miR22或miR22高表达MSC的外泌体miR22-Exos在治疗眼疾病药物中的应用

本发明涉及生物医药，尤其涉及一种治疗青光眼或视网膜神经节细胞rgc损伤药物。

背景技术：

1、青光眼是全世界最常见的不可逆性视力丧失的原因。眼压升高，导致视网膜神经节细胞（rgc）损伤，是该疾病发生和发展的主要风险因素。目前的治疗局限于各种降眼压方法，包括药物治疗，激光治疗和手术治疗。然而，一些患者在理想控制眼压后仍会经历疾病进展，这表明青光眼引起的rgc损伤一定有其他影响因素。据报道，谷氨酸神经毒性会导致青光眼和其他视网膜疾病中的rgc凋亡。因此，玻璃体内注射n-甲基-d-天冬氨酸（nmda）成为了研究rgc凋亡及其保护作用的常用动物模型。nmda受体过度激活引发钙离子的快速流入，从而触发下游促凋亡信号级联，导致rgc凋亡。基于以上神经毒性机制，在青光眼的治疗中需要除降低眼压外的其他神经保护方法。

2、外泌体是内吞来源的脂质双层膜细胞外小囊泡，直径40-160nm，含有遗传物质，如dna、mrna、mirna和蛋白质。它们具有广泛的生物学功能，可以作为细胞之间的通信载体。间充质干细胞来源的外泌体（msc-exos）已被证明在各种疾病模型中可以发挥与mscs相似的治疗作用，如心肌损伤模型、肾脏损伤模型和自身免疫性疾病模型。特别是在神经退行性疾病中，msc-exos显示出治疗潜力，因为它们的抗炎和神经保护功能都与mscs相似。在眼部疾病中，之前的研究揭示了msc-exos在实验性自身免疫性葡萄膜炎、视网膜激光损伤和实验性视网膜脱离中的治疗作用。msc-exos比较适合用于眼部治疗。首先，msc-exos对眼睛更安全，因为它具有较低的免疫原性和较低的致瘤风险。其次，其拥有脂质双层膜结构，当储存或运输一些生物活性分子时，其中的活性成分不会被降解。最后，由于体积小，它们可以很容易地通过生物屏障，也不会引起玻璃体混浊。因此基于mir22或mir22高表达msc的外泌体mir22-exos在治疗眼疾病及药物的研究，具有很高的应用价值，并且也为相关技术的深入研究提供了一种新的思路。

技术实现思路

1、本发明正式为了解决现有技术的不足，研究来源于mir22过度表达msc的外泌体（mir22-exos）在rgc损伤的动物和细胞模型中的作用，通过收集并鉴定来源于mir22高表达msc的外泌体（mir22-exos），建立rgc损伤模型，并通过玻璃体内同时注射n-甲基-d-天冬氨酸（nmda）和外泌体或pbs进行治疗。经生物信息学分析、荧光素酶报告基因实验和验证实验，本发明mir22-exos可以使视网膜较厚，凋亡细胞较少，rgcs保留较多，视网膜功能较好，肿瘤坏死因子（tnf）-α和caspase-3的表达水平较低。mir22-exos可以促进rgc-5细胞系的增殖，抑制细胞凋亡和caspase-3的表达。

2、本发明采用的技术方案是：

3、本发明提供了mir22或mir22高表达msc的外泌体mir22-exos在治疗眼疾病药物中的应用。进一步的，该药物包括治疗青光眼或视网膜神经节细胞rgc损伤药物。

4、所述的mir22通过调节mapk/jnk/p38信号通路抑制rgc凋亡。进一步的，mir22靶向map3k12的3'-utr通过调节mapk/jnk/p38通路抑制rgc凋亡。

5、所述的mir22的引物序列，包括正义链seq id no：3，反义链seq id no：4。

6、所述的map3k12具有包括正义链seq id no：17，反义链seq id no：18。

7、所述的mir22的种子序列与map3k12 3’-utr互补。

8、本发明提供了一种治疗青光眼或视网膜神经节细胞rgc损伤药物，该药物包含本发明以上所述的mir22或mir22高表达msc的外泌体mir22-exos。

9、进一步的，该药物具有mir22的引物序列，包含正义链和反义链，正义链为seq idno：3，反义链为seq id no：4。

10、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

11、microrna-22-3p（mir22）和来源于间充质干细胞的外泌体（msc-exos）具有很好的神经保护作用，将mir22或mir22高表达msc的外泌体mir22-exos用于制备治疗眼疾病药物，对青光眼或其他rgc损伤疾病具有很好的治疗效果。

技术特征：

1.mir22或mir22高表达msc的外泌体mir22-exos在治疗眼疾病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是：该药物包括治疗青光眼或视网膜神经节细胞rgc损伤药物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征是：mir22通过调节mapk/jnk/p38信号通路抑制rgc凋亡。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征是：mir22靶向map3k12的3'-utr通过调节mapk/jnk/p38通路抑制rgc凋亡。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征是：mir22的引物序列，包括正义链seq id no：3，反义链seq id no：4。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征是：map3k12具有包括正义链seq id no：17，反义链seq id no：18。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征是：mir22的种子序列与map3k12 3’utr互补。

8.一种治疗青光眼或视网膜神经节细胞rgc损伤药物，其特征是：该药物包含权利要求1-7任一项所述的mir22或mir22高表达msc的外泌体mir22-exos。

9.根据权利要求8所述的治疗青光眼或视网膜神经节细胞rgc损伤药物，其特征是：该药物具有mir22的引物序列，包含正义链和反义链，正义链为seq id no：3，反义链为seq idno：4。

技术总结
miR22或miR22高表达MSC的外泌体miR22‑Exos在治疗眼疾病药物中的应用，涉及生物医药技术领域，该药物包括治疗青光眼或视网膜神经节细胞RGC损伤药物。经过收集并鉴定来源于miR22高表达MSC的外泌体miR22‑Exos，建立RGC损伤模型，并通过玻璃体内同时注射N‑甲基‑D‑天冬氨酸NMDA和外泌体或PBS进行治疗，评估组织学和功能学变化，测定炎症和细胞凋亡相关基因和蛋白质的表达水平，观察RGC‑5细胞系在治疗后的凋亡情况。miR22或miR22高表达MSC的外泌体miR22‑Exos在抗炎、神经保护、视网膜功能保护、蛋白表达等方面具有理想的效果，为青光眼或其他RGC损伤疾病提供了潜在的治疗方法，进一步对治疗相关疾病的药物研发提供了一种新思路。

技术研发人员：于波,张晓敏,郝慧杰,邢小丽
受保护的技术使用者：天津医科大学眼科医院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21