E3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备抗狂犬病病毒产品中的应用

本发明涉及抗病毒，尤其涉及e3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备抗狂犬病病毒产品中的应用。

背景技术：

1、狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus，rabv)引起的一种高度致死性的人兽共患传染病，以侵害中枢神经系统为特征，引起人和其他哺乳动物的脑炎。据统计全世界每年有超过数万人死于狂犬病，这主要发生在发展中国家，其中亚洲和非洲占绝大多数。到目前为止，狂犬病仍是一种无法治愈的疾病，唯一的预防方法是在暴露前或暴露后进行疫苗接种。狂犬病一旦出现临床症状，病死率高达100％。因此，亟需开发更多的有效抗rabv试剂及药物。

2、泛素蛋白酶体(ups)系统的失调涉及许多人类疾病的发病机理，包括癌症、神经退行性疾病和病毒性疾病。该系统包括泛素ub、泛素活化e1，泛素结合酶e2，泛素蛋白连接酶e3，26s蛋白酶体和去泛素化酶(dub)。其中，泛素蛋白连接酶e3非常关键，决定了泛素将会特异性地连接到哪个目的蛋白上。大量研究表明，泛素蛋白连接酶e3在神经退行性疾病中发挥重要作用。然而，在rabv感染的宿主中泛素蛋白连接酶e3是否参与病毒复制还没有相关报道。

技术实现思路

1、本发明提供e3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备抗狂犬病病毒产品中的应用。

2、本发明通过e3泛素蛋白连接酶sirna文库筛选在rabv复制过程中发挥重要作用的e3泛素蛋白连接酶，建立了一个体外高通量筛选具有抗rabv功能的小干扰分子的平台，并通过该平台高通量筛选180个e3泛素蛋白连接酶的小干扰分子，通过elisa方法检测il-6的表达来判断这些小干扰分子抑制rabv复制的效果，最终筛选得到了6种e3泛素蛋白连接酶(fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1)的抑制剂具有不同程度的抗rabv作用，并发现fbxl18的抑制剂可通过抑制iκbα的降解并阻滞p-p65入核参与il-6表达，发挥抗rabv作用。

3、具体地，本发明提供以下技术方案：

4、第一方面，本发明提供e3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备抗狂犬病病毒产品中的应用；所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

5、本发明发现，通过抑制fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2或hrd1，rabv的复制得到有效抑制，感染rabv细胞的il-6的表达也被显著抑制。il-6是一种重要的炎症因子，狂犬病病毒感染可增加其表达并可导致神经炎症反应增强，可能引起神经细胞的损伤甚至死亡。上述e3泛素蛋白连接酶抑制剂显著抑制il-6的表达，进而可能发挥缓解神经炎症的作用。

6、第二方面，本发明提供e3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备用于预防和/或治疗狂犬病病毒感染的产品中的应用；所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

7、第三方面，本发明提供e3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备用于预防和/或治疗狂犬病的产品中的应用；所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

8、第四方面，本发明提供e3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备用于抑制狂犬病病毒复制的产品中的应用；所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

9、第五方面，本发明提供e3泛素蛋白连接酶抑制剂在制备用于预防和/或治疗因狂犬病病毒感染导致的神经炎症的产品中的应用；所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

10、上述第一至第五方面的应用中，所述产品为药物或抗病毒试剂。

11、第六方面，本发明提供e3泛素蛋白连接酶在作为抗狂犬病病毒药物筛选靶点中的应用；所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

12、上述第一至第六方面的应用中，所述e3泛素蛋白连接酶优选为fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种。

13、上述第一至第六方面的应用中，所述e3泛素蛋白连接酶抑制剂能够抑制e3泛素蛋白连接酶的表达和/或酶活性。

14、本发明中，所述抑制剂可为核酸、蛋白质、化合物或组合物。

15、其中，抑制e3泛素蛋白连接酶的表达的抑制剂包括但不限于sirna、sgrna、转录抑制因子、翻译抑制因子等。

16、在本发明的一些实施方式中，所述e3泛素蛋白连接酶抑制剂为抑制e3泛素蛋白连接酶表达的sirna。

17、优选地，fbxl18的sirna的正义链序列为：cagcauaugaaauucaacatt，反义链序列为：uguugaauuucauaugcugtt；

18、ube2d1的sirna的正义链序列为：gcaacgggaguauuugucutt，反义链序列为：agacaaauacucccguugctt；

19、ubr5的sirna的正义链序列为：ccagcaaucaagagauuuatt，反义链序列为：uaaaucucuugauugcuggtt；

20、wwp1的sirna的正义链序列为：gaggcgauuauauguaauatt，反义链序列为：uauuacauauaaucgccuctt；

21、asb2的sirna的正义链序列为：gccaucggacaugaggaautt，反义链序列为：auuccucauguccgauggctt；

22、hrd1的sirna的正义链序列为：gcucuacacggagcuguuutt，反义链序列为：aaacagcuccguguagagctt。

23、本发明经实验验证，上述sirna对fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1具有较高的抑制效率，能够显著抑制其表达，进而发挥有效的抑制狂犬病病毒复制、抗狂犬病病毒、缓解因狂犬病病毒感染导致的神经炎症的作用。

24、在本发明的一些具体实施方式中，所述狂犬病病毒为cvs-11病毒株。但是，本领域技术人员应该理解，由于狂犬病病毒的复制、感染和致病机理具有高度相似性，本发明的狂犬病病毒不局限于cvs-11病毒株，可为任意毒株(例如pv株、pm株、flury株、sad株、ag株、cvs株、ctn株等)。

25、第七方面，本发明提供一种非疾病治疗目的的抑制狂犬病病毒复制的方法，所述方法包括：使用e3泛素蛋白连接酶抑制剂处理狂犬病病毒感染或待感染的细胞；所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

26、上述方法中，所述e3泛素蛋白连接酶优选为fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种。

27、上述方法中，所述e3泛素蛋白连接酶抑制剂能够抑制e3泛素蛋白连接酶的表达和/或酶活性。

28、所述抑制剂可为核酸、蛋白质、化合物或组合物。

29、其中，抑制e3泛素蛋白连接酶的表达的抑制剂包括但不限于sirna、sgrna、转录抑制因子、翻译抑制因子等。

30、在本发明的一些实施方式中，所述e3泛素蛋白连接酶抑制剂为抑制e3泛素蛋白连接酶表达的sirna。

31、优选地，fbxl18的sirna的正义链序列为：cagcauaugaaauucaacatt，反义链序列为：uguugaauuucauaugcugtt；

32、ube2d1的sirna的正义链序列为：gcaacgggaguauuugucutt，反义链序列为：agacaaauacucccguugctt；

33、ubr5的sirna的正义链序列为：ccagcaaucaagagauuuatt，反义链序列为：uaaaucucuugauugcuggtt；

34、wwp1的sirna的正义链序列为：gaggcgauuauauguaauatt，反义链序列为：uauuacauauaaucgccuctt；

35、asb2的sirna的正义链序列为：gccaucggacaugaggaautt，反义链序列为：auuccucauguccgauggctt；

36、hrd1的sirna的正义链序列为：gcucuacacggagcuguuutt，反义链序列为：aaacagcuccguguagagctt。

37、第八方面，本发明提供一种产品，所述产品包含e3泛素蛋白连接酶抑制剂，所述e3泛素蛋白连接酶为选自fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1中的一种或多种。

38、以上所述的e3泛素蛋白连接酶抑制剂能够抑制e3泛素蛋白连接酶的表达和/或酶活性。

39、所述抑制剂可为核酸、蛋白质、化合物或组合物。

40、其中，抑制e3泛素蛋白连接酶的表达的抑制剂包括但不限于sirna、sgrna、转录抑制因子、翻译抑制因子等。

41、在本发明的一些实施方式中，所述e3泛素蛋白连接酶抑制剂为抑制e3泛素蛋白连接酶表达的sirna。

42、优选地，fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1的sirna的序列如上所述。

43、本发明中，fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1均为已知的e3泛素蛋白连接酶，本领域技术人员可从公开的数据库中获得上述e3泛素蛋白连接酶的序列等信息。

44、所述fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1来源于哺乳动物，优选来源于人或小鼠。不同哺乳动物中，e3泛素蛋白连接酶fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1的氨基酸序列和编码基因序列均可通过公开数据库获得。

45、本发明的有益效果至少包括：本发明首次公开6种e3泛素蛋白连接酶fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1的抑制剂具有抗狂犬病病毒的作用，通过抑制e3泛素蛋白连接酶fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1能够有效抑制狂犬病病毒的复制，发挥抗狂犬病病毒、缓解因狂犬病病毒感染导致的神经炎症的功效。e3泛素蛋白连接酶fbxl18、ube2d1、ubr5、wwp1、asb2、hrd1可作为药物筛选靶点用于狂犬病防治药物的开发，其抑制剂可以开发为小分子药物用于狂犬病的预防和治疗，具有较好的应用前景。