专利名称：非胃肠用药的可加热灭菌的水包油乳剂型x-射线造影剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种基于碘化脂肪酸酯的非胃肠道用药的、可加热灭菌的水包油型乳剂型X-射线造影剂，它以适宜的浓度、必要时作适当稀释后，可用于X-射线诊断，例如淋巴系造影术。
现已有若干种X-射线造影乳剂，特别是那些基于碘化脂肪酸酯的乳剂，被用于X-射线诊断。因为已经发现，它们可在胃肠道外、特别是静脉注射中应用。然而，现在已知的乳剂，在需要和欲达到的程度上还不能满足所有的要求，例如，它们对X-射线的吸收能力常常表现出不够高。一个突出的问题是用这类乳剂时稳定性很差，带来的不利后果是不能灭菌或难以灭菌，或者贮存时间不够长。因此考虑到它们的稳定性和临床的可用性，一直在致力于改良X-射线造影用的乳剂。
在德国专利DE-PS2602907中叙述了碘化的脂肪酸甘油脂的水性乳剂，其中含有50-60%(重量)脂肪酸的烷基链长至少有10个碳原子的碘化脂肪酸甘油酯，2-10%(重量)的脂肪酸聚氧乙烯脱水山梨醇酯作为乳化剂，其余部分为双蒸馏水。这样得到的乳剂由于在较高温度下不稳定，只能用r-射线灭菌。
M.Vermess等在J.Comput.Assist.Tomogr(计算机辅助X-射线断层照相术杂志)3(1979)，25-31页中叙述了各种组成的含碘脂肪乳剂。最好的乳剂是EOE13，其中含有53%(体积)罂粟油的碘化脂肪酸乙酯(商品名叫ethiodol)，10%乙醇，0.45%大豆卵磷脂，用磷酸缓冲液调节至PH7，大约55%的油是以小油滴的形式存在，直径为1-3μm。根据作者的见解，得到的乳剂作肝造影时若能对X-射线有足够高的吸收能力，乳剂的颗粒大小必须在2～4μm范围内，如同J.Reinick等在Radiology 162(1987)，43-47页中确证，这种EOE13乳剂尚不够稳定，大量制备还很困难，此外，该乳剂还会引起不希望有的副作用，如发热。所以必须对患者用留体药物作预处理。
美国专利US-PS4404182公布了罂粟油的碘化脂肪酸乙酯(商品名叫ethiodol)和作为乳化剂的卵磷脂组成的乳剂的制备方法，该乳剂含有30～35%(体积)的直径为2～3μm的脂肪滴，经膜过滤对乳剂进行灭菌，系因它对热不稳定，因而不能在热压器中进行消毒。
最后，欧州专利EP-A-0294534叙述了含碘乳剂用作X-射线造影剂。是由一个或多个碘化脂质，例如罂粟油、棉籽油、豆油等的碘化脂肪酸酯，用乳化剂乳化到水相中，这种乳剂的特征是含有0.1-5%(重量)的一种或多种氨基酸、脂肪酸或其盐、和(或)脂溶性维生素和(或)尿素，必要时可含有一种或多种药用油或脂，加入这些是为了改善乳剂的稳定性。此外，该乳剂应含有2.5～65%(体积)的碘化脂质，其颗粒直径在0.5μm以下，这种乳剂非常稳定，可以在热压器中消毒。
此外，在欧州专利EP-A-0294534中根据一系列的公开副本，对该技术作了详尽的讨论。
在所引证的技术中一方面指出了乳剂的分散相的主要部分的颗粒大小在2-4μm范围时，具有例如对肝和脾脏有良好的X-射线吸收性，固而作为X-射线造影剂，比颗粒明显小的相应的乳剂，例如小于0.75μm的乳剂，更好地满足了作为造影剂的要求，如同E.Grimes等在J.Pharm.Sci.68(1979)52-56页所证明的那样。另一方面，在欧州专利EP-A-0294534的第4栏，第45-47行中指出，为了获得稳定的可加热灭菌的X-射线造影乳剂，被分散的碘化脂肪酸酯的颗粒大小必须小于0.5μm。
由于这种技术状况，迄今显然不能制备这样的X-射线造影乳剂它兼有特别稳定的优点因而可在121℃温度下经热压器灭菌和良好的吸收X-射线性能的优点，虽然很久以来迫切地要求能满意地解决这个问题。
本发明就是基于此，创制了以有机碘化合物为基础的改良的X-射线造影乳剂，患者对这种乳剂有良好耐受性，既对X-射线有非常好的吸收性能，也有优良的乳剂稳定性，所以这种乳剂具有良好的贮存稳定性，并可在120-121℃热压器中进行足够长时间的灭菌。
按照本发明的内容，一种供胃肠道外使用的、可加热灭菌的水包油型的X-射线造影乳剂满足了这些要求，乳剂的内相是一种或多种合适的油溶性的有机碘化合物，特别是含碘的脂肪酸酯，必要时含有一种或多种高度精制的甘油酯油，一种或多种乳化剂以及必要时加入辅助乳化剂，外相是含有等渗添加剂的蒸馏水，等渗添加剂的特征是含有生理可容的缓冲液，它是由氢氧化钠和一种成多种合适的无机和(或)有机磷酸盐组成。
我们意外地发现本发明的水包油乳剂由于含有少量的但是确定量的生理可容的缓冲系统，乳剂获得优良的稳定性，因此可以在121℃热压器中灭菌大约15～20分钟。并且根据灭菌过程，通过适当地选择磷酸缓冲液与氢氧化钠的比例和缓冲液的总量，可以得到适宜的平均粒度，而不会对乳剂的结构有明显的不利影响，在充氮气后，具有优良的贮存稳定性。因此，可非常容易地将这种造影乳剂用于胃肠道外给药。同时，本发明的X-射线造影乳剂对X-射线具有非常好的吸收性，可用于X-射线诊断，非常有利。
在本发明的水包油乳剂中，含碘的X-射线造影剂一般是已知的，可以买到，可作为胃肠道外用药的有机碘化合物使用，对器官作X-射线造影时，有非常强的阳性对比度。优选的是含碘的脂肪酸酯，特别是脂肪酸甘油酯，尤以脂肪酸甘油三酯最好，例如碘化罂粟油的脂肪酸乙酯，以商品名Lipiodol UF出售，此外，还有碘化豆油、棉籽油、花生油，碘化鱼油等等，碘化的脂肪酸酯的用量以制好的乳剂计，通常为5-40%(重量)。
本发明的乳剂必要时也可含有一种或多种非碘化的、高纯的、在胃肠道外营养范围用的甘油酯油，例如豆油，红花油，中等链长的脂肪酸甘油三酯等等。由于加入这些油，可以降低乳剂作为内相的小油珠的密度，因而阻止了油珠的沉积。
本发明的乳剂还含有一种或多种乳化剂，这类乳化剂作为胃肠道外用药，必须要纯净。这些乳化剂是已知的，可以买到。优选的是自然界存在的乳化剂，特别是卵磷脂，例如大豆卵磷脂。对于本发明的目的，特别优选的是蛋卵磷脂。通过已知的特定的精制和精馏方法，可以把卵磷脂中存在的磷脂组分调整成适当的比例。加入的特别优选的蛋卵磷脂中磷脂酰胆碱含量≥75%，脑磷脂含量≤15%。也可以加入大豆卵磷脂的高纯组分。
此外，本发明的乳剂必要时含有适当的辅助乳化剂，其中特别适宜的是长链脂肪酸例如棕榈酸、油酸或硬脂酸的碱金属盐。
本发明制成的乳剂中卵磷脂的含量一般是在0.4～35g/l的范围，辅助乳化剂例如脂肪酸的碱金属盐在制成的乳剂中含量一般在0.5-1g/l范围内。
本发明乳剂的外相含有蒸馏水或注射用高纯度水和等渗物，等渗物的加入是使本发明乳剂的外相与人体血液等渗。适宜作等渗物的特别是生理可容性的多醇，如甘油，山梨醇或木糖醇。此处特别优选的是甘油，为使乳剂等渗所必需的等渗物例如甘油加入量，以制成的乳剂计，为25g/l。
本发明乳剂中提及的加入由适当浓度(例如1N)的氢氧化钠和一种或多种适宜的无机和(或)有机磷酸盐构成的生理可容性缓冲液，可使乳剂具有优良的热和贮存稳定性。含于本发明乳剂中的无机磷酸盐优选为磷酸氢二钠。有机磷酸酯盐可考虑生理可容性的有机磷酸酯，这种酯在121℃，15-20分钟的加热过程中基本上不会被破坏。在这种情况下尤以甘油磷酸酯盐可得到良好的结果，如同现今用于商业上可买到的胃肠道外的灌注溶液。这通常是α-和β-甘油磷酸酯盐的混合物，不过也可用该混合物的单一组分。本发明乳剂中作为有机磷酸酯盐优选为磷酸甘油酯二钠。
要知道由氢氧化钠和磷酸盐构成的所提及的缓冲系统必须在乳剂中有足够的用量才能起到所希望的作用。已证明为使乳剂具有所希望的稳定性作用，在制成的乳剂中以体积计，各含无机和(或)有机磷酸盐为2-10mmol/l，优选为3～8mmol/l，氢氧化钠为0.2～5mmol/l，优选为0.5～3mmol/l。有关的试验表明，通过改变乳剂中磷酸缓冲液与氢氧化钠的比例以及缓冲系统的总量，可以有目的地调整内相中所希望的平均粒度，缓冲系统的各个比例及总量必须靠经验确定于上述的界限内。
试验表明，如果作为内相的碘化的脂肪酸酯油珠的平均直径至少为0.6μm时，则本发明的乳剂可以得到特别良好的X-射线造影性能，且不会影响其优良的热和贮存稳定性。优选本发明的乳剂其作为内相的碘化脂肪酯酯油珠的平均直径在0.6～4μm范围。特别优选的本发明乳剂是碘化脂肪酸酯的油珠平均直径为0.8～3.0μm，而尤其特别优选的乳剂其碘化脂肪酸酯油珠的平均直径是0.8～2.5μm，因为它有优良的热和贮存稳定性，具有特别良好的X-射线造影性能。
本发明乳剂的制备原则上按DE-PS3722540的已知方法进行，尤其要参见13/14栏，在制备的全过程以及必要时对制好的乳剂随后贮存时，要注意使诸组分和得到的混合物以及制得的乳剂持续地充氮保存。各个操作步骤简要叙述如下首先在大约55～60℃和不停的搅拌下，将所需量的卵磷脂加到适量的注射用水中，加毕再将混合物搅拌一段时间，例如15～20分钟。
与此同时，也在55～60℃和不停的搅拌下将适量的甘油和油酸钠加到另一份适量的注射用水中并使其溶解。得到的溶液在氮气下经适宜的滤膜过滤，例如滤膜的孔径为0.2μm，将滤液加到温度为55～60℃的已制好的水/卵磷脂混合物中。
将称定的适量的碘化脂肪酸酯，例如碘化罂粟油加热到50～60℃，经尼龙滤膜过滤，滤膜的孔径例如是0.2μm。在不停的搅拌下，例如用连有搅拌装置的机械性的高频器，将滤液直接加到已制好的卵磷脂、甘油和油酸钠的水混合物中，生成了粗乳剂。碘化油加完后，生成的粗乳剂再乳化一段时间，以得到相应的前乳剂。然后将整个混合物一直要保持在55-65℃和充氮状态。
得到的前乳剂于密闭系统中在一个适宜的两段匀浆机中再乳化，第一段压力为400巴，第二段为100巴，再乳化时温度保持在50～60℃。高压匀化后，乳剂转到贮罐中。在贮罐中加入适量的磷酸缓冲液和氢氧化钠，将乳剂稀释到适当的浓度。然后将乳剂冷却到10～15℃。再把乳剂于氮气保护下灌装，在旋转热压器中121℃加热灭菌15分钟。
本发明乳剂在灌装后要避免光线和氧气的作用，所以在灌装时要在氮气下进行。灭菌后灌装好的乳剂贮存于+4和21℃。贮存了14天和35天后进行相应的试验，证明该乳剂在这段时间内没有变化。
以下实施例对本发明作进一步说明。
实施例1本发明的水包油型X-射线造影乳剂制法如下首先将231ml注射用蒸馏水加到充满氮气的容器中，加热到55～60℃，在后面的操作步骤也要维持该温度。向水中鼓氮直至氧含量降到0.1mg/l以下。然后继续在鼓氮情况下将16g蛋卵磷脂E80在不停的搅拌下于2分钟内加到水中。在连续的高频器(Ultra-Turrax)和搅拌器中打碎成细粒，并再搅拌15分钟。
与此同时将75ml注射用蒸馏水加到第二个充有氮气的容器中，加热至55～60℃。在后面的操作步骤也维持此温度。向水中鼓氮直至氧含量降到0.1mg/l以下。然后将25g甘油(100%含量)和0.3g油酸钠加到水中，慢慢搅拌使溶解。将得到的55～60℃温热的溶液在氮气压力下于10分钟内通过0.2μm的滤膜加到已制好的水/卵磷脂混合液中。
200g碘化罂粟油的脂肪酸乙酯(商品名Lipiodol UF)置于容器中，在充氮气情况下加热到50-60℃，并且在20～25分钟内滤经孔径为0.2μm的尼龙-滤膜，并于不停搅拌下直接进到已制好的卵磷脂、甘油和油酸钠的水混合液中，混合物同时经机械的高频器(Ultra-Turrax)在连续的精发生器(G6)和粗发生器(G2)内处理。加完X-射线造影剂后，生成的粗乳剂再乳化25分钟。在制备粗乳剂时，要保持温度55～65℃，并且不断地充氮气。
在停掉机械高频器后，该粗乳剂在经轻搅拌下和大约0.5巴的氮气压力下通过平均孔径为40μm的滤膜(商品名为HDCH400)，加到为制备脂肪乳剂的适宜的2一段匀浆器(Gaulin-2段均化器)中，第一段压力为400巴、第二段为100巴进行匀化。所需的匀化压力用热蒸馏液经一旁路而达到，最后转变成乳剂。
匀化作用时的温度大约为60℃，生成的乳剂置于用氮气复盖的贮罐中。此时要使乳剂静置，偶尔可缓慢地摇动。
然后还要使乳剂进行2次匀化，温度仍维持在大约60℃。经过4次匀化后，尽可能快地使乳剂冷却。冷却后的乳剂转入一个盛有500毫升冷却至12℃的无氧蒸馏水和0.89g带两个结晶水的磷酸氢二钠的容器中。在进行4次匀化后，容器中的乳剂不必用氮鼓气，只用氮气复盖即可。乳剂间或地慢慢搅动下再冷却到8～9℃。到达该温度后停止搅拌。
要测试乳剂的PH值，若偏离了预定的理论值(PH10.0～10.2)，加入2.2ml 1N氢氧化钠加以调整。得到的乳剂置于氮气复盖的冷罐内，灌装之前，用孔径为2～8μm的膜过滤器过滤，灌装压力最大是0.5巴。乳剂装入一个充有氮气的玻璃瓶中，在装瓶过程中要用氮气保护，瓶中的氧含量要低于0.1mg/l。灌装后瓶子用中空的橡皮塞密塞并翻卷过来。
本发明乳剂在制备和贮存时要避免光线和氧气的作用。
灌装入玻璃瓶中的乳剂紧接着在121℃旋转热压器中加热灭菌15分钟。乳剂在灭菌前的PH值为10.0，灭菌后PH值为7.1，灭菌前后乳剂的密度为1.046，乳剂的渗透性为278mosm/l。
光学试验表明，灭菌以前和以后得到的乳剂满足胃肠道外用药的水包油乳剂的常规标准。
此外，灭菌前的乳剂的粒度分布用动力学的光散射法(Autosizer 2C，Malvern公司)测定，灭菌后用Coulter法测定。这些测定用颗粒数据公司(Firma particle Data)的测量仪“Elzone”进行。结果如下表1粒度分布(%) 灭菌前 灭菌后＞0.6μm - 92.5＞1.0μm - 63.41＞1.5μm - 30.61＞5.0μm - 0.00平均粒度(用Autosizer 280.7nm -2C测定)ζ电位 -36.18mV
灌装后灭菌的乳剂避光贮存于+4°和21℃。随机取样表明，存放时间14和35天以后该乳剂原样不变，部分沉降的粒珠可轻轻振摇灌装瓶又会均匀分布。
实施例2-9按实施例1详细叙述的方法制备的另一种水包油型X-射线造影乳剂，具有如下的组成，只是所用的缓冲系统的性质和用量不同。为了作比较，实施例2的乳剂中没有缓冲系统，显然它不能加热灭菌，其粒度分布是以未灭菌情况下测定的。而实施例3到9的乳剂粒度分布是在121℃旋转热压器中灭菌15分钟后测定的。
实施例2到9所述的乳剂每1000ml具有如下的组成16g 蛋卵磷脂E8025g 甘油(100%)0.3g 油酸钠193.5g 碘化罂粟油的脂肪酸乙酯(Lipiodol UF)820ml 蒸馏水这样组成的乳剂在经过第4阶段匀化和大约12℃冷却后，加入如下量的缓冲系统实施例2不加缓冲系统实施例35mMol/l Na2HPO4·2H2O+0.68mMol/l NaOH实施例45mMol/l Na2HPO4·2H2O+1.2mMol/l NaOH
实施例55mMol/l Na2HPO4·2H2O+1.5mMol/l NaOH实施例65mMol/l Na2HPO4·2H2O+2.2mMol/l NaOH实施例75mMol/l磷酸甘油钠+1.1mMol/l NaOH实施例85mMol/l磷酸甘油钠+1.38mMol/l NaOH实施例95mMol/l磷酸甘油钠+2.13mMol/l NaOH得到的乳剂经光学检查都合格可用。下表(表2)列出了灭菌前后(实施例2只有灭菌前)的PH值和用Coulter法测定的粒度分布，实施例2的乳剂是未灭菌情况下测定的，实施例3到9是各个乳剂在加入缓冲液并灭菌后测定的。表2中还列出了各个乳剂稳定性的ζ电位。
表2的结果非常清楚地表明，用同样制备条件加入缓冲系统和121℃灭菌后，乳剂的粒度分布由较小的颗粒(见实施例2)向明显的较大颗粒变化(见实施例3到9)。ζ电位表明，加入的缓冲系统都有所希望的作用。
权利要求
1.非胃肠道用药的可加热灭菌的水包油型X-射线造影乳剂，内相是由一种或多种适当的油溶性的有机碘化物，特别是碘化的脂肪酸酯，必要时加入一种或多种高精炼的甘油酯油珠，和一种或多种乳化剂以及必要时含有辅助乳化剂所组成，外相是含有等渗添加物的蒸馏水，其特征是含有一定量的由氢氧化钠和一种或多种适宜的无机和(或)有机磷酸盐构成的一种生理可容的缓冲液。
2.按照权利要求1的乳剂，其特征是，它含有作为无机磷酸盐的磷酸氢二钠。
3.按照权利要求1和2的乳剂，其特征是，它含有作为有机磷酸盐的磷酸甘油二钠。
4.按照权利要求1到3中一项中的乳剂，其特征是，以制成的乳剂体积计，含有3～8mMol/l的无机和(或)有机磷酸盐和0.5-3mMol/l的氢氧化钠。
5.按照权利要求1到4中一项的乳剂，其特征是，作为内相的碘化脂肪酸酯的油珠，平均直径的范围是0.6～4.0μm
6.按照权利要求5的乳剂，其特征是，碘化的脂肪酸脂油珠的平均直径范围为0.8-3.0μm。
7.按照权利要求5的乳剂，其特征是，碘化的脂肪酸油珠的平均直径范围为0.8-2.5μm。
全文摘要
本发明涉及一种非胃肠道用药的可加热灭菌的水包油型X-射线造影乳剂，内相是由一种或多种适宜的油溶性的有机碘化合物、特别是碘化脂肪酸酯、一种或多种乳化剂以及在必要时使用的辅助乳化剂所组成，外相是含有等渗添加物的蒸馏水，该乳剂的特征是，它是由氢氧化钠和一种或多种适宜的无机和(或)有机磷酸盐所组成的一种生理可容的缓冲液。得到的乳剂具有非常良好的贮存和热稳定性，能够在121℃热压器中进行灭菌。
文档编号A61K49/04GK1065595SQ92101848
公开日1992年10月28日 申请日期1992年3月20日 优先权日1991年4月12日
发明者克劳斯·萨默梅尔, 海因·福斯, 伯德·埃施巴赫 申请人:弗里桑尼斯公司