一种EGCG-PLGA-CHP纳米靶向制剂及其制备和应用

本发明涉及纳米颗粒，具体涉及一种egcg-plga-chp纳米靶向制剂及其制备和应用。

背景技术：

1、2021年《中国心血管病一级预防指南》报道，我国居民每年心血管病死亡人数约占总死亡人数40％，心血管疾病已成为我国居民死亡的主要原因之一。大量研究表明,多种心血管疾病与氧化应激损伤密切相关。氧化应激损伤是指机体细胞内环境稳态遭到破坏，使细胞内氧自由基产生和消除失衡，导致细胞毒性，是心肌损伤的重要的发病机制。血管病的发病较为危重，早期有效的药物干预，可以减缓疾病发展，达到治疗的效果。

2、儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate，egcg)是绿茶主要的活性和水溶性成分，占儿茶素80％。相关研究表明，长期饮用绿茶可以显著降低心脑血管疾病的发病率。egcg因化学结构具有多个酚羟基，ph、温度、氧气水平、抗氧化剂水平、金属离子和egcg浓度等因素均会影响egcg稳定。egcg在细胞培养条件下易氧化，半衰期约0.5-2h，可生成egcg醌、二聚体、二聚体醌等氧化产物。此外，egcg的有效剂量与毒性剂量之间相距不大，生物功效低且可能造成机体伤害。因此，如何保持egcg的稳定性以维持其生物活性、提高其生物利用度及降低其毒性等问题亟待解决。鉴于egcg优异的抗氧化活性，构建具有心脏靶向效应的egcg纳米载药体系对心血管疾病的治疗具有重要意义。

3、纳米医学中的智能化纳米药物递送系统的构建，可使药物免受外部媒介的破坏，实现药物的主动或被动靶向及可控释放，使药物精准作用于病变部位，提高药物的生物利用度、降低药物对正常组织、细胞的毒副作用。目前，常见的药物载体有脂质体、聚合物胶束以及聚合物纳米水凝胶等。研究发现，脂质体包裹egcg形成纳米胶囊，显著提高egcg的稳定性；经壳聚糖包裹的egcg，在热处理条件下降解程度显著下降、稳定性提高，生物利用度提高；egcg经聚乳酸/聚乙二醇(pla/peg)包裹形成的纳米体系，在抑制细胞生长，促凋亡，抑制血管生成的作用上显著提升生物利用度。由此可见，egcg纳米化可提高其稳定性和生物利用度并降低其毒性，在疾病治疗中具有应用前景。

4、目前，关于egcg纳米载药体系的应用研究大都侧重于肿瘤治疗，未见用于心血管疾病治疗方面的研究报道。因此，构建具有心脏靶向效应的egcg纳米载药体系对心血管疾病的治疗具有重要意义。本发明提供一种egcg-plga-chp纳米靶向制剂及其制备和应用。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种egcg-plga-chp纳米靶向制剂及其制备和应用。目的是设计以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)上接枝靶向心脏归巢肽(chp)作为egcg载体，使制得的纳米递送系统主动靶向至心脏，egcg在目标组织更好地发挥药效。

2、本发明解决上述技术问题，第一方面是提供：一种egcg-plga-chp纳米靶向制剂制备，所述egcg-plga-chp纳米靶向制剂主要由egcg和plga-chp靶向载体制成，所述plga-chp靶向载体主要在聚乳酸-羟基乙酸共聚物上接枝心脏归巢肽制备得到。

3、其中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(英文名称为poly(lactic-co-glycolic acid)，plga)具有良好的生物相容性和生物可降解性，其水解会产生代谢产物单体乳酸和乙醇酸；由于这两种单体是内源性的，并且很容易通过克雷布斯循环被身体代谢，所以使用plga进行药物递送或生物材料应用时，全身毒性最小；且plga已获得美国fda和欧洲药品管理局(ema)的批准用于人体的各种药物输送系统，包裹了化学药物、多肽、蛋白质或核酸分子的plga纳米粒可用于治疗一些棘手的疾病，包括心血管疾病。

4、心脏归巢肽(chp，cstsmlkac)是由9个氨基酸组成的短肽，研究表明chp可以特异性地靶向到缺血再灌注(iri)损伤的心肌细胞，因chp对缺血性心脏肥大的高度敏感性，chp可增强纳米粒子直接靶向肥厚心肌的特异性和有效性，chp与心脏干细胞外泌体结合形成的chp-xos可以通过促进心肌细胞增殖及血管生成，改善梗死后的心功能。

5、所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物上通过酰胺键接枝所述心脏归巢肽。egcg-plga-chp纳米靶向制剂需要在-20℃下储存。

6、本发明egcg-plga-chp纳米靶向制剂具有良好稳定性、分散性，实现了egcg控释，保护egcg抗氧化性，并且靶向载体plga-chp可将药物egcg精准靶向至心脏，且纳米靶向制剂抑制凋亡，可用于防治心肌缺血相关疾病。

7、本发明的有益效果是：

8、(1)本发明采用了plga-chp作为egcg的靶向载体，实现了egcg控释，保护egcg抗氧化性，并且靶向载体plga-chp可将药物egcg精准靶向至心脏。

9、(2)本发明的egcg-plga-chp纳米颗粒具有良好稳定性和分散性。

10、(3)本发明考察了egcg-plga-chp纳米靶向制剂在心脏缺血疾病中的应用价值，提供了一种预防治疗方案。

11、进一步，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物分子量为15000mw。

12、进一步，所述egcg与所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的重量比为(0.1～12)：(3～40)；所述egcg和所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的总重量与所述心脏归巢肽的重量比为(10～30)：(1～3)。

13、进一步，所述egcg-plga-chp纳米靶向制剂的粒径范围为90～120nm，所述egcg-plga-chp纳米靶向制剂的平均粒径为95.65±0.227nm，所述egcg-plga-chp纳米靶向制剂的zeta电位为-1.67±0.01mv。

14、本发明第二方面是提供一种egcg-plga-chp纳米靶向制剂的制备方法，包括如下步骤：

15、(1)将egcg和聚乳酸-羟基乙酸共聚物通过复乳化溶剂挥发法，制备得到egcg-plga纳米粒；

16、(2)将所述egcg-plga纳米粒与偶联活化剂(例如edc、nhs)在mes缓冲液中进行活化，得到活化后的egcg-plga纳米粒，将所述活化后的egcg-plga纳米粒与心脏归巢肽在mes缓冲液中进行偶联反应，得到egcg-plga-chp纳米靶向制剂。

17、其中，活化时采用的mes缓冲液的浓度为0.1mol/l，ph 5.5；偶联反应时采用的mes缓冲液的浓度为0.1mol/l，ph 8.0。

18、采用上述方案的有益效果是：本发明的方法制备过程简便，低毒、环保、安全，所得纳米颗粒稳定性、分散性良好。

19、进一步，步骤(1)中所述复乳化溶剂挥发法包括如下具体步骤：将egcg水溶液和plga乙酸乙酯溶液进行混合，得到egcg和plga混合溶液，将所述egcg和plga混合溶液，在冰浴下进行乳化，得到初乳；在所述初乳中加入聚醚f-127溶液，在冰浴下进行破乳化，得到复乳；室温下在所述复乳中加入聚醚f-127溶液，后依次进行溶剂挥发、超滤、冻干，得到egcg-plga纳米粒。

20、其中超滤采用超滤离心管，3000～3500rpm/min离心，离心、冻干时长根据需要确定。

21、进一步，所述egcg水溶液的质量浓度为10～60mg/ml；所述plga乙酸乙酯溶液的质量浓度为3～20mg/ml；在所述初乳中加入的所述聚醚f-127溶液的质量浓度为10～30mg/ml；在所述复乳中加入的所述聚醚f-127溶液的质量浓度为1～5mg/ml；所述egcg水溶液、所述plga乙酸乙酯溶液、在所述初乳中加入的聚醚f-127溶液与在所述复乳中加入的聚醚f-127溶液的体积比为(0.1～0.2):(1～2)：(5～10)：(15～20)。

22、进一步，所述破乳化具体为采用超声细胞破碎仪破乳化90～120s；所述乳化具体为采用用超声细胞破碎仪乳化90～120s。

23、进一步，所述偶联活化剂为edc和nhs，所述edc与所述nhs的质量比为(2～4)：(1～2)；所述egcg-plga纳米粒与所述edc的质量比为(5～15)：(6～12)；所述egcg-plga纳米粒与所述心脏归巢肽的重量比为(10～30)：(1～3)。

24、其中所述偶联活化剂edc和nhs的活化的原理是利用活化剂edc、nhs活化plga的羧基，后与chp的氨基偶联。

25、进一步，所述活化、偶联的温度为20-28℃，活化时间为1～2小时，偶联反应时间为8～24小时。

26、本发明第三方面是提供一种egcg-plga-chp纳米靶向制剂的应用，将上述所述egcg-plga-chp纳米靶向制剂用于预防或治疗心肌缺血损伤的药物中。