改进的神经节苷脂类及其功能性衍生物的制作方法

专利名称：改进的神经节苷脂类及其功能性衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及改进的神经节苷脂类及其功能性衍生物，更确切地讲是N-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂类，N'-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂类和N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂类(在这些化合物中，酰基从脂肪族，芳香族，芳脂族，脂环类或杂环类有机酸衍生而来，其中至少在两个酰基中的一个不是脂肪族的)，它们的酯类，内酯类，酰胺类，和羟基全酰化物及其盐类。
本发明也针对含上述一种或一种以上神经节苷脂衍生物或其盐的药物制剂，以及它们的治疗应用和制备方法。
本发明的新衍生物的基本神经节苷脂可以是从天然产物，特别是从脊椎动物中枢和外周神经系统，也可是从肾上腺髓质，红细胞，脾脏或其它器官，提取出来的神经节苷脂类的一种。它们是较佳提纯的神经节苷脂，虽然不是单一的化合物，但可以看作是相同的，由于近似的分子式，其中包括低聚糖部分(对每一种神经节苷脂一般在化学上是特定的)，唾液酸部分(即由一种或一种以上唾液酸组成)和神经酰胺部分，后两部分通常由各种唾液酸和各种N-酰基神经鞘氨醇的混和物构成，各种N-酰基神经鞘氨醇在其脂肪链长度上不同，并带有从较高级脂肪酸而来的各种酰基。这样一种神经节苷脂的大致分子式表示如下
其中唾液酸的一般分子式为
其中一个或一个以上伯羟基或仲羟基也可酰化，其酰基来自乙酸或乙醇酸。“神经酰胺”残基系对应于下面两个分子式之一
其中n＝6-18，酰基来自具有16-22个碳原子的饱和和不饱和脂肪酸或来自相应的羟基酸。本发明的新型衍生物在酰基的本质方面是不同的。这里，酰基基团是单一的，而在神经节苷脂中它是具有16-22个碳原子的来自各种脂肪酸的混和物。另一个区别是，和神经节苷脂相反，酰基属于非天然存在的羧基酸系列，即属于芳香族、脂环类或杂环类系列。因之，它们是含有非天然存在的神经酰胺的半合成神经节苷脂衍生物。
存在于神经节苷脂中的唾液酸数目通常从1至5不等。唾液酸残基通过2-位上的羟基和低聚糖的羟基形成的酮糖型键连接在低聚糖上。
当几个唾液酸连接在一起时，它们分子的连接是由两个唾液酸分子的2-位和8-位羟基之间形成的酮糖键来完成的。神经节苷脂的唾液酸，包括如以前所述进行纯化的那些唾液酸，是各种化学上一元酸的混和物，例如，N-乙酰神经氨糖酸和N-乙醇酰神经氨糖酸，以前者为主，可能有一种或一种以上它们的O-酰基衍生物，如8-0-酰基衍生物。
低聚糖由最多5个单糖或它们的带有酰胺基的衍生物所组成，特别是己糖和它们的上述类型衍生物。无论如何在低聚糖中有至少1个葡萄糖或半乳糖分子。作为上述糖的酰胺基衍生物的最常见残基是N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰半乳糖胺。
为了更好地阐明包括在分子式(Ⅰ)中的神经节苷脂的结构，这基本上是本发明的衍生物的主要结构，特别是糖部分，唾液酸和神经酰胺之间的键的特性，在此一起，作为一个整体提供含一个单唾液酸(以N-乙酰神经氨糖酸或N-乙醇酰神经氨酸为代表)的“纯”神经节苷脂GM1的分子式
对于依照本发明的神经节苷脂“GM1”，分子式基本上是相同的，带有被相应的“人造”神经酰胺取代的神经酰胺残基，其N-酰基来自芳香族，脂环或杂环系列酸中的一个。
术语“溶解性神经节苷脂”被用在文献中来称呼从天然神经节苷脂消除其中神经鞘氨醇上的酰基得到的化合物。它可用酶法消除，例如，将神经节苷脂暴露在乙醇酰神经鞘酯-神经酰胺-脱酰基酶的作用下。这种类型的水解使神经氨酸残基上的酰胺基和酰羟基保持完整。为了使这些基团也脱酰基，从而得到在神经鞘氨醇上的氮和神经氨上的氮上都有游离氨基的神经节苷脂衍生物，必须用化学水解，例如用稀氢氧化钾。以此处描述的方法对神经氨氮脱酰基得到的神经节苷脂衍生物，通常以专门名词“去N-酰基-神经节苷脂”见于文献中，在此位置上的酰基是乙酰基。神经鞘氨醇残基和神经氨残基上的两个氮原子分别称作N和N'，术语“N'-溶解性神经节苷脂”也可用于上述的去N-乙酰基-神经节苷脂，同样，术语“溶解性神经节苷脂”也可用于在神经鞘氨醇残基上带游离氨基的衍生物，因之更精确地用术语“N-溶解性神经节苷脂”来认定。另一方面，术语“N-N'溶解性神经节苷脂”指带两个都是游离氨基的化合物。此命名法被用于本申请书的始终。
按本发明所得衍生物的上述定义包括神经节苷脂衍生物的基团，这种衍生物在神经氨氮上有个乙酰基;在神经鞘氨醇上有个芳香族，芳香脂肪族，脂环族或杂环族酰基。
本发明也包括从酶学法得到的上述溶解性神经节苷脂衍生出来的这种N-酰基-溶解性神经节苷脂，后者因之在其唾液酸中含有存在于天然神经节苷脂的酰基，主要来自乙酸和较少程度的乙醇酸的酰胺基混和物，以及可能有酯化羟基的酰基。术语“N-溶解性神经节苷脂”或“N-酰基-溶解性神经节苷脂”将用于本发明的以下介绍中，既用于可定性为“天然的”(如，天然N-溶解性GM1)这些衍生物，也用于在神经氨氮上具有单一乙酰基的那些衍生物，它们在本介绍之外或更可取地被称作N，N'-二-溶解性神经节苷脂类，例如，N-乙酰基-N'-苯甲酰基-N，N'-二-溶解性GM3。
术语“酰基-二-溶解性神经节苷脂”此后将用来表示本发明的所有新化合物。如以后将详述的，可单单在神经氨糖酸的氮上和羟基上选择性地将神经节苷脂脱酰基，例如，用稀碱氢氧化物。用从乙酰基(和乙醇酰基)开始的不同酰基来酰化这些化合物上神经氨残基的氨基，得到仍保留神经节苷脂天然部分的N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂，此天然部分即在神经鞘氨醇氮上的来自较高级脂肪酸的混和酰基。这些衍生物构成按本发明所得新化合物中最佳的一组，它们将被称作N'-酰基-N'-溶解性神经节苷脂，例如，N'-苯甲酰基-N'-溶解性GM1。
众所周知，神经节苷脂在神经系统起重要作用，最近证明，他们在外周神经系统病理学和中枢神经系统病理学的治疗上是有用的[Acta Psychiat.Scand.，55，102，(1977);Eur.Medicophys.，13，1，(1977);Ric.Sci.Educ.Perm.Suppl.9，115，(1978);Adv.Exp.Mcd.Biol.，71，275(1976);Electromyogr.Clin.Neurophy siol.，19，353，(1979);Minerva Medica，69，3277，(1978);Minerva stomat.，27，177，(1978);Med，del Lavoro，68，296，(1977);Brain Res.197，236，(1980)]。神经节苷脂的治疗作用主要在于刺激神经细胞发芽现象和激活与神经刺激的传导有关的酶，如Na+，K+-ATP腺苷三磷酸酶[Brain Res.，197，236，(1980)，J.of Neurochem.37，350，(1981)]。神经节苷脂刺激的神经元发芽促进受损的或毁坏的神经组织的功能性恢复。
我们已进行进一步的研究以发现在神经系统病理学的治疗上可能比神经节苷脂更有效的化合物。这些研究导致例如神经节苷脂内酯类的发现，在这类化合物中，糖部分的一个或一个以上羟基和唾液酸部分的一个或一个以上羧基发生酯化(分子内反应)，生成同样数目的内酯环，这种内酯类在促进神经元抽芽和激活与神经刺激传导有关的膜酶如Na+、K+-ATP酶上比神经节苷脂本身更有效(如，见美国专利4，476，119，4，593，091和4，716，223)。
神经节苷脂的“外”酯，即唾液酸的羧基官能团和脂肪族、芳香脂肪族、脂环类或杂环类的各种醇生成的酯，对神经元发芽和神经刺激的传导也显示了活性的改善。神经节苷脂的酰胺类也具有同样的性质，如酰胺类，酯类和单纯神经节苷脂的全酰化衍生物那样。所有这些衍生物，如美国专利4，713，374中介绍的，也被认为是本发明的酰基-二-溶解性神经节苷脂类的基础物质。
本发明的新化合物是半合成的神经节苷脂类似物，它们不同于现有技术的分子，由于在神经鞘氨醇氮和神经氨氮上均有N-酰基。它们不是“天然的”，因之至少有一个来自芳香族、芳香脂肪族，脂环类或杂环类的酰基。
此外，它们不同于天然的神经节苷脂(上述“天然的”N-酰基-N-溶解性神经节苷脂和N'-酰基-N'-溶解性神经节苷脂例外)，由于酰基是单一的，定义确切的这样一个事实。含有在神经氨氮上从乙酰基起不同酰基的那些衍生物，可以是存在于天然神经节苷脂上那种类型的酰基，即较高级脂肪酸如硬脂酸或棕榈酸的混和物。
在本发明基础上的发现是，新的“半合成”神经节苷脂也具有与天然神经节苷脂及其酯类、酰胺类、内酯类和所有这些化合物的全酰化衍生物基本相同的药理作用，就很多参数而论其作用范围是改变的，如神经元抽芽作用的“启动”、持续时间和强度(这可按酰基组分亲脂性或亲水性的大小进行调节)，或副作用的类型和程度(有时可证明它是负性的或正性的，根据要处理的治疗问题而定)。对蛋白激酶C的抑制作用是一例，在神经传递功能正常机制失平衡的某些情况下，它可以是不希望出现的负性作用。通过增加兴奋性氨基酸如谷氨酸和/或天门冬氨酸的浓度而触发激活作用。在上述异常条件下，这些酸对神经元细胞具有直接的毒性作用。本发明产品的一大优点是(这些产品置身于其它蛋白激酶C抑制剂如神经节苷脂类本身或神经鞘氨醇之外)，包括在于它们预防和对抗上述神经毒作用的能力。
重要的是强调，本发明的产品，和钙拮抗剂及谷氨酸受体拮抗剂(特别是NMDA)不一样，只在异常情况下起作用，因而限制了局部神经毒性，保持神经可塑性，从而使受损的生理功能更容易地恢复。在很多情况下，有可能使用本发明的衍生物，使对应于特定酰基的酸本身的作用而得到利用，可避免神经节苷脂部分的特异作用，这时神经节苷脂起了载体的作用。例如这样的情况，在新型的神经节苷脂中其N-酰基来自对中枢或外周神经系统有活性的一种酸，如麦角酸及其类似物，或烟酸和异烟酸。这些酸在体外有一定的作用，但在体内几乎很少或一点也没有作用。当它们按本发明引入神经节苷脂分子时，其作用在体内显示完全的程度。
本发明的神经节苷脂衍生物因而可被用来取代天然产物或上述已知的半合成衍生物，它们在病人不能对常规产品起满意的反应或存在个体特异反应或过敏反应性的情况下是很有价值的。此外，由于对应于N-酰基的酸的特殊药理作用，它们可被用作载体。
充作按本发明制备新的酰基-二-溶解性神经节苷脂基础的溶解性神经节苷脂类是可以从见于天然产物的神经节苷脂脱酰基而获得的上面所有那些神经节苷脂类，特别是在脊椎动物中枢和外周神经系统，也在肾上腺髓质，红细胞、脾脏或其它器官发现的。它们可以是纯化的神经节苷脂类，如在文献中以此术语定义的和以糖部分单一结构所代表的，或者可以是多种神经节苷脂的混和物。在被用作本发明衍生物的起始基础的最重要的神经节苷脂类中，可以提到的是那些例如在其分子中低聚糖由最多4个己糖残基组成，糖的部分是单一的神经节苷酯。己糖最好从由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰半乳糖胺构成的一组(神经节苷脂A组)中选择。这组神经节苷脂是例如从脊椎动物脑中提取的，见于“Gangliosides of the Nervous Systcm”in“Glycolipid Methodology”，Lloyd A.，Witting Ed.，American Oil Chemists Society，Champaign，Ⅲ.187-214(1976)(特别看表1)，例如神经节苷脂GM4，GM3，GM2，GM1-Glc NAc，GD2，GD1a-Gal NAC，GTlC，GQ和GT1，特别是那些其低聚糖含有至少一个葡萄糖残基或半乳糖残基，含N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺，最好是下面的(神经节苷脂B组)GM1Gal(1→3)GalNAC(1→4)Gal(1→4)Glc(1→1)神经酰胺
GD1nGal(1→3)GalNAC(1→4)Gal(1→4)Glc(1→1)神经酰胺
GD1bGal(1→3)GalNAC(1→4)Gal(1→4)Glc(1→1)神经酰胺
GT1bGal(1→3)GalNAC(1→4)Gal(1→4)Glc(1→1)神经酰胺
其中Glc代表葡萄糖，Gal NAC代表N-乙酰半乳糖胺，Gal代表半乳糖，NANA代表N-乙酰神经氨酸。
本发明也包括新的N-酰基-溶解性神经节苷脂类混和物，特别是从各种动物组织提取物(如“总”提取物或各种不同提取组份)中的神经节苷脂混和物得到的N-酰基-溶解性神经节苷脂类混和物，如文献中所述。此种文献的例子包括前面提到的论文或上述刊物，P159-186(1976)中的论文“Extraction and analysis of materials containing lipid bound sialic acid”以及同一出版物p187-214，和德国专利No.2549680中的“Gangliosides of theNervous System”。在这些新混和物中，神经节苷脂混和物的N-酰基部分被上述酰基中的一个所取代，它们可按本发明的方法以获得，如下文所公开的，通过神经节苷脂混和物的脱酰化和随后的再酰化，或者选择性地从神经节苷脂的唾液酸部分的其它脱酰化基团的再酰化。在用作起始物的最重要的神经节苷脂混和物中，有从神经系统，特别是从脑和已得到的含神经节苷脂GM1，GD1a，GD1b和GT1b的神经组织中得到的神经节苷脂提取物。
如上所述，在本发明的基础上发现，在此处描述的半合成神经节苷脂类似物及它们的上述功能性衍生物或盐，基本上具有和天然神经节苷脂或其类似物功能性衍生物相同的药理作用，而就很多参数来说，其作用范围不同。
这些改进的神经节苷脂对蛋白激酶C的激活也有抑制作用。
本发明的改进的神经节苷脂的上述药理学性质可用以下实验加以说明。
在神经元细胞的原始培养物中，刺激兴奋性氨基酸(EAA)受体，促进Ca+2流入增加和移位，随后激活蛋白激酶C(PKC)从胞浆移向细胞膜。在颗粒细胞的原始培养物中加入谷氨酸盐或暴露于缺氧条件下，引起细胞损毁，导致神经元死亡。急性脑局部缺血之后谷氨酸能神经传递改变，触发了一系列变化，如体外试验所见，导致细胞死亡。
已知将神经元原始培养物预先暴露于三唾液酸酰基-N-四糖基神经酰胺(GT1b)或单唾液酸酰基-N-四糖基神经酰胺(GM1)，可抑制PKC移位并防止谷氨酸盐引起的细胞死亡。
结合试验表明神经节苷脂的作用机制与受体拮抗并无联系。
这儿报告的是用下列神经节苷脂衍生物进行的实验，N'-3，4，5-三甲氧基苯甲酰基-N'-溶解性GM1(Ligade 5)，N-(2-呋喃甲酰)-N-溶解性GM1(Ligade 34)，N-(1-甲基-2-吡咯-羰基-N-溶解性GM1(Ligade 38)，N-(2-噻吩乙酰基)-N-溶解性GM1(Ligade 45)，N，N'-二-苯乙酰基-二-溶解性GM1(Ligade 82)，，N，N'-二-(2-吡啶乙酰基)-二-溶解性GM1(Ligadc 84)，和N，N'-二-(5-甲基-2-噻吩羧基)-二-溶解性GM1(Ligade 85)，这些化合物适用于评价对谷氨酸盐引起的神经元死亡的拮抗能力。
材料和方法细胞培养物应用出生8天的Sprague Dawley大鼠的小脑颗粒细胞的原始培养物，含＞90%的颗粒细胞，约5%的GABA能神经元和＜5%的胶质细胞。在这些实验中，细胞在培养的第12天使用。
用谷氨酸盐诱发的神经毒性将谷氨酸盐(100μm，用无Mg+2洛氏液配制)加入至细胞中，室温下放置15分钟(对照组无谷氨酸);用洛氏液将培养物洗3次以除去过量谷氨酸，然后在原始培养基上重新辅成平板。
化合物的增溶、培养和分析方法将Ligade 5，34，38，45，82，84和85溶于氯仿/甲醇(2∶1)，在氮气中干燥，再悬于加Mg+2洛氏液，终浓度为5×10-6M，然后在诱发神经毒性前15分钟加入37℃培养物中。GM1同样地增溶，终浓度1×10-4M，在暴露于-L-谷氨酸盐前120分钟加入细胞中。
24小时后，用MTT((3-4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-四唑)比色法(D.O.570-630)估测细胞存活情况。
结果实验表明Ligade 5，34，38，45，82，84和85在浓度为5×10-6M时(GM1在浓度1×10-4M时用于对照)，在预防谷氨酸诱导的神经毒性上证明是有效的(P＜0.05)(表1)。
应当注意的是，Ligadc衍生物在低于GM1所需浓度10倍的剂量下在短得多的时间后是有效验的。
讨论实验所得结果清楚地表明，名为Ligade 5，34，38，45，82，84和85的新型神经节苷脂衍生物能够拮抗在小脑颗粒细胞原始培养物上谷氨酸诱发的神经毒性。
新衍生物的效应特别令人感兴趣，因为这是在相应效应水平上比GM1浓度低10倍以上时，并且在较短时的预培养后观察到的。
关于这一效应，本发明的衍生物可被推荐用于谷氨酸能型损伤的急慢性病理学上，例如大脑局部缺血，创伤、癫痫、舞蹈病、巴金森氏疾病、老熟和痴呆，以及脑部疾病，低血糖和缺氧。在脑损害基础上的某些机制，特别是关于神经毒性，对于其它系统的损害也是常见的，例如神经心血管系统。
表1.在小脑颗粒细胞原始培养物中外源性谷氨酸诱导的神经毒性模型上Ligade 5，34，38，45，82，84和85的保护作用。
细胞存活化合物 MTT(DO570-630)对照含Mg+2洛氏液 0.156±0.021L-谷氨酸 0.103±0.004L-Glu+Ligade 5 0.147±0.01434 0.126±0.00338 0.131±0.00345 0.138±0.00682 0.165±0.00684 0.151±0.00785 0.126±0.008
+GM10.133±0.018颗粒细胞在培养的第12天使用，在室温下暴露于100μM L-谷氨酸盐(L-Glu)15分钟。在神经毒性诱导前15分钟，加入溶于洛氏液，终浓度为5×10-6M的Ligade衍生物，而GM1为1×10-4M预培养120分钟。GM1和Ligade衍生物相对于L-Glu P＜0.05。
鉴于上面描述的药理学性质，上述半合成神经节苷脂类似物可被用作治疗下列疾病的药物。大脑局部缺血，代谢性脑病如低血糖和缺氧，毒物源性脑病，创伤，衰老，癫痫、神经变性性疾病如巴金森氏疾病和亨廷顿舞蹈病，以及精神性疾病。
最好配成适当缓冲的水溶液，注射给药，肌注，皮下注射，静注，经皮或经肺给药。将该药物配制成含衍生物的溶液，和其它可选择的辅助成分放于小瓶中，可确保其安全贮存。如下文在本发明的药物制剂实例中所示。为治疗或也可能作为预防，上述胃肠外途径应用，其剂量宜在每天每公斤体重0.05mg-5mg内变动，特别是在每天每公斤体重0.05mg 2mg之间。
虽然根据本发明，新的治疗应用一般适合于和神经传导损害相关联的全部病理过程，但可特别提及下面这些眼球后视神经炎，眼球运动神经麻痹、三叉神经痛、而神经麻痹、面瘫、Garcin's综合症，外周神经创伤性损害、糖尿病性和酒精性多神经炎、产科性麻痹、麻痹性坐骨神经痛、运动神经元疾病、肌萎缩性侧索硬化、脊髓病性肌萎缩、进行性延髓性麻痹、重症肌无力和Lambert Eaton's综合症、肌营养障碍，中枢和外周神经系统突触神经传递减弱，意识缺陷如精神混乱、震荡、血栓形成和栓塞。
本发明也包括以下化合物新酰基-溶解性神经节苷脂类的唾液羧基功能性衍生物，即酯类和酰胺类，和在唾液羧基与低聚糖的羟基间有内酯键的内酯类，与神经节苷脂类衍生物及神经节苷脂羟基上的全酰化衍生物相似，酰基-溶解性神经节苷脂类和上述它们的功能性衍生物，所有新酰基-二-溶解性神经节苷脂类及其功能性衍生物的盐。这些唾液酸功能性衍生物可用相应神经节苷脂上述各专利中介绍的方法，从新的酰基-二-溶解性神经节苷脂类获得。
本发明也特别包括这些衍生物的混合物，如按本发明从酰基-溶解性神经节苷脂类混和物得到的，后者又是从上述神经节苷脂混合物得到的。
本发明的新N-酰基-溶解性神经节苷脂衍生物的酯基特别来源于下列醇(1)脂肪族类尤其是有最多为12个碳原子主要是有6个碳原子的醇，(2)芳脂族的醇，最好只带一个苯环，可任意被1-3个低级烷基(C1-4)如甲基取代，在脂肪链上最多有4个碳原子，(3)脂环类或脂肪族脂环类的醇，只带一个环脂肪族环，最多14个碳原子，(4)杂环类醇，有最多12个主要是6个碳原子，只有一个杂环，上面只有一个由N，O和S组成的基团上来的杂原子。本发明的N-酰基-溶解性神经节苷脂衍生物上羧基功能团的酰胺基来自于氨和任一类胺，最好有最多12个碳原子。
上述醇类和胺类可以是未取代的或取代的，尤其是被来自下列基团的化合物的功能团所取代羟基，在烷基上有最多4个碳原子的氨基或烷氧基，在烷基残基上有最多4个碳原子的羧基或烷酯基，在其烷基上有最多4个碳原子的烷氨基或二烷氨基，上述醇和胺可以是饱和的或不饱和的，尤其是只带一个双键的。
使本发明所得N-酰基-溶解性神经节苷脂的羧基功能基团酯化的醇可以是单价或多价的，特别是二价。在脂肪族的醇中应特别提及有最多6个碳原子的低级醇，如甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇，以及二元醇乙二醇和丙二醇。在芳香脂肪族中的醇应特别提及有一个单苯环的，如苯甲醇和苯乙醇。在脂环类醇中优先权应给予只有一个环脂肪族环的醇，如环己醇或萜烯醇，如
烷醇或香芹
醇，或萜品醇或薄荷醇之一。
在杂环类的醇中，应特别提及四氢呋喃醇或四氢吡喃醇。为了酯化N-酰基-溶解性神经节苷脂的羧基，还可用取代的脂肪醇，如被氨基功能团取代，例如氨基醇，如最多带有4个碳原子的氨基醇尤其是带有二烷基(C1-4)-氨基的氨基醇，如二乙氨基乙醇。
按照本发明的羧酰胺功能团来自氨(在这种情况下酰胺是未取代的-CONH2)或来自伯胺或仲胺，尤其是含最多为12个碳原子的。这些胺可以是芳香族的，杂环类或脂环类的，但最好是脂肪族的。本发明的最佳对象是有最多12个碳原子的脂肪族胺类的羧酰胺衍生物，其中的胺可以是开链、直链或支链的或环状的，例如来自有1-6个碳原子的烷基的烷胺，如甲胺、乙胺、丙胺、己胺、二甲胺、二乙胺、二-异丙胺、二己胺，或来自有3-6个碳原子的直链亚烷基的亚烷胺类，或相应的链被1-3个甲基取代的，如吡咯烷、哌啶和氮杂草。这些胺的烷基或亚烷基，在碳原子链上可被中断或被其它杂原子特别是氮原子所取代。这样的话，本发明的酰胺来自二胺类，如乙二胺、丙二胺或哌嗪。如果烷基或亚烷基被氧或硫原子中断或取代，酰胺就代表氨基醇的衍生物，例如氨基乙醇或氨基丙醇，或从吗啉或硫代吗啉得来的氨基醇。
依照本发明，特别有趣的是来自上述神经节苷脂A组和B组的N-酰基-溶解性神经节苷脂类及其混合物的酯和酰胺。
本发明也包括在此所述的酯和酰胺的糖部分，唾液酸和神经酰胺的羟基上全酰化的衍生物。这些衍生物中，酰基可来自于脂肪族、芳香族、芳脂族、脂环类或杂环类的酸。它们最好来自有最多10个碳原子特别是6个碳原子的脂肪族类，例如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸类、戊酸、己酸或癸酸。它们也可来自例如有同样数目碳原子但被取代的酸类，特别是被羟基酸如乳酸取代，被氨基酸如甘氨酸取代，或被二元酸如琥珀酸、丙二酸或顺丁烯二酸取代。
在芳香族酸中应当提到只有一个苯核的，特别是苯甲酸及其带甲基、羟基、氨基或羧基基团的衍生物，如对氨基苯甲酸、水杨酸或苯二甲酸。
本发明也包括前面介绍的N-酰基-溶解性神经节苷脂类及其混合物的全酰化衍生物，但带有游离的羧基功能团。对于这些衍生物，特别重要的是从此处列出的酸中得到的酰化衍生物。特别要提到的一组新衍生物是由在羟基上酯化或转为酰胺或全酰化的神经节苷脂类所组成，它的酯基来自有最多6个饱和碳原子的脂族醇，未被取代或被下列基团取代羟基、最多有4个碳原子的烷氨基、氨基、在烷基上最多有4个碳原子的烷氨基或二烷氨基、羧基、在烷基残端上有最多4个碳原子的烷酯基，或被下列醇类取代至多带一个双键的相应醇类，只带一个未取代或被1-3个甲基取代的苯环的芳脂醇，只带一个环己烷环的环脂肪醇或脂肪基环脂肪醇(环上未取代或被1-3个甲基取代，脂肪链上最多有4个碳原子)、四氢呋喃醇或四氢吡喃醇。
在此处的酰胺基可能来自氨，或在烷基上最多有6个碳原子、在亚烷基上有4-8个碳原子的烷氨基、二烷氨基或亚烷氨基，其中烷基或亚烷基在碳原子链上可被选自由氮、氧和硫形成的基团的杂原子所中断，氨基有时可能是-NH-，这里的氮原子被最多4个碳原子的烷基取代，和/或它们可被选自由氨、最多含4个碳原子的烷氨或二烷氨基团形成的化合物的基团所取代，或被羟基或在烷基上最多有4个碳原子的烷氧基所取代，或被只有一个苯环的芳香脂肪胺取代，而此处的酯化羟基的酰基则来自最多有6个碳原子的饱和和或不饱和脂肪酸，它也可被由羟基、氨基和羧基形成的化合物的功能团或被它们的盐所取代。
在新的半合成神经节苷脂类似物的功能性衍生物中尤其应提及上述新化合物的唾液酸酯，它们来自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、苄基、烯丙基、乙氧羰甲基，或环己醇，可提及的来自甲胺、乙胺、丙胺、二甲胺、二乙胺、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉，或硫代吗啉的唾液酸酰胺类，以及它们的全酰化物、全丙酰化物、全丁酰化物、全马来酰化物，全琥珀酰化物，以及上述唾液酸酯类和酰胺类的全酰化类似物。
从芳香族、环脂族或杂环类的酸而来的N-酰基基团可具有直接、或通过脂肪族的亚烷基(RCH)残基，连接于神经节苷脂衍生物的神经氨或神经鞘氨醇残基的脲基-NH-CO-上的环状系统。因而在本发明范围内，上述术语既包含象这样的芳香族、脂环或杂环酸的衍生物(即直接连接在脲基上的)，也包含芳香脂肪族、脂肪族、脂环族和脂肪杂环酸。这些烃基残基的环当然可接着被脂肪烃基所取代。上述脂肪链也可被杂原子中断，例如选自N、S和O形成的基团的杂原子。环状系统可为单环或多环，后者最好是二环。酸类可以是一元或多元的，在后一种情况最好是二元的。
本发明的化合物的N-酰基基团最好具有6-24个碳原子，可含一个或一个以上环状系统，但最好只有一个，环状系统本身可选择地被脂肪族烃基尤其是烷基，最好是含最多6个碳原子的烷基所取代。N-酰基基团的烃基残基，既可在脂肪链部分也可在环上，被下列功能团或改变的功能团所取代，例如特别是卤素(如氯、溴和氟)、游离或酯化的羟基、游离或酯化的氨基、或酰化物、烷基或亚烷基、游离或催化的氧化基团、肟类或取代肟、腙或取代腙、游离或醚化的巯基、游离或取代的硫酰胺基团、游离或酯化的磺酰基、亚砜基、硝酰基或硝基。羟基或氨基的酯可从脂肪类、芳脂类、脂环类或杂环类的酸得到。这样的酯基首先是从治疗上可接受的酸而得到。脂肪族酸最好是含最多8个碳原子的较低级酸，如乙酸、丙酸、丁酸、或戊酸如异戊酸，或它们的取代衍生物，例如羟基酸(如羟乙酸，或α-或β-羟丁酸、乳酸)，或氨基酸(例如天然氨基酸如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸，或苯基甘氨酸)，或二元酸(如丙二酸、琥珀酸、顺丁烯二酸或苹果酸)，它们也可被选择地取代。
芳香族系列的酸是例如苯甲酸或其被1-3个较低级烷基、羟基或较低级烷氧基、或被卤素如氯、溴或氟取代的衍生物。在芳香脂肪类酸中首先应提及只有一个苯环的，如苯乙酸或苯丙酸，如前所述可选择地被取代。脂环类酸最好是有5或6个碳原子的环，如环己烷碳酸和环己烷二碳酸。杂环类酸是今后要报告的，但最好是只有一个杂环基团的简单酸，例如，吡啶的衍生物如烟酸或异烟酸或吡咯烷碳酸。
能代表羟基或巯基的醚化基团的醚化组份的合适的醇是所有以上所列的关于唾液酸羧基的酯，以它们功能性衍生物的形式作为本发明的酰基溶解性神经节苷脂部分。较佳的是低级脂肪族或芳基脂肪族醇，在其脂肪族部分最多4个碳原子。在氨基上作为取代基，或在取代的缩酮，乙缩醛或酮基中或在酯化羧基中的烷基或芳烷基优先在其脂肪族部分最大为4个碳原子和一个苯环，它可任意被取代如前所述。同样最大数目的碳原子也存在于所有在以前称作“较低级”脂肪族基团中。较低级亚烷基，能取代氨基，这样形成饱和杂环基团，它系由那些具有4或5个碳原子所组成。
芳香酰基最初从只有一个芳香环的酸衍生，如苯甲酸及其取代的衍生物，此衍生物由一个或更多个，尤其是1到3个基团，从由烷基，羟基，氧代，氨基，巯基，羧基和磺基组成的组中选出的，这些基团可以是没有修饰或功能上经修饰的，或卤素，如前所述所取代。这些例子包括苯甲酸、水杨酸，对氨基苯甲酸，甲苯甲酸的三种同分异构体，邻苯二甲酸，间苯二甲酸或对苯二甲酸，对羟基苯甲酸，原儿茶酸，茴香酸，香草酸，藜芦酸，胡椒基酸，二羟基苯甲酸，苔色酸，焦棓酸，对氨磺酰苯甲酸，2，6-二甲氧基苯甲酸，3，4，5-三甲氧基苯甲酸，2-氯代苯甲酸，3-氯代苯甲酸，4-氯代苯甲酸，4-乙酰胺基苯甲酸，N-乙酰邻氨基苯甲酸，3-氨基-苯甲酸，4-氨基苯甲酸，2-氨基-4-氯代苯甲酸，4-氨基-2-氯代苯甲酸，3-氨基-4-甲氧基苯甲酸，4-丁氧基苯甲酸，4-丁基苯甲酸，2-氯代-5-甲基硫代苯甲酸，4-氯代苯氧基乙酸，4-氯代-3-氧磺酰基苯甲酸，4-氰基苯甲酸，2，3-二氯-苯甲酸，2，4-二氯苯甲酸，2，5-二氯苯甲酸，2，6-二氯苯甲酸，3，4-二氯苯甲酸，3，5-二氯苯甲酸，4-二乙基氨基苯甲酸，3，4-二氟苯甲酸，4-乙氧苯甲酸，2-氟代苯甲酸，4-氟代苯甲酸，4-氟代苯氧基乙酸，4-庚基苯甲酸，2-(4-羟基苯氧基)丙酸，4-甲基硫代苯甲酸，苯氧基乙酸，2-磺基苯甲酸，和2-三氟-0-甲苯甲酸。
这些酰基也可从有几个苯环的酸衍生而来，苯环稠合或没有稠合，或从有苯环和其它环状烃基，如脂环或杂环残基的酸衍生而来，如萘甲酸，对氨基萘甲酸，对羟基萘甲酸，萘二甲酸，二苯基-0，0'-二碳酸，3-甲基茚-2-羧酸和2-乙氧基-1-萘甲酸。
在芳基脂肪族中，可有如上提到只有一个苯环的，如前所述可选择地替代的，其中脂肪族链优先具1到6个碳原子。这些酸可以是直链或支链的，饱和或未饱和的，也可被前述一个功能或它们的衍生物所取代，和/或能从N，O和S组中选出的杂原子所中断，或由其它芳香基或杂环或脂环核所中断。此种类型的特定酸有，如苯基乙酸，水溶酸，肉桂酸，苯丙炔酸，胡椒酸，扁桃酸，3-(4-氟代-苯甲酰基)-丙酸，α-氟代肉桂酸)-4-氟代肉桂酸，3-氟代-4-羟基苯基乙酸，4-氟代苯氧基乙酸，α-氟代苯基乙酸，4-羟基扁桃酸，(+)-6-甲氧基-α-甲基-2-萘乙酸，1-萘氧基乙酸，苯氧基乙酸，4-苯氧基苯甲酸，3-三氟代甲基肉桂酸，4-三氟甲基扁桃酸，α，α，α-三氟代-对甲苯乙酸，3，4，5-三甲氧基-肉桂酸，苯基甘氨酸，D-4-羟基苯基甘氨酸，α-磺基苯乙酸，4-羟基苯基丙二酸，α-氨基-3，4-二-羟基苯乙酸，4-氨基肉桂酸，N-苯甲酰基-L-苏氨酸，苄基硫代羟基乙酸，4-溴代扁桃酸，氯代乙酰基酪氨酸，2-氯代-6-氟代苯乙酸，4-氯代苯氧基乙酸，反式肉桂酸，3-(4-氟代苯甲酰基)-丙酸，4-氟代苯乙酸，DL-4-羟基扁桃酸，2-(4-羟基苯氧基)-丙酸，(S)-(+)-α-甲氧基苯乙酸，(R)-(+)-α-甲氧基-α-(三氟代甲基)-苯乙酸，和(S)-(-)-α-甲氧基-α-(三氟代甲基)-苯乙酸。
脂环酰基最初从含1到3个脂环的酸衍生，脂环优先从那些具5到7个环碳原子中选出，任意由芳香烃残基取代，如苯或萘，或脂肪族残基，如烷基或链烯基，优先具1到6个碳原子，或由羟基，氧代，氨基或羧基，以上这些基团是没有或经功能性修饰的，如前所述。从这些脂环酸衍生的那些基团中，羧基直接取代一个或多个环上氢原子，或者它可在上述一个脂环族烃基中发现，因此提供脂环-脂肪族酸。在此情况下，这些脂环脂肪族酸中的脂肪族链由那些上面为芳基脂肪酸列出的功能所取代，或它能被先前所提到的杂原子所阻断。对此系列专一的酸有，如环丙烷羧酸，环丁烷羧酸，环己烷羧酸，1-氨基-1-环己烷羧酸，环戊烷羧酸，2，2-二氯-1-甲基环丙烷-羧酸，1-甲基-1-环己烷羧酸，3-正-金刚烷-羧酸，1-苯基-1-环丙烷羧酸，(±)-1-苯并环丁烯羧酸，(1S)-(-)-烷酸，(+)-樟脑羧酸，(-)-异冰片乙酸，(-)-甲氧基-乙酸，5-甲氧基-1-(2，3-二氢-1-茚酮)-3-乙酸，3-甲基-1-金刚烷乙酸，3-甲基茚-2-羧酸，2-降冰片烷乙酸，1，2，3，4-四氢-2-萘甲酸，1-金刚烷乙酸，环庚烷羧酸，和环己烷丁酸。
为本发明目的服务的特定感兴趣的一组包括甾类酸，如胆酸和胆甾烷酸，如胆烷酸，胆酸，石胆酸，脱氧胆酸，及各自相应的乙二磺酸(ethio-acids)，这些乙二磺酸从雄甾烷或孕烷或从它们在4，5-位未饱和衍生物衍生的。
含酰基的杂环残基可从此系列酸所衍生，可为三环或八环的，优先在戊和庚环烷的之间，以及可含从0，N和S组中选出的一到四个杂原子，可为饱和的或不饱和的，尤其是有一个双键的芳香系统。而且，它们能够被一或更多组已叫作芳香或脂环酰基的基团所取代。尤其它们能被脂肪族烃基取代，特别是最大为6个碳原子的烷基，它们也能在碳链中被以上所述的一个杂原子所中断。此类中的杂环基团也可被脂肪族酸，脂环或芳基脂肪族酸取代，在这种情况下，同样地脂肪族链可被以上所述基团中的一个所取代，如氨基，羟基，没有或有功能修饰磺基或磺酰胺基，或者它们可以上述方式被其它杂原子所中断。
尤其需要提到的是从杂环单环酸衍生的酰基，如吡咯，吡唑，咪唑，噻吩，呋喃，吡喃，吡啶，嘧啶，吡嗪，噻喃，噁唑，异噁唑，噻唑，异噻唑，三唑，四唑，三嗪和那些由这些杂环与苯或萘环，或与此类型的几个芳环稠合得到的，尤其如吲哚，中氮茚，香豆素，硫茚，咔唑，吲唑，苯并咪唑，苯并异噻唑，苯并噻唑，喹啉，异喹啉，吖啶，菲啶，苯并吡喃，噌啉，2，3-二氮杂萘，喹唑啉，吩嗪，吩噁嗪，吩噻嗪和酚嗪，以及那些由一个或多个上述杂环化合物与其它杂环和/或芳环或苯环稠合而衍生的。
最后，考虑从生物碱衍生的上述酸类。这些酸优先是已知的具生物或治疗-药学意义的酸。
根据本发明的神经鞘氨醇和/或神经氨糖酸的酰基可从上述杂环类型的酸化合物衍生，其中存在芳香型的双键，如在吡啶或吡唑中的，或从相应的衍生物，部分或完全氢化的衍生，如哌啶或哌嗪。以下是这些酸的特定例子2-呋喃甲酸，3-呋喃甲酸，2-噻吩乙酸，2-氨基-4-噻唑乙酸，烟酸，异烟酸，吡啶甲酸，7-茶碱乙酸，2-氨基烟酸，6-氨基烟酸，5-氨基乳清酸，(S)-(-)-2-氮杂环丁烷羧酸，5-溴代烟酸，5-氯代吲哚-2-羧酸，6-氯代烟酸，噌啉-4-羧酸，L-组氨酸，N-乙酰基-L-组氨酸，N-乙酰基-L-色氨酸，3-氨基-4-吡唑羧酸，3-氨基-1，2，4-三唑-5-羧酸，5-苯并咪唑羧酸，2-苯并呋喃羧酸，(
)-生物素，2-氯代烟酸，2，4-二羟基嘧啶-5-羧酸，5-氟代吲哚-2-羧酸，2-呋喃丙酸，5-乙内酰脲乙酸，5-羟基吲哚-3-乙酸，5-羟基-2-吲哚羧酸，6-羟基烟酸，4-咪唑乙酸，5-甲氧基吲哚-3-乙酸，5-甲氧基吲哚-2-乙酸，5-甲氧基-2-甲基-3-吲哚乙酸，4-甲氧基-2-喹啉羧酸，Kinurenic acid，硫代Kinurenic酸，7-氯代Kinurenic酸，氯代硫代Kinurenic酸，氟代硫代Kinurenic酸和三氟甲基硫代Kinurenic酸，1-甲基吲哚-2-羧酸，6-甲基烟酸，N-甲基-L-脯氨酸，1-甲基-2-吡咯羧酸，3-甲基-2-噻吩羧酸，5-甲基-2-噻吩羧酸，niflumic酸，5-硝基-2-呋喃甲酸，(-)-2-氧代-4-噻唑烷羧酸，1-哌啶丙酸，2-吡嗪羧酸，4-吡唑羧酸，4-哒嗪羧酸，2-吡啶基乙酸，3-(3-吡啶基)-丙烯酸，4-吡啶基硫代乙酸，(2-嘧啶基硫代)乙酸，喹哪啶酸，3-喹啉羧酸，4-喹啉羧酸，4-(2-噻吩基)-丁酸，3-噻吩乙酸，2-噻吩乙酸，2-(甲基硫代)-烟酸，4-吡啶基硫代乙酸，四唑-1-乙酸，α-氧代-2-呋喃乙酸，(甲氧基氨基)-2-呋喃乙酸，2-α-(甲氧基氨基)-4-噻唑乙酸，α[[(4-乙基-2，3-二氧代-1-哌嗪)羰基]氨基]-苯乙酸，1，3-二噻烷-2-羧酸，3-(2-氯代苯基)-5-甲基-4-异噁唑羧酸，3-(2-氯代-6-氟代苯基)-5-甲基-4-异噁唑羧酸，和3-(2，6-二氯苯基)-4-异噁唑羧酸。
在本发明的N-和N'-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂中，酰基是以上所说的芳基，脂环，芳基脂族或杂环系列中的基团。因此，至少一个酰基，是在神经鞘氨醇的氮和神经氨糖酸的氮上的两个，都必须是这个性质的。在N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂上，两个酰基都可从上述酸衍生，对本发明来说这种化合物尤其重要，因为它们容易制备。
在N，N'-二酰基衍生物中，一个酰基也可从饱和或不饱和脂肪族酸衍生，取代或未取代，优先为1到24个碳原子，这些酸可为具有1到11个碳原子，直链或具有支链的低级酸，如甲酸，乙酸，丙酸，丁酸，戊酸，尤其如正戊酸和异戊酸，新戊酸，己酸和异乙酸，庚酸，辛酸，壬酸，癸酸和十一酸，二-叔-丁基乙酸和2-丙基戊酸。不饱和酸可为当归酸和惕各酸。合适的较长链酸包括那些直链的，尤其是有12到16个碳原子的酸，如月桂酸，肉豆蔻酸和棕榈酸。含更高碳组分的那些包括如油酸，反油酸，十八酸，二十烷羧酸和二十二碳烷酸。在有支链的酰基中，支链优先为最大为4个碳原子的低级烷基，尤其是甲基。
尤感兴趣的是N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂，其中在神经氨糖酸氮上的脂肪族酰基是如在天然神经节苷脂上的混合酰基，即大部分是乙酰基，少数分是乙醇酰基，其中神经氨糖酸残基上的羟基也任意被酰化。这种衍生物是这样获得的在神经节苷脂的神经鞘氨酸氮上进行选择性水解，同以上所述芳香族，芳基脂肪族，脂环或杂环系列中的一种在N位酰化上述获得的N'-溶解性神经节苷酯。
相似地，可以选择性水解神经节苷脂，在神经氨糖酸氮上及在获得的N'-溶解性神经节苷脂中，在此位点用以上所述非脂肪酸的一种酰化氨基。从较高级脂肪酸衍生的混合酰基，如在天然神经节苷脂中存在的，保留在神经鞘氨醇氮上。这是本发明的较佳目的。
任意存在于神经氨糖酸氮或鞘氨醇氮上的脂肪族酰基也可由没有功能性或功能性修饰的基团，优先为功能极性基团取代。优先地，存在1到3个功能基，并从由羟基，氨基，酮基，巯基，羧基，磺基，磺酰胺，亚砜，或砜及硝酰或硝基中选出，及从这些基团的功能衍生物如羟基，巯基，羧基，磺基，缩酮，缩醛，酮肟，醛氧基和腙基中选出的。这个类型的基团可任意地与被具有在脂肪族部分1到6个碳原子，优先只有一个苯环的低级脂肪族或芳基脂肪族烃基取代，如烷基胺，亚烷基胺，烷基巯基，烷基磺酰胺和烷基腙基。烃基的酯中可提到的尤其是那些无机氢酸，如卤素，尤其是氯，氟和溴。
在本发明新的酰基-二-溶解性神经节苷脂中，特别重要的是从天然神经节苷脂衍生的N-酰基-N-溶解性神经节苷脂，如神经节苷酯GM1，GD1a，GD1b，GT1b，GM2和GM3在这些衍生物中，神经氨糖酸的酰基是那些存在于神经节苷脂中的，如混合乙酰-乙醇酰基，乙酰基是普通存在的，其中唾液酸的羟基任意由相应酸酯化。它们从神经节苷脂处获得，通过涉及单独鞘氨醇氮上的去酰化的酶水解，及通过随后用芳香族，芳基脂肪族脂环族或杂环酸酰化的方法。以下是这些化合物的例子N-2，6-二甲氧基苯甲酰基-N-溶解性GM1N-5-甲氧基-2，3-二氢-1-茚酮-3-乙酰基-N-溶解性GM1N-苯乙酰基-N-溶解性GM1N-环丁烷羧基-N-溶解性GM1N-2-降冰片烷乙酰基-N-溶解性GM1N-呋喃甲酰基-N-溶解性GM1N-咪唑乙酰基-溶解性GM1N-6-甲基烟酰基-N-溶解性GM1N-甲基脯氨酰-N-溶解性GM1N-1-甲基-2-吡咯羧基-N-溶解性GM1N-2-吡啶乙酰基-N-溶解性GM1
N-4，4-吡啶硫代乙酰基-N-溶解性GM1N-3-喹啉羧基-N-溶解性GM1N-四唑基-1-乙酰基-N-溶解性GM1N-7-茶碱乙酰基-N-溶解性GM1N-2-噻吩乙酰基-N-溶解性GM1N-3-氨基-1，2，4-三唑-5-乙酰基-N-溶解性GM1N-乙酰基-DL-色氨酸乙酰基-(α，α，α-三氟-甲苯胺)-烟酰-GM1N-5-海因乙酰基-N-溶解性GM1N-5-羟基吲哚-3-乙酰基-N-溶解性GM1N-2-氯代烟酰基-N-溶解性GM1N-5-甲基-2-噻吩乙酰-N-溶解性GM1N-5-苯并咪唑乙酰基-N-溶解性GM1N-5-羟基-2-吲哚乙酰-N-溶解性GM1N-3，4，5-三甲氧基苯甲酰基-N-溶解性GM1N-环庚烷乙酰基-N-溶解性GM1N-环戊烷乙酰基-N-溶解性GM1N-5-甲基-2-噻吩乙酰-溶解性GM1以及其它以前所述基本神经节苷脂的相应衍生物，以及所有这些化合物的内酯。
N，N'-二酰基-N，N'二-溶解性神经节苷脂是相应于上述N-酰基-N-溶解性神经节苷脂的衍生物，从以前所述的GM1或其它神经节苷脂衍生而来，其中神经氨糖酸氮上的氨基也由同样的酸酰化，如N，N'二-环庚基乙酰基-N，N'-二-溶解性GM1N，N'-二-环戊基羧基-N，N'-二-溶解性GM1
N，N'二-苯乙酰基-N，N-二-溶解性GM1N，N'-二-吡啶乙酰基-N，N'-二-溶解性GM1或N，N'-二(5-甲基-2-噻吩乙酰)-二-溶解性GM1从这儿所述的神经节苷脂GM1和其它基本的神经节苷脂衍生的N'-单酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂的例子包含在例子中提到的酰基，其中酰基在神经氨糖酸氮上而不是在鞘氨醇氮上对GM1N-单-溶解性神经节苷脂有专一性。根据本发明的另外一组有兴趣的化合物是如相应于上述N-酰基-N-溶解性GM1化合物的神经节苷脂衍生物，其中在神经氨糖酸氮上的“天然”混合酰基由具有3到6个碳原子的脂肪族酸取代，例如戊酸或新戊酸，或此类型由卤素取代的酸，即单氯代乙酸或二氯代乙酸，或具有12到18个碳原子的脂肪族酸，如十六酸，油酸或十八酸。
具有功能性修饰的唾液酸羧酸功能的化合物可为从具有1到6个碳原子的低级脂肪醇衍生的酯，如甲酯，乙酯或丙酯，从低级脂肪族胺衍生的酰胺，如甲胺，乙胺或丙胺或环胺，如哌啶或哌嗪，吡咯烷，所有以上所述特定化合物的内酯，全酰化物，全乙酰化物，全丙酰化物，和全丁酰化物(即从具有1到6个碳原子的脂肪族酸衍生的酰化物)。
本发明的半合成神经节苷脂类似物可用已知方法制备，通过酰化二-溶解性神经节苷脂或它们的N-酰基或N'-酰基衍生物，或任意地在鞘氨醇氮和神经氨糖酸氮上选择性将N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂去酰化。
为制备其中酰胺基是从同样酸衍生的二-酰基衍生物，为简便起见，优先在一次操作中用已知方法酰化二-溶解性神经节苷脂。可从神经节苷脂或N-溶解性神经节苷脂通过加碱水解得到二-溶解性神经节苷酯，如用四烷基铵氢氧化物，氢氧化钾或其它。为制备其中酰胺基是从不同酸衍生的本发明产物，优先用二-溶解性神经节苷脂的N-或N'-单酰基衍生物做为起始材料。N-单-酰基-二-溶解性神经节苷脂可通过选择性酰化从二-神经节苷脂获得，因为鞘氨醇氨基比神经氨糖酸氨基更具反应活性。根据已知方法温和地酰化二-溶解性神经节苷脂，如用肽化学中的酰化方法，可获得上述在鞘氨醇氮上的单酰基衍生物。接着以传统方式在神经氨糖酸氮上酰化。在此情况下获得本发明产物的酰化步骤包括一个二步酰化反应。
可用不同方法制备在神经氨糖酸氮上衍生单酰基的化合物。可以，如从二-溶解性神经节苷脂出发，继续对鞘氨醇氨基进行居间暂时保护，如通过与卵磷脂的疏水性交互反应，或通过用合适的保护基酰化，随后用欲介入此位的酸的衍生物酰化神经氨糖酸上的氮，然后在鞘氨醇氮上去保护，也可以用相同的酸酰化二-溶解性神经节苷脂的二个氨基，然后使二酰基化合物暴露于酶的作用下，这些酶能选择性地只裂解在鞘氨醇氮上的酰胺基，如用从神经节苷脂获得溶解性神经节苷酯。一个例子是神经鞘糖脂-神经酰胺-去酰化酶(见

图1)
N-单酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂也可通过在神经氨糖酸的氮上选择性化学水解去酰化N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂，如用0.1摩尔醇氢氧化钾。
在获得的酰基-二-溶解性神经节苷脂中，如需要的话，可以功能性地转换唾液酸的羟基或这些酸的羟基。如，这些基团可能转变为酯或酰胺，这些基团中的羟基用酸酯化(全酰化物)。
根据本发明制备N-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂，N'-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂和N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂的步骤包括用对应于上述酰基的酸酰化N，N'-二-溶解性神经节苷脂，N-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷酯或N'-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂，或在鞘氨醇氮上或神经氨糖酸氮上，或这些化合物的混合物上，选择性地去酰化合适的N，N'-二酰基-N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷酯。如需要的话，所获得的化合物可以转化为酯，酰胺，或内酯或羟基全酰化物。这些化合物也可转化为合适的盐。
根据上述步骤的N-酰化反应可以传统方式进行，如使起始产品与酰化剂，最重要的是酸的功能性衍生物反应，该衍生物的残基是要导入的。因此，可用酸的功能性衍生物酰胺或卤化物，酰化作用优先在叔碱如吡啶或可力丁的存在下进行。反应可在无水条件下，在室温或更高的温度下进行，优越地根据Schotten Baumann方法，在有水条件下在无机碱存在下进行。有些情况下，也可用酸的酯作为反应性功能衍生物。酰化可用利用活化羧基衍生物的方法，如在肽化学中所用的，如用混合酐的方法，或用可用碳化二亚胺衍生物获得的衍生物，或者异噁唑盐。
在各种方法中，最合适的如以下
1.使溶解性神经节苷脂衍生物与酸的叠氮化物反应;
2.使溶解性神经节苷脂衍生物与酸的酰基咪唑反应，该酰基咪唑可通过酸与N，N'-羰基二咪唑反应而得;
3.使溶解性神经节苷脂衍生物与酸与三氟乙酸的混合酸酐反应;
4.使溶解性神经节苷脂衍生物与酰基氯反应;
5.使溶解性神经节苷脂衍生物与酸在碳化二亚胺(如二环己基碳化二亚胺)的存在下反应，也可选择地使用材料如1-羟基-苯并三唑;
6.使溶解性神经节苷脂衍生物与酸通过加热反应，7.使溶解性神经节苷脂衍生物与酸的甲基酯在较高温度下反应;
8.使溶解性神经节苷脂衍生物与酸的苯酚酯反应，如用对硝基苯酚所成的酯;和9.使溶解性神经节苷脂衍生物与一种酯反应，该酯从酸的盐和1-甲基-2-氯代吡啶鎓碘之间交换而衍生的。
已注意到现在能够在鞘氨
氮和神经氨糖酸氮两者上获得选择性部分酰化。图1说明了步骤。
在N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂上的鞘氨醇的氮上去酰化的酶，如前所述可在用于神经节苷脂的部分去酰化的条件下进行，如在J.Biochem.，103，1(1988)中所述。N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂的双重去酰化成N，N'-二-溶解性神经节苷脂的反应可在同样方法下可用于制备去-N-酰基-溶解性神经节苷脂。如在下列文献国所述，Biochemistry 24，525(1985);J.Biol.Chem.255，7657，(1980);Biol.Chem.Hoppe Scylcr 367，241，(1986);Carbohydr Research 179，393(1988);Bioch Bioph Res Comn 147，127(1987)。
以上所述的出版物在Carbohydr Rescarch 179中也描述了一种在神经氨糖酸氮上选择性全酰化的方法，通过0.1M KOH在90%正丁醇中与神经节苷脂GM3反应而获得。这个去酰化作用也可用于本发明的N，N'-二酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂以获取N-酰基-N，N'-二-溶解性神经节苷脂。当然，在本发明范围内的制备方法还包括对本技术领域的人是明显的化学等效物。
可用已知方法制备根据上述步骤获得的新颖酰基溶解性神经节苷酯的羧基或羟基衍生物，除去那些将具有改变神经节苷脂的基本结构的方法。这将排除掉用高度酸性试剂的方法，或者将在剧烈碱性或酸性条件下进行的方法，或者也排除那些将导致对糖部分的羟基以不需要的烷基化作用的方法。
N-酰基神经节苷脂的酯化或它们的转变成酰胺的反应可以用例如关于神经节苷脂的美国专利4，713，374所述的进行，本发明衍生物的内酯的形成可以如同制备神经节苷脂内酯那样进行，例如如美国专利4，593，091和欧洲专利0072722中所述。
这些内酯不仅包括通过唾液酸羧基同糖类羟基形成内酯化的化合物，还包括那些如包含在唾液酸羧基和唾液酸羟基之间形成内酯环的化合物，因为后者依次与糖类部分结合，也包括其它可能的内酯结构。上述专利形成内酯的方法包括使神经节苷脂在不含水有机溶剂中在无水条件下用内酯化试剂处理。合适的有机试剂包括二甲亚砜，二甲基甲酰胺，环丁砜，四氢呋喃，二甲氧基乙烷，吡啶或这些溶剂的混合物。合适的内酯化试剂包括溶于有机溶剂中的碳化二亚胺，如二环己基碳化二亚胺，苄基异丙基碳化二亚胺，苄基乙基碳化二亚胺，2-氯代甲基吡啶的盐，乙氧基乙炔和Woodward's试剂(N-乙基-5-苯基-异噁唑鎓-3'磺酸盐)。较旧的方法利用在神经节苷脂和乙酸或三氯乙酸或碳化二亚胺之间的反应，溶解在水中或者含水介质中。所有这些方法也可用于制备新N-酰基溶解性神经节苷脂的内酯中。对于羧基的“外部”酯化，即用上述的醇酯化，如可以使N-酰基溶解性神经节苷脂同所需醇反应，在一个离子交换剂的存在下，如Dowex 50-型树脂，产率受同时形成内酯限制，反应时间相当长。另一种酯化的方法包括使醇通过树脂，该树脂是Dowex-50 Wx8型(100-200筛孔，H+型)，溶解洗脱液在同样的醇中用相应的重氮基链烷烃处理。
另一种合适的酯制备方法包括用醚化剂处理溶解性神经节苷脂衍生物的金属盐。可用碱金属或碱土金属盐，也可用其它任何金属盐。作为醚化剂，可用文章所说的那些，如尤其是各种无机酸的酯，或者是有机磺酸如氢酸的酯，即换句话说，烃基卤化物，如碘甲烷，碘乙烷等，或者是烃基的中性硫酸酯或酸，亚硫酸酯，碳酸酯，硅酸酯，亚磷酸酯或烷基磺酸酯，如甲基苯并-或对甲苯磺酸酯。反应可在合适的溶剂中，如一种醇中，优先是对应于欲导入的烷基的那种，但也在非极性溶剂中，如酮或酯中，如二氧杂环烷和二甲亚砜。
一种特别优越的酯化方法包括用所需醇和它的相应的醇盐的混合物处理溶解性神经节苷脂衍生物的内酯。反应在相应于醇的沸点的温度进行，但也可用较低温度，这种情况下反应时间略长。
可通过已知方法制备本发明溶解性神经节苷脂的酰胺，尤其是通过以下方法(a)使N-酰基溶解性神经节苷脂衍生物的内酯与氨或者胺反应;
(b)使N-酰基溶解性神经节苷脂衍生物的羧酸酯与氨或者胺反应;及(c)使N-酰基溶解性神经节苷脂衍生物与同氨或者胺活化的羧基反应。
反应(a)可通过直接处理而进行，在有或没有溶剂的存在下，使神经节苷脂内酯与氨或胺反应，其中酰胺需制备。反应也可在较低温度下进行，如-5°到+10°，但优先在室温或更高，如在30°和120°之间反应。作为溶剂，可用酮类，芳香族烃，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，二氧杂环己烷或四氢呋喃。反应(b)优先在为反应(a)描述的条件下进行。除了为本发明所描述的酯，也可用其它酯，如带苯酚的酯。
为根据(c)在反应中活化羧基，可用肽化学领域中已知的方法，避免用涉及过酸或过碱情况的那些，那些会导致神经节苷脂分子的分解。如果起始神经节苷脂是以如钠盐形式存在，建议首先用离子交换树脂处理盐，如Dowex型，或其它一个酸性离子交换剂。也可用在碳化二亚胺存在下缩合的方法，如二环己基碳化二亚胺，苄基异丙基碳化二亚胺，或苄基乙基碳化二亚胺，在1-羟基苯并三唑，或在N，N'-羰基二咪唑的存在下进行。
糖的羟基，唾液酸部分及任意地神经酰胺的酰化作用也可用已知的方法进行，如用酸的卤化物或用于酰化的酸酐，优先在一个叔碱的存在下，如吡啶或可力丁。结果获得以上所述全酰化衍生物。根据本发明解释的方法，也可以使去-N-乙酰溶解性神经节苷脂受酰化作用，在酰化后恢复在神经氨糖酸上的乙酰氨基，这样的酰化作用也可以已知方式进行。在这种情况下为N-酰化作用选择相对温和的方法，这样神经氨糖酸的羟基保持不改变。酰化该基团，在鞘氨醇氮的酰化反应后进行，可通过激烈方法进行，如用酸酐。
最后，如前所述，在所有用以上方法获得的能提供能成盐的化合物中，可用已知方法使这些基团成盐，以获取合适盐衍生物。
本发明还涉及新衍生制备方法的修饰物，其中一个步骤可在任何阶段被中断，或从中间化合物开始进行其余的步骤，或者其中起始化合物在原位形成。
也包括在本发明内的是药物制剂，其含有一个或多个新酰基溶解性神经节苷脂作为活性材料，尤其是以上所提到的。这儿提到的药物制剂可以口服，直肠给药非肠胃道、局部给药或经皮给药。因此，它们可是固体或半固体型，如片剂，丸剂，胶状胶囊，胶囊，栓剂和软明胶胶囊。非肠道使用时，可用肌内，皮下或经皮给药形式，或者适合于输注或静脉内注射的形式。因此，这些制剂可以活性化合物溶液或活性化合物的冻干粉末与一个或多个药学上可行的赋形剂或稀释剂混合，易于上述使用，而且具有与生理液体相适应的渗透性。局部使用时，可以以喷雾剂形式，如鼻内喷雾，表面供给的乳膏或软膏，经皮使用的合适制备的膏药。
本发明制剂可用于动物或人体。对溶液，喷雾剂，软膏，和乳膏来说优先含0.01%到10%活性化合物重量，对固体型制剂优先含5%到50%重量活性化合物。所给药的剂量依赖于个体表征，所需作用及所选择的给药途径。
本发明的另一方面通过治疗上使用新颖酰基-溶解性神经节苷脂和先前所列并已知的那些而显示。这种治疗上使用包括所有以前所列出的情况，对人体用于注射(皮下或肌内)或经皮或口服给药，每天剂量为每公斤体重用0.05毫克到5毫克活性材料。
以下实施例说明本发明酰基-溶解性神经节苷脂的制备，以及含有它作为活性组分的药物制剂，及其治疗用途，这些实施例是说明性的，不能被认为是限制本发明的。
实施例1N，N'-二-溶解性GM1将10g GM1溶解在200ml，3N氢氧化钾中，在90℃进行水解72小时。
然后冷却该溶液并用盐酸调节pH到6.5，让它在4℃静置18小时，然后把沉淀出来的脂肪酸过滤掉，将所得溶液对水渗析并浓缩至500ml，使它在51丙酮中沉淀。
将产物干燥并使用三氯甲烷/甲醇/氨水5N(55∶45∶10)混合物作为洗脱剂的高效能硅胶色谱层析。将含有产物的提取组分干燥然后再溶解在水中。用0.01N的氢氧化钠将它的pH调到10，渗析，浓缩至100mg/ml，并在5倍体积的丙酮中沉淀。N，N'-二-溶解性GM的产量为5.7g(理论值的70%)。用三氯甲烷/甲醇/氨水5N(55∶45∶10)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得产品是单一的化合物，该化合物的比移值Rf＝0.05(GM1＝0.35)。
实施例2N-溶解性GM1将10g(6.37mM)GM1溶解在200ml 3N的氢氧化钾中，在90℃进行水解72小时。然后将该溶液冷却并用盐酸将pH调到6.5。让它在4℃静置18小时，然后把沉淀出来的脂肪酸过滤掉。对水渗析并浓缩到500ml，在5l丙酮中沉淀。
将含有N'-二-溶解性GM1和N，N'-二-溶解性GM1(20%)的产品真空干燥，然后再溶解在100ml二甲基甲酰胺中。将2.15g(6.37mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺溶解在20ml四氢呋喃中，然后将它慢慢加到上述产品溶液中去，在室温下使其反应1小时。其后加入3ml(31.85mM)乙酐和0.9ml(63.7mM)三乙胺。30分钟以后，把12.5ml哌啶加入以除去保护基团。该混合物在室温下反应18小时，在21丙酮中沉淀并干燥。将这样得到的物质溶解在1M碳酸钠中，并在60℃保持1小时。使之渗析，浓缩到100mg/ml，并在5倍体积的丙酮中沉淀。
将产品通过一在甲醇中达到平衡的S琼脂糖凝胶柱(H+型)，它是用甲醇洗涤和通过10mM氯化铵-甲醇洗脱的N-溶解性GM1。收集含有产品的流份加以干燥并然后再溶解在水中。该溶液用0.01N的氢氧化钠把pH调到10并渗析，浓缩到100mg/ml，并在5倍体积的丙酮中沉淀。
所得到的产品大约5g(理论值的60%)。用三氯甲烷/甲醇/氨水5N(55∶45∶10)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得该产品是单一的，其Rf＝0.11。
实施例3N-环丁烷羰基-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)的溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在1ml二甲基甲酰胺和1.050ml(7.6mM)的三乙胺中，并将728μl(7.6mM)的环丁烷羰酰氯在室温下加入。
缩合反应系在室温下进行了四丁小时。反应结束时，将该溶液在10ml乙酸乙酯的饱和水溶液中沉淀，过滤和真空干燥。
然后用硅胶色谱层析提纯该产品，该硅胶色谱是以三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作洗脱剂的。
将各纯取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析并浓缩到5ml，在50ml的丙酮中沉淀。
所得到的产品350mg(理论值的66%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得该化合物是单一的，该化合物的Rf＝0.33(GM1＝0.43;溶解性GM1＝0.24)。
实施例4N-(2-降冰片烷乙酰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)的溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml的二甲基甲酰胺中，然后在0℃加入106μl(0.76mM)的三乙胺和降冰片烷乙酐，该降冰片烷乙酐是通过将1.1ml(7.6mM)的2-降冰片烷乙酸和939mg(9.12mM)的二环己碳化二亚胺溶解在20ml四氢呋喃中，在2小时以后把已形成的二环己脲过滤除去以后，新制备得到的。
该缩合反应是在0℃和搅拌下进行了18小时。反应结束时，该溶液浓缩至1ml，在10毫升丙酮中沉淀并真空干燥。
产品随后用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)的混合物作为洗脱剂作硅胶色谱层析而被提纯。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，用蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml，并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品508mg(理论值的92%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得该化合物是单一的，其Rf＝0.33(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)。
实施例5N-苯乙酰-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)的溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，然后，在室温下将溶解在2.5ml 2-甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)的三乙胺，260mg(1.9mM)的苯乙酸和194.2mg(0.76mM)的1-甲基-2-氯代吡啶碘盐。
该混合物在室温下反应18个小时，然后在100ml丙酮中沉淀。将其过滤并干燥。产品以三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物为洗脱剂作硅胶色谱提纯。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩至5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得到的产品354mg(理论值的65%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得该化合物是单一的，其Rf＝0.37(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例6N-(2，6-二甲氧苯甲酰)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM1(按照实施例2制备)溶解在1ml二甲基甲酰胺中，然后在室温下加入1.056ml(7.6mM)三乙胺和新鲜制备的二甲氧基苯甲酸酐，该二甲氧基苯甲酸酐是由2.76g(15.2mM)的2，6-二甲氧基苯甲酸和1.08g(3.8mM)的1-甲基-2氟吡啶对甲苯磺酸盐在10ml二甲基甲酰胺/四氢呋喃(1∶1)中进行反应而制得。
该缩合反应是在室温搅拌下进行了4小时。反应结束时，将溶液浓缩至5ml，在50ml丙酮中沉淀，过滤并真空干燥。用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物为洗脱液作硅胶色谱层析。将提纯部分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠收集，对蒸馏水渗析并浓缩到5ml，在50ml丙酮中沉淀。
所得产品506mg(理论值的90%)用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得该化合物是单一的，其Rf＝0.35(GM1＝0.43;溶解性GM1＝0.24)，在254nM读取萤光订数据。
实施例7N-(2-呋喃甲酰)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)的溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(3.8mM)的三乙胺，210mg(1.9mM)的2-β-呋喃甲酸和194.2mg(0.76mM)的1-甲基-2-氯吡啶碘盐。
该混合物在室温下进行反应18小时，然后在10ml丙酮中沉淀。将它过滤和干燥。该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱层析进行提纯。将各纯提取组分汇集起来，蒸发，以1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩至5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品402mg(理论值的75%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱测得该化合物是单一的，其Rf＝0.37(GM1＝0.43;溶解性GM1＝0.24)，在254nM下读取荧光计数据。
实施例8N-(4-咪唑乙酰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)的溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)三乙胺，310mg(1.9mM)4-咪唑乙酸氢氯化物和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2氯吡啶。在室温下反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，将其过滤和干燥。然后将该产品用用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱层析进行提纯。将各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N的碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品352mg(理论值的65%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得化合物是单一的，其Rf＝0.33(GM1＝0.43;溶解性GM1＝0.24)。
实施例9N-(1-甲脯氨酰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)的溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在3.5ml二甲基甲酰胺/水(2.5∶1)中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)的三乙胺，260mg(1.9mM)的N-甲基-L-脯氨酸和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。该混合物在室温下反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤和干燥。该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作洗脱剂通过硅胶色谱层析进行提纯。将提纯部分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩至5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品380mg(理论值的70%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱测得该化合物是单一的，其Rf＝0.33(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)。
实施例10N-(1-甲基-2吡咯羰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)三乙胺，220mg(1.9mM)1-甲基-2-吡咯羧酸及194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，将反应混合物过滤并干燥。然后，将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品487mg(理论值的90%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.38(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例11N-(1-四唑乙酰)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)三乙胺，250mg(1.9mM)1-四唑乙酸和194.2mg(0.76mM)的碘化1-甲基-2氯吡啶。
该混合物在室温下进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀。过滤并干燥。然后，将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂，通过硅胶色谱层析进行提纯。把各纯提取组分汇集起来。蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品472mg(理论值的87%)。
用三氯甲烷/甲醇氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得该化合物是单一的，其Rf＝0.32(GM1＝0.43;溶解性GM1＝0.24)。
实施例12N-(2-噻吩乙酰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)三乙胺，270mg(1.9mM)噻吩乙酸和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤和干燥。然后，将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂，通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品383mg(理论值的70%)。
用三氯甲烷/甲醇氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.34(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例13N-(6-甲基烟酰)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM1(按照实施例2制备的)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)三乙胺，260mg(1.9mM)6-甲基烟酸和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
该混合物在室温下进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，将其过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品218mg(理论值的40%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.38(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例14N-(-吡啶乙酰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)可溶性GM1(按照实施例2制备的)溶解在3.5ml二甲基甲酰胺/水(2∶5∶1)中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)三乙胺，330mg(1.9mM)2-吡啶-乙酸氢氯化物和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后，将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品327mg(理论值的60%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.35(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例15
N-(4-吡啶硫代乙酰)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM1(按实施例2制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)三乙胺，320mg(1.9mM)4-吡啶硫代乙酸和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品390mg(理论值的70%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.34(GM1＝0.43，Lyso GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例16N-(3-喹啉羰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM(按实施例2制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)三乙胺，330mg(1.9mM)3-喹啉羧酸和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
该混合物在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品358mg(理论值的64%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.35(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例17N-(7-茶碱乙酰基)-N-溶解性GM1将500mg(0.38mM)溶解性GM1(按实施例2制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(7.6mM)三乙胺，460mg(1.9mM)7-茶碱乙酸和194.2mg(0.76mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品397mg(理论值的68%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.35(GM1＝0.43，溶解性GM1＝0.24)，在254nm下读取荧光计数据。
实施例18N-2，6-二甲氧苯甲酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mm)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向该溶液慢慢加入145mg(0.43mm)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-Succ)。在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物N-FMOC-二-溶解性GM1的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺、甲醇(1∶1)，其后在0℃加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和0.40ml(3.96mM)三氟乙酸甲酯。在室温下使其反应三天。
向所得反应混合物中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，向其中加入二甲氧苯甲酸酐(通过1.88g(7.6mM)2，6-二-甲氧苯甲酸和5.40mg(1.9mM)对甲苯磺酸氟甲基吡啶1∶1反应新鲜制备。)该混合物在室温下进行反应18小时，在100ml丙酮中沉淀，用5ml水收集并用0.01N氢氧化钠调节pH为9.0。
使其在室温下反应2小时以除去三氟乙酰基。将其渗析，浓缩到3ml并在15ml丙酮中沉淀。
所得的粗制品用三氯甲醇/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
把提纯部分汇集起来，蒸发，再溶解在2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝283mg(理论值的51%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.18。对茚三酮显色法显示阳性，并在254nm下读取萤光计读数。
实施例19N-2-吡啶乙酰基-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-Succ)。使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物N-FMOC-di-lyso-GM1的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在0℃加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和0.40ml(3.96mM)三氟乙酸甲酯，使其在室温下反应三天。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)的三乙胺，330mg(1.9mM)2-吡啶乙酸氢氧化物和194.2mg(0.76mM)碘化氯甲基吡啶。
使在室温下反应18小时，在50ml丙酮中沉淀，用5ml水溶解并用0.01N的氢氧化钠调节pH值为9.0。使该溶液在室温下反应2小时以除去三氟乙酰基。将其渗析，浓缩到3ml并在15ml丙酮中沉淀。
所得的粗产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
把各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解在2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝296mg(理论值的55%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析测得该化合物是单一的，其Rf＝0.19，对茚三酮显色法显示阳性，并在254nm下读取荧光计数据。
实施例20N-N'-二-环庚烷羰基-二-溶解性GM1将500mg(0.39mM)二-溶解性GM1(按实施例1制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的0.33ml(2.37mM)三乙胺，162μl(1.18mM)环庚烷羧酸和0.2g(0.7mM)碘化氯甲基吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶25∶4)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品407mg(理论值的68%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(60∶35∶8)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.32。
实施例21N-N'-环戊烷羰基-二-溶解性GM1将500mg(0.39mM)二-溶解性GM1(按实施例1制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的0.33ml(2.37mM)三乙胺，1，23ml(1.18mM)环戊烷羧酸和0.2g(0.79mM)碘化氯-甲基吡啶。
该混合物在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶25∶4)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸镏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品277mg(理论值的48%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(60∶35∶8)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.30(GM1＝0.43，Lyso GM1＝0.24)。
实施例22N-N'-二-苯乙酰-二-溶解性GM1将500mg(0.39mM)二-溶解性GM1(按实施例1制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的0.88ml(6.34mM)三乙胺，430mg(3.17mM)苯乙酸和0.2g(0.79mM)碘化氯-甲基吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶25∶4)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸镏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品564mg(理论值的95%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(60∶35∶8)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.32。在254nm下读取荧光计数据。
实施例23N-N'-二-(5-甲氧基-1-(2，3-二氢-1-茚酮)-3-乙酰基)溶解性GM1将500mg(0.39mM)二-溶解性GM1(按实施例1制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的0.88ml(6.34mM)三乙胺，700mg(3.17mM)5-甲氧基-1-(2，3-二氢-1-茚酮)-3-乙酸和0.2g(0.79mM)碘化氯甲基吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶25∶4)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠收集，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品60lmg(理论值的91%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(60∶35∶8)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.33，(GM1＝0.43，Lyso GM1＝0.24)。在254nm下读取荧光计数据。
实施例24N-N'-(2-吡啶乙酰基)-二-溶解性GM1将500mg(0.39mM)二-溶解性GM1(按实施例1制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的0.88ml(6.34mM)三乙胺，550mg(3.17mM)2-吡啶乙酸和0.2g(0.79mM)碘化氯甲基吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶25∶4)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品268mg(理论值的43%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(60∶35∶8)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.23。在254nm下读取荧光计数据。
实施例25N-N'-二(5-甲基-2-噻吩-羰基)-二-溶解性GM1将500mg(0.39mM)二-溶解性GM1(按实施例1制备)溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的0.88ml(6.34mM)三乙胺，450mg(3.17mM)5-甲基-2-噻吩羧酸和0.2g(0.79mM)碘化氯甲基吡啶。
在室温进行反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶25∶4)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。把各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，对蒸镏水渗析，然后浓缩到5ml并在50ml丙酮中沉淀。
所得产品509mg(理论值的85%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(60∶35∶8)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.33。在254nm下读取荧光计数据。
实施例26N-乙酰基-N'-2-吡啶乙酰基-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(接实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在室温加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)三乙胺，330mg(1.9mM)2-吡啶乙酸氢氯化物和194.2mg(0.76mM)碘化氯甲基吡啶，该混合物在室温下反应18小时。
然后向该反应混合物中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在30ml三氯甲烷/甲醇/水(1∶1∶0.1)中，其后加入1.1ml(7.92mM)三乙胺和373μl(3.96mM)乙酸酐。使在室温下反应2小时，干燥，用5ml 1M的碳酸钠处理并在60℃保持1小时。渗析，浓缩到5ml并在5倍体积的丙酮中沉淀。
所得的粗产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
把各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解在2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝299mg(理论值的54%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.37，在254nm下读取荧光计数据。
实施例27N-乙酰基-N'-3，4，5-三甲氧苯甲酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后问其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)，使该混合物在室温下反应1小时。反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后加入溶解于20ml四氢呋喃中的三甲氧苯甲酐(这是使0.3g＜1.9mM＞二环己碳化二亚胺与0.3g＜1.4mM＞三甲氧苯甲酸在20ml四氢呋喃中反应，二小时后滤去所形成的二环己脲而新鲜制备出来的)。
缩合反应在25℃搅拌下进行18小时。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在30ml三氯甲烷/甲醇/水(1∶1∶0.1)中，然后加入1.1ml(7.92mM)三乙胺和373μl(3.96mM)乙酐。使在室温反应2小时，干燥，以5ml碳酸钠(1M)处理。并在60℃保持1小时。再将它渗析，浓缩至5ml，并在5倍体积丙酮中沉淀。
所得的粗产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
把各纯提取组和汇集起来，蒸发，再溶解在2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝286mg(理论值的49%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.39，在254nm下读取荧光计数据。
实施例28N-二氯乙酰基-N'-2-吡啶乙酰基-二-溶解性GM1将按实施例1制备的500mg二-溶解性GM1(0.39mM)溶解于5ml二甲基甲酰胺中，在这溶液中缓慢加入145mg(0.43mM)的9-芴基甲氧基-羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)。让它在室温反应1小时。
反应结束时，将它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后通过硅胶色谱法将产物提纯，以60∶30∶6的三氯甲烷/甲醇/水混合物作为洗脱剂。将含有中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥，再溶解于2.5ml的二甲基甲酰胺/甲醇1∶1，然后在室温下加入1056μl(7.6mM)的三乙胺，330mg(1.9mM)的2-吡啶乙酸氢氯化物和溶于2.5ml中的碘化氯甲基吡啶。让它在室温反应18小时。
随后在这反应混合物中加入1ml的哌啶以去除芴基。让它在室温反应18小时并在100ml的9∶1丙酮/水中沉淀，过滤和干燥。
将中间反应产物溶解于1∶1∶0.1的三氯甲烷/甲醇/水中，然后加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和950mg(3.96mM)的二氯乙酐。让它在室温反应2小时，干燥，以5ml1M的碳酸钠处理，并在60℃保持1小时。再渗析，浓缩至5ml并在5倍体积的丙酮中沉淀。
将反应产物用硅胶色谱法提纯，以60∶35∶8的三氯甲烷/甲醇/水混合物作为洗脱剂。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解于2.0ml的1∶1三氯甲烷/甲醇中，并在10ml的丙酮中沉淀。
获得的产品＝267mg(理论值的46%)。
用以50∶42∶11的三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%构成的溶剂作硅胶色谱层析，测得化合物是单一的，Rf＝0.40，在254nm下读取荧光计数据。
实施例29N-二氯乙酰基-N'-3，4，5-三甲氧苯甲酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使所得混合物在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物N-FMOC-di-lyso-GM1的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后向其中加入溶解在10ml四氢呋喃中的三甲氧苯甲酸酐，这是使0.3g(1.9mM)的二环己碳化二亚胺与0.3g(1.4mM)的三甲氧苯甲酸在10ml四氢呋喃中反应，二小时后滤掉生成的二环己脲而新鲜制备出来的。
缩合反应在25℃搅拌下进行18小时。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使混合物在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在30ml三氯甲烷/甲醇/水(1∶1∶0.1)中，其后加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和950mg(3.96mM)的二氯乙酸酐。使在室温下反应2小时，干燥，用5ml1M的碳酸钠处理并在60℃保持1小时。将其渗析，浓缩至5ml，并在5倍体积的丙酮中沉淀。
反应的粗产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
把各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解在2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝293mg(理论值的48%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.41，在254nm下读取荧光计数据。
实施例30N-2-呋喃甲酰-N'-丁酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇()，其后在0℃加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和6.26mg(3.96mM)丁酸酐，使其在室温反应2小时。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(3.8mM)三乙胺，210mg(1.9mM)的2-β呋喃甲酸和194.2mg(0.76mM)的碘化氯甲基吡啶。
使在室温下反应18小时，然后在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。将产物用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱法提纯。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解于2.0ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝289mg(理论值的52%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.39，在254nm下读取荧光计数据。
实施例31N-2，6-二甲氧苯甲酰-N'-丁酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)，其后在0℃加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和626mg(3.96mM)丁酸酐，使其在室温反应2小时。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在1ml二甲基甲酰胺中，然后在室温下加入1.056ml(7.6mM)的三乙胺和2，6-二甲氧苯甲酐，(这是使2.76g(15.2mM)的2，6-二甲氧苯甲酸和1.08g(3.8mM)对甲苯磺酸氟甲基吡啶在10ml二甲基甲酰胺/四氢呋喃(1∶1)中反应而新鲜制备出来的)。缩合反应在室温搅拌下进行4小时。在反应结束时，将溶液浓缩至5ml，在50ml丙酮中沉淀，过滤并真空干燥。
以三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)作为洗脱剂进行硅胶色谱分离。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，用1N碳酸钠处理，将其对蒸馏水渗析，然后浓缩到5ml，在50ml丙酮中沉淀。
所得产品＝297mg(理论值的51%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.37，在254nm下读取荧光计数据。
实施例32N-2-吡啶乙酰基-N'-月桂酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在0℃加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和1.51g(3.96mM)月桂酸酐，使其在室温反应18小时。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)三乙胺，330mg(1.9mM)的2-吡啶乙酸氢氯化物和194.2mg(0.76mM)碘化氯甲基吡啶。使在室温反应18小时并在100ml丙酮中沉淀。
所得的粗产品用三氯甲烷/甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
把各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解在2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝262mg(理论值的43%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.61，在254nm下读取荧光计数据。
实施例33N-3，4，5-三甲氧苯甲酰-N'-月桂酰-二-溶解性GM1将500mg溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-SUCC)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-id-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在0℃加入1.1ml(7.92mM)的三乙胺和1.51g(3.96mM)月桂酸酐，使其在室温反应18小时。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解于2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，向其中加入溶于10ml四氢呋喃中的三甲氧苯甲酐(这是使0.3g＜1.9mM＞二环己碳化二亚胺和0.3g＜1.4mM＞三甲氧苯甲酸在10ml四氢呋喃中反应二小时后滤去生成的二环己脲而新鲜制备出来的)。
缩合反应在25℃搅拌下进行18小时，将产物在100ml丙酮中沉淀。
反应粗产物用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解于2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝294mg(理论值的46%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得产品是单一的化合物，Rf＝0.63。在254nm下读取荧光计数据。
实施例34N-3，4，5-三甲氧苯甲酰-N'-2-吡啶乙酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-Succ)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在室温下加入溶解于2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)三乙胺和330mg(1.9mM)2-吡啶乙酸氢氯化物和194.2(0.76mM)碘化氯甲基吡啶。使在室温反应18小时。
然后在这反应混合物中加入1ml哌啶以去除芴基。使在室温反应18小时，在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解于2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，向其中加入溶于10ml四氢呋喃中的三甲氧苯甲酐(这是使0.3g＜1.9mM＞二环己碳化二亚胺和0.3g＜1.4mM＞三甲氧苯甲酸在10ml四氢呋喃中反应，二小时后滤去生成的二环己脲而新鲜制备出来的)。
缩合反应在25℃搅拌下进行18小时，将产物在100ml丙酮中沉淀。
反应粗产物用三氯甲烷/甲醇/水(60∶35∶8)作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解于2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝243mg(理论值的43%)用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得产品是单一的化合物Rf＝0.59。在254nm下读取荧光计数据。
实施例35N-2-吡啶乙酰基-N'-2，6-二甲氧苯甲酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺(FMOC-Succ)，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，使它在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。然后将该产品用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将包含中间反应产物(N-FMOC-di-lyso-GM1)的流分汇集起来，干燥并再溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)其后加入二甲氧苯甲酐，它是使1.88g(1.6mM)2，6-二甲氧苯甲酸和540mg(1.9mM)对甲苯磺酸氟甲基吡啶在5ml二甲基甲酰胺/四氢呋喃(1∶1)中反应而新鲜制备出来的。使其在室温反应4小时。
然后向其中加入1ml哌啶以除去芴基。使在室温下反应18小时并使其在100ml丙酮/水(9∶1)中沉淀，过滤并干燥。
将中间反应产物溶解在2.5ml二甲基甲酰胺/甲醇(1∶1)中，其后在室温下加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的1056μl(7.6mM)的三乙胺，330mg(1.9mM)2-吡啶乙酸氢氯化物和194.2mg(0.76mM)碘化氯甲基吡啶。使在室温下反应18小时，在100ml丙酮中沉淀。
所得的粗产品用三氯甲烷/甲醇/水(60;35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
把各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解在2ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在10ml丙酮中沉淀。
所得产品＝247mg(理论值的41%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，其Rf＝0.58，在254nm下读取荧光计数据。
实施例36N'-3，4，5-三甲氧苯甲酰-N'-溶解性GM1将500mg(0.33mM)N'-溶解性GM1溶解于50ml三氯甲烷/甲醇/(1∶1)中，在这溶液中加入溶解于20ml四氢呋喃中的三甲氧苯甲酐(这是使0.3g＜1.9mM＞二环己碳化二亚胺与0.3g＜1.4mM＞三甲氧苯甲酸在20ml四氢呋喃反应，二小时后滤掉生成的二环己脲而新鲜制备出来的)。
缩合反应在25℃搅拌下进行18小时。
反应结束时，将产物干燥，用5ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)收集，并在100ml丙酮中沉淀。
这样得到的粗产物用三氯甲烷/甲醇/水(60∶15∶2)作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解在5ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在100ml丙酮中沉淀。
所得产品＝320mg(理论值的56.7%)用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(60∶35∶8)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得产物是荧光的单一化合物，Rf＝0.50。
实施例37N'-2-呋喃甲酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解于5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入溶解于2ml四氢呋喃中的145mg(0.43mM)9-芴甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺。使其在室温反应1小时。
反应结束时，在室温下加入溶解于2.5ml二甲基甲酰胺中的528μl(3.8mM)三乙胺，210mg(1.9mM)2-呋喃甲酸和194.2mg(0.76mM)碘化氯甲基吡啶。使这混合物在室温反应18小时，然后加入2ml哌啶以除去保护基团。再让它在室温反应18小时，在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。将所得产物溶解于10ml 1M的碳酸钠中，并在60℃保持1小时。将其渗析，浓缩至5ml，在5倍体积的丙酮中沉淀。
将反应粗产物用三氯甲烷/甲醇氨水2.5N(60∶35∶8)作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
将含有纯产物的流分干燥，再溶解在5ml水中。用0.01N的氢氧化钠将溶液的pH调节至10，使其渗析，浓缩至5ml，再在50ml丙酮中沉淀。
所得产品301mg(理论值的57%)用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得产品是单一的，Rf＝0.31，对茚三酮显色法显示阳性。在254nm下读取荧光计数据。
实施例38N'-3，4，5-三甲氧苯甲酰-二-溶解性GM1将500mg二-溶解性GM1(0.39mM)(按实施例1制备)溶解在5ml二甲基甲酰胺中，然后向其中慢慢加入溶解于2ml四氢呋喃中的145mg(0.43mM)9-芴基甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺，使该混合物在室温下反应1小时。
反应结束时，加入溶解于20ml四氢呋喃中的三甲氧苯甲酐(这是使0.3g＜1.9mM＞二环己碳化二亚胺和0.3g＜1.4mM＞三甲氧苯甲酸在20ml四氢呋喃中反应，二小时后滤去生成的二环己脲而新鲜制备出来的)。
缩合反应在25℃搅拌下进行18小时。然后加入2ml哌啶以去除保护基团，使它在室温反应18小时，再在100ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。将所得的产物溶解于10ml 1M的碳酸钠中并在60℃保持1小时。将它渗析，浓缩至5ml并在5倍体积的丙酮中沉淀。反应粗产物用三氯甲烷/甲醇/氨水2.5N(60∶35∶8)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。将含有纯产物的流分干燥，再溶解于5ml水中。用0.01N的氢氧化钠将溶液的pH调节至10，并使它渗析，浓缩至5ml，再在50ml丙酮中沉淀。
所得产品317.5mg(理论值的56%)用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得产物是单一的，Rf＝0.35，对茚三酮显色法显示阳性，在254nm下读取荧光计数据。
实施例39由牛脑组织提取神经节苷脂混合物(GA混合物)将牛脑皮层从牛身上取出并在磷酸缓冲液中打成匀浆至pH6.8，向其中加入6倍体积的四氢呋喃，将所得混合物离心分离。然后用四氢呋喃将上清液萃取2次。离心分离后，非极性物质通过用乙醚分层而去除，而水-四氢呋喃相则被引入用50%乙醇平衡的离子交换柱中。在从离子交换柱出来的产物中加入氢氧化钡和4倍体积的冰冻乙醇。冷却18小时后，将沉淀收集起来，溶解于水，并用盐酸使之轻微酸化。将所得溶液渗析并冰冻干燥。这时的产率是大约每克神经组织得到0.6mg粗的神经节苷脂混合物。将冰冻干燥的粉末分散在20倍体积的三氟甲烷-甲醇(2∶1)中，而所得的溶液一旦过滤到完全清彻后，就加入0.2体积的氯化钾0.88%水溶液使它分层。
将上层分离出来，渗析并冰冻干燥。最后产率是每克脑组织的0.3mg纯化的神经节苷脂盐混合物。所得的神经节苷脂混合和可以用硅酸柱、以甲醇-三氯甲烷洗提而分级分离为代表基本纯净(在上述的意义上)神经节苷脂的各个部分。这样得到的平均成分约为40%神经节苷脂GD1a，21%神经节苷脂GM1，19%神经节苷脂GT1b和16%神经苷脂GD1b。
实施例40N-溶性神经节苷脂混合物的2-呋喃甲酰衍生物(1)N-溶神经节苷脂的制备将10g神经节苷脂混合物(按实施例39制得)溶解在200ml 3M的氢氧化钾中，在90℃水解72小时。将溶液冷却并用盐酸调节到pH6.5。使它在4℃静置18小时，将沉淀的脂肪酸滤去。将它对水渗析，浓缩至500ml，并在5升丙酮中沉淀。
将含有N'-溶性神经节苷脂和N，N'-二-溶性神经节苷脂(＜20%)的产物真空干燥，再溶解于100ml二甲基甲酰胺中。
然后向这溶液缓慢加入溶解于20ml四氢呋喃中的2.15g(6.37mM)9-芴甲氧羰基-N-羟基琥珀酰亚胺，使在室温反应1小时。最后加入3ml(31.85mM)乙酐和0.9ml(63.7mM)三乙胺。30分钟后，加入12.5ml派啶以去除保护基团。使在室温反应18小时，在2升丙酮中沉淀，并干燥。将所得物质溶解于1M碳酸钠并在60℃保持1小时。再将其渗析，浓缩至100mg/ml，并在5倍体积的丙酮中沉淀。使产物通过一平衡在甲醇中的S-琼脂糖凝胶柱(H+型)。以甲醇洗涤，通过用氯化铵(10mM)甲醇溶液洗脱就得到N-溶性神经节苷脂。
将含有产物的流分干燥，再溶解于水。用氢氧化钠(0.01N)调节至pH为10，使它渗析，浓缩至100mg/ml，并在5倍体积丙酮中沉淀。
(2)2-呋喃甲酰衍生物的制备将500mg(0.31mM)上面制得的N-溶性神经节苷脂混合物溶解于2.5ml二甲基甲酰胺中，在其中加入溶解在2.5ml二甲基甲酰胺中的431μl(3.1mM)三乙胺，174mg(1.55mM)2-呋喃甲酸和158.4mg(0.62mM)碘化1-甲基-2-氯吡啶。
使在室温反应18小时，随后产物在10ml丙酮中沉淀，过滤并干燥。通过平衡在甲醇中的S-琼脂糖凝胶柱(H+型)作色谱分离，将酰化产物与未反应化合物分离开来。将呋喃甲酰衍生物用甲醇洗脱，干燥，再用碳酸钠(1N)收集，渗析，浓缩至2.5ml并在25ml丙酮中沉淀。
所得产品373mg(理论值的72%)。
实施例41N(2-呋喃甲酰)-N-溶性GM的甲酯将500mg(0.36mM)N-(2-呋喃甲酰)-N-溶解性GM1钠盐(按实施例7制得)溶解于5ml甲基吡咯烷酮中，在其中加入44.5μl(0.72mM)甲基碘。使在室温反应3小时，在乙酸乙酯中沉淀，过滤并真空干燥。
然后将产物用三氯甲烷/甲醇/水(60∶30∶6)混合物作为洗脱剂通过硅胶色谱进行提纯。
将各纯提取组分汇集起来，蒸发，再溶解在2.5ml三氯甲烷/甲醇(1∶1)中，并在25ml丙酮中沉淀。
所得产品449mg(理论值的89%)。
用三氯甲烷/甲醇/氯化钙0.3%(50∶42∶11)组成的溶剂作硅胶色谱层析，测得该化合物是单一的，Rf＝0.4[N-(2-呋喃甲酰)溶解性GM1＝0.37]。
实施例42N-(2-呋喃甲酰)-N-溶性GM1的甲酯的全乙酰化物使500mg(0.36mM)N-(2-呋喃甲酰)-N-溶性GM1(按照实施例41制备的)溶于5ml吡啶，再将2.5ml新鲜蒸馏乙酐加入到该溶液中，混合物在室温下搅拌72小时。反应完毕，使溶液在旋转蒸发器蒸发，残留物被分配在10ml冰水和10ml乙酸乙酯中，在1M冷HCl中，用水和1MNaHCO3溶液洗涤乙酸乙酯。有机相用硫酸钠脱水，再蒸发，残留物通过硅胶色谱法用二氯甲烷/乙酸乙酯/异丙醇(70∶30∶45)提纯。收集纯馏分，经蒸发，再溶于5ml乙醚中，在25ml正己烷中析出沉淀。
所得产物463mg(理论收率的62%)采用由氯仿/甲烷/乙酸乙酯(70∶10∶30)和乙酸乙酯/异丙醇(95∶5)所形成的溶剂的硅胶色谱法表明，产物是分别具有Rf0.45和0.26的单元组分。
实施例43N-(2-呋喃甲酰)-N-溶解性GM1的内酯在4℃下，使500mg(0.36mM)N-(2-呋喃甲酰)-N-溶性GM1钠盐溶于5mlN-甲基吡咯烷酮，再与55μl(0.4mM)三乙胺和100mg(0.41mM)1-甲基-2-碘化氯吡啶反应。反应进行4小时得到定量收率。通过添加50ml丙酮使产物析出，经过过滤，用5ml氯仿/异丙醇(1∶1)收集，再在25ml丙酮中再析出沉淀。
所得产物476mg(理论收率的96%)采用由氯仿/甲烷/0.3% CaCl2(50∶42∶11)所形成的溶剂的硅胶色谱法表明，化合物是具有Rf＝0.44的单元[N-(2-呋喃甲酰)-N-溶性GN1＝0.37]。
实施例44N-(2-呋喃甲酰)-N-溶性GM1的丁酰胺使500mg(0.36mM)N-(2-糠酰)-N-溶性GM的甲酯(按照实施例41制备的)溶于5ml吡啶，并将2.5ml2-丁胺加入到该溶液中。在室温下，反应72小时，然后在旋转蒸发器中干燥，再用5ml氯仿/甲烷(1∶1)溶解，在25ml丙酮中析出。经过滤和真空干燥。
然后，通过硅胶色谱法，用氯仿/甲烷/水(60∶25∶4)作洗脱剂，提纯产物。
收集纯馏分，进行蒸发，再溶于2.5ml氯仿/甲烷(1∶1)中，在25ml丙酮中析出。
所得产物376mg(理论收率的75%)采用由氯仿/甲烷/0.3%CaCl2(50∶42∶11)所形成的溶剂的硅胶色谱法表明，化合物是具有Rf＝0.50单元[N-(2-呋喃甲酰)-N-溶性GM1的甲酯＝0.42]。
注射溶液的医药制剂实施例45制剂1号-2ml-管含有-活性物质 5mg-氯化钠 16mg用注射用水中pH为6的柠檬酸缓冲剂加至 2ml活性物质选自由实施例5和12中任何一例所述的神经节苷酯衍生物所组成的组。
制剂2号-2ml一管含有-活性物质 50mg-氯化钠 16mg用注射用水中pH为6的柠檬酸缓冲剂加至 2mg活性物质选自由实施例7所述的神经节苷酯衍生物所组成的组。
制剂3号-4ml一长颈细口瓶含有-活性物质 100mg-氯化钠 32mg
用注射水中pH为6的柠檬酸缓冲剂加至 4ml活性物质选自由实施例27、29、38以及40所述的神经节苷酯衍生物所组成的组。
双长颈细口瓶中制备的医药组合物实施例46本实施例中所述的制剂是在一对长颈细口瓶中。第一长颈细口瓶含有冻干粉末状的活性物质，其数量为10%-90%(重量)，以及医药上可接受的赋形剂，例如甘氨酸或者甘露糖醇。第二长颈细口瓶含有溶剂，如氯化钠溶液以及柠檬酸缓冲剂。在施用之前，立即将二个长颈细口瓶的内容物混合在一起，含有活性物质的冻干粉末迅速溶解形成注射液。由含有冻干粉末状的活性物质的一个长颈细口瓶组成的医药上的形式是本发明最佳的形式。
系统1号a.2ml 一长颈细口瓶冻干物质含有-活性物质 5mg-甘氨酸 30mgb.2ml -管溶剂含有-氯化钠 16mg-用注射水中柠檬酸缓冲加至 2ml活性物质选自由实施例5和12中任何一例所述的神经节苷酯衍生物所组成的组。
系统2号a.3ml 一管冻干物质含有-活性物质 5mg-甘露糖醇 40mgb.2ml 一管溶剂含有
-氯化钠 16mg-注射用水中柠檬酸缓冲剂加至 2ml活性物质选自由实施例5和12中任何一例所述的神经节苷脂所形成的组。
系统3号a.3ml 一管冻干物质含有-活性物质 50mg-甘氨酸 25mgb.3ml 一管溶剂含有-氯化钠 24mg-用注射水中柠檬酸缓冲剂加至 3ml活性物选自由实施例18、33及38中任何一例所述的神经节苷脂衍生物所形成的组。
系统4号a.3ml 一管冻干物质含有-活性物质 50mg-甘露糖醇 20mgb.3ml 一管溶剂含有-氯化钠 24mg-注射水中柠檬酸缓冲剂加至 3ml活性物质选自由实施例18、33及38中任何一例所述的神经节苷酯衍生物组成的组。
系统5号a.5ml 一长颈细口瓶冻干物质含有-活性物质 150mg-甘氨酸 50mg
b.4ml 一管溶剂含有-氯化钠 32mg-注射水中柠檬酸缓冲剂加至 4ml活性物质选自由实施例27、29、38及40中任何一例所述的神经节苷脂衍生物组成的组。
系统6号a.5ml 一长颈细口瓶冻干物质含有-活性物质 100mg-甘露糖醇 40mgb.4ml 一管溶剂含有-氯化钠 32mg-注射水中柠檬酸缓冲剂加至 4ml活性物质选自由实施例27、29、38及40中任何一例所述的神经节苷脂衍生物组成的组。
系统7号a.3ml 一长颈细口瓶含有-无菌、微粉化的活性物质 40mgb.3ml 一管溶剂含有-吐温80(Tween 80) 10mg-氯化钠 24mg-注射水中磷酸盐缓冲剂加至 3ml活性物质选自由实施例41、42及43中任何一例所述的神经节苷脂衍生物所组成的组。
系统8号a.5ml 一长颈细口瓶含有-无菌、微粉化的活性物质 100mg
b.4ml -管溶剂含有-吐温80(Tween 80) 15mg-大豆卵磷酯 5mg-氯化钠 36mg-注射水中磷酸盐缓冲剂加至 4ml活性物质选自由实施例41、42及43中任何一例所述的神经节苷脂衍生物所组成的组。
经皮肤施用的医药制剂实施例47制剂1号 -一种膏药含有-活性物质 100mg-甘油 1.6g-聚乙烯醇 200mg-聚乙烯吡咯烷酮 100mg-增强经皮肤渗透的赋形剂 20mg-水 1.5g活性物质选自由实施例22、23及25中任何一例所述的神经节苷脂衍生物所组成的组。
制剂2号 -100g软膏含有-活性物质(在5g混合的磷酯脂质 4.0g体中)-聚乙二醇酯单硬脂酸 1.5g-甘油 1.5g-对羟基苯甲酸酯 125mg-水 72.9g活性物质选自由实施例22、23及25中任何一例所述的神经节苷脂所组成的组。
口服医药制剂实施例48制剂1号 -一片含有-活性物质 20mg-微晶纤维素 150mg-乳糖 20mg-酰胺 10mg-硬脂酸镁 5mg活性物质选自由实施例9、13、19及26中任何一例所述神经节苷脂衍生物所组成的组。
制剂2号 -一丸含有-活性物质 30mg-羧甲基纤维素 150mg-酰胺 15mg-虫胶 10mg-蔗糖 35mg-着色剂 0.5mg活性物质选自由实施例9、14及28中任何一例所述的神经节苷脂衍生物所组成的组。
制剂3号 -一胶质胶囊含有-活性物质 40mg-乳糖 100mg-耐胃液外衣 5mg活性物质选自由实施例15、24及34中任何一例所述的神经节苷酯衍生物所组成的组。
制剂4号 -一软明胶胶囊含有-活性物质 50mg-植物油 200mg-蜂蜡 20mg-明胶 150mg-甘油 50mg-着色剂 3mg活性物质选自由实施例15、24及34中任何一例所述的神经节苷脂衍生物所组成的组。
权利要求
1.一种N-酰基-N，N’-二-溶性神经节苷酯类、N’-酰基-N’N-二-溶性神经节苷酯类以及N，N’-二酰基-N，N’-二-溶性神经节苷酯类的制备方法，其特征在于它包括用引入酰基的相应的酸使N，N’-二-溶性神经节苷酯类、N-酰基-N，N’-二-溶性神经节苷酯类或N’-酰基-N，N’-二-溶性神经节苷酯类酰化或者在鞘氨醇氮上、或在神经氨酸氮上或在这些化合物的混合物上，选择性地使适合的N，N’-二酰基-N，N’-二-溶性神经节苷酯类脱酰。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于它进一步包括使所得的酰基-二-溶性神经节苷酯类转变成所得化合物的酯、酰胺、内酯和/或羟基全酰化衍生物的步骤。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于使所得的产物转变成治疗上可接受的盐类。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所说的酰化是通过使起始的酰基-二-溶性神经节苷酯与相应的酸的一活性官能衍生物反应来实现的。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于按照以下各组反应中的一种使酰基-二-溶性神经节苷酯反应(1)溶性神经节苷酯衍生物与相应的酸的叠氮化物的反应;(2)溶性神经节苷酯衍生物与酰基咪唑的反应;(3)溶性神经节苷酯衍生物与相应的酸和三氟乙酸的混合酸酐的反应;(4)溶性神经节苷酯衍生物与相应酸的酰氯的反应;(5)溶性神经节苷酯衍生物与在碳化二亚胺存在下和任选在1-羟基苯并三唑存在下的相应的酸的反;(6)溶性神经节苷酯衍生物与高温下的相应的酸的反应;(7)溶性神经节苷酯衍生物与高温下相应酸的甲酯的反应;(8)溶性神经节苷酯衍生物与高温下相应酸的苯酚酯的反应;(9)溶性神经节苷酯衍生物与自酸的盐与碘化1-甲基-2-氯吡啶之间交换产生的酯的反应;
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于在酰化反应中，羟基、伯或仲氨基或者游离羧基被暂时保护。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于采用肽化学中所使用的保护方法。
8.根据权利要求4、5、6或7所述的方法，其特征在于当用N'-溶性神经节苷酯作起始物料时，采用适度的酰化方法。
9.根据权利要求1到8中任何一项所述的方法，其特征在于唾液羧基被酯化或者被转变成酰胺类。
10.根据权利要求1到8中任何一项所述的方法，其特征在于工艺在任何一步中断或者在中间步骤开始，然后进行所余下的步骤。
11.一种医药制剂，其特征在于它含有N-酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类、N'-酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类和N，N'-二酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类，其中酰基由脂族、芳族、芳脂族、脂环族或杂环族系列的有机酸衍生，并且其中两个酰基中的至少一个不是脂族的，它们的唾液羧基的酯类和/或酰胺，和/或它们的内脂和/或全酰化衍生物，和它们的任选的金属盐，以及这些化合物的混合物作为活性组份，以及医药上可接受的赋形剂。
12.根据权利要求11所述的医药制剂，其特征在于活性组份是以下化合物中的一种酰基-二-溶性神经节苷酯类，酰基-溶性神经节苷酯类，N，N'-二酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类，酰基-二-溶性神经节苷酯类中化合物的唾液羧基的酯类，酰基-二-溶性神经节苷酯类中化合物的唾液羧基的酰胺类，酰基-二-溶性神经节苷酯类化合物的全乙酰化物、全丙酰化合、全丁酰化物、全丙二酰化物及全丁二酰化物，酰基-二-溶性神经节苷酯类的唾液羧酯，酰基-二-溶性神经节苷酯类的唾液羧酰胺，酰基-二-溶性神经节苷酯类的内脂，酰基-二-溶性神经节苷酯类的全乙酰化衍生物，酰基-二-溶性神经节苷酯类的混合物，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的治疗上可接受的金属盐或它们各自的混合物，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的钠盐、钾盐、铵盐、钙盐、镁盐或者它们各自的混合物，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的治疗上可接受的有机碱盐或者它们各自的混合物，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的带有治疗上可接受酸的加成盐或者它们的混合物。
13.根据权利要求11或12所述的医药制剂，其特征在于活性组份是以下化合物中的一种N-2，6-二甲氧基苯甲酰基-N-溶性GM1，N-5-甲氧基-(2，3-二氢-茚酮)-乙酰基-N-溶性GM1，N-苯乙酰基-N-溶性GM1，N-环丁烷羰基-N-溶性GM1，N-2-降冰片烯乙酰基-N-溶性GM1，N-呋喃甲酰-N-溶性GM1，N-咪唑乙酰基-GM1，N-6-甲基菸酰基-N-溶性GM1，N-甲基脯氨酰基-N-溶性GM1，N-1-甲基-2-吡咯羰基-N-溶性GM1，N-2-吡啶乙酰基-N-溶性GM1，N-4-4-吡啶硫代乙酰基-N-溶性GM1，N-3-喹啉羧基-N-溶性GM1，N-四唑基-1-乙酰基-N-溶性GM1，N-7-茶碱乙酰基-N-溶性GM1，N-2-噻吩乙酰基-N-溶性GM1，N-3-氨基-1，2，4-三唑-5-乙酰基-N-溶性GM1，N-乙酰基-DL-色氨酸乙酰基-(α，α，α-三氟甲苯胺)-菸酰基-GM1，N-5-海因乙酰基-N-溶性GM1，N-5-羟基吲哚-3-乙酰基-N-溶性GM1，N-2-氯代菸酰基-N-溶性GM1，N-5-甲基-2-噻吩乙酰基-N-溶性GM1，N-5-苯并咪唑乙酰基-N-溶性GM1，N-5-羟基-2-吲哚乙酰基-N-溶性GM1，N-3，4，5-三甲氧基苯甲酰基-N-溶性GM1，N-环庚烷乙酰基-N-溶性GM1，N-环戊烷乙酰基-N-溶性GM1，N-5-甲基-2-噻吩乙酰基-溶性GM1。
14.以下的一种化合物N-酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类、N'-酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类和N，N'-二酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类，其中酰基由脂族、芳族、芳脂族、脂环族或杂环族系列的有机酸衍生，并且其中两个酰基中的至少一个不是脂族的，它们的唾液羧基的酯类和/或酰胺，和/或它们的内脂和/或全酰化衍生物，和它们的任选的金属盐，以及这些化合物的混合物用作治疗神经系统病症。
15.根据权利要求14所述的治疗应用，其中将一种或多种以下化合物施用于需要这样治疗的病人酰基-二-溶性神经节苷酯类，酰基-溶性神经节苷酯类，N，N'-二酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类，酰基-二-溶性神经节苷酯类中化合物的唾液羧基的酯类，酰基-二-溶性神经节苷酯类中化合物的唾液羧基的酰胺类，酰基-二-溶性神经节苷酯类化合物的全乙酰化物、全丙酰化合、全丁酰化物、全丙二酰化物及全丁二酰化物，酰基-二-溶性神经节苷酯类的唾液羧酯，酰基-二-溶性神经节苷酯类的唾液羧酰胺，酰基-二-溶性神经节苷酯类的内脂，酰基-二-溶性神经节苷酯类的全乙酰化衍生物，酰基-二-溶性神经节苷酯类的混合物，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的治疗上可接受的金属盐或它们各自的混合物，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的钠盐、钾盐、铵盐、钙盐、镁盐或者它们各自的混合，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的治疗上可接受的有机碱盐或者它们各自的混合物，酰基-二-溶性神经节苷酯类中任何一种的带有治疗上可接受酸的加成盐或者它们的混合。
16.以下的一种化合物N-酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类、N'-酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类和N，N'-二酰基-N，N'-二-溶性神经节苷酯类，其中酰基由脂族、芳族、芳脂族、脂环族或杂环族系列的有机酸衍生，并且其中两个酰基中的至少一个不是脂族的，它们的唾液羧基的酯类和/或酰胺，和/或它们的内脂和/或全酰化衍生物，和它们的任选的金属盐，以及这些化合物的混合物用作治疗大脑局部缺血，代谢性脑病，如低血糖和缺氧，毒物源性脑病，创伤，老熟，癫痫，神经变性性疾病，如巴金森氏疾病和亨廷顿舞蹈病和/或精神性疾病。
17.根据权利要求13到16的任何一项的治疗应用，其中通过胃肠外途径施用，每天每公斤体重为0.05-5mg活性组份。
全文摘要
本发明涉及N-酰基-N，N′-二-溶性神经节苷脂类、N′-酰基-N，N′-二-溶性神经节苷脂类及N，N′-二酰基-N，N′-二-溶性神经节苷脂类，其中酰基由脂族、芳族、芳脂族、脂环族或杂环族系列的有机酸衍生，并且其中两个酰基中的至少一个不是脂族的，及其制备。还涉及上述化合物的酯类、内酯类、酰胺类及羟基全丙烯酸酯类及其盐的制备。这些化合物用于治疗中枢和外周神经系统的病症。
文档编号A61P25/28GK1051912SQ90109290
公开日1991年6月5日 申请日期1990年11月14日 优先权日1989年11月14日
发明者费郎切斯科·德拉·瓦莱, 奥雷利奥·罗密欧 申请人:菲迪安股份公司