒、热痹，减轻关节损伤和关节肿胀，有效的减轻风湿骨病的症状，预防和治疗病情发展。

40、其中，厚藤具祛风除湿、消痈散结、拔毒消肿的功效，其中，提取得到的丁香酚、4-乙烯基愈创木酚等苯丙素类成分可显著抑制前列腺素合成，其抗炎机制可能与抑制白细胞趋化性、防止白细胞产生氧自由基，抑制角叉菜胶致小鼠足跖肿胀、耳肿胀及前列腺素合成，改善风湿寒、热痹关节损伤，减轻关节肿胀，抑制血清中炎性因子生成。

41、制草乌具有祛风除湿、温经止痛的功效，其主要成分乌头类生物碱，包括乌头碱、新乌头碱，有镇痛、抗炎、调节免疫以及抗肿瘤作用，抑制前列腺素e2(pge2)的合成、降低毛细血管通透性、拮抗炎症介质及细胞因子，乌头碱、新乌头碱等可作为na+通道的激活剂，并与其通道结合位点相结合，致使其去极化而阻滞疼痛传导，乌头碱可抑制t细胞及其亚群，从而间接抑制b细胞的分化，发挥出细胞免疫和体液免疫的调节作用。

42、苦参中的生物碱苦参碱具有抗病毒、抗炎和调节免疫等作用，可以减轻风湿骨病患者的压痛感，降低炎症因子水平，抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶b信号通路，抑制胶原诱导的关节炎滑膜血管生成、促进滑膜细胞凋亡。

43、从薏苡仁、肉桂中提取得到的挥发油对细胞免疫、体液免疫有促进作用，同时也具有抗炎作用。

44、秦艽中含有大量的龙胆苦苷，龙胆苦苷能抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀、醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加，对炎症早期渗出有一定的抑制作用，有持续镇痛作用，其利湿浊作用有利于尿酸的排泄，同时，在提取处理过程中龙胆苦苷可以与氨作用转化得到生物碱秦艽碱甲，能减轻关节肿,进一步提高抗风湿效果。

45、三七和人参中含有丰富的皂苷，同时，通过发酵菌的发酵作用下，普通皂苷可以向高活性的稀有皂苷转化，其中，三七皂苷r1、人参皂苷rg1、rg3、rh2可抑制mapk/erk途径的活化，限制炎性因子白介素-6(il-6)和il-1β的释放，抑制关节组织中的金属蛋白酶合成，减少炎症反应，减缓关节软骨降解，从而起到缓解风湿骨病的病情。三七总皂苷可通过il-1β/nf-kb信号通路的调节，使椎间盘退变速度减慢。三七皂苷和人参皂苷的协同作用下，可以起到抗炎、抑菌、抑制血小板聚集、改善微循环、抗自由基损伤、抗血栓、改善骨关节微循环、促进损伤修复的作用。

46、益生菌可以通过调节肠道菌群的作用下，有助于形成较厚的黏膜屏障以抵抗病原体，抑制血清淀粉样蛋白a、肿瘤坏死因子α和纤维蛋白原的产生，从而改善风湿骨病的病情。摄入干酪乳杆菌能够降低il-10、肿瘤坏死因子α、il-12的分泌,摄入瑞士乳杆菌可以显著降低抗原特异性igg水平和炎症反应，抑制风湿骨疾病进展,病情进一步缓解，两者具有协同增效的作用。同时，通过加入益生元，能改变风湿骨病患者肠道菌群结构，增加肠道细菌产生丁酸盐及丙酸盐等短链脂肪酸，具有免疫调节作用，能间接改善风湿骨病的病情，另外，益生元，包括菊粉和羧甲基茯苓多糖，还可以与海藻酸钠一同形成包埋颗粒的壳层，加强包埋颗粒抵抗胃酸、胆碱的能力，从而保证益生菌能够顺利到达肠道，益生元也在肠道被益生菌利用，从而起到很好的调节作用。

47、另外，复合物中添加的柳氮磺吡啶虽然在肠道内无直接的活性，但是，其到达远端肠道后刺激肠道微生物组基因编码偶氮还原酶切割n-n双键释放出有活性的5-氨基水杨酸，实现抗炎作用。同时,柳氮磺吡啶可诱导肠道微生物组基因簇的表达，编码硫氧还蛋白还原酶和硝酸盐还原酶，硫氧还蛋白还原酶可抑制过氧化氢抑制风湿骨病患者中滑膜细胞的凋亡,从而改善风湿骨病患者关节疼痛症状。