一种预防或治疗水痘-带状疱疹病毒相关疾病的免疫组合物产品及其制备方法与流程

本发明涉及生物医药，特别涉及预防或治疗水痘-带状疱疹病毒(vzv)相关疾病的免疫组合物产品及其生产制备方法。

背景技术：

1、带状疱疹是由水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,vzv)初次感染人体导致水痘后潜伏在脊髓后角神经元中，受刺激再活化引起的一种沿神经节段分布的红斑水疱样皮肤病，较常见于高龄、免疫缺陷、使用免疫抑制剂等患者，其症状及遗留的后遗神经痛给患者造成很大困扰。到目前为止，该疾病一直没有有效的治疗药物，接种疫苗成为防治该类疾病的唯一途径。

2、多数人携带vzv时病毒潜伏在神经元内，在经历不同的潜伏期后，vzv便可释放并感染其他细胞。带状疱疹疫苗的主要保护机制是：通过诱导细胞免疫反应，抑制病毒在神经元内被激活、并通过神经扩散到细胞，体液免疫产生的抗体也有一定的保护作用。

3、当前全球范围内已问世共有两种带状疱疹疫苗，重组疫苗(gsk)和减毒疫苗(merck)，两种疫苗均覆盖50岁及以上人群。ge蛋白是vzv表达最丰富的一种糖蛋白，具有较高免疫原性。重组疫苗产品由活性成分、as01b佐剂系统、其他辅料组成。活性成分为vzv的糖蛋白e(ge)，其系通过dna重组技术在中国仓鼠卵巢(cho)细胞中转染蛋白编码序列、表达特异性抗原，经纯化、冻干制成。注射用ge蛋白为无菌白色粉末。as01b佐剂系统混悬液系含有两种免疫增强成分(3-o-去酰基-4’-单磷酰脂a(mpl)和皂树皂苷qs-21)的脂质体制剂。注射用混悬液(as01b佐剂系统)为泛乳光的无色到浅褐色液体。年龄增长引起的cd4+t细胞数量减少及免疫反应下降是激活vzv病毒的关键因素，对特异性t细胞免疫力的增强是带状疱疹疫苗的核心竞争力，(gsk)所含的佐剂as01b可有效持续促进50岁以上人群体内特异性cd4+t细胞的发育和分化。相比于(merck)，(gsk)对带状疱疹和带状疱疹引发的疱疹后神经痛均有更强的防护效果，二者均已被批准应用于多个国家。成为国内首个上市的带状疱疹疫苗，在国内尚未上市。

4、虽然使用as01b的带状疱疹疫苗能把疫苗的51％保护力提高到超过90％，但是/as01b也具有明显的不足，佐剂产能受到限制且佐剂导致的疫苗副作用较大。as01b佐剂诱导炎症反应的能力很强，接种者在接种后常表现为全身性肌肉关节痛、乏力、发热等症状，鉴于此，很多适龄人群不愿接种该疫苗，疫苗的接种率、依从性都大大降低。因此，研发新的副作用小的疫苗，增加适龄人群的接种率、依从性，具有深远的临床意义。

技术实现思路

1、本发明提供了一种水痘-带状疱疹疫苗及其制备方法，所述疫苗为纳米颗粒疫苗，该疫苗可避免采用as01b佐剂，从而消除或降低由该类佐剂引发的副作用；同时，与疫苗相比，所述纳米颗粒疫苗的t细胞免疫原性和抗体免疫原性均高于从而可提供比更高的保护效力，在临床上具有深远价值。同时，还解决了目前水痘-带状疱疹疫苗技术和供应种类不足的问题，填补了纳米颗粒类型的水痘-带状疱疹疫苗供应基本空白的现状。

2、纳米颗粒疫苗：基于纳米颗粒蛋白形成的疫苗，纳米颗粒蛋白主要用于展示抗原。

3、本发明提供了一种免疫原性复合物，其包括由抗原组分和颗粒蛋白组分通过共价结合反应形成的蛋白。

4、本发明提供一种免疫组合物，其含有本发明中的免疫原性复合物和药学上可接受的载体，可以是冻干制剂剂型或注射液制剂剂型。

5、本发明提供一种疫苗，其含有本发明中的免疫组合物和佐剂。

6、本发明提供了一种免疫原性复合物，其包含：

7、(1)抗原组分，其包含水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白或其免疫原性片段；

8、(2)颗粒蛋白组分，其包含纳米颗粒蛋白。

9、本发明提供了一种免疫原性复合物，其包含：

10、(1)抗原组分，其包含水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白或其免疫原性片段、连接

11、肽1和结合肽1；

12、(2)颗粒蛋白组分，其包含纳米颗粒蛋白、连接肽2和结合肽2；

13、所述抗原组分与所述颗粒蛋白组分之间通过结合肽1与结合肽2共价结合。

14、本发明提供了一种免疫原性复合物，其包含：

15、(1)抗原组分，由水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白或其免疫原性片段、连接

16、肽1和结合肽1组成；

17、(2)颗粒蛋白组分，由纳米颗粒蛋白、连接肽2和结合肽2组成；

18、所述抗原组分与所述颗粒蛋白组分之间通过结合肽1与结合肽2共价结合。

19、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述抗原组分由vzv ge蛋白在c端通过连接肽1与结合肽1融合形成。

20、在一些实施方案中，“免疫原性片段”指的是寡肽、多肽或蛋白质的一部分，其具有免疫原性且当施用于对象后引发保护性免疫应答。

21、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述颗粒蛋白组分由纳米颗粒蛋白在n端通过连接肽2与结合肽2融合形成。

22、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，抗原组分从n端到c端依次为：水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白或其免疫原性片段、连接肽1和结合肽1；颗粒蛋白组分从n端到c端依次为：结合肽2、连接肽2、纳米颗粒蛋白；所述抗原组分与所述颗粒蛋白组分之间通过结合肽1与结合肽2共价结合，形成免疫原性复合物。

23、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述抗原组分和/或所述颗粒蛋白组分中包含组氨酸标签。

24、本发明提供了一种免疫原性复合物，其包含：

25、(1)抗原组分，其包含水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白或其免疫原性片段、连接肽1；

26、(2)颗粒蛋白组分，其包含纳米颗粒蛋白亚基。

27、在一些实施方案中，vzv ge蛋白与纳米颗粒蛋白的一个亚基连接形成融合蛋白，所述融合蛋白再与所述纳米颗粒蛋白的另一个亚基结合。

28、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述颗粒蛋白组分包含纳米颗粒蛋白，优选地，纳米颗粒蛋白可以是病毒样颗粒蛋白,病毒样颗粒蛋白由病毒结构蛋白形成，优选地，由细菌噬菌体衣壳蛋白ap205形成。所述颗粒蛋白组分和所述抗原组分可通过共价结合形成颗粒结构。

29、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所用的纳米颗粒蛋白还可选自：npm颗粒、铁蛋白颗粒(ferritin)、i53-50颗粒等。

30、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所用的纳米颗粒蛋白i53-50颗粒由i53-50a、i53-50b两个亚基组成。

31、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述结合肽1含有如seq id no:1所示的氨基酸序列。

32、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述结合肽2含有如seq id no:2所示的氨基酸序列。

33、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述连接肽1包括(ggggs)n或(eaaak)n的氨基酸序列，n可取大于0且小于等于5的整数。在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述连接肽1优选为(ggggs)3(seq id no：3)、(eaaak)3(seq id no：4)或ggsggsgsekaakaeeaar(seq id no：5)。

34、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述连接肽2包括(ggs)n、(sggsgg)n或(gsggsggsg)n的氨基酸序列，n可取大于0且小于等于10的整数。在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述连接肽2优选为ggsggsggs(seq id no：6)、ggsggsggsggs(seq id no:7)、sggsgg(seq id no：8)、gsggsggsg(seq idno:9)。

35、优选地，本发明的水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白采用氨基酸序列如seq id no：10、seq id no:11或seq id no:12所示的信号肽表达；更优选信号肽序列为seq id no:12。

36、具体地，由于vzv ge蛋白前544氨基酸的序列都不属于跨膜区，具有抗原性，因此本发明vzv ge蛋白的设计依据vzv ge第1-544氨基酸序列(vzv ge第1-544位氨基酸如seqid no:13所示)，其中第1-30位氨基酸为vzv ge固有的天然分泌信号肽，vzv ge第31-544为不含信号肽的氨基酸序列(如seq id no:14所示的氨基酸序列)。本发明使用vzv ge第31-544这段序列，或者出于提高蛋白表达量考虑使用其他序列结构的非天然信号肽代替上述天然结构的信号肽。将上述不连接信号肽或者使用其他非天然结构的信号肽连接vzv ge第31-544位氨基酸，使得vzv ge在c端通过特定连接肽1(linker 1)与结合肽1(所述结合肽1命名为“4t”)连接，同时可在融合蛋白c端加组氨酸(例如6his)纯化标签；将编码上述融合蛋白的编码基因插入到真核细胞表达载体(例如pcdna3.4)中，在cho细胞进行表达，得到vzv ge-结合肽1形成的融合蛋白，该抗原组分经镍柱亲和层析以及分子筛层析等获得高纯度蛋白，该抗原组分即vzv ge-4t。

37、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白包含如seq id no：14所示的氨基酸序列。

38、在一些实施方案中，发明提供的上述任何一种免疫原性复合物中，所述颗粒蛋白组分为在纳米颗粒蛋白的n端通过连接肽2与结合肽2形成融合蛋白；优选地，纳米颗粒蛋白为npm、ap205 capsid protein3(ap205)或ferritin蛋白。具体地，在一些可选方案中将结合肽2(所述结合肽2命名为“4c”)通过连接肽2与纳米颗粒蛋白的编码基因连接，插入到原核表达载体(例如pet-28a(+)、pet-30a(+))中，在e.coli细胞进行表达，获得结合肽2与纳米颗粒蛋白的融合蛋白,所述融合蛋白可经过层析进行纯化，例如经过阴离子交换层析、疏水层析进行纯化，获得产物。纳米颗粒蛋白优选为npm、ap205或ferritin；所形成的颗粒蛋白组分命名为npm-4c、ap205-4c、ferritin-4c。

39、具体地，在一些可选方案中，在合适的反应条件下，将上述任何一种抗原组分与颗粒蛋白组分进行共轭结合反应，通过抗原组分的结合肽1与颗粒蛋白组分的结合肽2形成共价键结合发生偶联实现，从而形成所述免疫原性复合物。采用不同纳米颗粒蛋白可形成不同的免疫原性复合物，这些免疫原性复合物分别命名为vzv ge-npm、vzv ge-ap205或vzvge-ferritin。

40、优选地,本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述抗原组分采用信号肽mefglswvflvaiikgvqc(seq id no:12)表达，包含vzv ge蛋白(seq id no:14)、连接肽1(eaaak)3(seq id no：4)、结合肽1(seq id no：1)、组氨酸标签；更优选地，所述抗原组分序列如seq id no：15所示。

41、优选地,本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述抗原组分采用信号肽mefglswvflvaiikgvqc(seq id no：12)表达，包含vzv ge蛋白(seq id no：14)、连接肽1(ggggs)3(seq id no：3)、结合肽1(seq id no：1)、组氨酸标签；更优选地，所述抗原组分vzv ge-4t序列如seq id no：16所示。

42、在一些实施方案中，本发明提供了一种免疫原性复合物，其包含：

43、(1)抗原组分，其包含水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白、连接肽1和结合肽1；

44、(2)颗粒蛋白组分，其包含纳米颗粒蛋白、连接肽2和结合肽2。

45、所述连接肽1为任何本领域常用的连接肽，包括但不限于(ggggs)n或(eaaak)n的氨基酸序列，n可取大于0且小于等于5的整数,优选为seq id no:3或seq id no:4；所述连接肽2为任何本领域常用的连接肽，包括但不限于(ggs)n、(sgg)n或(gsggsggsg)n的氨基酸序列，n可取大于0且小于等于10的整数,优选为seq id no:6、seq id no:7、seq id no：8或seq id no：9；所述纳米颗粒蛋白为npm、ap205或ferritin铁蛋白。

46、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述纳米颗粒蛋白npm包含如seq id no:17所示的氨基酸序列。

47、优选地，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述颗粒蛋白组分包含npm-4c，如seq id no：18所示，其是如seq id no：2所示的结合肽2通过如seq id no：7所示的连接肽2与如seq id no：17所示的纳米颗粒蛋白npm连接获得的融合蛋白。

48、在另一些实施方案中，本发明提供了一种免疫原性复合物，其包含：

49、(1)抗原组分，其包含水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白和连接肽1，所述连接肽1包含如seq id no:5所示的氨基酸序列；

50、(2)颗粒蛋白组分，其包含纳米颗粒蛋白亚基；优选地，所述纳米颗粒蛋白亚基为i53-50a和/或i53-50b亚基。

51、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述纳米颗粒蛋白i53-50包含i53-50a和/或i53-50b亚基；优选地，i53-50a包含如seq id no:19所示的氨基酸序列，i53-50b包含如seq id no:20所示的氨基酸序列。

52、具体地，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白与纳米颗粒蛋白的一个亚基连接形成融合蛋白，所述融合蛋白再与所述纳米颗粒蛋白的另一个亚基结合。优选地，所述纳米颗粒蛋白的亚基为i53-50a或i53-50b。进一步地，在一些可选方案中，抗原组分中的vzv ge蛋白通过连接肽1在c端与纳米颗粒蛋白i53-50a亚基形成vzvge-i53-50a融合蛋白；然后，该融合蛋白再与纳米颗粒蛋白i53-50b亚基结合。

53、如上所述，当纳米颗粒蛋白选择i53-50时，i53-50包含i53-50a、i53-50b两个亚基，上述将含有特定信号肽或者不含有信号肽的vzv ge蛋白膜外区域通过连接肽1与i53-50a连接，可在c端加组氨酸(例如6h)纯化标签，编码上述融合蛋白的编码基因插入到真核细胞表达(例如pcdna3.4)中，在cho细胞进行表达、纯化，得到的融合蛋白命名为vzv ge-i53-50a；同时可以在i53-50b的c端加组氨酸(例如6h)纯化标签，并将编码上述蛋白的基因插入到原核细胞表达载体(例如pet-30a(+))中，在e.coli细胞进行表达、纯化，得到的蛋白命名为i53-50b。然后，在合适的反应条件下，将vzv ge-i53-50a与i53-50b进行共价结合反应，从而形成水痘-带状疱疹纳米颗粒，命名为vzv ge-i53-50。

54、优选地，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，包含vzv ge-i53-50a(表达蛋白采用seq id no：12所示的信号肽、包含如seq id no:14所示的vzv ge蛋白通过连接肽1与如seq id no：19所示的i53-50a连接获得的融合蛋白),如seq id no：21所示。

55、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述纳米颗粒蛋白ferritin包含如seq id no:22所示的氨基酸序列。

56、优选地，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述颗粒蛋白组分包含ferritin-4c(由如seq id no：2所示的结合肽2通过如seq id no:8所示的连接肽2与如seqid no:22所示的纳米颗粒蛋白ferritin形成的融合蛋白)，如seq id no：23所示。

57、在一些实施方案中，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述纳米颗粒蛋白ap205包含如seq id no：24所示的氨基酸序列。

58、优选地，本发明提供的任何一种免疫原性复合物中，所述颗粒蛋白组分包含ap205-4c(由如seq id no：2所示的结合肽2通过如seq id no：9所示的连接肽2与如seq idno：24所示的纳米颗粒蛋白ap205形成融合蛋白)，如seq id no：25所示。

59、在一些实施方案中，本发明提供一种免疫原性复合物，包含如下(1)-(7)项中的任意一项或者多项：

60、(1)所述水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白的氨基酸序列如seq id no：14所示；

61、(2)所述连接肽1的氨基酸序列如seq id no：3、seq id no：4或seq id no:5所示；

62、(3)所述结合肽1的氨基酸序列如seq id no:1所示；

63、(4)所述纳米颗粒蛋白选自npm、ap205或ferritin；

64、(5)所述纳米颗粒蛋白亚基选自i53-50a和/或i53-50b；

65、(6)所述连接肽2包括(ggs)n、(sggsgg)n或(gsggsggsg)n的氨基酸序列，n可取大于0且小于等于10的整数；

66、(7)所述结合肽2的氨基酸序列如seq id no:2所示。

67、在一些实施方案中，本发明提供一种免疫原性复合物，包含如下(1)-(3)项中的任意一项或者多项：

68、(1)所述npm的氨基酸序列如seq id no:17所示；所述ferritin的氨基酸序列如seq id no:22所示；所述ap205的氨基酸序列如seq id no:24所示；

69、(2)所述i53-50a的氨基酸序列如seq id no:19所示；所述i53-50b的氨基酸序列如seq id no:20所示；

70、(3)所述连接肽2的氨基酸序列如seq id no：6、seq id no：7、seq id no:8或seqid no:9所示。

71、在一些实施方案中，本发明提供一种免疫原性复合物，包含如下(1)-(6)项中的任意一项或者多项：

72、(1)水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白的氨基酸序列如seq id no:14所示；

73、(2)连接肽1的氨基酸序列如seq id no:3或seq id no:4所示；

74、(3)结合肽1的氨基酸序列如seq id no:1所示；

75、(4)纳米颗粒蛋白选自npm、ap205或ferritin；其中，所述npm的氨基酸序列如seqid no：17所示，所述ferritin的氨基酸序列如seq id no：22所示，所述ap205的氨基酸序列如seq id no：24所示；

76、(5)连接肽2的氨基酸序列如seq id no：7、seq id no：8或seq id no：9所示；

77、(6)结合肽2的氨基酸序列如seq id no：2所示；

78、在一些实施方案中，本发明提供一种免疫原性复合物，包含如下(1)-(6)项中的任意一项或者多项：

79、(1)水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白的氨基酸序列如seq id no：14所示；

80、(2)连接肽1的氨基酸序列如seq id no:4所示；

81、(3)结合肽1的氨基酸序列如seq id no:1所示；

82、(4)纳米颗粒蛋白为npm，其氨基酸序列如seq id no：17所示；

83、(5)连接肽2的氨基酸序列如seq id no:7所示；

84、(6)结合肽2的氨基酸序列如seq id no:2所示。

85、在一些实施方案中，本发明提供一种免疫原性复合物，水痘-带状疱疹病毒(vzv)ge蛋白采用氨基酸序列如seq id no：10-12任一所示的信号肽表达；抗原组分和/或所述颗粒蛋白组分包含组氨酸标签。

86、在一些实施方案中，本发明提供一种免疫原性复合物，由抗原组分和颗粒蛋白组分组成，所述抗原组分的氨基酸序列如seq id no:15所示，所述颗粒蛋白组分的氨基酸序列如seq id no:18所示。

87、进一步地，本发明还提供了上述任何一种免疫原性复合物的制备方法，包括以下步骤：

88、(1)将抗原组分、颗粒蛋白组分编码基因分别连接入表达载体中，构建成表达重组质粒和表达宿主菌株，表达目的蛋白，并纯化；

89、(2)将步骤(1)中获得的抗原组分与颗粒蛋白组分共孵育，获得免疫原性复合物。

90、本发明提供一种预防或治疗水痘-带状疱疹病毒相关疾病的免疫原性复合物的制备方法：

91、(1)将水痘-带状疱疹病毒抗原组分、颗粒蛋白组分编码基因分别连接入表达载体中，构建成表达重组质粒；

92、(2)构建能够在宿主细胞中表达所述水痘-带状疱疹病毒抗原组分、颗粒蛋白组分的重组菌株；

93、(3)应用该重组菌株表达融合蛋白，并进行融合蛋白的纯化；

94、(4)将上述抗原组分和颗粒蛋白组分共孵育，发生共轭结合反应，获得免疫原性复合物。

95、优选地，将上述步骤(4)获得的免疫原性复合物进行纯化，获得疫苗原液。

96、优选地，所述的一种预防或治疗水痘-带状疱疹病毒相关疾病的免疫原性复合物的制备方法，步骤(1)中表达所述水痘-带状疱疹病毒抗原组分的质粒可选pcdna3.4,表达所述颗粒蛋白组分的质粒可选pet-28a(+)、pet-30a(+)。

97、本发明所述的一种预防或治疗水痘-带状疱疹病毒相关疾病的免疫原性复合物的制备方法步骤(2)中表达所述水痘-带状疱疹病毒抗原的宿主细胞为cho，表达所述颗粒蛋白组分载体的宿主细胞为e.coli。

98、本发明所述一种预防或治疗水痘-带状疱疹病毒相关疾病的免疫原性复合物，所述免疫原性复合物的抗原组分包含上述vzv ge-结合肽1形成的融合蛋白。

99、本发明所述的一种预防或治疗水痘-带状疱疹病毒相关疾病的免疫原性复合物中，vzv ge-4t与npm-4c结合比例为6：1，结合条件为ph 7.4 0.1m tris-hcl，25％(w/v)sucrose，22℃反应48小时；vzv ge-i53-50a与i53-50b结合比例为1：3，结合条件为ph 7.4、20mm tris-hcl，150mm nacl，25℃，反应2小时；vzv ge-4t与ap205-4c的结合比例为2：1，结合条件为ph6.2 40mm na2hpo4，25％(w/v)sucrose，200mm枸橼酸钠(na3c6h5o7·2h2o),22℃反应24小时；vzvge-4t与ferritin-4c结合比例为6：1，结合条件为ph 7.4 0.1m tris-hcl，25％(w/v)sucrose,22℃反应48小时。内毒素检测均小于100eu/ml，符合规模化生产要求。

100、本发明还提供了一种免疫组合物，所述免疫组合物包含上述任何一种免疫原性复合物和药学上可接受的载体；优选地，所述药学上可接受的载体包含稳定剂、赋形剂、表面活性剂、缓冲剂、ph调节剂，稳定剂为蔗糖、精氨酸，赋形剂为甘露醇，表面活性剂为吐温80，缓冲剂为磷酸氢二钠二水合物、磷酸二氢钠二水合物，ph调节剂为盐酸。

101、在一些实施方案中，本发明所述的免疫组合物，其所含的免疫原性复合物用量为0.25-100μg/剂，优选为0.5-50μg/剂，更优选的为0.5μg/剂、1μg/剂、2μg/剂、3μg/剂、4μg/剂、5μg/剂、10μg/剂、15μg/剂、20μg/剂、25μg/剂、30μg/剂、35μg/剂、40μg/剂、45μg/剂、50μg/剂。小鼠实验用剂量为人用剂量的1/10。

102、在一些实施方案中，本发明提供的免疫组合物为注射液或冻干制剂，优选为冻干制剂。

103、在一些实施方案中，本发明提供的免疫组合物为冻干制剂，其包含vzv ge-npm免疫原性复合物、稳定剂、赋形剂、表面活性剂、缓冲剂、ph调节剂；优选地，所述稳定剂为蔗糖、精氨酸，赋形剂为甘露醇，表面活性剂为吐温80，缓冲剂为磷酸氢二钠二水合物、磷酸二氢钠二水合物，ph调节剂为盐酸。

104、在一些实施方案中，本发明提供的免疫组合物为冻干制剂，其包含vzv ge-npm免疫原性复合物、蔗糖、精氨酸，甘露醇，吐温80，磷酸氢二钠二水合物、磷酸二氢钠二水合物，盐酸。所述冻干制剂的每单位剂量中包含：vzv ge-npm 0.5-50μg，优选25μg-50μg；蔗糖10-20mg,优选12-15mg；甘露醇10-30mg，优选20-25mg；吐温80 0.1-0.5mg，优选0.2-0.3mg；精氨酸2-8mg，优选3-5mg；磷酸氢二钠二水合物0.5-1.5mg，优选1-1.2mg；磷酸二氢钠二水合物0.5-1mg，优选0.6-0.8mg；盐酸8.0-9.5mg，优选8.2-9.0mg。

105、在一些实施方案中，本发明提供的免疫组合物为冻干制剂，其包含vzv ge-npm免疫原性复合物25μg或50μg、蔗糖12.5mg、甘露醇25mg、吐温80 0.25mg、精氨酸4.35mg、磷酸氢二钠二水合物1.085mg、磷酸二氢钠二水合物0.62mg，盐酸8.66mg。

106、在一些实施方案中，本发明提供的免疫组合物为注射液，其包含vzv ge-npm免疫原性复合物、稳定剂、表面活性剂、缓冲剂、ph调节剂；优选地，所述稳定剂为蔗糖，表面活性剂为吐温80，缓冲剂为二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠，ph调节剂为盐酸。

107、在一些实施方案中，本发明提供的免疫组合物为注射液，其包含vzv ge-npm免疫原性复合物、蔗糖、吐温80、二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠，盐酸。所述注射液的每单位剂量中包含：vzv ge-npm免疫原性复合物0.5-50μg，优选25μg-50μg；蔗糖10-30mg，优选15-25mg；吐温80 0.05-0.5mg，优选0.1-0.3mg；二水合磷酸氢二钠0.2-1mg，优选0.3-0.8mg；二水合磷酸二氢钠0.1-0.5mg,优选0.2-0.4mg；盐酸0.2-0.5mg，优选0.25-0.35mg。

108、在一些实施方案中，本发明提供的免疫组合物为注射液，其包含vzv ge-npm免疫原性复合物25μg或50μg、蔗糖20mg、吐温80 0.125mg、二水合磷酸氢二钠0.5425mg、二水合磷酸二氢钠0.31mg，盐酸0.3mg。

109、本发明进一步提供了一种水痘-带状疱疹疫苗，其包括上述任何一种免疫组合物和佐剂，所述佐剂选自：铝盐类佐剂、弗氏完全佐剂、蜂胶佐剂、水油佐剂、细胞因子、cpgdna、基因工程减毒素、免疫刺激复合物、脂质体中的至少一种。

110、本发明所述的一种水痘-带状疱疹疫苗，所述水油佐剂为含角鲨烯的角鲨烯类佐剂。在小鼠实验中，所述免疫原性复合物(如vzvge-npm)用量0.5μg/剂时搭配使用25μl/剂的含角鲨烯的角鲨烯类佐剂，就能实现良好的免疫效果。

111、本发明所述的一种水痘-带状疱疹疫苗，人用每单位剂量的疫苗中，含所述免疫原性复合物用量为5-50μg/剂，优选为5μg、25μg或50μg，并且含角鲨烯0.105mg至10.5mg。

112、本发明所述的角鲨烯类佐剂含：(w/w)角鲨烯(squalene)0.5％-5％、司盘(span)85 0.05％-1％、吐温(tween)80 0.05％-1％、10mm枸橼酸盐缓冲液。

113、本发明所述角鲨烯类佐剂含：(w/w)含角鲨烯squalene 1.5％-5％、司盘span 850.05％-1％、吐温tween 80 0.05％-1％、10mm枸橼酸盐缓冲液。

114、本发明所述角鲨烯类佐剂优选含：(w/w)角鲨烯(squalene)2％-4.5％、司盘(span)85 0.2％-0.5％、吐温(tween)80 0.2％-0.5％、10mm枸橼酸盐缓冲液。其中角鲨烯用量更优选的为2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％(w/w)，司盘85更优选的为0.3％-0.4％(w/w)，吐温80更优选的为0.3％-0.4％(w/w)。

115、本发明具体实施方式使用的角鲨烯类水油佐剂成分可以为：(w/w)角鲨烯3.9％、司盘85 0.47％、吐温80 0.47％、10mm枸橼酸盐缓冲液。

116、本发明具体实施方式使用的角鲨烯类水油佐剂成分可以为：(w/w)角鲨烯4.3％、司盘85 0.5％、吐温80 0.5％、10mm枸橼酸盐缓冲液。

117、本发明具体实施方式使用的角鲨烯类水油佐剂成分可以为：(w/w)角鲨烯4.03％、司盘85 0.5％、吐温80 0.5％、枸橼酸0.016％、枸橼酸钠0.264％。

118、本发明具体实施方式使用的角鲨烯类水油佐剂成分可以为：(w/w)角鲨烯3.0225％、司盘85 0.375％、吐温80 0.375％、枸橼酸0.012％、枸橼酸钠0.198％。

119、本发明具体实施方式使用的角鲨烯类水油佐剂成分可以为：(w/w)角鲨烯2.015％、司盘85 0.25％、吐温80 0.25％、枸橼酸0.08％、枸橼酸钠0.132％。

120、本发明具体实施方式使用的角鲨烯类水油佐剂成分可以为：(w/w)角鲨烯0.403％、司盘85 0.05％、吐温80 0.05％、枸橼酸0.0016％、枸橼酸钠0.0264％。

121、进一步地，本发明具体实施方式使用的角鲨烯佐剂(佐剂1)成分优选为：角鲨烯10.50mg(4.2％)、司盘85 1.25mg(0.5％)、吐温80 1.25mg(0.5％)、枸橼酸0.04mg(0.264％)、枸橼酸钠0.66mg(0.016％)(w/w)。该佐剂可以配合vzv ge-npm的注射液处方使用，可选地，小鼠实验用单位剂量疫苗中佐剂1的用量可以为25μl/剂，人用单位剂量疫苗中佐剂1的用量可以为250μl/剂(0.25ml/剂)。

122、如上所述，免疫原性复合物vzv ge-npm、佐剂用量对于人体和小鼠所用剂量不同，对应关系为：作为人用剂量时，vzv ge-npm、佐剂用量均为在小鼠中用量的10倍，例如：小鼠用vzv ge-npm 5μg/剂、人用剂量需为50μg/剂；小鼠用佐剂50μl/剂、人用佐剂剂量需为500μl/剂(0.5ml/剂)，小鼠用佐剂为25μl/剂、人用剂量需为250μg/剂(0.25ml/剂)，以此类推。

123、本发明中对照疫苗涉及佐剂as01b佐剂，as01b成分为：每0.5ml的as01b佐剂含50μg皂树皂苷qs-21、50μg 3-o-去酰基-4’-单磷酰脂a(mpl)、1mg二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)、0.25mg胆固醇、4.385mg氯化钠、0.15mg无水磷酸氢二钠、0.54mg磷酸二氢钾。本发明所用as01b佐剂是gsk公司市售疫苗中与vzv ge蛋白搭配销售的佐剂产品。

124、本发明进一步提供一种成套试剂盒，其特征在于，包含本发明所述的一种水痘-带状疱疹疫苗，以及用于接种所述疫苗所需的器具和容器。

125、本发明提供一种水痘-带状疱疹疫苗，包含vzv ge-npm免疫组合物(即含有vzvge-npm的免疫组合，可制成冻干制剂或注射液制剂)和佐剂(为液体)。vzv ge-npm免疫组合物和佐剂分瓶包装。佐剂中成分含量为角鲨烯10.50mg、司盘85 1.25mg、吐温80 1.25mg、枸橼酸钠0.04mg、枸橼酸0.66mg；该佐剂配合vzv ge-npm冻干制剂使用与注射液使用时，佐剂瓶中所装佐剂各成分浓度前者是后者情况的1/2(稀释一倍)。vzv ge-npm免疫复合物含量为50μg/剂或25μg/剂(两种规格)。

126、对于vzv ge-npm免疫组合物为冻干制剂剂型：临床接种前需从佐剂瓶抽取全部液体到装有vzv ge-npm冻干制剂的瓶中，混匀后使用，复溶后每次人用剂量为0.5ml，分别含vzv ge-npm免疫原性复合物50μg或25μg。

127、对于vzv ge-npm免疫组合物为注射液制剂剂型：vzv ge-npm注射液每次人用剂量为0.25ml，佐剂每次人用剂量为0.25ml。临床接种前需从佐剂瓶抽取全部液体到装有vzvge-npm注射液的瓶中，混匀后使用，复溶后每次人用剂量为0.5ml，分别含vzv ge-npm免疫原性复合物50μg或25μg。

128、本发明提供一种水痘-带状疱疹纳米颗粒免疫原性复合物、免疫组合物或疫苗在制备用于预防或治疗带状疱疹的药物中的应用。

129、本发明采用的所有试剂均可商业化购买获得。

130、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

131、(1)本发明免疫原性复合物填补了全球范围内纳米颗粒类型的水痘-带状疱疹疫苗供应基本空白的现状。经尝试不同重组颗粒蛋白后发现，采用本发明使用的不同纳米颗粒蛋白npm、i53-50、ap205及ferritin，获得的水痘-带状疱疹纳米颗粒免疫原性复合物vzvge-npm、vzv ge-i53-50、vzv ge-ap205、vzv ge-ferritin均可获得较为理想的技术效果：颗粒粒径均一、分布均匀无聚集，产品性能稳定，内毒素合格，适合进行非临床开发及抗体免疫原性试验测试，从而适合作为水痘-带状疱疹疫苗。

132、(2)相对于目前已上市的重组蛋白水痘-带状疱疹疫苗本发明的水痘-带状疱疹疫苗进一步提高了机体内产生抗体的水平和t细胞的免疫效果。在本发明提供的水痘-带状疱疹纳米颗粒免疫原性复合物制备成功后，针对进行了不同的非临床的细胞及抗体免疫原性实验测试对比。本发明提供的水痘-带状疱疹纳米颗粒免疫原性复合物引发的t细胞的免疫原性和抗体免疫原性均高于说明本发明提供的水痘-带状疱疹纳米颗粒免疫原性复合物均可诱导出优于该商品化疫苗的细胞免疫和体液免疫反应。本发明提供的水痘-带状疱疹纳米颗粒免疫原性复合物在使用特定角鲨烯类佐剂的情况下会比gsk已上市的水痘-带状疱疹重组蛋白疫苗更早介入免疫系统诱导过程，起到更好的免疫防护作用。

133、更重要地，本发明提供的水痘-带状疱疹纳米颗粒免疫原性复合物的使用量显著减少的情况下仍能达到与相似的效果。例如，小鼠经初免减毒水痘苗(模拟感染)后序贯加免两针，vzv ge-npm可诱导出优异的体液免疫反应，同时可诱导出显著高于对照组同等抗原用量产生的ifn-γ和il-2水平，1/10剂量即0.5μg的vzv ge-npm即可达到全剂量即5μg shingrix所能达到的效果。

134、(3)本发明选用特定连接肽(eaaak)3，其无论对vzv ge与结合肽1形成的融合蛋白表达量，还是对于引发免疫组合物的免疫原性效果均有促进作用。综合western blot、sds-page和免疫原性试验等结果发现，选择(eaaak)3连接vzv ge和结合肽1可以获得最理想的效果。

135、(4)本发明选用特定信号肽mefglswvflvaiikgvqc进行转染表达可以获得相对最高的表达量。

136、(5)本发明将角鲨烯含量不同的角鲨烯类佐剂与vzv ge-npm组合使用，观察效果发现，本发明提供的疫苗可在角鲨烯很低含量下即可发挥理想的免疫原性效果，从而可大大节省价格昂贵的角鲨烯用量，进而降低成本。

137、(6)本发明选用特定种类含量配比的稳定剂、赋形剂、表面活性剂、缓冲剂、ph调节剂，由此将免疫复合物做成的冻干制剂处方可达到最为理想的稳定性。

138、(7)本发明提供的纳米颗粒类型的水痘-带状疱疹疫苗制备方法成本低、适合大规模生产。

139、本发明中颗粒蛋白组分采用大肠杆菌发酵与层析纯化方式进行制备，vzv ge抗原采用cho细胞反应器培养与层析纯化进行制备，均适合工业化大规模生产，并且具备表达量高、工艺与收率稳定、操作简单等优势。一个批次重组颗粒蛋白组分的产量可对应多批次vzv ge抗原进行结合，提高生产效率。对比普通重组蛋白疫苗，本发明纳米颗粒疫苗在同等或更低的剂量下具有更高的免疫保护水平优势，可节约大规模生产的成本。

140、本发明提供的重组颗粒蛋白组分的制备方法，无需特殊设备，利于放大，适合工业化生产，生产时间短，工艺简洁稳定，可减少工业化大生产的成本；使用本发明提供的重组颗粒蛋白组分方法制备出的蛋白产品，有效降低了由颗粒中杂质、宿主蛋白质、外源性dna、抗生素、细菌内毒素等物质的残留所带来的副作用，提高了安全性。