专利名称：生发剂及其制备的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生发剂，更具体地说涉及一种含有载体和有效量的选自3-[4-羟基-3，5-双(3-甲-基-2-丁烯基)苯基]-2-丙烯酸、苯丙酸4-(2-羰氧乙烯基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)苯基酯和它们的盐的一种或多种化合物的生发剂，以及所述生发剂的制备方法。
在有生之年保持浓密的头发是人们的共同愿望。本发明的发明者研究了蜂巢蜡胶(Propolis)提取物和其功能。结果我们得到了纯化的蜂巢蜡胶提取物，其对毛发生长有活性，它和其制备及用途公开在日本利申请No.269，038/92中。但是，对起这种活性作用的确实物质还没有披露。迫切需要揭示这种物质并建立一种对毛发生长有强活性而不必担心产生副作用的生发剂。
本发明的目的是提供和一种含有载体和对毛发生长和再生有强活性而不产生副作用的有效成分化合物的生发剂。
为了达到上述目的，本发明者对蜂巢蜡胶提取物进行了热切的研究。结果，我们发现3-[4-羟基-3.5-双(3-甲基-2-丁烯基)苯基]-2-丙烯酸(以下称为“化合物(1)”)和苯丙酸4-(2-羰氧乙烯基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)苯基酯(以下称为“化合物(2)”)对毛发生长和再生有强活性。基于此发现，本发明者继续研究并建立了含载体和有效量的选自3-[4-羟基-3.5-双(3-甲基-2-丁烯基)苯基]-2-丙烯酸、苯丙酸4-(2-羰氧乙烯基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)苯基酯和它们的盐的一种或多种化合物的生发剂，更具体地，我们建立了一种对毛发生长和再生有强活性的化妆品和药物组合物，完成了本发明。
因此，本发明涉及含有载体和有效量的选自化合物(1)和化合物(2)及它们的盐的一种或多种化合物的生发剂，以及所述生发剂的制备。
图1表示化合物(1)的紫外吸收光谱。
图2表示化合物(1)的红外吸改光谱。
图3表示化合物(2)的紫外吸收光谱。
图4表示化合物(2)的红外吸收光谱。
本发明可用的化合物(1)和(2)的盐为那些可用在各种生发剂中的盐，例如用于化妆品和药物组合物中的盐，即那些钠、钙、铜、锌、和银盐形式的盐。
本发明的生发剂指用于促进毛发如头发和眉毛生长和再生的化妆品或药物组合物。
化合物(1)和(2)以及它们可用于本发明的盐为已知化合物，其可用传统方法通过合成途径制备，也可以从含这些化合物和盐的植物等中提取来制备。在本发明中用于从自然资源制备这些化合物和盐的方法包括，例如，在Phytochemistry，Vol，25，pp.2，841-2，855(1986)和ChemicalPharmaceuticalBulletin，Vol.36，pp.769-775(1988)中报导的从蜂巢蜡胶及菊科(Compositae)植物如茵陈蒿(ArtemisiaCapillarisTunb.)的叶和茎中制取的方法。当从这些天然资源中制备这些化合物(1)和(2)及它们的盐时，不分离出其结晶形式，可以是部分纯化到对毛发生长和再生有活性并作为有效成分的提取物。
传统的提取和纯化方法可适当地用于前述制备。例如，化合物(1)和(2)及它们的盐可以这样制备将蜂巢蜡胶和菊科植物的叶或茎粉碎，用醇如甲醇和乙醇及它们的水溶液提取所形成的粉末，用一般方法浓缩所得提取液，再将浓缩液施于如凝胶过滤柱或反相柱进行层析。
化合物(1)可用如日本专利公开No.163，841/85中公开的化学合成方法来制备。
本发明生发剂含有选自化合物(1)和(2)及它们的盐的一种或多种化合物作为有效成分。
可用于本发明的这些化合物和盐包括可用合成方法得到的化合物及来自天然资源的纯化合物和粗制品如提取物。
可用于本生发剂的载体掺入生发剂中以得到满意的形式和特性例如，可用药用溶剂如水溶性溶剂和有机溶剂，和如用于软膏剂的赋形剂或基质。
虽然掺入本发明生发剂中的选自化合物(1)和(2)及它们的盐的一种或多种化合物的含量随着它们的种类、欲治疗病人的脱发和病人症状及个体差异而变化，但通常在约0.01-10ω/ω%范围内(“ω/ω%”以下简写为“%”，除非另有说明)，优选为约0.5-10%，更优选0.5-5.0%。
所用常规方法将本生发剂制成液体、胶体、奶状、气溶胶和软膏形式，例如养发剂(Hairtonic)、洗发液、发乳、发油、护发剂、摩丝(mousse)、香波和染发液。
在本生发剂中可适当加入用于常规生发剂的其它物质，例如软化剂、乳化剂、胶化剂、香料、防腐剂、抗氧化剂、着色剂、冷冻剂、杀菌剂、致湿物、和提取物如迷迭香提取物。
必要时本发明的有效成分可与药物联合使用，例如，维生素如对人和动物毛发生长和再生有活性的维行素E、激素、氨基酸、血管减压药、血液活动促进剂、细胞活化因子、抗炎剂、皮肤角质层分离剂和过敏剂。
特别是致湿物如丙二醇、1，3-丁二醇、甘油、山梨醇、肉豆蔻酸、2-辛基十二烷基酯、聚氧亚乙基聚氧亚内基二醇、月桂酸二乙醇酰胺，使本发明的有效成分与人和动物的皮肤容易接触，加速本有效成分的皮肤吸收，并达到满意的毛发生长和再生效果而不刺激皮肤。
“KANKOSO301”，6-[2-[(5-溴-2-吡啶基)氨基]乙烯基]-1-乙基-2-甲基吡啶鎓碘盐和“KANKOSO401”，2-(2-苯胺基乙烯基)-3，4-二甲基噁唑鎓盐，两者都由日本NipponKankoh-ShikisoKenkyusboCo.Ltd.，Okayam上市出售，它们可在本发明中适当地用作花青染料。花青染料和本发明的有效成分的联合使用在人和动物上起协同作用，并得到令人满意的毛发生长和再生的高效。加入本生发剂中的花青染料的含量一般在约0.001-0.01%的范围内。
本生发剂有相当高的商业价值，因为它储存期相当长，当用于人和动物皮肤时对毛发生长和再生相当高效。因此，本生发剂加速毛发生长和再生，改善脱发症状如老年脱发、过早脱发、甲老性脱发、斑形脱发、机械脱发和综合性脱发，并对预防和治疗皮屑、痒病、灰发和落发有强效。本发明的生发剂促进动物毛或绒的生长和再生，这些毛或绒是有商业价值的，例如绵羊、狐、羊驼、安哥拉兔、水貂和开士米山羊，还可改进它们的色调、光泽和商业价值。本生发剂还改进爱畜和鸟如狗、猫、长尾小鹦鹉和金丝雀的毛、绒和羽毛的质量。
本生发剂一般施于生发点，每天一到三次。本发明的有效成分(其分散在水溶液中)可用日本利公告No.41，747/84和日本专利公开No.56，060/89中公开的低频治疗仪进行离子电渗透疗法，以达到更满意的毛发生长和再生的效果。
对传统的生发剂，它们含有的有效成分化合物仅可溶解于或油基质中或水基质中，才对毛发生长和再生起满意的高效，它们在形式上受到相当大的限制。这是传统生发剂的一个缺点。有效量的本发明的有效成分可容易的与水基质和油基质混和，因此本生发剂有受其形式限制少的优点。
本发明将通过下列化合物(1)和(2)的制备实施例和实验实施例进行详细解释。
制备实施例1化合物(1)的制备用“TRIOBIENDER”(日本东京TrioScienceCo.Ltd的产品)奖153.3重量份的来自巴西的蜂巢蜡胶粉碎，并用乙酸乙酯提取。所得提取液中加入甲醇，离心除去形成的沉淀。将所得上清液置于旋转蒸发器中以除去剩余的溶剂，与甲醇混和以形成沉淀，然后离心除去沉淀，剩余上清液置于旋转蒸发器中以除去剩余溶剂，再进一步与甲醇混和得到产量为63.9重量份(以干燥固体计d.s.b)的提取物。
用“硅胶69G650”(日本东京KatayeinaChemicalIndustriesCo.Ltd的产品)对该是取物进行柱层析，将35重量份(d.s.b)提取物施于柱上，用己烷和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱。从己烷乙酸乙酯[＝59∶41-57∶43(体积)]溶剂系统的洗脱流份回收到总量为2.2重量份(d.s.b)的部分。
将这样得到的部分合并用“SEPHADEXLH-20”(瑞典UppsalaPharmaciaLKBBiotchnolgyAB的一种载体)进行柱色谱。用甲醇作洗脱剂，目标产品以SV(空速)0.16的流速流出。收集并浓缩1.1(洗脱体积/载体体积)左右洗脱位置的洗脱部分，形成结晶，然后用己烷洗涤该结晶，得到0.28重量份(d.s.b)的结晶化合物。
研究了此结晶化合物的理化性质(1)熔点95℃(2)元素分析实测值C＝75.85H＝8.39%O＝16.39%理论值C＝75.97H＝8.05%O＝15.98%(分子式为C19H24O3)(3)分子量300.40(4)紫外吸收光谱将结晶化合物溶解在甲醇中测定其紫外吸收光谱。结果示于图1中。如图1所示，它表明最大吸收峰在波长204nm、219nm、235nm和313nm处。这些数据与日本专利公开No.103，84185中描述的化合物的数据相符。
(5)红外吸收光谱将1.5mg的结晶化合物和200mg干燥KBr混合并压片，然后测其红外吸收光谱。结果示于图2中。如图2所示，吸收峰波数为3440cm-1、3000-2500cm-1(宽)、1670cm-1、1625cm-1和1595cm-1。这些吸收峰与日本专利公开No.163，841/85中描述的化合物的吸收峰相符，后者吸收峰波数为3440cm-1、2800-2500cm-1(宽)、1680cm-1、1628cm-1、1599cm-1等。
(6)核磁共振(′H-NMR)分析将结晶化合物溶解在氘代氯仿中并在500MHz测其NMR。发现下列22个氢信号7.69ppm(1H，d，J＝15.9Hz)、7.20ppm(2H，s)、6.29ppm(1H，d，J＝15.9Hz)、5.31ppm(2H，宽t)、3.35ppm(4H，宽d)、1.79ppm(6H，s)和1.78ppm(6H，s)。这些信号与ChemicalPharmaceuticalBulletin，Vol36，P.769(1988)中报导的在丙硐-d碍6中测定的化合物信号相符，后者信号为7.69ppm(1H，d，J＝17Hz)、7.15ppm(2H，宽s)、6.23ppm(1H，d，J＝17Hz)、5.28ppm(2H，宽t)、3.33ppm(4H，m)和1.78ppm(12H，s)。
(7)化学结构从这些结果鉴定结晶化合物为已知化合物3-[4-羟基-3，5-双(3-甲基-2-丁烯基)苯基]-2-丙烯酸。
该结晶化合物的化学结构如化学式1所示化学式1
制备实施例2化合物(2)的制备在制备实施例1的硅胶柱层析步骤中用己烷乙酸乙酯[＝55∶45-52∶48(体积)]的梯度溶剂系统洗脱的1.5重量份(d.s.b)部分流份，用制备实施例1相似方法用“SEPHADEXLH-20”进行柱层析。收集1.0(洗脱液体积/载体体积)左右洗脱位置的洗脱流份。合并该流份并用反相高效液相柱层析分离。甲醇∶水∶乙酸[＝900∶100∶0.01(体积)]的溶剂系统作为洗脱剂。收集目标流份，合并浓缩，得到0.058重量份(d.s.b)的结晶化合物。
研究了该结晶化合物的理化性质(1)熔点99℃(2)元素分析实测值C＝75.14%H＝6.59%(3)分子量FD/MSM/z＝364分别测定分子式、分子量和元素组成为C碍癌23蔼H碍癌24蔼O碍4，364.44和C＝75.80%，H＝6.64%及O＝17.56%。
(4)紫外吸收光谱将结晶化合物溶解在甲醇中并测是其紫外吸收光谱。结果示于图3中。如图3所示，最大吸收峰波长在208nm和278nm。
(5)红外吸收光谱将1mg结晶化合物和200mg干燥KBr混合并压片，然后测定其红外吸收光谱。结果示于图4。如图4所示，结晶化合物吸收峰波数为3450cm-1(宽)、2920cm-1、3100-2800cm-1(宽)、1750cm-1、1690cm-1、1635cm-1等。
(6)核磁共振分析(′HNMR)将结晶化合物溶解在氘代氯仿中并在500MHz定其NMR。检测到下列23个氢原子信号7.73ppm(1H，d，J＝16.OHz)，7.40ppm(1H，dd)，7.39ppm(1H，s)，7.31ppm(2H)，7.27ppm(2H)，7.24ppm(1H)，6.97ppm(1H，d，J＝8.3Hz)，6.38ppm(1H，d，16.OHz)，5.18ppm(1H，brt，J＝7.3，1.4Hz)，3.14ppm(2H，brd，J＝7.3Hz)，3.09ppm(2H，t，J＝7.8，7.4Hz)，2.92ppm(2H，t，J＝8.0，7.4Hz)，1.75ppm(3H，s)and1.67ppm(3H，s)。
这些信号与PhytochemistryVol.25，P2，841(1986)中报导的一甲酯化合物的信号相符。这些信号为7.63ppm(1H，d，J＝16Hz)，7.35ppm(1H，dd，J＝2，8.5Hz)，7.34ppm(1H，brs)，7.15-7.3ppm(5H，m)，6.93ppm(1H，d，J＝8.5Hz)，6.33ppm(1H，d，16Hz)，5.17ppm(1H，tqq，J＝7，1Hz)，3.13ppm(2H，brd，J＝7Hz)，3.08ppm(2H，brt)，2.91ppm(2H，brt)，1.74ppm(3H，brs)，1.66ppm(3H，brs)and3.79ppm(OMe，s)。
(7)化学结构结晶化合物被鉴定为已知化合物4-(2-羰氧乙烯基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)苯基酯。
此结晶化合物的化学结构如化学式2所示化学式2 实验实施例1对毛发生长和再生的作用将制备实施例1或2中分离的化合物(1)或(2)溶解在含2%丙二醇的50%甲醇水溶液中，得到0.1%、0.5%或5.0%的浓度，加入氢氧化钠调节每个溶液pH值6.7以得到洗发液形式的试验溶液。用相同的甲醇水溶液作为对照，只是用纯化水代替化合物(1)或(2)。将每只兔的背表面分成四个区，每个区约5cm2即两个区接近头部，两个区接近尾部，分别以兔的椎骨两对称。在此四个区上施以银乳液(即脱毛剂)脱毛，并让兔子做短暂停歇。脱毛区首先用水充分洗涤，然后在右侧接近头部的脱毛区、左侧接近头部的脱毛区、右侧接近尾部的脱毛区分别用刷子每天一次施以1ml含化合物(1)的实验溶液、1ml含纯化水的对照溶液和1ml含化合物(2)的实验溶液。左侧近尾部区不施加任何东西。
从脱毛后的第二天开始施用这些溶液，脱毛后第10天和第20天将新再生的毛脱下并计数。用显微镜测量每个区再生的毛中10根粗毛的长度，然后计算每只兔施用和不施用生发剂的区再生毛长度间的平均毛长差(mm)(remainder)。
另外，已知兔的椎骨两对称的背表面毛生长速度没有实质差别，及它们的毛生长速度没有实质的性别差异。
结果示于表1中。
如表1的结果所示，它揭示了化合物(1)和(2)对毛发生长和再生有强活性，并且此活性当在0.5%或更高的浓度时更强。
实验实施例2临床实验用含约1%的化合物(1)或(2)的溶液(实验实施例1中已揭示对毛发生长和再生有强活性)在志愿的脱发病人身上进行3个月的临床实验。用纯化水代替化合物(1)或(2)(与实验实施例1中相似)作为对照。自愿者由从脱发病人中随机选出的20名患者组成，10名男性，10名女性，20-58岁。
这些病人的症状为男子(male)型脱发如过早脱发、早老性脱发和老年脱发、及斑形脱发如多处脱发(multiplealopecia)和恶性脱发，他们已在医院皮肤科等接受过药物治疗和理疗。
因为患轻微斑秃的病人有时不用任何特殊治疗就可痊愈，所以那些第一次被诊断为有相当小脱发区但无明显脱发、萎缩性真皮和萎缩性毛孔的病人排除在本实验以外。
自愿者首先在患区外部施用来治疗，以形成一个薄层、按摩好、并用人造阳光照射。指示病人在家每天外部施用三次。
促进毛发生长和再生的效果根据下列4级来判定，即“恢复”意指观察到毛发再生但不落发;“满意”意指毛发生长和再生的速度慢并且没有观察到脱发再发生;“变坏”意指观察到副作用和/或促进落发。
结果示于表2中。
表2样品溶液治疗效果判断ABCD化合物(1)61040本发明∽(2)51230本发明纯化水03152对照注“A”指“恢复”;“B”指“满意”;“C”指“无改变”;“D”指“变坏”。
实验实施例3急性毒性给7-周龄dd-株小鼠口服化合物(1)以测其急性毒性。高达1.0g/kg体重的剂量时，无小鼠死亡。这说明化合物(1)的毒性相当低。
进行与上相似的化合物(2)(按制备例2中方法制备)的急性毒性实验，得到与化合物(1)相似的结果，这说明化合物(2)的毒性也相当低。
下面为本发明的优选实施例。
实施例1滋养剂向55.0重量份乙醇、2.0重量份聚氧亚乙基(8)油醇醚和40重量纯化水中加入1重量份的化合物(1)，将此混合物与足够量的β-苧侧醇(hinikitol)、香料和着色剂混合，得到养发剂形式的生发剂。
因为该产品促进毛发生长和再生，所以它可用于治疗和预防脱发和落发以及皮屑和病痒。
本产品可适当地用作滋养剂，因为它具有满意的香味和清新味。
本产品还有杀菌和抗炎活性，这使它可任意地用作创伤药。
实施例2滋养剂2份(重量)″αGRUTIN(日本东京ToyoSugarRefiningCo.Ltd上市出售的一种α-糖基芸香茸)和20.0份(重量)甘油混合并溶解在550份(重量)纯化水中(60℃)，将此混合物与440份(重量)乙醇中溶解10份(重量)化合物(2)和0.05份(重量)“KANKOSO301”6-[2-((5-溴-2-吡啶基)氨基)乙烯基]-1-乙基-2-吡啶鎓碘盐制成的溶液以及将2.0(份重)l-薄荷醇溶解在10份(重量)乙醇中制得的溶液混合。将这样得到的混合物过滤，将滤液装瓶，得到滋养剂形式的生发剂。
促进毛发生长和再生的本产品可任意地用于治疗和预防脱发和落发，及用作滋养剂以抑制皮屑和痒病。
本产品有杀菌和抗炎活性，这些性质使它可任意地用作创伤药。
实施例3发液向55.0份(重量)乙醇、20.0份(重量)聚氧亚丙基(40)丁醚和13.0份(重量)纯化水中加入一份(重量)化合物(1)和3.0份(重量)2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸，所得混合物以常规方式与足够量的pH-控制剂、香料、防腐剂混合，得到发液形式的生发剂。
促进毛发生长和再生的本产品可任意地用于治疗和预防脱发和落发，及用作抑制皮屑和痒病的发水。
该产品有杀菌和抗炎活性，这些性质使它可任意地用作外伤药。
实施例4发乳用常规方法制备发乳形式的生发剂，将3.0份(重量)蜂蜡、15.0份(重量)石油、42.0份(重量)液体石蜡、3.0份(重量)聚氧亚乙基(5)硬脂酸酯、2.0份(重量)聚氧亚乙基(6)油醇醚、一份(重量)聚氧亚乙基(6)鲸蜡醇醚、一份(重量)化合物(1)、0.3份(重量)2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸、32.0份(重量)纯化水及足量的pH调节剂、香料和防腐剂混合。
此产品促进毛发生长和再生，可任意用于治疗和预防脱发和落发，及皮屑和痒病。
本产品可有利地用作发乳，因为它有满意的产生光泽活性，以及对皮肤补充营养和抗炎活性。
实施例5软膏用常规方法制备软膏形式的生发剂，混合10.0份(重量)阴离子蜡(自乳化)、3.0份(重量)肉桂酸异丙酯、3.0份(重量)液体石蜡、4.0份(重量)鲸蜡醇、5.0份(重量)麦芽糖、4.0份(重量)化合物(1)的钠盐、51.0份(重量)纯化水、以及足量防腐剂。
此产品促进毛发生长和再生，可任意用于治疗和预防脱发、落发、皮屑和痒病。
本产品有杀菌和抗炎活性，这些性质使它可任意用作外伤药。
如上所述，本发明不涉及含有至少一种选自化合物(1)和(2)及它们的盐的化合物的生发剂。此生发剂对毛发生长和再生有强活性，可任意用作治疗和预防脱发和落发的化妆品组合物，药物组合物和这样的药物。因此，本发明在化妆品和药物工业领域中有极大的重要性。
权利要求
1.一种生发剂，其含有载体和有效量的一种或多种选自3-[4-羟基-3，5-双(3-甲基-2-丁烯基)苯基]-2-丙烯酸、苯丙酸4-(2-羰氧乙烯基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)苯基酯和它们的盐的化合物作为有效成分。
2.根据权利要求1的生发剂，其中所述化合物的含量在约0.01-10ω/ω%范围内。
3.根据权利要求1的生发剂，其中所述载体选自化妆品用载体、药用载体和它们的混合物。
4.根据权利要求1的生发剂，其中所述化合物为结晶形式。
5.根据权利要求1的生发剂，它还含有一种或多种选自6-[2-[(5-溴-乙-吡啶基)氨基]乙烯基]-1-乙基-2-吡啶鎓碘盐和2-(2-苯胺基乙烯基)-3，4-二甲基噁唑鎓碘盐的花青染料。
6.根据权利要求5的生发剂，其中所述花青染料的含量在约0.001-0.01ω/ω%范围内。
7.一种制备生发剂的方法，其包括将载体与作为活性成分的一种或多种选自3-[4-羟基-3，5-双(3-甲基-2-丁烯基)苯基]-2-丙烯酸、苯丙酸4-(2-羰氧乙烯基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)苯基酯及它们的盐的化合物混合的步骤。
8.根据权利要求7的方法，其中所述化合物的含量在约0.01-10ω/ω%范围内。
9.根据权利要求7的方法，其中所述载体选自化妆品用载体、药用载体和它们的混合物。
10.根据权利要求7的方法，其中所述化合物为结晶形式。
11.根据权利要求7的方法，其中所述化合物与所述载体及一种或多种选自6-[2-[(5-溴-2-吡啶基)氨基]乙烯基]-1-乙基-2-吡啶鎓碘盐和2-(2-苯胺基乙烯基)-3，4-二甲基噁唑鎓碘盐的花青染料一起混合。
12.根据权利要求11的方法，其中所述花青染料的含量在约0.001-0.01ω/ω%范围内。
全文摘要
一种含有载体和有效量的作为有效成分的选自3-[4-羟基-3，5-双(3-甲基-2-丁烯基)苯基]-2-丙烯酸、苯丙酸4-(2-羰氧基乙烯基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)苯基酯和它们的盐的一种或多种化合物的生发剂。这些有效成分对毛发长和再生有强活性。因此，该生发剂可满意地用于治疗和预防脱发和落发。
文档编号A61K8/00GK1103578SQ9410539
公开日1995年6月14日 申请日期1994年4月28日 优先权日1993年4月28日
发明者阿贺创, 涉谷孝, 杉本利行, 三宅俊雄 申请人:株式会社林原生物化学研究所